Yalıtım insan alveoler kapaklarini ve Osteojenik etkinlik kapaklarini türetilmiş hücre D vitamini etkileri Mezenkimal kök hücrelerin

Bu çalışmanın genel amacı, D vitamininin dental alveoler periosteumdan elde edilen kültürlenmiş mezenkimal kök hücreler üzerindeki osteoindüktif etkilerini araştırmaktır. Mezenkimal kök hücrelerin kullanımı, son on yılda diş hekimliğinde büyük bir ilerlemedir. Diş dokusunun birçok kısmından başarılı bir şekilde izole edilmiş ve kültüre edilmiştir.

Amaç, mezenkimal kök hücreleri alveoler periosteumdan izole etmek ve kültürlemek ve D vitamini bileşiğinin osteoindüktif potansiyelini araştırmaktır. Genel olarak konuşursak, bu konuda yeni olan bireyler, alveolar periosteumdan türetilen mezenkimal kök hücrelerde yeni kemik oluşumu fikri nedeniyle mücadele edeceklerdir. Laboratuvar personeli prosedürü gösterecek olan Bayan Hsin-Wen Chi olacaktır

. Başlamak için, bir periosteal ayırıcı kullanarak diş cerrahisi sırasında hastalardan periosteal dokuları toplayın. Yaklaşık iki x beş milimetre olan dilimleri toplayın.

Doku dilimlerini antibiyotiklerle DPBS'de saklayın. Laboratuvarda, alveolar periosteal doku parçalarını hasattan sonraki 24 saat içinde iyice doğramak için bir neşter kullanın. Daha sonra, dokuyu uygun kültür ortamında 35 milimetre petri kapları üzerinde kültürleyin.

% 5 karbondioksit gazı içeren nemlendirilmiş 37 santigrat derece inkübatör kullanın. Üç gün sonra, toplanan periosteal dokuları atın ve ortamı değiştirin. Hücreler yaklaşık% 80 birleşime kadar çoğaldığında, Tripsin ekleyerek kültürlenmiş hücreleri ayırın.

Ve kültürü üç dakika kuluçkaya yatırın. Bundan sonra, ayırmayı sonlandırmak için 0,8 mililitre orta ekleyin. Toplama ve sayma işleminden sonra, plaka başına bir mililitrede 5.000 hücre dağıtın.

Kaplanmış hücreleri bu aşamada birinci geçiş olarak işaretleyin. Bu hücreleri kültürleyin ve% 80 birleşim noktasına kadar çoğaldıktan sonra tekrar ayırın. Birinci geçişli ortam başlangıçta turuncu/kırmızı renktedir.

Ortam üç gün sonra turuncuya dönmeye başladığında değiştirin. Bir hücrenin geçişi %80 birleşime ulaştığında, sıfır nesli birinci nesle hazırlamak için kullanılan prosedürlerin aynısını tekrarlayarak ikinci ila beşinci nesil hücreleri oluşturun. Ortamı haftada iki kez değiştirin.

Dört hafta sonra, hücrelerin morfolojisini mikroskop altında gözlemleyerek hücrelerin osteojenik bir soya farklılaşma potansiyelini değerlendirin. Bir von kossa testi kullanarak hücreleri köklendirin. Bu tahlil, kültürünüzde kalsifiye birikintilerin varlığını ayırt eder.

Hücreleri PBS ile yıkayın ve bir mililitre% 10 Formalin içinde 30 dakika boyunca sabitleyin. Bundan sonra, Formalini çıkarın ve ardından hücreleri yıkayın ve% 5 gümüş nitrat ile muamele edin. Hücreleri bir saat boyunca UV ışığına maruz bırakın.

Daha sonra, gümüş nitratı çıkarın ve hücrelere her seferinde üç dakika boyunca dört kez iki mililitre% 5 sodyum sülfat uygulayın. Tedaviler arasındaki çözeltiyi değiştirin. Son olarak, hücreleri damıtılmış su kullanarak iki kez yıkayın.

34 periosteal doku örneğinin 20'sinde başarılı bir şekilde kemik iliği kaynaklı kök hücre kolonileri elde edildi. Donörlerle ilişkili olarak kültür başarısını anlamlı olarak etkileyen herhangi bir faktör bulunamamıştır. Başlangıçta, PDC'ler yuvarlak ve iğ şeklindeki hücrelerin bir karışımı ile koloniler ve küresel kümeler oluşturdu.

İlk geçişten sonra, hücreler homojen bir şekilde fibroblast benzeri ve bir iğ şeklindeydi. Osteojenik farklılaşmanın sonunda, von kossa testi, kalsiyum birikintilerinin ve osteojenik farklılaşmanın olası varlığını gösterdi. Bu sonuçlar, periosteal hücre popülasyonları arasında, progenitör hücrelerin osteojenik hücrelere farklılaşma potansiyeline sahip olduğunu güçlü bir şekilde göstermektedir.

Osteojenik öncü hücreler ayrıca Kalsitriol ile muamele edildi ve hücrelerin erken osteojenik farklılaşması için güçlü bir gösterge olan alkalin fosfataz ekspresyon seviyesini değerlendirmek için RTPCR kullanılarak incelendi. Hem C vitamini hem de D vitamininin aktif bir metaboliti olan Kalsitriol tedavisi, alkalin fosfataz ekspresyonunu arttırdı. Ayrıca, aynı tedavilere yanıt olarak kollajen bir mRNA seviyeleri ekspresyonu artmıştır.

Kemik sialoprotein mRNA'sının ekspresyonunun, daha yüksek bir Calcitriol konsantrasyonu ile tedavi edilen hücreler için arttığı bulundu. Ancak CBFA ve ostokalsiyum mRNA ekspresyonu tedavilere yanıt vermedi. Bu videoyu izledikten sonra, izleyiciler insan alveolar periostunun mineralizasyon ve kültür protokolünü iyi anlamalıdır.

Bir kez ustalaştıktan sonra, bu arayış uygun şekilde yapılırsa dört ila beş hafta içinde yapılabilir. Bu deneyi denerken, hücrenin kirlenmesini önlemek için dikkatli ve steril bir teknik kullanmak önemlidir.