Name: Kan - beyin bariyerini bozulma iskemik inme, bir fare modeli Vivo içinde değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 19 s
Description: Öğrenin iskemik inmede kan-beyin bariyeri bozulmasını fare modelinde Evans Blue boyası ile değerlendirme yöntemini. Bu teknik, nörolojik tedaviler için güvenilir bir araştırma protokolü sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar araştırma için mali destek Erdebil eyaleti Üniversitesi Tıp Bilimleri (: Ardabil, Iran) için Şansölye Yardımcısı için müteşekkir olan (Hayır vermek: 9607).

Tüm yordamları hayvan çalışmaları yürütmek için: Ardabil Üniversitesi Sağlık Bilimleri Araştırma Konseyi kılavuzlarınıza uygun olarak gerçekleştirilmiştir (etik Sicil No: IR. ARUMS. rec.1394.08). bu görüntülenmeyecektir çalışmada, biz mera Enstitüsü (Tahran, Iran)'nden elde edilen yetişkin erkek Sprague-Dawley Rat (300-350 g) kullanılır.
1. anestezi ve Flowmetry
<ol><li>Anestezi % 4 isoflurane kullanarak teşvik ve ameliyat süresince Nitröz oksit (% 70 v/v) ve oksijen (% 30 v/v) karışımı isoflurane (1-%1,5) ile sürdürmek.</li>
	<li>Anaesthetized bir hayvan üzerinde bir geri besleme kontrollü Isıtma battaniye eğilimli duruş yerleştirin ve bu ısıtıcının bağlı bir rektal sonda aracılığıyla 37±0.5 ° C de vücut ısısını korumak.</li>
	<li>Oftalmik merhem az miktarda kuruluğu önlemek için her iki gözde uygulanır.</li>
	<li>Kafatasının sol tarafında cerrahi bölge elektrik makasları ile tıraş. Betadine çözüm bir gazlı bez yastık ile cilt dezenfekte için kullanın. Bu bölge % 70 etanol içeren steril bir yastık ile durulayın ve üç devir17için her iki adımları yineleyin.</li>
	<li>Analjezi için 0.2 mL % 0.5 bupivacaine subkutan ameliyat bölgesi17enjekte.</li>
	<li>(Sol göz yanal canthus sol kulak tabanına uzanan) kafatası üzerinde 1 cm uzun cilt kesi yapmak ve kafatası ortaya çıkarmak için sol temporalis kas incelemek. Daha sonra bir küçük burr deliği 5 mm lateral için ve 1 mm Doppler Flowmetre kalem sonda ucu yerleşimini kolaylığı için bregma18 arka oluşturun.</li>
	<li>Sıçan eğilimli sırtüstü konumuna gelen açın ve sonra lazer kalem sonda önceden delinmiş kafatası kör-bölgesel beyin kan akımı (rCBF) izlemek için deliğe sok.</li>
	<li>Her hayvanın temel rCBF kaydetmek ve bu % 100 olarak düşünün. Özellikle, her rCBF fazla % 80 azalma tespit edilen19,20ne zaman orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) başlatılır.</li>
</ol>2. indüksiyon Fokal Cerebra iskemi
<ol><li>Boyun bölgesi tıraş ve cilt betadin çözüm ve % 70 etanol ile dezenfekte. Analjezi17için ameliyat sitedeki subkutan %0,5 bupivacaine 0.2 mL enjekte.</li>
	<li>2 cm uzun cerrahi kesi sol ortak Karotid arter (LCCA) erişmek için boyun ventral yüzeyinde olun. Bifurkasyon dış Karotid arter (ECA) ve iç Karotis arter (ICA) erişmek için LCCA komşu fasya ve vagus siniri izole et.</li>
	<li>Ya LCCA ya da 5-0 ipek sütür istihdam ECA kalıcı olarak ligate ve pterygopalatine arter seviyeye ücretsiz ICA incelemek.</li>
	<li>Gevşek 5-0 ipek sütür LCCA, etrafında kravat yerleştirin ve ardından geçici olarak ICA ile vasküler bir mikro-klip kelepçe.</li>
	<li>LCCA daha önce yerleştirilmiş gevşek kravat önce küçük bir kesi yapmak ve 4-0 naylon silikon kaplı dikiş ICA luminal uzaya takın ve naylon dikiş güvenli ve kan sızıntı önlemek için LCCA çevresinde dikiş sıkın.</li>
	<li>Vasküler mikro-klip ICA kaldırın. Sonra bir silikon kaplı intraluminal filament MCA kökenli tıkanıklığı gösterir rCBF belirgin bir düşüş gözlemleyerek kadar ilerlemek. (90 dk) iskemik dönemin sonunda, reperfüzyon intraluminal dikiş21çekilerek başlatın.</li>
</ol>3. juguler ven Cannulation ve Evans mavi (EB) enjeksiyon
<ol><li>1 cm boyuna kesi boynundan orta çizgi sol tarafında yapmak ve sonra açık açık sol juguler ven (LGV) dış dalı erişmek için uzak yüzeysel fasya incelemek. Sonra kalıcı olarak 5-0 ipek sütür ile LGV kafatası sonuna ligate. Gevşek damar çevresinde iki bağları yerleştirin ve ardından geçici olarak kelepçe LGV bir vasküler mikro-kelepçe ile kardiyak sonu.</li>
	<li>Arasında iki dikiş, LGV küçük bir insizyon attım kazanmama ve LGV luminal uzaya heparinized serum dolu kateter yerleştirin ve yaklaşık 10 mm. daha sonra ilerlemek, kateter güvenli ve kanama önlemek için damar çevresinde bitişik harfler sıkın. Az miktarda damar çöken önlemek için bir serum enjekte.</li>
	<li>Reperfüzyon döneminin başlangıcında, yavaş yavaş bir 5 dk süre içinde EB boya (%2 EB çözüm serum fizyolojik içinde 1 mL/kg) enjekte et. Daha sonra kanül 0.5 mL normal salin enjeksiyonu ile yıkama ve enjeksiyon kanül ven12,22çekilme.</li>
	<li>Son olarak, boyun ve baş insizyon dikiş ve 0,05 mg/kg buprenorfin intraperitoneally enjekte (IP) ve enjeksiyon ameliyat sonrası analjezi17reperfüzyon dönemde her 6-8 h tekrarlayın.</li>
	<li>Hidrasyon kurtarma kafes17sağlamak için Önceden ısıtılmış saline(IP) 5 mL enjekte.</li>
	<li>Yer özel kurtarma Kafesteki hayvan sıcaklık ve klima kontrol ile donatılmış ve hayvan kurtarma anestezi üzerinden izleyebilirsiniz.</li>
</ol>4. kan beyin bariyerini geçirgenliği değerlendirilmesi
<ol><li>Reperfüzyon, 24 saat sonra derin sodyum tiyopental hayvanla anestezi. Göğüs boşluğuna, göğüs kemiğinin altında küçük bir delik yaparak açın.</li>
	<li>Sağ atrium içinde küçük bir açılış yapmak ve Önceden ısıtılmış % 0,9 serum (37 ˚C) sol ventrikül atrium gelen normal tuzlu çıkar hale gelinceye kadar renksiz23EB uzak dolaşım yıkamak 15 dakika ile 110 mmHg basınçta 250 mL enjekte.</li>
	<li>Hemen beyin kafatasından çıkarın ve beyin matris yerleştirin. Olfaktör ampul ve beyincik incelemek ve sonra temiz bir tıraş bıçağı kullanarak orta hat boyunca (Lesioned) sol beynin sağ hemisfer ayırın.</li>
	<li>Her hemisphere tartmak ve onları ayrı ayrı 2.5 mL fosfat tamponlu tuz homojenize ve bu 2 bir girdap makine kullanarak en az 2.5 mL trichloroacetic asit (% 60) ile karıştırın.</li>
	<li>Beyin örnekleri 1,322 x g de 30 dk santrifüj kapasitesi ve örnekleri 4 ° C buzdolabı 10 dakika soğumasını bekleyin.</li>
	<li>EB Absorbans Spektrofotometre tarafından 610 nm23, tahmin etmek için supernatants kullanın.</li>
	<li>EB konsantrasyonları standart bir eğri ve hızlı sonuçlar karşı µg/g beyin doku hesaplayın.</li>
</ol>5. EB standart eğri imalatı
<ol><li>EB 10 örnek çözümler EB fosfat tamponlu tuz 5 ml, 1-10 µg konsantrasyonları ile hazırlayın.</li>
	<li>Her örneği 610'Absorbans değerleri ölçmek bir Spektrofotometre kullanarak nm.</li>
	<li>Elektronik tablo ve X ekseni üzerinde mevcut EB konsantrasyonları ve Absorbans değerleri Y ekseni (şekil 1) kullanarak bir dağılım grafik olun.</li>
	<li>Denklemi ile eğrisi doğrusal bir eğilim-satır tanımlayın. Daha sonra örnekleri EB konsantrasyonu elde etmek için kullanabilirsiniz.</li>
	<li>EB ekstravazasyonu kesin sonuçları µg/g beyin doku ağırlık rapor.</li>
</ol>6. sahte işlem
<ol><li>Sham işletilen grubunda (dahil olmak üzere bir kesik boyun bölgesi ve EB enjeksiyon yapma) fareler aynı cerrahi işlemle gerçekleştirmek ancak MCAO dışarıda.</li>
</ol>

<ol><li>Jin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protecting+against+cerebrovascular+injury%3A+contributions+of+12%2F15-lipoxygenase+to+edema+formation+after+transient+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Protecting against cerebrovascular injury: contributions of 12/15-lipoxygenase to edema formation after transient focal ischemia.</a> Stroke. 39 (9), 2538-2543 (2008).</li>
<li>Lo, E. H., Dalkara, T., Moskowitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms%2C+challenges+and+opportunities+in+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms, challenges and opportunities in stroke.</a> Nat Rev Neurosci. 4 (5), 399-415 (2003).</li>
<li>Tam, S. J., Watts, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connecting+vascular+and+nervous+system+development%3A+angiogenesis+and+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Connecting vascular and nervous system development: angiogenesis and the blood-brain barrier.</a> Annu Rev Neurosci. 33, 379-408 (2010).</li>
<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+use+of+H102+peptide-loaded+dual-functional+nanoparticles+in+the+treatment+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">The potential use of H102 peptide-loaded dual-functional nanoparticles in the treatment of Alzheimer's disease.</a> J Control Release. , (2014).</li>
<li>Obermeier, B., Daneman, R., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+maintenance+and+disruption+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Development, maintenance and disruption of the blood-brain barrier.</a> Nat Med. 19 (12), 1584-1596 (2013).</li>
<li>Fang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+Blood-Brain+Barrier+Dysfunction+by+XQ-1H+Following+Ischemic+Stroke+in+Hyperlipidemic+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Attenuated Blood-Brain Barrier Dysfunction by XQ-1H Following Ischemic Stroke in Hyperlipidemic Rats.</a> Mol Neurobiol. 52 (1), 162-175 (2015).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCR4+antagonist+AMD3100+protects+blood-brain+barrier+integrity+and+reduces+inflammatory+response+after+focal+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">CXCR4 antagonist AMD3100 protects blood-brain barrier integrity and reduces inflammatory response after focal ischemia in mice.</a> Stroke. 44 (1), 190-197 (2013).</li>
<li>Omidi, Y., Barar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impacts+of+blood-brain+barrier+in+drug+delivery+and+targeting+of+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Bioimpacts%22%5BJournal%5D)">Impacts of blood-brain barrier in drug delivery and targeting of brain tumors.</a> Bioimpacts. 2 (1), 5-22 (2012).</li>
<li>Cho, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+blood-brain+barrier+model+for+in+vitro+studies+of+neurovascular+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional blood-brain barrier model for in vitro studies of neurovascular pathology.</a> Sci Rep. 5, (2015).</li>
<li>Barar, J., Rafi, M. A., Pourseif, M. M., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+transport+machineries+and+targeted+therapy+of+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Bioimpacts%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier transport machineries and targeted therapy of brain diseases.</a> Bioimpacts. 6 (4), 225-248 (2016).</li>
<li>Kaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnesium+sulfate+attenuates+increased+blood-brain+barrier+permeability+during+insulin-induced+hypoglycemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Magnesium sulfate attenuates increased blood-brain barrier permeability during insulin-induced hypoglycemia in rats.</a> Can J Physiol Pharmacol. 79 (9), 793-798 (2001).</li>
<li>Pasban, E., Panahpour, H., Vahdati, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+oxygen+therapy+does+not+protect+the+brain+from+vasogenic+edema+following+acute+ischemic+stroke+in+adult+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Early oxygen therapy does not protect the brain from vasogenic edema following acute ischemic stroke in adult male rats.</a> Sci Rep. 7 (1), 3221(2017).</li>
<li>Haghnejad Azar, A., Oryan, S., Bohlooli, S., Panahpour, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-Tocopherol+Reduces+Brain+Edema+and+Protects+Blood-Brain+Barrier+Integrity+following+Focal+Cerebral+Ischemia+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Princ+Pract%22%5BJournal%5D)">Alpha-Tocopherol Reduces Brain Edema and Protects Blood-Brain Barrier Integrity following Focal Cerebral Ischemia in Rats.</a> Med Princ Pract. 26 (1), 17-22 (2017).</li>
<li>Belayev, L., Busto, R., Zhao, W., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+blood-brain+barrier+permeability+following+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of blood-brain barrier permeability following middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Brain Res. 739 (1-2), 88-96 (1996).</li>
<li>Bodsch, W., Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((125I-antibody+autoradiography+and+peptide+fragments+of+albumin+in+cerebral+edema%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">125I-antibody autoradiography and peptide fragments of albumin in cerebral edema.</a> J Neurochem. 41 (1), 239-243 (1983).</li>
<li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+BBB+permeability+after+embolic+stroke+in+rat+using+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+FlowMetab%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of BBB permeability after embolic stroke in rat using MRI.</a> J Cereb Blood FlowMetab. 25 (5), 583-592 (2005).</li>
<li>Uluç, K., Miranpuri, A., Kujoth, G. C., Aktüre, E., Başkaya, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+cerebral+ischemia+model+by+endovascular+suture+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Focal cerebral ischemia model by endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in the rat.</a> J Vis Exp. (48), (2011).</li>
<li>Hungerhuber, E., Zausinger, S., Westermaier, T., Plesnila, N., Schmid-Elsaesser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+bilateral+laser+Doppler+fluxmetry+and+electrophysiological+recording+during+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Simultaneous bilateral laser Doppler fluxmetry and electrophysiological recording during middle cerebral artery occlusion in rats.</a> J Neurosci Methods. 154 (1-2), 109-115 (2006).</li>
<li>Panahpour, H., Nouri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-Ischemic+Treatment+with+candesartan+protect+from+cerebral+ischemic%2Freperfusioninjury+in+normotensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Post-Ischemic Treatment with candesartan protect from cerebral ischemic/reperfusioninjury in normotensive rats.</a> Int J Pharm Pharm Sci. 4 (4), 286-289 (2012).</li>
<li>Panahpour, H., Dehghani, G. A., Bohlooli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enalapril+attenuates+ischaemic+brain+oedema+and+protects+the+blood-brain+barrier+in+rats+via+an+anti-oxidant+action%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Pharmacol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Enalapril attenuates ischaemic brain oedema and protects the blood-brain barrier in rats via an anti-oxidant action.</a> Clin Exp Pharmacol Physiol. 41 (3), 220-226 (2014).</li>
<li>Panahpour, H., Nekooeian, A. A., Dehghani, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+Central+Angiotensin+II+AT1+Receptor+Protects+the+Brain+from+Ischemia%2FReperfusion+Injury+in+Normotensive+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Iran+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Blockade of Central Angiotensin II AT1 Receptor Protects the Brain from Ischemia/Reperfusion Injury in Normotensive Rats.</a> Iran J Med Sci. 39 (6), 536-542 (2014).</li>
<li>Panahpour, H., Nekooeian, A. A., Dehghani, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+attenuates+ischemic+brain+edema+and+protects+the+blood-brain+barrier+integrity+from+ischemia%2Freperfusion+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Iran+Biomed+J%22%5BJournal%5D)">Candesartan attenuates ischemic brain edema and protects the blood-brain barrier integrity from ischemia/reperfusion injury in rats.</a> Iran Biomed J. 18 (4), 232-238 (2014).</li>
<li>Kaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+magnesium+sulfate+on+blood-brain+barrier+disruption+caused+by+intracarotid+injection+of+hyperosmolar+mannitol+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+sci%22%5BJournal%5D)">The effects of magnesium sulfate on blood-brain barrier disruption caused by intracarotid injection of hyperosmolar mannitol in rats.</a> Life sci. 76 (2), 201-212 (2004).</li>
<li>Schöller, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+microvascular+basal+lamina+damage+and+blood-brain+barrier+dysfunction+following+subarachnoid+hemorrhage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of microvascular basal lamina damage and blood-brain barrier dysfunction following subarachnoid hemorrhage in rats.</a> Brain Res. 1142, 237-246 (2007).</li>
<li>Bodsch, W., Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((125I-Antibody+Autoradiography+and+Peptide+Fragments+of+Albumin+in+Cerebral+Edema%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">125I-Antibody Autoradiography and Peptide Fragments of Albumin in Cerebral Edema.</a> J Neurochem. 41 (1), 239-243 (1983).</li>
<li>Sandoval, K. E., Witt, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+tight+junction+permeability+and+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier tight junction permeability and ischemic stroke.</a> Neurobiol Dis. 32 (2), 200-219 (2008).</li>
<li>Zhu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Baicalin+reduces+the+permeability+of+the+blood-brain+barrier+during+hypoxia+in+vitro+by+increasing+the+expression+of+tight+junction+proteins+in+brain+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Baicalin reduces the permeability of the blood-brain barrier during hypoxia in vitro by increasing the expression of tight junction proteins in brain microvascular endothelial cells.</a> J Ethnopharmacol. 141 (2), 714-720 (2012).</li>
<li>Kucuk, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+losartan+on+the+blood-brain+barrier+permeability+in+long-term+nitric+oxide+blockade-induced+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of losartan on the blood-brain barrier permeability in long-term nitric oxide blockade-induced hypertensive rats.</a> Life Sci. 71 (8), 937-946 (2002).</li>
<li>Uyama, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+vascular+permeability+in+the+gerbil+brain+after+transient+ischemia+using+Evans+blue+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of vascular permeability in the gerbil brain after transient ischemia using Evans blue fluorescence.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 8 (2), 282-284 (1988).</li>
<li>Kleinig, T. J., Vink, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+inflammation+in+ischemic+and+hemorrhagic+stroke%3A+therapeutic+options%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Suppression of inflammation in ischemic and hemorrhagic stroke: therapeutic options.</a> Curr Opin Neurol. 22 (3), 294-301 (2009).</li>
<li>Del Zoppo, G. J., Mabuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microvessel+responses+to+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Cerebral microvessel responses to focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 23 (8), 879-894 (2003).</li>
<li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Des+Devel+Ther%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Shin, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+induced+hypertension+improves+blood+flow+and+oxygen+metabolism+in+transient+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).</li>
<li>Bottiger, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cerebral+ischemia+due+to+cardiocirculatory+arrest+in+mice+causes+neuronal+degeneration+and+early+induction+of+transcription+factor+genes+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Mol+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Global cerebral ischemia due to cardiocirculatory arrest in mice causes neuronal degeneration and early induction of transcription factor genes in the hippocampus.</a> Brain Res Mol Brain Res. 65 (2), 135-142 (1999).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Şimdiye kadar autoradiography ve algılama, radyoaktif izleyiciler24,25, ayirt mikroskobu26,27ve EB ekstravazasyonu tekniği20, gibi çeşitli yöntemleri 23 kan - beyin bariyerini zarar değerlendirmek için kullanılmaktadır. EB boya ve serum albümin bağlamak güçlü yapabiliyor bir izleyici vasküler sızıntı tespit ve BBB arıza11<s...

Vasogenic Beyin ödemi kan - beyin bariyerini (BBB) bozulma nedeniyle iskemik inme önemli bir komplikasyonu ve inme hasta1,2sağkalım oranı önemli bir belirleyici kalır. Kan - beyin beyin kapiller endotel hücreleri tarafından (BCECs) kurdu ve farklı nörovasküler bileşenler (Örneğin, BCECs, perisitlerden, astroglial ve nöronal hücrelerin3arasında sıkı kavşak) oluşur, bariyerini (BBB), sağlar bir Merkezi sinir sistemi (MSS) ve periferik dolaşım4,5arasında uzman ve dinamik arabirim. İskemi-reperfüzyon yaralanmalar gibi hakaret BBB işlevsel bütünlüğü bozabilir ve lökosit sonuçta beyin iltihabı ve birincil beyin yaralanmaları tetiklemek beyin parankimi dolaşan sonraki penetrasyon yol 6 , 7. hayvan modelleri felç oluşumunu takip BBB disfonksiyon kesin tespiti için ihtiyaç vardır. Patofizyolojik mekanizmaları temel ve yeni nöroprotektif stratejileri tanıtımı için büyük önem böyle modellerdir. BBB vitro hücre kültür tabanlı modelleri son derece geliştirilmiş ve BBB Fizyopatoloji8,9,10moleküler çalışma için kullanılan. Yine de, insan klinik koşullara benzer BBB iskemik hasar üretmek, in vivo hayvan modelleri de bu konuda çok değerli bulunmaktadır. Evans mavi (EB) ekstravazasyonu nicel tespiti değerlendirme BBB bütünlüğü ve nörodejeneratif hastalıklar, iskemik inme11, de dahil olmak üzere bir işlev için kullanılan bir iyi kabul edilen ve hassas teknik olduğunu 12 , 13 , 14. bu deneysel herhangi bir laboratuvarda, tekrarlanabilir mümkün, maliyet-etkin ve tamamen geçerli bir yöntemdir. Onun uygulanması gibi radyoaktif izleyiciler15 veya diğer yöntemleri için önkoşul olan manyetik rezonans görüntüleme (MRG)16, gelişmiş donanım gerektirmez. Bu makalede, biz kapsamlı bir şekilde BBB değerlendirme EB ekstravazasyonu iskemik inme fare modellerinde kullanarak temel teknik işlemleri göstermek.

<table><tbody><tr><td>Isofluran</td><td>Piramal</td><td>AWN 34041100</td><td>20 - 25 derece; C</td></tr><tr><td>2,3,5-Trifeniltetrazolyum klorür (TTC)</td> <td>Molekula</td><td>31216368</td><td>4 yıl</td></tr><tr><td>Sprague&ndash; Dawley sıçanları&nbsp;</td><td>Mera Enstitüsü (Tahran, İran)</td><td></td><td>300-350g</td></tr><tr><td>Evans Mavi&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>314-13-6</td><td></td></tr><tr><td>Trikloroasetik asit&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>76-03-9</td><td>2 yıl</td></tr><tr><td>Bupivakain HCl (% 0.5)</td> <td>Delpharm Turları</td><td></td><td>aşağıda&nbsp; 25 &deg; C</td></tr><tr><td>Bupernorfin</td><td>Exir (İran)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Sodyum Karbonat</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>497-19-8</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür ve nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Di-Sodyum hidrojen fosfat</td><td>EMD Millipore&nbsp;</td><td>231-448-7</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>&nbsp; 7447-40-7</td><td></td></tr><tr><td>Etanol ve nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>silikon(Xantopren)</td><td>Heraeus</td><td>EN ISO 4823</td><td></td></tr><tr><td>Aktivatör üniversal artı</td><td>Heraeus</td><td>66037445</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon forseps</td><td>Çalmak</td><td>52100-41</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı Makaslar</td><td>Çalmak</td><td>52130-00</td><td></td></tr><tr><td>Çalıştırma&nbsp; Makas</td><td>Roboz</td><td>52140-70</td><td></td></tr><tr><td>Beyin matrisi&nbsp;</td><td>Stoelting</td><td>51390</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Hayvanlar İçin Anestezi Cihazı |</td><td>&nbsp; Kent Scientific</td><td>SS-01</td><td></td></tr><tr><td>Güç Laboratuvarı sistemi</td><td>AD Instruments</td><td>ML880</td><td></td></tr><tr><td>Lazer Doppler akış ölçer</td><td>AD Instruments</td><td>ML191</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma geri besleme sistemi</td><td>Harvard Appratus</td><td>72-7560</td><td></td></tr><tr><td>Vasküler mikro kelepçe</td><td>FineScience Tools</td><td>18055-03</td><td></td></tr><tr><td>İpek 5-0 sütür ipliği</td><td>Ethicon</td><td>682G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 4-0 sütür ipliği&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>EH6740G</td><td></td></tr></tbody></table>

kan - beyin bariyerini bozulma iskemik inme, bir fare modeli vivo içinde değerlendirilmesi

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

İskemik inme vasogenic serebral ödem ve kan - beyin bariyerini (BBB) imha aracılık ettiği sonraki birincil beyin hasarı yol açar. Fareler indüklenen iskemik inme ile kurulan ve in vivo modelleri BBB işlevsel bütünlüğü araştırmak için kullanılan. Evans mavi (EB) spektrofotometrik algılama beyin örneklerinde iskemik yaralanma ile araştırma ve geliştirme yeni tedavi yöntemleri için güvenilir gerekçe sağlayabilir. Bu yöntem tekrarlanabilir sonuçlar üretir ve özel ekipman gerek olmadan herhangi bir laboratuvar geçerlidir. Burada, indüksiyon Sıçanlarda iskemik inme takip EB ekstravazasyonu algılamayı görüntülenmeyecektir ve teknik kılavuz mevcut.

Karşı sahte ile çalışan fareler sol hemisfer sağ hemisfer EB düzeylerinde anlamlı bir fark yoktu (1.06 ± 0,1 µg/g ve 1,1 ± 0,09 µg/g, sırasıyla). Rakamlar 2A-2B, indüksiyon geçici iskemi gösterildiği gibi (90 dk iskemi / 24 h reperfüzyon) EB seviyesi önemli bir fark neden (10.41 ± 0,84 µg/g, p &lt; 0.001) ile karşılaştırıldığında ilgili iskemik sıçan sol yarıküre'deki sham çalışan fareler yarımkürede. Toplu olarak, bu bulgular normal şartlarda EB kolayca beyin pa...

Bu yordamı genel amacı fare modelleri iskemik inme kan - beyin bariyerini bozulma vivo içinde değerlendirmesi için son derece tekrarlanabilir bir teknik sağlamaktır.

Kan - beyin bariyerini bozulma iskemik inme, bir fare modeli Vivo içinde değerlendirilmesi

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

Bu prosedürün genel amacı, iskemik inmenin bir reaksiyon modelinde kan-beyin bariyeri bozulmasının in vivo değerlendirmesi için yüksek oranda tekrarlanabilir bir yöntem sunmaktır. Bu, beynin sol tarafında orta serebral arter tıkanıklığı için intraluminal filament kullanılarak iskemik inme indüksiyonu ile gerçekleştirilir. İşlemin bir sonraki adımı, orta serebral arter tıkanıklığının bitiminde ve reperfüzyon periyodunun başlangıcında juguler ven dış dalının kanülasyonu ve Evans Blue boyasının enjeksiyonudur.Yirmi dört saat sonra derin anestezi altında, hayvanın dolaşım sistemi Evans Blue'dan yıkanır ve beyin çıkarılır. Daha sonra iki serebral hemisfer ayrılır, homojenize edilir ve santrifüjlenir ve sonuçta bir spektrofotometre ile Evans Blue konsantrasyonunu ölçmek için dokuların süpernatanları kullanılır. Anestezi ve flowmetri.% 4 izofluran kullanarak anesteziyi indükleyin ve% 70 azot oksitve% 1.5 oksijen karışımı içinde% 1-13 izofluran ile koruyun. Anestezi uygulanmış hayvanı geri besleme kontrollü ısıtma battaniyesi üzerine yüzüstü pozisyonda yerleştirin ve bu ısıtma ünitesine bağlı bir rektal prob vasıtasıyla vücut ısısını normal fizyolojik aralıkta tutun. Kafatasının sol tarafı

an-vivo-assessment-blood-brain-barrier-disruption-rat-model-ischemic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, bir EAE fare modelinde kan-beyin bariyeri bozulmasını değerlendirmek için bir prosedürü göstermektedir. Farklı boyutlardaki floresan boyalar retro-orbital olarak enjekte edilir ve beynin kan damarlarında dolaşır. Daha küçük boya, boşluklardan beyin dokusuna sızarken, daha büyük boya, yalnızca bozulma şiddetli olduğunda girer ve bariyer hasarının derecesi ile ilişkilidir.

Bir EAE Fare Modelinde Floresan Boyalar Kullanılarak Kan-Beyin Bariyeri Bozulmasının Belirlenmesi

Bu video, orta serebral arter tıkanıklığına maruz kalan sıçanlardan alınan beyin dilimlerinde enfarktüs bölgesi ve beyin ödeminin değerlendirmesini göstermektedir. Enfarktüslü alanlar redoks boyaması kullanılarak tanımlanırken, görüntü analiz yazılımındaki mavi filtre ve eşik fonksiyonu, etkilenen hemisferdeki enfarktüs bölgesini ve ödemi ölçer.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Sonrası Bir Sıçan Beyninde Enfarktüs Bölgesi ve Beyin Ödeminin Ölçülmesi

Kaynak: Kuts, R.  et al. Sıçanların Motor Korteksinde Lazere Bağlı Beyin Hasarı. J. Vis. Uzm. (2020)Bu video, sıçanlarda lazerin neden olduğu beyin hasarını takiben kan-beyin bariyeri (BBB) bütünlüğünün değerlendirilmesini göstermektedir. Kuyruk damarına bir izleme boyası enjekte edilir, bu da beyne dolaşmasına ve hasarlı BBB yoluyla dokuya sızmasına izin verir. Beyin daha sonra boyayı serbest bırakmak için çıkarılır ve işlenir. Boyanın floresan yoğunluğu, lazerin neden olduğu BBB hasarının...

Lazer Kaynaklı Beyin Hasarı Sıçan Modelinde Kan-Beyin Bariyeri Bütünlüğünün Değerlendirilmesi 

Kan-beyin bariyeri bozulması, beyin bazı ilaçların ulaştırılması, yardımcı olur. Mannitol fiziksel bariyer düzenini bozacak içi arterially kan damarları çevreleyen daralır hücreleri teslim.

Kan-beyin bariyer bozulması arasında Rat Modeli Nörovasküler Therapeutics Hedefli izin ver için

Bu protokol, farelerde geçici orta serebral arter tıkanıklığını takiben enfarktüs hacimlerini ve kan-beyin bariyeri bozulmasını azaltan tekrarlayan hipoksik ön koşullandırmayı veya sistemik hipoksiye kısa süreli maruziyetleri tanımlar. Ayrıca, nörovasküler korumanın etkinliğini değerlendirmek için inme sonrası enfarktüs hacminin ve kan-beyin bariyeri bozulmasının ikili miktar tayinini detaylandırır.

Farelerde Tekrarlanan Hipoksik Önkoşullanma ve Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ardından Nörovasküler Koruma Kantitasyonu

Bu çalışmada, biz kan - beyin bariyerini nörodejeneratif koşullar altında çalışmasının değerlendirilmesi için kolay ve etkin bir yordam mevcut. Bizim hedefe ulaşmak için biz yüksek molekül ağırlıklı floresein isothiocyanate (FITC) etiketli infüzyon-albümin içine fare juguler ven ve onun kaçak beyin parankimi Floresans mikroskobu tarafından değerlendirilir.

Kan - beyin bariyerini geçirgenliği FITC etiketli albümin nörodejeneratif hastalık, bir fare modeli intravenöz infüzyonu tarafından değerlendirilmesi

Burada bir fare beyin damar geçirgenliği tahlil mayi enjeksiyon kan - beyin bariyerini disfonksiyon hayvan modelleri için geçerlidir perfüzyon ardından floresan tarayıcıları kullanarak mevcut. Bir hemi-beyin geçirgenliği kantitatif değerlendirilmesi ve diğer izleme görselleştirme/immunostaining için kullanılır. Yordamı 5-6 h 10 fareler için alır.

Vivo kan - beyin bariyerini geçirgenliği tahlil Fluorescently kullanarak farelerde izleyiciler etiketli

Bu protokol, aynı kemirgen beyin örnekleri kümesinde iskemik beyin hasarının en önemli üç parametresini ölçmenin yeni bir tekniğini açıklar. Sadece bir beyin örneği kullanmak etik ve ekonomik maliyetler açısından oldukça avantajlıdır.

Tek Bir Kemirgen Beyin Örneklerinde İnme Sonrası Serebral Ödem, Enfarktüs Bölgesi ve Kan-Beyin Bariyeri Kırılımının Ölçülmesi

Farelere farklı zaman noktalarında iki floresan boya uygulanarak kan-beyin bariyeri (BBB) bozulmasına bağlı boya ekstravazasyonunu görselleştirmek için bir yöntem geliştirilmiştir. Gliserolün kriyoprotektan olarak kullanılması, aynı numune üzerinde immünohistokimyayı kolaylaştırdı.

Hafif Travmatik Beyin Hasarı Olan Bir Fare Modelinde Kan-Beyin Bariyeri Bozulmasının Değerlendirilmesi

Sıçan in vivo modelleri, iskemik inme için patolojik mekanizmaları ve terapötik hedefleri araştırmak için vazgeçilmez araçlardır. Bu çalışma, sıçanlarda orta serebral arter tıkanıklığını (MCAO) takiben enfarktüslü beyin dilimlerinde immünofloresan boyama gerçekleştirmeyi açıklayacaktır.

İskemik İnmenin Sıçan Modelinde İmmünofloresan ile Hücre Ölümü Sinyalinin Değerlendirilmesi

Öğrenin iskemik inmede kan-beyin bariyeri bozulmasını fare modelinde Evans Blue boyası ile değerlendirme yöntemini. Bu teknik, nörolojik tedaviler için güvenilir bir araştırma protokolü sunar.

Kan - beyin bariyerini bozulma iskemik inme, bir fare modeli Vivo içinde değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet