Name: İki fotonlu Lipopolysaccharide tedavi fare karaciğer bağışıklık yanıtında sırasında lökositlerin Intravital görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-06T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Keşfedin, fare karaciğerinde lipopolisakkarit kaynaklı endotoksemi sırasında lökosit davranışlarını canlı görüntülemek için iki fotonlu intravital görüntüleme yöntemini. Bu teknik, karaciğer immünolojisi ve sepsis tedavilerinin değerlendirilmesi için yüksek çözünürlüklü platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışmada bir hibe--dan Ulusal Araştırma Vakfı, Kore (Kore hükümeti (MSIP; grant No 2016R1A2B4008199 Y-m tarafından finanse edilen NMG) tarafından desteklenmiştir H.), Sağlık Bakanlığı ve refah, Güney Kore (sayı vermek: HI14C1324).

Tüm yordamları kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi Yonsei Üniversitesi Tıp Fakültesi, Kore kılavuzlarınıza uygun olarak yapılmıştır. LysM-yeşil flüoresan protein (GFP; gfp / +) fareler8 ve CX3Cr1-GFP (gfp / +)9 fare 8-12 hafta-in yaş, intravital görüntüleme için kullanılmıştır. Tüm cerrahi alet autoclaved ve % 70 alkol ile dezenfekte edildi.
1. özel tasarlanmış fare araçları destekleyici odası Imaging karaciğer
<ol><li>Fare karaciğer odası tasarım görüntüleme<ol>
<li>Fare karaciğer (şekil 1) görüntüleme için aşağıdaki boyut TMMOB olun: iç Odası (120 mm Uzunluk × 160 mm genişlik × 30 mm yükseklik), dış Kamara (100 mm Uzunluk × 100 mm genişlik × 24 mm yükseklik), cıvata (Ф 3 mm × 30 mm yükseklik), fındık (Ф 4 mm) ve kanat şeklindeki fındık (Ф 4 mm).</li>
		<li>Kür Ajan ve elastomer 1:9 oranı temel silikon 120 g toplam yapmak için ölçmek.</li>
		<li>Sıvı silikon karışımı bir 250 mL Erlenmeyer şişeye koyun ve iyice karıştırın. Sonra bir desiccator şişeye koy ve hava kabarcıkları vakum altında yaklaşık 1 h için pompa ile kaldırın.</li>
		<li>10 mm yükseklik gibi yüksek bir özel tasarlanmış fare odasına sıvı silikon karışımı dökün ve izin için bir kaç gün (şekil 1A) tedavi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kapak slaytlar ve yatak sabitleme karaciğer hazırlanması<ol>
<li>Metal çerçeve üzerinde kapak cam silikon yapıştırıcı kullanarak ekleyin. 1 gündür (şekil 1B) kurumasını bekleyin.</li>
		<li>Etkili bir şekilde su daldırma lens için distile su tutmak için semipermanent su engelleme yapısı çok önemlidir. 1 mm silikon yapıştırıcı yuvarlama yapmak ve gecede sertleşmesine.</li>
		<li>Mix kür Ajan ve elastomer temel ve sonra içine 6-şey plaka bir yükseklikte, yaklaşık 8-10 mm. gerçekleştir sertleştirme işlemi 1.1.2-1.1.4 içinde açıklandığı gibi dökün.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. LPS hazırlanması
<ol><li>Steril 1 × fosfat tamponlu tuz (PBS) üzerinden Salmonella enterica serotip enteritidis LPS toz sulandırmak için hazırlayın. (1 × PBS: 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4).</li>
	<li>PBS su banyosu 37 ° C'de ön ısı ve LPS toz şişe (25 mg) dikkatlice açın.</li>
	<li>Damlalıklı yardımların kullanılması, steril PBS (5 mL) LPS toz şişe içine dökün ve hafifçe karıştırın veya hisse senedi çözüm hazırlamak için çözüm askıya alabiliriz. Not: LPS toz sıvılaşmış sonra sert vortexing kabarcıklar neden olabilir. Aliquots 1.5 mL tüplerde yaparken kaybı en aza indirgemek için baloncuklar yapmaktan kaçının.</li>
	<li>−20 ° C de hisse senedi LPS çözüm depolamak ve enjeksiyon için 1 mg/mL LPS çözüm içine oranında seyreltin.</li>
	<li>1 mg/mL LPS çözüm (20 mg/kg) 1-mL şırınga kullanarak bir sigara anestezi fare Periton enjekte. Denetim hayvan için PBS aynı hacmi enjekte.</li>
	<li>2s için yeterli inflamatuar yanıt bekleyin.</li>
</ol>3. kan damarları leke hazırlanması Texas-kırmızı Dextran
<ol><li>İki 15 mL konik boru ve 10 mL steril PBS hazırlayın.</li>
	<li>Texas-kırmızı Dextran toz (25 mg) PBS 3 ml seyreltik ve iyice karıştırın. Karışımı bir boş 15 mL konik tüp aktarın.</li>
	<li>Kalan PBS (7 mL) dextran karışımı (3 mL) içeren 15 mL konik tüp aktarın.</li>
	<li>0,45 µm şırınga filtre bir 10 mL şırınga ucunu bağlayın. Şırınga filtre iğne değiştirmeniz gerekir.</li>
	<li>Dextran karışımı (10 mL) filtre. Şırınga eşit dökülmesini önlemek için tuşuna basın.</li>
	<li>2.5 mg/mL dextran çözüm ışık bloke 1.5 mL tüp içinde 500 µL dağıtmak ve −20 ° C. saklayın Bir kez çözdürülen, 4 ° C'de depolayın</li>
</ol>4. cerrahi işlem
<ol><li>Cerrahi tablo ve tüm aletleri ameliyat öncesi % 70 alkol kullanarak dezenfekte edin. Sonra karaciğer ameliyatı için araçları seti ve ısıtma yüzeyi 37 ° C (şekil 2A, B) için ayarlayın.</li>
	<li>Anestezi için 30 mg/kg tiletamine/zolazepam ve 10 mg/kg xylazine ile fareler intraperitoneally enjekte et. Bu çözümler karışık olabilir ve aynı anda enjeksiyon için PBS içinde seyreltilmiş. Anesthetization yavaşça fare ayak basarak onaylayın.  Hiçbir refleks olduğunda sonraki adıma geçin.</li>
	<li>Fare'nın retina kuruluğu önlemek için göz merhem küçük miktarda uygulayın.</li>
	<li>Vücut saç saç dökücü krem (şekil 2C) kullanarak karın çevresinde kaldırın.</li>
	<li>Texas-kırmızı Dextran eriyik (2.5 mg/mL konsantrasyonu) kuyruk ven veya bir insülin şırınga (şekil 2B) kullanarak retro-orbital enjeksiyon yolu ile 200 µL enjekte.</li>
	<li>Şu subcostal alan bir marker ile işaretleyin. Çizgi xiphoid işleminden kaburga sonuna kadar çizilmiş olması. Forseps ve makas (şekil 2E, F) ile epidermis kesti.</li>
	<li>Karın boşluğu mikro-makas ve forseps kullanarak açın ve karaciğer dikkatle bulaşmasına neden. Sol yan lob pamuk temizleme bezi (Şekil 2 g, H) kullanılarak alınması.</li>
	<li>Steril PBS 500 µL kuruluk karaciğer önlemek için karın boşluğuna dökün.</li>
	<li>Özel olarak tasarlanmış odası sağ-decubitus konumda fareyi getirin ve doku yapıştırıcı az miktarda silikon yatağa uygulayın. Pamuk temizleme bezi (şekil 2I) kullanarak karaciğer yapıştırmanız dikkatle. Not: karaciğer dokusu son derece kırılgan olduğundan, mekanik karaciğerinden çekmeyin. Yavaşça pamuk temizleme bezi ile tomar dışarı.</li>
	<li>Birkaç saniye sonra Karaciğer karaciğer dışarı kurutma önlemek için steril PBS 500 µL ile tekrar ıslak. Metal çerçeve üzerinde karaciğer yerleştirin ve sıkıca fındık (şekil 2J) ile düzeltmek.</li>
</ol>5. İki fotonlu mikroskobu ile karaciğer intravital görüntüleme
<ol><li>ZEN yazılım (Carl Zeiss) üzerine lazer açmak, dalga boyunu ayarlamak için 880 nm ve set yeşil, çalıştırın ve kırmızı kanalları. Lazer güç floresan yoğunluğu (şekil 3A) göre ayarlayın. Emisyon filtre bilgi ise şöyle: yeşil/Alexa488, 500-550 nm ve kırmızı/Alexa 555, 575-610 nm.</li>
	<li>Odası görüntüleme sahnesinde yerini ve 20 X su-daldırma objektif lens kapağı cam yakın yerleştirin.</li>
	<li>Silikon kauçuk ısıtıcı (şekil 3B), vücut ısısını korumak için fare cesedi altında düzeltmek.</li>
	<li>500 µL distile su üzerinde metal çerçeve bırakın ve sonra karaciğer (şekil 3 c) yakın objektif lens çekin.</li>
	<li>Derinlik ve saati görüntüleme alanını belirlemek ve odağı ayarlayın.</li>
	<li>Kuralları görüntüleme.</li>
	<li>Uzun vadeli görüntüleme için her saat görüntüleme sırasında yarım doz tiletamine/zolazepam ve xylazine karışımı enjekte et. Vücut ısısı 37 ° C'de farelerin Bakımı sırasında bu sahne çok önemlidir. Her zaman anesthetization zaman her fare farklılık fare için göz kulak ol. Not: Bu yöntem cerrahi ve görüntüleme sonra kurtarma için uygun değildir. Etik fare hemen ameliyat sonrası kurban ediyoruz.</li>
	<li>Kararlı anesthetization için her 30 dakika pedal refleksleri kontrol edin.</li>
</ol>6. veri analizi
<ol><li>Veri analiz yazılımı Volocity açın ve sonra kütüphanede ham veri yazılım alın.</li>
	<li>Gürültü durumu uygun ve bir anlık görüntü almak için görüntüden kaldırın. Not: düzgün görüntü elde etmek, 'Para' veya 'Orta' filtresini kullanın. Ayrıca, karanlık ya da bulanık görüntülerin daha net yapmak için 'Kontrast geliştirme' özelliğini kullanın.</li>
	<li>Anlık görüntüler için JPEG veya TIFF dosyalarını ve AVI dosyalarını filmler için % 100 ve ihracat için düzenlenmiş öğe sığar.</li>
</ol>

<ol><li>Girard, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fuels%2C+hormones%2C+and+liver+metabolism+at+term+and+during+the+early+postnatal+period+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Fuels, hormones, and liver metabolism at term and during the early postnatal period in the rat.</a> J Clin Invest. 52 (12), 3190-3200 (1973).</li>
<li>Marques, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+liver+biology+in+vivo+using+conventional+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Imaging liver biology in vivo using conventional confocal microscopy.</a> Nat Protoc. 10 (2), 258-268 (2015).</li>
<li>Dasari, S., Weber, P., Makhloufi, C., Lopez, E., Forestier, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+Microscopy+Imaging+of+the+Liver+following+Leishmania+Infection%3A+An+Assessment+of+Hepatic+Hemodynamics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics.</a> J Vis Exp. (101), e52303(2015).</li>
<li>Honda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+neutrophil+recruitment+in+hepatic+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of neutrophil recruitment in hepatic ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Transplantation. 95 (4), 551-558 (2013).</li>
<li>Jenne, C. N., Wong, C. H., Petri, B., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+spinning-disk+confocal+microscopy+for+the+intravital+analysis+of+platelet+dynamics+in+response+to+systemic+and+local+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The use of spinning-disk confocal microscopy for the intravital analysis of platelet dynamics in response to systemic and local inflammation.</a> PLoS One. 6 (9), e25109(2011).</li>
<li>Ritsma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy+through+an+abdominal+imaging+window+reveals+a+pre-micrometastasis+stage+during+liver+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy through an abdominal imaging window reveals a pre-micrometastasis stage during liver metastasis.</a> Sci Transl Med. 4 (158), 158ra145(2012).</li>
<li>Sierro, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Liver+Capsular+Network+of+Monocyte-Derived+Macrophages+Restricts+Hepatic+Dissemination+of+Intraperitoneal+Bacteria+by+Neutrophil+Recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">A Liver Capsular Network of Monocyte-Derived Macrophages Restricts Hepatic Dissemination of Intraperitoneal Bacteria by Neutrophil Recruitment.</a> Immunity. 47 (2), 374-388 (2017).</li>
<li>Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insertion+of+enhanced+green+fluorescent+protein+into+the+lysozyme+gene+creates+mice+with+green+fluorescent+granulocytes+and+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages.</a> Blood. 96 (2), 719-726 (2000).</li>
<li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+fractalkine+receptor+CX%283%29CR1+function+by+targeted+deletion+and+green+fluorescent+protein+reporter+gene+insertion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion.</a> Mol Cell Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).</li>
<li>Heymann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+intravital+multiphoton+microscopy+imaging+of+immune+cells+in+healthy+and+diseased+liver+using+CXCR6.Gfp+reporter+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Long term intravital multiphoton microscopy imaging of immune cells in healthy and diseased liver using CXCR6.Gfp reporter mice.</a> J Vis Exp. (97), (2015).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının bildirin.

Karaciğer aktif olarak birçok gruplar3,10, onun işlevini önemi nedeniyle tarafından incelenmiştir. Örneğin, Heymann vd. özel kullanarak hassas bir yöntem önerdi. Bu yöntem son derece kesin olarak bulundu rağmen özel ayar sürüyor. Ancak, bizim metodoloji ile tüm yordamları karıştırıcı diğer faktörler minimize 30 dk içinde yürütülen. Kalp atışı video rahatsız edemez çünkü İkincisi, karaciğer sabitleme son derece önemlidir. Bu olgu ortadan kaldırmak için biz fareyi ...

Karaciğer önemli metabolik organ memelilerde olduğunu; enerji, hormonlar ve detoksifikasyon1için bir kontrol kulesi olarak görür. Onun önemi nedeniyle, araştırmacılar değişiklikleri karaciğerde iltihap sırasında aydınlatmak için birçok vitro ve in vivo deneyler yaptık. İntravital mikroskobu karaciğer2 canlı görüntüleri yakalamak için kullanılır. Gerçekten de,2,3,4,5,6çeşitli karaciğer görüntüleme yöntemleri olmuştur tanıttı. Ancak, daha basitleştirilmiş bir cerrahi yaklaşım geliştirmek ve sabitleme hedef organ ve bağışıklık hücreleri elde etmek için biz kendi çaba intravital görüntüleme için en aza indirmek araştırmacılar rehberlik eder basit bir protokol tasarlanmıştır.
Bu çalışmada, istikrarlı ve yeni görüntüleme odası ve kanama ve olası enfeksiyon en aza indirmek için kullanılabilir cerrahi tekniği tanıttı. Karaciğer daha 2 h için sağlam kaldı doğruladı. Bu yöntemle başarıyla türleri Morfoloji LCMs7 ve nötrofil septik koşul altında tanımlanan. Bu yöntem titreyen ve beklenmedik iltihabı gibi fiziksel ve biyolojik karıştırıcı faktörlerin cerrahi işlem sırasında en aza indirir bu yana, biz bu yöntemi yanıt olarak karaciğerde bağışıklık hücrelerinin akut reaksiyonlar gözlemlemek için kullanılan olabilir tahmin reaktifler LPS severim.

<table><tbody><tr><td>Özel tasarlanmış oda</td><td>Canlı Hücre Aletleri</td><td></td><td>Özel tasarlanmış boyut</td></tr><tr><td>Metal kapak sürgüsü</td><td>Canlı Hücre Aletleri</td><td></td><td>Özel tasarlanmış boyut</td></tr><tr><td>Kapak camı</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td> <td># 72204-03</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silikon elastomer kiti</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Erlenmeyer şişesi</td><td>DURAN</td><td>21 216 36</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü plakası (Düz tip)</td><td>HYUNDAI Micro Co.</td><td>H31006</td><td></td></tr><tr><td>Kurutucu</td><td>ADARSH</td><td>55204</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek Q BOND SE 5 mL</td><td>BJM LAB</td><td></td><td>Yarı kalıcı baraj yapmak için</td></tr><tr><td>Esnek Silikon Kauçuk Isıtıcılar</td><td>Omega</td><td>SRFR/SRFG SERİSİ, M1250/0800</td><td></td></tr><tr><td>DC güç kaynağı</td><td>Toyotech</td><td>DP30-03A</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su Ev</td><td></td><td></td><td>yapımı</td></tr><tr><td>Salmonella enteria serotip enteritidis'ten lipopolisakkaritler (LPS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6011</td><td></td></tr><tr><td>Texas Red Dextran</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1830</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Yüksek berraklıkta polipropilen konik tüp</td><td>FALCON</td><td>14-959-49B</td><td></td></tr><tr><td>0.45 & mu; m filtre (Minisart Şırınga Filtresi)</td><td>Sartorius</td><td>16555k</td><td></td></tr><tr><td>1.5ml Mikro Tüp, Amber</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-X</td><td>Işığı bloke eden</td></tr><tr><td>1 mL şırınga</td><td>için Kore Aşısı</td><td>KV-S01</td><td></td></tr><tr><td>3 mL şırınga</td><td>Kore Aşısı</td><td>KV-S03</td><td></td></tr><tr><td>10 mL şırınga</td><td>Kore Aşısı</td><td>KV-S10</td><td></td></tr><tr><td>0.3 mL insülin şırıngası</td><td>Becton Dickinson</td><td>324900</td><td></td></tr><tr><td>Tüy dökücü krem 100 mL</td><td>Vücut doğal</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pamuklu çubuk</td><td>ABDI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zoletil 50 5 mL</td><td>Virbac</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rompun 10 mL</td><td>Bayer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isıtma plakası</td><td>Canlı Hücre Aletleri</td><td>PH-S-10</td><td>Özel tasarlanmış boyut</td></tr><tr><td>DC kontrol cihazı</td><td>Canlı Hücre Aletleri</td><td>CU-301</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodeseksiyon Makası</td><td>Harvard Aparatı</td><td>72-5418</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Roboz</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>Roboz</td><td>RS-5137</td><td></td></tr><tr><td>Veteriner bağı</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>ZEN yazılımı (Black Edition)</td><td>LSM 7 MP LSM 7 MP</td>Carl <td>Zeiss için Carl Zeiss</td><td></td></tr> <tr><td></td><td></td><td></td><td>Programı</td></tr><tr><td>Volocity</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td>Analiz programı</td></tr></tbody></table>

İki fotonlu lipopolysaccharide tedavi fare karaciğer bağışıklık yanıtında sırasında lökositlerin intravital görüntüleme

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

Sepsis organ yetmezliği ve doku neden olabilir şiddetli enfeksiyon türüdür hasar. Mortalite ve morbidite oranları sepsis ile ilişkili, ancak son derece yüksek, hayır doğrudan tedavi vardır veya mekanizma organ ile ilgili ayrıntılı gerçek zamanlı olarak inceledi. Karaciğer toksinleri ve enfeksiyonlar insan vücudunda yönetir anahtar organdır. Burada, nötrofil ve karaciğer kapsüler makrofajlar (LCMs) gibi bağışıklık hücreleri hareket izlemek için fare karaciğer intravital görüntüleme sonra endotoksemi indüksiyon gerçekleştirmek amaçladık. Buna göre bir roman cerrahi yöntemi pozlama minimal invaziv cerrahi ile karaciğer için tasarlanmış. Fareler intraperitoneally ile lipopolysaccharide (LPS), bir ortak endotoksin enjekte edildi. Pozlama ve LPS tedavi LysM-yeşil flüoresan protein (GFP) fare karaciğer, o nötrofil bulduk alımı intravital görüntüleme için bizim yeni cerrahi yaklaşım kullanarak fare karaciğer bununla fosfat tamponlu göre artış serum fizyolojik tedavi karaciğer. LPS tedaviden sonra nötrofil sayısı önemli ölçüde zamanla arttı. Ayrıca, CX3Cr1-GFP fare kullanarak, biz başarıyla karaciğer ikamet makrofajlar LCMs adı görüntülenir. Bu nedenle, bağışıklık hareketlilik vivo içindekontrol etmek için yeni reaktifler etkinliğini araştırmak için hareketliliği ve nötrofil ve LCMs morfolojisi karaciğerde belirleme organ yetmezliği ve doku hasarı nedeniyle tedavi edici etkisi tanımamıza izin verebilir Sepsis lökosit etkinleştirme.

Basit ve çok kararlı görüntüleme odası geliştirildi. Odası alt fare vücudu ve organları kaymasını engelleyen silikon ile kaplıydı. Ayrıca, silikon elastikiyet doğru miktarda olduğundan, beklenen hasar kapak slayt (şekil 1A, C) basınç tarafından indüklenen engelleyebilir. İkinci, doku-kasa tutkal (veteriner bond)'i ayıklanan karaciğer daire şeklinde silikon yatağa düzeltmek için uygulandı. Bu yöntem kalp atışı ya da respirational hareketi nede...

Bir roman cerrahi protokol İki fotonlu görüntüleme en az invaze olan canlı fare karaciğer için kurduk. Bu teknik ile karaciğer detaylı yapısını lipopolysaccharide kaynaklı endotoksemi sırasında tespit. Biz bu yöntemi hepatik lökosit göç için çeşitli reaktifler tedavinin etkinliğini belirlemek için kullanılması gereken tahmin.

İki fotonlu Lipopolysaccharide tedavi fare karaciğer bağışıklık yanıtında sırasında lökositlerin Intravital görüntüleme

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

Bu prosedürün genel amacı, septik şok sırasında karaciğer içindeki lökositlerin morfolojisini ve işlevselliğini gözlemlemektir. Bu tekniğin temel avantajı, karaciğer içindeki lökositlerin doğrudan videolarını elde edebilmenizdir. Ameliyattan önce ameliyat masasını ve tüm aletleri dezenfekte etmek için %70 etanol kullanın.Ardından karaciğer ameliyatı için aletleri ayarlayın ve ısıtma plakasını 37 santigrat dereceye ayarlayın. Metin protokolüne göre LPS veya PBS enjekte edilen fareleri uyuşturduktan sonra, retinanın kurumasını önlemek için az miktarda göz merhemi uygulayın. Karın çevresindeki tüyleri almak için bir jilet ve tüy dökücü krem kullanın.Ardından karnı temizlemek için ıslak gazlı bez kullanın. Bir insülin şırıngası kullanarak retro-orbital enjeksiyon yaparken, 200 mikrolitre Texas kırmızı dekstran çözeltisi enjekte edin. Ksifoid işleminden kaburganın sonuna kadar sağ subkostal alanı işaretlemek için bir işaretleyici kullanın.Daha sonra ikincil enfeksiyonu önlemek için farenin karnına povidon iyot uygulayın. Epidermisi kesmek için forseps ve makas kullanın. Daha sonra, mikro makas ve forseps kullanarak karın boşluğunu açın ve karaciğeri dikkatlice ortaya çıkarın.Sol yan lob

two-photon-intravital-imaging-leukocytes-during-immune-response

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Burada, fare Kapkaççı lökosit homing çalışmada non-invaziv bir iki foton (2P) mikroskopi yaklaşımı açıklar. Biz, bizim doku görüntüleme hazırlık teknik yönlerini tartışmak ve yürütme ve veri toplama için kurulmuş ilk tipik bir deney yoluyla okuyucu yürümek.

Lökosit Homing Göç ve non-invaziv Görüntüleme In vivo</em

2-foton mikroskopi son gelişmeler, gerçek zamanlı...

Intravital Görüntüleme Fare Popliteal Lenf Nodu

Bu makale, görüntü elde etme ve analiz için özel bir metodoloji ile birlikte intravital mikroskopi görüntüleme kullanılarak fare karaciğer damar sisteminin tek tek kan damarları içindeki kan akış hızının dinamik ölçümü ve miktarının belirlenmesi için ayrıntılı bir yöntem hakkında ayrıntılı bir yöntem hakkında rapor vermektedir.

Aşağıdaki Karaciğer intravital Mikroskopi Görüntüleme<em&gt; Leishmania</em&gt; Enfeksiyon: Karaciğer Hemodinami Üzerine Bir Değerlendirme

Karaciğerdeki immün hücrelerin stabil intravital yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi zordur. Burada, yoğun bakım monitörizasyonu ile birlikte intravital multifoton lazer tarama mikroskobu ile fare karaciğerindeki bağışıklık hücrelerinin göçünü ve hücre-hücre etkileşimlerini uzun süreler boyunca (yaklaşık 6 saat) incelemek için oldukça hassas ve güvenilir bir yöntem sunuyoruz.

CXCR6.Gfp Muhabir Fare kullanma Sağlıklı ve hastalıklı Karaciğer Bağışıklık Hücreleri Uzun Vadeli intravital multiphoton Mikroskopi Görüntüleme

Farelerde mezenter damarlarının intravital mikroskopisinin bu basitleştirilmiş uygulaması, lökosit-endotel ve trombosit-lökosit etkileşimlerini gözlemlemek için farklı inflamasyon modellerinde kullanılabilir.

Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri

Anestezi uygulanmış farelerde intravital konfokal mikroskopi kullanarak kararlı durum ve enflamatuar koşullar altında mezenterik venlerdeki nötrofillerin ve monositlerin davranışını izlemek için bir protokolü detaylandırıyoruz.

Real Time Anestetize Farelerde Intravital Mikroskopi Mezenterik Damarlardaki nötrofiller ve monositler Görüntüleme

Burada, CD11c.DTR farelerinin intratrakeal difteri toksini tedavisi ile indüklenen, bir aseptik fulminan miyokardit modelinde kardiyak CD45 + lökosit infiltrasyonunu görselleştirmek için bir ışık-tabakalı mikroskopik yaklaşım anlatılmaktadır.

Bir Fulminan Miyokardit Modelinde Işık Yeri Mikroskopisi İle Lökosit İnfiltrasyonunun Nicel Görselleştirilmesi

Biz faktörler ana bilgisayar kodlama faaliyetlerini analiz için kullanılan her iki tüp bebek ve içinde vivo enfeksiyonu deneyleri tarif.

Bakteriyel Pathogen sonda için hücresel ve Organismic düzeyi ana bilgisayar yanıt için kullanma

Biz GFP etiketli γδ IELS görselleştirmek için bir yöntem açıklamak, ters dönen disk konfoksel mikroskobu tarafından murine ince bağırsak intravital görüntüleme kullanarak. Bu teknik, 4 h 'ye kadar mukoza içindeki canlı hücrelerin takibini sağlar ve çeşitli bağırsak immün-epitelyal etkileşimleri araştırmak için kullanılabilir.

Murine Ince bağırsak INTRAEPİTELYAL lenfosit intravital görüntüleme

Burada, nakledilen farenin sol akciğerini iki foton mikroskobu kullanarak intravitalal olarak görüntülemek için bir protokol sunuyoruz. Bu, murin akciğer naklini takiben hücresel dinamikleri ve etkileşimleri gerçek zamanlı olarak incelemek için değerli bir araçtır.

Nakledilen Fare Akciğerinin İntravital İki Foton Mikroskobu

Keşfedin, fare karaciğerinde lipopolisakkarit kaynaklı endotoksemi sırasında lökosit davranışlarını canlı görüntülemek için iki fotonlu intravital görüntüleme yöntemini. Bu teknik, karaciğer immünolojisi ve sepsis tedavilerinin değerlendirilmesi için yüksek çözünürlüklü platform sunar.

İki fotonlu Lipopolysaccharide tedavi fare karaciğer bağışıklık yanıtında sırasında lökositlerin Intravital görüntüleme

Daha fazla video keşfet