Erişkin Sıçanlarda Spinal Kord Lateral Hemisite ve Asimetrik Davranış Değerlendirmeleri

Bu protokol, insanlarda Brown-Sequard sendromunu taklit eden omurilik lateral hemiyonunun güvenilir bir hayvan modeli ve asimetrik davranış açıklarını değerlendirmek için yeni bir kombine davranış ölçeği sağlar. Bu fare hemisection modeli insanlarda Brown-Sequard sendromu nda meydana gelen nörolojik bozukluklar anlayışımızı daha da ileriye verebilir. Bahsedilen değerlendirmelerinizin aksine, yeni kombine davranış ölçeğimiz, asimetrik, lokomotif ve laboratuvar içi açıkları gerektiren herhangi bir kalıba uygulanabilir.

Bu, tutarlı, doğal hemi kesit modeli kullanarak temel ve çeviri araştırma arasında deneysel sonucu karşılaştırma kolaylaştırabilir. Bu model ile tutarlı sonuç kullanarak yeni başlayanlar için zor olabilir. Kritik adım, yaralanmaya neden olmak için bir kılavuz olarak, orta hatta dikey iğne yerleştirerek.

Bu videoyu izledikten sonra, hem cerrahi hem de davranışsal prosedürleri nasıl uygulayabileceğinizi iyi anlamalısınız. İşlem günü, cerrahi tabloyu %70 etanol ile temizleyin ve önceden ısıtılmış bir ısıtma yastığını masaya yerleştirin. Steril bir cerrahi perde ile cerrahi alanı kapsayan sonra, anestezili sıçanda parmak-çimdik yanıt eksikliği onaylamak.

Korneanın kurumasını önlemek için hayvanın gözlerine merhem uygulayın ve göğüs omurunu örten saçı tıraş edin. Daha sonra, üç alternatif iyot bazlı ve etanol scrubs ile maruz kalan cilt temizleyin. Hayvan hazır olduğunda, on üçüncü kaburga bulmak ve T-13 omur ile bağlantısını belirlemek için kaburga dorsally izleyin.

T-9 omurunu tanımlamak için sayın ve sekiz ila on birinci vertebra dikenli süreçleri üzerinde 3-4 santimetrelik orta hat deri kesiyapmak için on beş numaralı neşter bıçak kullanın. Bir cerrahi mikroskop altında sıçan hareket ettirin ve künt incelemek ve çapraz kasları yanal spinous süreçlerden T-9 ve T-10 omurları her iki tarafta yüzlerine doğru ayırın. Modifiye bir stabilizatör tutucu ile omurga disabize, lateral vertebral kemiğin her iki tarafında bir yarık yapmak, ve maruz kalan enine işlem yönleri altında tutucu paslanmaz çelik kolları slayt.

Tutucuyu sabitlemek için vidaları sıkın ve T-8 ile 11 vertebral lamina ve spinous promaz işlemlerini ortaya çıkarmak için bir protraktör kullanın. Bir rongeur kullanarak, T-9 spinous süreci uzak snip ve lamina küçük bir kısmını kaldırmak, orta hatta sol ve lamina tüm sağ kısmı, yanal mümkün olduğunca. Sonra yavaşça lamina altında ronguer yerleştirin ve laminektomi istenilen bölge tamamlanana kadar, bir seferde kemik küçük bir parça snip.

Sonra, omurilik akorunun dorsal orta hattını tanımlayın ve 30 kalibrelik bir iğneyi dikey olarak orta hattan, omurilik akoruna, vertebral kanalın ventral duvarına kadar, eğim sağa bakacak şekilde yerleştirin. Steril jel köpük küçük bir parça ile herhangi bir kanama durdurun, ve iğne parçanın orta hattı ile iridektomi mikro cerrahi makas bir çift bir ucu eklemek, ve sağ hemisen lateral yüzeyi boyunca diğer ucu, sağ hemisen tam bir kesim yapmak için. Tam bir sağ hemisection onaylamak için lezyon boşluğu kesmek için, bir bıçak olarak aynı iğnenin lateral kenarını kullanın.

Ve sağ hemiksiyonun tamlığını doğrulamak için vertebral kanalın altını görselleştirin. Sünger üzerinde dar köprü inşa etmek için çimento karışımı kullanın ve T-8 ve T-10 spinous süreçleri. Daha sonra, 4 / 0 ipek iplik ile ayrı ayrı kas ve deri katmanları dikiş, ve hidrasyon korumak için% 0.9 steril salin subkutan enjekte.

İlk hafta boyunca günde 2-3 kez idrar kesesi basarak, ve takip eden haftalarda bir ila iki kez, spontan mesane voiding dönene kadar. İşlemden sonraki uygun deneysel zaman noktalarında, yetişkin sıçanı açık alan deneyine yerleştirin ve hayvanın hareketini dört dakika boyunca inceleyin. Tabloyu kullanarak, her davranış kategorisi için evet've 0 için 1 değeri atayın ve 0-8 son tek taraflı hemisection basamak puanı vermek için toplam değeri toplamı.

Kapı kaplin analizi için, dar bir pist cihazında yürüyen deneysel hayvanı kaydedin ve her kaplin kategorisi için normal've/veya sakar've 2 için no'1 için 0 puan atayın. Kontak yerleştirme değerlendirmesi için hayvanı dikey bir pozisyonda tutun, böylece her iki arka ekstremitenin de yerleştirme tepkisi için kullanılabilir olup, bir arka ekstremitenin sırt yüzeyini hafifçe bir yüzeyin kenarına doğru ileri doğru fırçalayın. Yüzeye ayak yerleştirme gözlemlemek ve hiçbir yerleşim için 0 puan yerleştirerek bir arka ekstremite temas atamak've 1 yerleştirme için'ızgara yürüyüş değerlendirmesi için, 3 cm kare açıklıklar ile otuz sekiz santimetre plastik kaplı tel örgü ızgara yükseltilmiş bir otuz altı sıçan yerleştirin ve video kayıt 30 adım için platform boyunca serbestçe yürüyen sıçan 30 adım için her bir hareket yoğunluğu yoğunluğu nu belirlemek için ayak yanlış adım sayısının sayısalsağlamak için.

Yaralanma merkez üssü bir kesit Amino floresan boyama sağ hemisen tam bir kayıp gösterir. Ve sol hemisenin yaralanmasına karşı bir kontralateral. Bireysel kapı değerlendirme ölçümlerinin puanları ayrı ayrı analiz edilebilir veya hemikesit skorundan sonra kompozit bir leştirilmiş davranış olarak birleştirilebilir.

Yaralanma sonrası ilk üç gün içinde, sıçanlar adım atma yeteneğini kaybederler, yaralanmadan 7 10 gün sonra ipsilesional tarafta step benzeri hareketler yeniden görülmeye başlar. Ve çoğu adım sırt adımları olmak. T-9 hemiksiyonundan 28 gün sonra, sıçanlar hemen hemen normal koordinasyon la plantar adımlar atabilirler.

Buna karşılık, kontrkülonel arka ekstremite, yaralanmadan sonraki ilk beş gün içinde tek taraflı hemizelik skorunun düşmesi ve yaralanma sonrası 10. Toplam geçit kaplin testi için, hemizeyasyon sonrası koordinasyonun hem stabilitesi hem de adaptasyonu, yaralanmadan sonraki ilk beş gün boyunca belirgin bir şekilde azalır. İpsilateral arka ekstremitenin temas yerleştirme ve ızgara-yürüyüş de etkilenir, genellikle hayvan plantar adımlar atmaya başladığında kurtarma.

Temiz bir yaralanma üretmek zor olabilir. Ortasına bir iğne yerleştirmek, dokunun tamamen ayrılmasını sigortalamada yararlı bir kılavuz olabilir.