Matris ile sentetik polimerler karakterizasyonu Lazer Desorpsiyon iyonlaşma zaman uçuş (MALDI-TOF) kütle spektrometresi destekli

Bu MALDI-TOF MS eğitiminin genel amacı, kullanıcılara MALDI-TOF MS ile karakterizasyon sırasında polimerlerin numune hazırlama, elde etme ve analizi hakkında bilgi vermektir. Bu yöntem, polimer moleküler ağırlığı, dağılması ve son grup kimliği gibi polimer karakterizasyonu alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, homopolimer uç gruplarının belirlenmesine izin vermesidir. İlk olarak, önceden hazırlanmış matris, analit ve katyon çözeltilerini karıştırarak ve bileşenlerin nispi oranlarını dokuz benzersiz numune karışımı yapılacak şekilde değiştirerek bir dizi çözelti hazırlayın.

Bu deney için, 15 mikrolitre poli (L-laktit) çözeltisini 15 mikrolitre 2, 5-dihidroksibenzoik asit çözeltisi ve bir mikrolitre sodyum trikloroasetat çözeltisi ile birleştirin. Her çözelti karışımından bir mikrolitreyi bir MALDI hedef plakası üzerindeki ayrı bir numune kuyucuğuna pipetleyin. Numunenin numune kuyucuğundan dışarı akmasını önlemek için numuneleri küçük porsiyonlar halinde artımlı olarak ekleyin ve ek numune eklemeden önce her bir alikotun kuruyana kadar buharlaşmasına izin verin.

Veri toplamayı başlatmak için önce veri toplama yazılımı Flexcontrol'ü açın. Çıkarma düğmesine basarak hedef plakanın yüklenmesini sağlamak için platformu çıkarın. Yüklü kalibant ve analit ile hedef plakayı nazikçe yerleştirin.amps uygun yönde platform üzerine.

Ardından, çıkarma düğmesine tekrar basarak hedef plakayı platforma enjekte etmek için edinme yazılımını kullanın. Dosya'ya basarak ve Yöntem Seç'i seçerek uygun bir veri toplama yöntemi seçin. Verileri almadan önce, Algılama sekmesine tıklayarak ve Kütle Aralığını görüntüleyerek veri toplamak için uygun bir kütle aralığının seçildiğinden emin olun.

Çekim yazılımından, hedef plaka üzerinde istenen analite karşılık gelen konumu seçin. Veri toplamayı başlatmak için Başlat'a basın ve sinyali en üst düzeye çıkarmak için lazer hedefini s'nin etrafında hareket ettirin. Kamera penceresinin sol tarafındaki kaydırma çubuğunu kullanarak lazer gücünü, izotopik çözünürlük elde etmek için gereken minimum güç elde edilecek şekilde ayarlayın.

İlgilenilen kütle aralığının ortasındaki tek bir tepe noktasını yakınlaştırarak, Spektrometre sekmesindeki IS2 değerini değiştirerek hızlanma voltajlarındaki farkı ayarlayarak çözünürlüğü optimize edin. Son olarak, makul bir sinyal-gürültü oranı üretmeye devam ederken lazer gücünü mümkün olduğunca azaltarak optimize edin. Alım parametreleri optimize edildikten sonra, Dosya'yı ve ardından Yöntemi Farklı Kaydet'i seçerek yöntemi kaydedin.Spektrometre sekmesi altındaki Kalibrasyonu Geçersiz Kıl'a basarak mevcut kalibrasyonun geçersiz kılındığından veya üzerine yazılacak bir konumda olduğundan emin olun.

Aynı toplama parametrelerini kullanarak, imleçle karşılık gelen kuyucuğu seçerek lazeri kalibantı içeren numune kuyucuğuna taşıyın ve Başlat'a basarak bir spektrum elde edin. Yeterli bir sinyal alındıktan sonra, verileri almayı tamamlamak için Başlat'a basın. Kalibrantın kütle spektrumu elde edildikten sonra, Kalibrasyon sekmesindeki bu kalibrasyon standardına karşılık gelen Kütle Kontrol Listesi açılır menüsünü seçin.

Karşılık gelen referans tepe noktasını seçilen her bir kalibrant tepe noktasıyla eşleştirmeden önce, İşleme sekmesini seçerek uygun bir tepe toplama protokolünün kullanıldığından emin olun. Kütle Kontrol Listesindeki referans kütlesini, ilgilenilen tepe noktasının solundaki alanı seçerek ve ardından uygulamak için kontrol listesindeki ilgili kütleye tıklayarak kalibant kütle spektrumu için karşılık gelen sinyale uygulayın. Kalan kalibant tepe noktaları için bu işleme devam edin.

Optimize edilmiş toplama parametreleri için kütle ölçeği kalibre edildikten sonra analit spektrumunu yeniden elde edin. Veri analizi yazılımında Analit Spektrumunu açın. X aralığında yakınlaştır düğmesini seçerek izotopik çözünürlüğe ulaşılıp ulaşılmadığını belirlemek için bir tepe noktasını yakınlaştırın.

Şimdi, Toplu Listeye basın ve tepe noktalarını seçmek için Bul'u seçin. Monoizotopik tepe çözülürse, bir monoizotopik tepe toplama protokolü kullanarak kütlesini belirlemek için izotopik dağılımdaki bu ilk tepe noktasını seçin. MALDI-TOF MS, sonlandırılan poli (L-laktid) tiyolün dar dağılımını doğrular ve burada gösterilen polimer özelliklerini hesaplamak için analiz yazılımı kullanılmıştır.

26-mer için gözlemlenen kütle 1973.62'dir, bu da teorik değerden eksi 0.07 dalton farklıdır. 2045.74'te daha küçük bir sinyal, laktik asidin halka açma polimerizasyonu sırasında transesterifikasyonun göstergesidir. 2057.73'teki küçük bir zirve, muhtemelen laktit monomerinin halka açma polimerizasyonu sırasında sudan başlatmanın sonucudur.

MALDI-TOF MS, maleimid ile bir tiyol-en reaksiyonundan sonra sonlandırılan poli (L-laktid) tiyolün dar dağılımını doğrular ve burada gösterilen polimer özelliklerini hesaplamak için analiz yazılımı kullanılmıştır. Sonlandırılmış 26-mer poli(L-laktit)tiolün teorik kütlesi, gözlemlenen kütleden 0.03 dalton farklı olan 2070.56891'e karşılık gelir. Potasyum ile iyonlaşan aynı tür de 2086.49'da gözlenmektedir.

2167.58'deki küçük bir zirve, başlangıç malzemesinde gözlemlenen su başlangıcından kaynaklanan aynı safsızlığın göstergesidir. Tiyol-en reaksiyon ürünleri için gözlemlenen aynı kütle kayması meydana gelmez, bu da bu karboksilik asit sonlu bileşiğin, işlevselleştirme reaksiyonuna girecek tiyol uç grubundan yoksun olduğunu gösterir. Bu videoyu izledikten sonra, numune hazırlama ve veri toplama parametrelerinin nasıl optimize edileceğini ve ayrıca polimerlerin MALDI-TOF kütle spektrometresi karakterizasyonu tarafından üretilen verilerin nasıl analiz edileceğini iyi anlamış olmalısınız.