Name: İnsan kullanarak Pluripotent kök hücre kaynaklı hepatosit benzeri hücreler indüklenen ilaç bulma için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-19T12:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: Öğrenin, insan iPSC'lerini hepatosit benzeri hücrelere farklılaştırma ve yüksek verimli tarama için ilaç keşfi yapma yöntemini. Bu teknik, karaciğer hastalıkları için kişiselleştirilmiş tedavi araştırmalarını kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Ulusal Sağlık Enstitüleri (DK55743, DK087377, DK102716 ve HG006398 S.A.D için) tarafından desteklenmiştir. Dr. Behshad Pournasr, Dr. James Heslop ve Ran Jing katkılarından dolayı teşekkür etmek istiyorum.

1. insan kültürünü Pluripotent kök hücreler indüklenen
<ol><li>
Rekombinant insan E-Cadherin Fc füzyon proteini (E-cad-Fc) veya diğer matrisler hPSC kültür için uygun kaplama 6<ol>
<li>E-cad-Fc 15 μg/mL Dulbecco'nın Phosphate-Buffered kalsiyum ve magnezyum (DPBS (+)) içeren serum fizyolojik ile oranında seyreltin.</li>
		<li>Kat 100-mm süspansiyon doku kültürü yemekleri ile seyreltilmiş E-cad-FC 5 mL için en az 1 h. Kaldır substrat 37 ˚C, kuluçkaya ve Orta (Örneğin, mTeSR1 bundan sonra M-aracı olarak anılacaktır) ile 5 mL yerine7. Not: Bu protokol için kullanılan kültür orta yayımlanmış protokolleri7takip hazırlanır. Ancak, diğer birçok medya hazırlıklar tarif var veya ticari, are elde edilebilir bu yordamı ile büyük olasılıkla uyumludur.</li>
		<li>Cryopreserved iPSCs bir şişe sıvı azot almak. Kadar küçük buz kristal kalır 37 ˚C çözülme. Yavaşça hücreleri M-Orta 4 mL içeren bir steril 15 mL konik tüp pipet.</li>
		<li>5 dk. süpernatant kaldır ve yavaşça Y-27632, selektif inhibitörü olan Rho ilişkili, kıvrılmış-coil içeren protein kinaz (ROCK) 10 µM ile desteklenmiş orta 5 mL içeren hücreleri yeniden askıya almak için de 300 x g santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Ve hücre 5 mL adımından 1.1.4 E-cad-Fc-kaplı 100-mm süspansiyon doku kültürü yemekleri için transfer M-orta adım 1.1.2 den çıkarın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Kültür insan iPSCs Bakımı
	<ol>
<li>Çevresinde iPSCs ulaştıktan sonra % 80 confluency, kültür orta kaldırmak ve bir kez kalsiyum ile yıkayın ve magnezyum ücretsiz DPBS (-). DPBS (-) Aspire edin ve kuruyucu, sonra 3 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya %0.02 EDTA çözüm yeterli miktarda ekleyin. Not: % 80 izdiham plaka 2 x 107 hücreleri içermelidir. Hücreleri sarmak değil ve hücreleri bir farklılaşmamış morfoloji korunmasını sağlamak için önemlidir. Hücreler pluripotent kök hücre işaretçisi Tra-1-60 veya eşdeğer8ile boyama tarafından belirlenebilir.</li>
		<li>Serbest bırakmak hücrelere başlar başlamaz, %0.02 EDTA çözeltisi kaldırmak ve hücreleri serbest bırakmak için M Orta 10 mL ile çanak su basması. İPSCs dekolmanı yavaşça pipetting tarafından yardım. Not: Yaklaşık 3 dakika ortalama kuluçka zamanı ayırmak hücreler için ama bu her IPSC satırı için ampirik olarak belirlenecek ihtiyacı var. Hücreleri çevresinde içeren küçük kümeleri olarak piyasaya sürülmelidir küme başına 5-10 iPSCs.</li>
		<li>1/10 temiz E-cad-Fc kaplamalı 100 mm süspansiyon doku kültürü çanak M-orta 5 mL içeren başına askıya alınan hücre / aktarın. 37 ˚C altında %4 O, kültürler kuluçkaya2/5% CO2 ve değişim orta günlük. Not: Her ne kadar iPSCs rutin Nanog teşvik için fizyolojik oksijen koşullarında kültürlü, iPSCs ortam oksijen kullanarak da yetiştirilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. insan iPSCs 96-şey plakaları hepatosit benzeri hücrelere farklılaşma
Not: Bu bölümde iPSCs tarama ile uyumlu bir biçimde farklılaşma açıklanmaktadır. Bu yaklaşımı kullanarak, ayırmak ve 20 gün içinde hepatosit benzeri hücreleri oluşturmak için insan iPSCs ikna etmek mümkündür. Bu çoğu deneyleri için uygun olmakla birlikte, kültür uzunluğu hücreleri olgunluk geliştirmek için genişletilebilir.
<ol><li>
96-iyi doku kültürü pilakalar ve düşük büyüme faktörü membran matris kaplama
	<ol>
<li>Hisse senedi 2 mg/ml steril buz gibi DMEM/F12 doku kültürü orta ile matris sulandrarak hazırlayın. Matrisin 250 μL aliquots bölmek ve gerekli kadar-80 ˚C saklayın. DMEM/F12 buz 30 dk. almak için 10 mL 250 μL aliquot 2 mg/mL matris stokunun ve tezcan buza chill.</li>
		<li>Matrix yavaşça olarak 0,05 mg/mL nihai toplama yapmak için önceden soğutulmuş bir pipet kullanarak karıştırarak 10 mL soğuk DMEM/F12 ile birleştirin.</li>
		<li>100 μL seyreltilmiş matrisinin bir 96-iyi doku kültürü tabak her şey için transfer. 37 ˚C kuluçkaya, en az 1 h için %4 O2/5% CO2 matrisin atmak ve iyi 50 M-Orta μL ile değiştirin. 37 ° C'de, %4 O2/5% CO2 gerekinceye kadar saklayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Plaka hücre farklılaşması için
	<ol>
<li>Hücrelerin % 80 izdiham e varana kadar 100-mm plakalar üzerinde iPSCs kültür. Plaka 2 x 107 hücreler içerdiğinden emin olun. Hücre sayıları hücre akış sitometresi veya hemasitometre belirler. Not: Tecrübesiyle, kalite iPSCs hücrelerinin mikroskopisi tarafından değerlendirilecektir olabilir; Ancak, hücreleri % 98'i yakın pluripotency işaretleri FACS veya immunostaining kullanılarak ölçülen TRA-1-60 epitope gibi hızlı. Bu hücreler aktif bölme kalır ve değil büyümüş önemlidir.</li>
		<li>Her 100-mm plaka iPSCs hasat için kültür orta Aspire edin ve 5 mL DPBS (-) ile durulayın. Durulama 3 mL hücre dekolmanı çözeltisi (Örneğin, accutase) ile değiştirin ve yaklaşık 2 dak 37 ° c, % 4 O2/5% CO2için kuluçkaya. Not: Dekolmanı hücrelerinin mikroskopisi tarafından takip etmek önemlidir. Özet accutase ile bitmedi yapmak. Hücreleri en az tedavi ile küçük kümeleri olarak serbest bırakmak için hedeftir.</li>
		<li>Ayırmak hücreleri başlar başlamaz M-orta 7 mL ekleyerek hasat. Birkaç kez pipet hücre kolonileri küçük kümeler halinde ayırmak için 3-6 hücreler (Şekil 1A).</li>
		<li>5 dk. süpernatant kaldırmak ve yeniden 5 mL M-Orta hücre Pelet askıya iPSCs 15 mL steril santrifüj tüpü ve santrifüj 300 x g de içine toplamak.</li>
		<li>96-şey matris kaplı plakalar üzerine hücreleri tarafından süspansiyon hücre pipetting 50 μL her kuyuya eşit olarak dağıtabilmenizi. Her 96-şey tabak ayarlamak için hücreleri, farklılaşma kurulum için yaklaşık 5 x 106 hücreler içeren yaklaşık % 80'i confluency ile iPSCs bir 100-mm tabak kullanın. Bu süreci hızlandırmak için bir çok kanallı pipet kullanın. Gecede, 37 ˚C, %4 O2/5% CO2hücre kültür. Not: Bu hücreler eşit sayıda tekrarlanabilir saptamaları emin olmak için her kuyuya yatırılır önemlidir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hücrelere farklılaşma teşvik
	<ol>
<li>96-şey plakaları mikroskobu tarafından hücre yüzey her bireyin en az % 70'i de kapak emin olmak için incelemek. Kapsama alanı % 70'den az ise, orta ile taze orta yerine ve 37 ˚C, %4 O2/5% CO2de ek bir 24 h için kuluçkaya. Not: Yaygın olarak farklılaşma inducing olmadan kaplama sonra hücreler daha 48 h için kuluçka farklılaşma verimliliğini azaltır. Her ne kadar verim olabilir etkilenen. farklılaşma ortam oksijen kullanarak yapılır
</li>
		<li>Gün 1 gün 2 farklılaşma, (olmadan insülin), % 2 ' B27 ile takıma RPMI kültür orta yerine 100 ng/mL aktivin A, 10 ng/mL BMP4 ve 20 ng/mL FGF2. Orta iyi başına 100 μL ekleyin ve ortam O2/5% CO2 2 gün için bir günlük orta değişiklikle 37 ˚C, kuluçkaya. Not: 96-şey tabak çok sayıda ile ilgili bir yardımlı pipet veya robot kullanımı gerektirir. 12 kanallı ve 96-kanal pipetler günlük orta değiştirmek için idealdir.</li>
		<li>3. gün için günlük 5 farklılaşma Değiştir RPMI ile kültür orta %2 B27 (insülin) olmadan ve 100 ng/mL aktivin A. Kültür ile ortam O2/5% CO2 3 gün için günlük orta değiştirmek ile 37 ˚C hücreleri takıma.</li>
		<li>Taze kültür orta, tedavi her takmadan önce farklılaşma günde 5, iyi 100 μL %0.02 EDTA çözüm 30 s, o zaman kaldır ve Değiştir ile taze kültür orta ile. Not: Farklılaşma endoderm için verimli ise, hücre ayırt monolayer plaka için peeling eğilimli olur. %0,02 EDTA çözeltisi kısa bir tedaviyle hücre dekolmanı hafifletmeye yardımcı olur. Bu tedavi için tetkikine farklılaşma etkilemez.</li>
		<li>Gün 6-10 arasında ayırt etme için kültür B27 (insülin ile) 20 ng/mL BMP4 ve 10 ng/mL FGF2 ile desteklenmiş ve 37 ˚C, %4 O2/5% CO2 günlük orta değiştirmek ile 5 gün boyunca, kuluçkaya Orta % 2 / RPMI ile değiştirin. Bu aşamada hücreleri hepatik progenitör hücre içine ayırt etmek için neden olmaktadır.</li>
		<li>Gün 11-15 arasındaki farklılaşma için kültür B27 (insülin ile) desteklenmiş orta RPMI / %2 20 ng/mL ile HGF değiştirin. 37 ˚C, %4 O2/5% CO2 günlük orta değiştirmek ile 5 gün boyunca, kuluçkaya.</li>
		<li>Gün 16-20 arasındaki farklılaşma için bir hepatosit hücre kültür 20 ng/mL ile Oncostatin-M (OSM) takıma Orta (HKM) kültür orta yerine. Senaryo Özeti ortam O2/5% CO2 5 gün için günlük orta değiştirmek ile 37 ˚C kuluçkaya. Not: Bireysel wells arasındaki farklılaşma tekrarlanabilirlik verimli albümin, AFP veya orta ELISA tarafından salgılanan APOB göreli düzeyi ölçülerek belirlenebilir (bkz: 3.2).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. küçük molekül tarama
Not: Aşağıdaki APOB düzeyini Orta ailesel hiperkolesterolemi iPSCs türetilmiş hepatosit benzeri hücre düşürmek için kullanılan bileşenleri tanımlamak için kullanılan yordamı açıklar. Açıklanan model ve kullanımı kolesterol düşürücü ilaçlar tanımlaması ile bir açıklama ayrıntılı olarak daha önce5,9. Geçerli örnek, Güney Carolina bileşik toplama (SC3) kitaplığından 1.000 bileşikler gösterildi. Her bileşik 2 μg/mL konsantrasyonu test edildi.
<ol><li>
IPSC - küçük moleküller ile türetilmiş tetkikine tedavisinde
	<ol>
<li>Tabak bileşikleri, 20 μg/mL bir konsantrasyon ile çalışma stoklarının % 2 DMSO ve -20 ˚C mağazasında oluşturmak için ana bileşik kitaplık sulandırmak.</li>
		<li>IPSC kaynaklı tetkikine test edilecek her bileşik izin vermek için yeterli 96-şey plakaları hazırlayın. Not: Taranacak bileşikler sayısı gereklidir 96-şey tabak sayısını belirleyecektir. Genel olarak, bir tek de herhangi bir kontrol örnekleri için her bileşik, artı ek kuyuları için hazırlanmalıdır. Plaka en dıştaki kuyu sık yorumu bozuk kenar efektleri olasılığını azaltmak için kaçınılmalıdır. Sayısı çoğaltır kullanmaya gerek kalmadan z-skor yöntemi kullanılarak belirlenebilir. Çoğaltır varsa, t testi kullanmak daha uygundur.</li>
		<li>Farklılaşma (gün 20, bakın 2.3.7) bitiminde, taze HCM 100 μL ile kültür orta yerine20 ng/mL ile Oncostatin-M desteklenmiştir. 37 ˚C kuluçkaya, tam olarak 24 h için %4 O2/5% CO2 taze 96-şey plaka ve -20 ˚C mağazasında içine kültür orta almak. Bu örnek APOB düzey ilaç eklenmesi önce Orta hesaplamak için kullanın.</li>
		<li>20 ng/mL Oncostatin-M her kuyuya ile takıma taze HCM 90 μL ekleyin. Her bileşik 10 μL çalışma stoktan pipetting tarafından karıştırdıktan sonra ekleyin. Tedavi örnekleri son konsantrasyon maç ve 37 ˚C kuluçkaya wells denetlemek için % 0,2 DMSO eklemek, ortam O2/5% CO2 tam olarak 24 h için kültür orta toplamanız ve -20 ˚C. Bu örnek bileşikler ile tedaviden sonra APOB düzeyini belirlemek için kullanın.</li>
		<li>İsteğe bağlı - kalan hücreleri immunostaining, hücre canlılığı veya standart yaklaşımları kullanarak mRNA düzeylerinin analizleri için işlenebilir. Not: Bu ekran APOB düzeyleri üzerinde hızlı bir etkisi vardı uyuşturucu tanımlamak için tasarlanmıştır. Ancak, hastalık modeli, aşağı akım deneyleri veya ilaç etki mekanizmaları bağlı olarak, bu örnek için birden fazla gün tedavisi faydalı olabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ELISA tarafından APOB düzeylerini belirlemek
	<ol>
<li>Üreticinin iletişim kuralları takip insan APOB ELISA geliştirme seti kullanarak her iki öncesi ve sonrası uyuşturucu tedavi örneklerinden apolipoprotein B (APOB) konsantrasyonu belirlemek.</li>
		<li>
Aşağıdaki çözümleri hazırlanıyor
		<ol>
<li>Yıkama arabellek, %0.05 oluşan ara 20 dakika sonra PBS, pH 7.4. 4 ˚C kullanmak kadar saklamak.</li>
			<li>Kuluçka arabellek, % 0.05 arası 20 ve % 0.1 sığır serum albümin (BSA) PBS, pH 7.4 içinde oluşur. 4 ˚C kullanmak kadar saklamak.</li>
		</ol>
</li>
		<li>PBS, pH 7.4 2 µg/ml sulandrarak APOB (mAB 20/17) antikor hazırlayın. Seyreltilmiş antikor iyi başına 100 μL ekleyin ve 4 ˚C gecede kuluçkaya.</li>
		<li>Antikor tahlil plakalar kaldırmak ve her biri de iki kez PBS, pH 7.4 200 μL yıkayın.</li>
		<li>%0,05 200 μL/iyi eklemek ara 20, % 0,1 sığır serum albümin (BSA) PBS, pH 7.4 içinde ve oda sıcaklığında 1s için titreyen bir platform üzerinde kuluçkaya.</li>
		<li>PBS, APOB aşağıdaki konsantrasyonları ile pH %7,4 0.05 arası 20 ve % 0.1 BSA kullanılarak bir 8-nokta standart eğri hazırlamak: 300 ng/mL, 200 ng/mL, 175 ng/mL, 150 ng/mL, 125 ng/mL, 100 ng/mL, 75 ng/mL ve 50 ng/mL.</li>
		<li>Test örnekleri 1:4 ile % 0.05 arası 20 ve % 0.1 BSA içinde PBS, pH 7.4 oranında seyreltin.</li>
		<li>Kuluçka arabellek ile engelleme 1 h sonra arabellek atmak ve beş kez ile %0,05 200 μL tahlil tabak yıkama PBS, pH 7.4 Ara 20.</li>
		<li>Tamamen ve 90 μL seyreltilmiş örnekleri ve APOB standartları için tahlil tabak transfer herhangi bir kalıntı çamaşır arabellek çıkarın. Bir shaker 1 h için oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
		<li>Örnek atmak ve yıkama 200 μL %0,05 ile ara 20 dakika sonra PBS, pH İyi 7.4. Yıkama toplam 5 kez tekrarlayın. MAB LDL 11-biotin seyreltilmiş 1:1,000 kuyu başına 100 μL % 0.05 arası 20 ve % 0.1 BSA PBS, pH 7.4 olarak ekleyin. 1s için titreyen bir platformda oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
		<li>Reaktif atın ve 5 kez de çamaşır arabellek başına 200 μL yıkayın. Streptavidin-HRP antikor kuyu başına 100 μL eklemek (1:1, 000 seyreltme kuluçka tampon kullanarak), o zaman 1s için titreyen bir platformda oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
		<li>Reaktif atmak ve yıkama 200 μL %0,05 ile ara 20 dakika sonra PBS, pH İyi 7.4. Yıkama toplam 5 kez tekrarlayın. Tamamen artık çamaşır arabellek tahlil plakalar kaldır ve Tetramethylbenzidin (TMB) substrat çözeltisi kuyu başına 100 μL ekleyin ve 8 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
		<li>TMB substrat kaldırmadan, doğrudan durmak eriyik (1N HCl) kuyu başına 100 μL ekleyin.</li>
		<li>450 absorbans belirlemek bir plaka okuyucu kullanarak nm.</li>
		<li>Sonra dört parametre Logistic regresyon yöntemi kullanarak APOB konsantrasyonu her örnek10dakika sonra tanımlamak için kullanılan standart bir eğri kurulabilir.</li>
		<li>Öncesi uyuşturucu inceleyin: APOB sonrası uyuşturucu oranını bileşikler APOB düşürmek için potansiyeli ile tanımlamak için her örnek içinde orta düzeyde.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Swinney, D. C., Anthony, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+were+new+medicines+discovered%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">How were new medicines discovered?</a> Nat Rev Drug Discov. 10 (7), 507-519 (2011).</li>
<li>Zeilinger, K., Freyer, N., Damm, G., Seehofer, D., Knospel, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+sources+for+in+vitro+human+liver+cell+culture+models%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%22%5BJournal%5D)">Cell sources for in vitro human liver cell culture models.</a> Exp Biol Med (Maywood. 241 (15), 1684-1698 (2016).</li>
<li>Robinton, D. A., Daley, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+promise+of+induced+pluripotent+stem+cells+in+research+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The promise of induced pluripotent stem cells in research and therapy.</a> Nature. 481 (7381), 295-305 (2012).</li>
<li>Lee, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+pathogenesis+and+treatment+of+familial+dysautonomia+using+patient-specific+iPSCs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Modelling pathogenesis and treatment of familial dysautonomia using patient-specific iPSCs.</a> Nature. 461 (7262), 402-406 (2009).</li>
<li>Cayo, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drug+Screen+using+Human+iPSC-Derived+Hepatocyte-like+Cells+Reveals+Cardiac+Glycosides+as+a+Potential+Treatment+for+Hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">A Drug Screen using Human iPSC-Derived Hepatocyte-like Cells Reveals Cardiac Glycosides as a Potential Treatment for Hypercholesterolemia.</a> Cell Stem Cell. 20 (4), 478-489 (2017).</li>
<li>Nagaoka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((E-cadherin-coated+plates+maintain+pluripotent+ES+cells+without+colony+formation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">E-cadherin-coated plates maintain pluripotent ES cells without colony formation.</a> PLoS One. 1, e15(2006).</li>
<li>Ludwig, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeder-independent+culture+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Feeder-independent culture of human embryonic stem cells.</a> Nat Methods. 3 (8), 637-646 (2006).</li>
<li>International Stem Cell Initiative. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+embryonic+stem+cell+lines+by+International+Stem+Cell+Initiative%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Characterization of human embryonic stem cell lines by International Stem Cell Initiative.</a> Nat Biotechnol. 25 (7), 803-816 (2007).</li>
<li>Cayo, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JD+induced+pluripotent+stem+cell-derived+hepatocytes+faithfully+recapitulate+the+pathophysiology+of+familial+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">JD induced pluripotent stem cell-derived hepatocytes faithfully recapitulate the pathophysiology of familial hypercholesterolemia.</a> Hepatology. 56 (6), 2163-2171 (2012).</li>
<li>DeSilva, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+the+bioanalytical+method+validation+of+ligand-binding+assays+to+support+pharmacokinetic+assessments+of+macromolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Recommendations for the bioanalytical method validation of ligand-binding assays to support pharmacokinetic assessments of macromolecules.</a> Pharm Res. 20 (11), 1885-1900 (2003).</li>
<li>Rowland, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+integrins+in+human+induced+pluripotent+stem+cell+growth+on+Matrigel+and+vitronectin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Roles of integrins in human induced pluripotent stem cell growth on Matrigel and vitronectin.</a> Stem Cells Dev. 19 (8), 1231-1240 (2010).</li>
<li>Nagaoka, M., Si-Tayeb, K., Akaike, T., Duncan, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+human+pluripotent+stem+cells+using+completely+defined+conditions+on+a+recombinant+E-cadherin+substratum%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Culture of human pluripotent stem cells using completely defined conditions on a recombinant E-cadherin substratum.</a> BMC Dev Biol. 10, 60(2010).</li>
<li>Hay, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+differentiation+of+hepatocytes+from+human+embryonic+stem+cells+exhibiting+markers+recapitulating+liver+development+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Efficient differentiation of hepatocytes from human embryonic stem cells exhibiting markers recapitulating liver development in vivo.</a> Stem Cells. 26 (4), 894-902 (2008).</li>
<li>Mallanna, S. K., Cayo, M. A., Twaroski, K., Gundry, R. L., Duncan, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+Cell-Surface+N-Glycoproteome+of+Human+Hepatocytes+Reveals+Markers+for+Selecting+a+Homogeneous+Population+of+iPSC-Derived+Hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Mapping the Cell-Surface N-Glycoproteome of Human Hepatocytes Reveals Markers for Selecting a Homogeneous Population of iPSC-Derived Hepatocytes.</a> Stem Cell Reports. 7 (3), 543-556 (2016).</li>
<li>Zhang, J. H., Chung, T. D., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simple+Statistical+Parameter+for+Use+in+Evaluation+and+Validation+of+High+Throughput+Screening+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A Simple Statistical Parameter for Use in Evaluation and Validation of High Throughput Screening Assays.</a> J Biomol Screen. 4 (2), 67-73 (1999).</li>
<li>Zhang, X. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illustration+of+SSMD%2C+z+score%2C+SSMD%2A%2C+z%2A+score%2C+and+t+statistic+for+hit+selection+in+RNAi+high-throughput+screens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">Illustration of SSMD, z score, SSMD*, z* score, and t statistic for hit selection in RNAi high-throughput screens.</a> J Biomol Screen. 16 (7), 775-785 (2011).</li>
<li>Lorenz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+iPSC-Derived+Neural+Progenitors+Are+an+Effective+Drug+Discovery+Model+for+Neurological+mtDNA+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Human iPSC-Derived Neural Progenitors Are an Effective Drug Discovery Model for Neurological mtDNA Disorders.</a> Cell Stem Cell. 20 (5), 659-674 (2017).</li>
<li>Rashid, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+inherited+metabolic+disorders+of+the+liver+using+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Modeling inherited metabolic disorders of the liver using human induced pluripotent stem cells.</a> J Clin Invest. 120 (9), 3127-3136 (2010).</li>
<li>Lu, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+progenitor+cells+of+biliary+origin+with+liver+repopulation+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Hepatic progenitor cells of biliary origin with liver repopulation capacity.</a> Nat Cell Biol. 17 (8), 971-983 (2015).</li>
<li>Ogawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+cholangiocytes+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of cholangiocytes from human pluripotent stem cells.</a> Nat Biotechnol. 33 (8), 853-861 (2015).</li>
<li>Sampaziotis, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholangiocytes+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+for+disease+modeling+and+drug+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Cholangiocytes derived from human induced pluripotent stem cells for disease modeling and drug validation.</a> Nat Biotechnol. 33 (8), 845-852 (2015).</li>
<li>Mallanna, S. K., Duncan, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+hepatocytes+from+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Stem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Differentiation of hepatocytes from pluripotent stem cells.</a> Curr Protoc Stem Cell Biol. 26 (Unit 1G 4), (2013).</li>
<li>Song, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+generation+of+hepatocyte-like+cells+from+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Efficient generation of hepatocyte-like cells from human induced pluripotent stem cells.</a> Cell Res. 19 (11), 1233-1242 (2009).</li>
<li>Cai, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+functional+hepatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human embryonic stem cells into functional hepatic cells.</a> Hepatology. 45 (5), 1229-1239 (2007).</li>
<li>Si-Tayeb, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+generation+of+human+hepatocyte-like+cells+from+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Highly efficient generation of human hepatocyte-like cells from induced pluripotent stem cells.</a> Hepatology. 51 (1), 297-305 (2010).</li>
<li>Pashos, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+Population+Cohorts+of+hiPSCs+and+Derived+Hepatocyte-like+Cells+Reveal+Functional+Genetic+Variation+at+Blood+Lipid-Associated+Loci%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Diverse Population Cohorts of hiPSCs and Derived Hepatocyte-like Cells Reveal Functional Genetic Variation at Blood Lipid-Associated Loci.</a> Cell Stem Cell. 20 (4), 558-570 (2017).</li>
<li>Davidson, M. D., Ware, B. R., Khetani, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-derived+liver+cells+for+drug+testing+and+disease+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Discov+Med%22%5BJournal%5D)">Stem cell-derived liver cells for drug testing and disease modeling.</a> Discov Med. 19 (106), 349-358 (2015).</li>
<li>Choi, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+drug+screening+and+gene+correction+for+treating+liver+disease+using+patient-specific+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Efficient drug screening and gene correction for treating liver disease using patient-specific stem cells.</a> Hepatology. 57 (6), 2458-2468 (2013).</li>
<li>Tafaleng, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells+model+personalized+variations+in+liver+disease+resulting+from+alpha1-antitrypsin+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells model personalized variations in liver disease resulting from alpha1-antitrypsin deficiency.</a> Hepatology. 62 (1), 147-157 (2015).</li>
<li>Jing, R., Duncan, C. B., Duncan, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+small-molecule+screen+reveals+that+HSP90beta+promotes+the+conversion+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+endoderm+to+a+hepatic+fate+and+regulates+HNF4A+turnover%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A small-molecule screen reveals that HSP90beta promotes the conversion of induced pluripotent stem cell-derived endoderm to a hepatic fate and regulates HNF4A turnover.</a> Development. 144 (10), 1764-1774 (2017).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Belirli bir protein aktivitesini etkileyen nerede küçük moleküller tanımlanır temel hedef ilaç bulma, birçok varolan tarama çalışmalarının odak noktası olmuştur. Bu yaklaşım çok sayıda ilaç, ekranlar üzerinde ters bir fenotip, klasik Farmakoloji, dayalı sağlamıştır, ancak klinik olarak etkili1olmuştur ilk sınıfındaki bileşikler belirlenmesinde daha başarılı olmuştur. Bir dezavantajı fenotipik ilaç keşif için uygun hastalık modelleri kullanılabilirliğine dayanır olmasıdır. Bu hücre modelleri hastal...

Tarama için kullanılabilir deneyleri gelişimi başarı nadir bir hastalık hedeflemek için kullanılan ilaçlar belirlenmesinde esas alır. Hipotez veya hedef tabanlı ekranlar (ters farmakoloji) yararlıdır, ancak hastalığın moleküler temeli detaylı bir anlayış gerektirir. Fenotipik ekranlar (klasik farmakoloji) biyokimyasal yollar ayrıntılı bir anlayış gerekir ama bunun yerine doğru hastalığın patofizyolojisi ayna modelleri geliştirilmesi üzerinde güveniyor. Hedef tabanlı yaklaşımlar için coşku rağmen fenotipik ekranları daha başarılı1olmuştur FDA onaylı ilk sınıfındaki ilaç analizleri ortaya koyuyor. Bu yöntem genel amacı bu eleme yüksek üretilen iş için bir platform kurmak için metabolik karaciğer hastalığının tedavisi için küçük moleküller tanımlamak için kullanılabilir. Birkaç vitro modelleri birincil tetkikine, hepatoma hücreleri ve karaciğer progenitör hücre2gibi tarif edilmiştir. Ancak, bu modellerin çoğu kısıtlamalar bulunmaktadır ve doğru bir şekilde kültür metabolik karaciğer eksiklikleri Patofizyoloji özetlemek yeni modeller için bir ihtiyaç. Son zamanlarda, insan pluripotent kök hücreler gen düzenleme ile kombine-si olmak teklif etmek bile nadir hastalıklar kültür ezelî belgili tanımlık lüzum erişim hastalara en nadide modellemek için bir fırsat doğrudan3. Hasta özel iPSCs kullanımı sırasında nadir karaciğer hastalıklarının tedavisi için küçük moleküller keşfetmek için bir araç kavramsal olarak makul olduğu gibi sadece bu yaklaşım4fizibilite gösteren birkaç rapor ediliyor. Ancak, son zamanlarda IPSC kaynaklı tetkikine başarıyla karaciğer metabolizması5eksiklikleri tedavisi için güvenilemez uyuşturucu tanımlamak için kullanılan bir platform kurduk.
Bu iletişim kuralı 96-şey plakaları hepatosit benzeri hücreleri insan iPSCs ayırt ve küçük moleküller içeren bir kitaplık ekranı için onları kullanarak işlemi açıklar. Ayrıca hiperkolesterolemi metabolik karaciğer hastalığı örnek olarak kullanarak bitiş noktası analizi açıklar. Bu yaklaşım rolünü ve uygulama bağlamında bulaşıcı karaciğer hastalığı, metabolik karaciğer hastalığı, ilaç toksisitesi ve diğer karaciğer bozuklukları, küçük moleküllerin çalışma yararlı olmalıdır.

<table><tbody><tr><td>100 mm x 20 mm steril doku kültürü kapları&nbsp;</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>100 mm x 20 mm steril süspansiyon kültür kapları</td><td>Corning</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>96 oyuklu doku kültürü plakası&nbsp;</td><td>Corning</td><td>3595</td><td></td></tr><tr><td>Anti-insan Albümin</td><td>Dako</td><td>A 0001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-insan FOXA2 (6C12)</td> <td>Novus Biyolojik</td><td>H00003170-M12</td><td></td></tr><tr><td>Anti-insan HNF4 alfa</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-6556</td><td></td></tr><tr><td>Anti-insan Oct-3/4 antikoru</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-9081</td><td></td></tr><tr><td>Anti-insan SOX17</td><td>R& D</td><td>AF1924</td><td></td></tr><tr><td>Anti-insan TRA-1-60 FITC konjuge</td><td>Millipore</td><td>FCMAB115F</td><td></td></tr><tr><td>Aktivin Rekombinant İnsan Proteini&nbsp;</td><td>İnvitrojen</td><td>PHC9563</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Takviyesi, eksi insülin ve nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>0050129SA</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Takviyesi, serum içermez&nbsp;</td><td>İnvitrojen</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>BMP4 Rekombinant İnsan Proteini&nbsp;</td><td>İnvitrojen</td><td>PHC9533</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Ayrışma Reaktifi StemPro&nbsp; Accutase&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A1110501</td><td></td></tr><tr><td>CellTiter-Glo Lüminesan Hücre Canlılık Testi&nbsp;</td><td>Promega</td><td>7572</td><td></td></tr><tr><td>DPBS + (kalsiyum, magnezyum)</td> <td>İnvitrojen</td><td>14040-133</td><td></td></tr><tr><td>DPBS- (kalsiyum yok, magnezyum yok)</td> <td>İnvitrojen</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>DMEM / F-12, HEPES ve nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>11330057</td><td></td></tr><tr><td>ELISA insan APOB ELISA geliştirme kiti</td><td>Mabtech</td><td>3715-1H-20</td><td></td></tr><tr><td>Fibroblast Büyüme Faktörü 2 (FGF2)</td><td>İnvitrojen</td><td>PHG0023</td><td></td></tr><tr><td>Hepatosit Kültür Ortamı (HCM Bullet Kit)&nbsp;</td><td>Lonza</td><td>CC-3198</td><td></td></tr><tr><td>Hepatosit Büyüme Faktörü&nbsp; (HGF)</td><td>İnvitrojen</td><td>PHC0321</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin&nbsp;</td><td>İnvitrojen</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>MEM Esansiyel Olmayan Amino Asitler Çözeltisi</td><td>Invitrogen</td><td>11140076</td><td></td></tr><tr><td>Oncostatin M (OSM) Rekombinant İnsan Proteini&nbsp;</td><td>İnvitrojen</td><td>PHC5015</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>15140163</td><td></td></tr><tr><td>Besleyici içermeyen pluripotent kök hücre ortamı: mTesR1&nbsp;</td><td>KÖK HÜCRE teknolojileri</td><td>5850</td><td></td></tr><tr><td>Azaltılmış Büyüme Faktörü Bazal Membran Matrisi&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A1413301</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Orta, HEPES&nbsp;</td><td></td> hPSC (E-cad-Fc) için <td>Invitrogen</td> 22400105 <td></td></tr><tr><td>StemAdhere Tanımlı Matris</td> <td>Primorigen Biosciences</td><td>S2071</td><td></td></tr><tr><td>TMB-ELISA Substrat Çözeltisi</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>34022</td><td></td></tr><tr><td>Anti-TRA-1-60 FITC konjuge</td><td>Kırlangıç FCMAB115F</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Versene (EDTA)% 0.02&nbsp;</td><td>Lonza</td><td>17-711E</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 KAYA inhibitörü</td><td>KÖK HÜCRE TEKNOLOJİLERİ</td><td>72302</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan kullanarak pluripotent kök hücre kaynaklı hepatosit benzeri hücreler indüklenen ilaç bulma için

Using Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Hepatocyte-like Cells for Drug Discovery

Hepatosit benzeri hücreler (HLCs) insan indüklenmiş pluripotent kök hücreler (iPSCs) ayırt etmek hepatik metabolizma doğuştan hataları incelemek için yeni fırsatlar sağlar. Ancak, karaciğer hastalığı tedavi etmek için kullanılabilir küçük moleküller tanımlaması destekleyen bir platform sağlamak için yordamı bileşikler binlerce eleme ile uyumlu bir kültür biçimi gerektirir. Burada, 96-iyi doku kültürü plakaları hepatosit benzeri hücreleri insan iPSCs tekrarlanabilir farklılaşma izin tamamen tanımlanmış kültür koşulları bir iletişim kuralı'nı açıklar. Ayrıca, Apolipoprotein B (APOB) düşürmek için yeteneklerini için ekran bileşikler platforma kullanarak örnek bir ailesel hiperkolesterolemi hastanın oluşturulan IPSC kaynaklı tetkikine üretilen sağlamaktayız. İlaç keşif ile uyumlu olan bir platform kullanılabilirliğini araştırmacılar roman karaciğeri etkileyen hastalıklar therapeutics tanımlamak izin vermelidir.

Hepatosit nesil - tarihlerde hücreleri: Şekil 1 insan iPSCs hepatosit benzeri hücrelere farklılaşma sırasında meydana gelen değişiklikler süre açıklar. İPSCs E-Cad-Fc Tarih kültür yaklaşık 2 mm pluripotent işaretçiyi OCT4 hızlı çapı kolonileri sağlar (Şekil 1A-B). Bir E-cadherin matris üzerinde yetiştirilen hücre morfolojisi bu diğer yüzeylerde kültürlü biraz far...

Burada sunulan Protokolü küçük moleküller karaciğer hastalığının tedavisi için tanımlamak için bir platform açıklar. Adım adım açıklamasını nasıl iPSCs hücrelere 96-şey plakaları hepatosit özellikleri ile ayırt etmek ve küçük moleküller için potansiyel terapötik etkinlik ile ekran için hücreleri kullanmak için ayrıntılı sunulmaktadır.

İnsan kullanarak Pluripotent kök hücre kaynaklı hepatosit benzeri hücreler indüklenen ilaç bulma için

The ability to differentiate human induced pluripotent stem cells (iPSCs) into hepatocyte-like cells (HLCs) provides new opportunities to study inborn ...

Bu deneyin genel amacı, insan kaynaklı pluripotent kök hücreleri, yüksek verimli tarama için uygun bir şekilde hepatosit benzeri hücrelere ayırmaktır. Karaciğer hücrelerinin laboratuvarda büyütülmesi zordur, ancak karaciğer hastalığı için tedavileri tanımlamak için bir tarama platformu sağlayan indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden üretilebilirler. Bu tekniğin temel avantajı, karaciğer hastalığı olan herhangi bir hastadan laboratuvarda hastalığı özetleyen sınırsız sayıda hepatosit üretilebilmesidir.Kök hücre biyolojisi hakkında kapsamlı bilgi sahibi olmadan bile prosedürün kurulması nispeten kolaydır. Tekrarlanabilirliği, araştırmacıların karmaşık robotiklere ihtiyaç duymadan binlerce bileşiği taramasına olanak tanır. Doktora sonrası araştırmacı Ray Liu ve yüksek lisans öğrencisi Paige Lamprecht bugün prosedürü gösterecek.İlk olarak, füzyon proteini Ecad'ı Dulbecco'nun fosfat tamponlu salini veya kalsiyum ve magnezyum içeren DPBS ile mililitrede 15 mikrograma seyreltin. 100 milimetre süspansiyon doku kültürü kaplarını beş mililitre seyreltilmiş matris ile kaplayın ve 37 santigrat derecede en az bir saat inkübe edin. İnkübasyonun ardından, substratı çıkarın ve beş mililitre iPSC k

using-human-induced-pluripotent-stem-cell-derived-hepatocyte-like

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu makale, insan embriyonik kök hücre popülasyonlarının insan hepatik endoderm üretimi üzerinde durulacaktır.

İnsan Embriyonik Kök Hücre Popülasyonlar Hepatosit gibi Hücreleri Sağlam Nesil

Burada sunulan yöntem, pluripotent kök hücrelerinden insan hepatosit benzeri hücreler üretmek için ölçeklenebilir ve iyi üretim uygulamaları (GMP) 'ya hazır farklılaşma sistemini anlatmaktadır. Temel ve Uygulamalı İnsan karaciğer araştırma için insan hepatosit benzeri hücrelerin oluşturmak için bir düşük maliyetli ve standart bir sistem olarak hizmet vermektedir.

Tanımlı ve hepatosit benzeri Hücrelerinin Ölçeklenebilir Nesil insan pluripotent kök hücreleri gelen

Bu iletişim kuralı insan pluripotent kök hücreler 96 iyi plaka kartvizitlere hepatosit benzeri hücreleri üretmek için yarı otomatik bir yaklaşımı açıklar. Bu hızlı ve uygun maliyetli, hepatosit benzeri hücreler temel ve uygulamalı insan araştırma için toplu halde üretim kalite güvence sağlayan işlemdir.

Hepatosit Pluripotent kök hücreler hücreleri gibi yarı otomatik üretimi

Bu protokol, 18 gün içinde insan pluripotent kök hücrelerinden (hPSCs) hepatosit benzeri hücreleri verimli bir şekilde üretmek için bir monolayer, serum içermeyen bir yöntem ayrıntıları. Bu hpscs sırayla ilkel çizgi, kesin endoderm, posterior foregut ve karaciğer tomurcuk ataları hepatosit benzeri hücreler oluşturmadan önce gibi ara hücre türlerine ayırt olarak altı adım gerektirir.

Insan pluripotent kök hücrelerinin karaciğer hücrelerine verimli farklılaşma

Bu protokol, insan pluripotent kök hücrelerden tanımlanan kültür sistemi ve hücre kendi kendine montaj kullanarak hepatospheres üretmek için bir yaklaşım açıklanmaktadır. Bu protokol, hücre çizgilerinin bir dizi tekrarlanabilir, maliyet etkili ve Biyomedikal uygulama için istikrarlı insan hepatospheres üretimi sağlar.

Pluripotent kök hücrelerinden üç boyutlu ınsan Hepatokürlerin serum ücretsiz üretimi

Bu makalenin amacı, insan hepatik progenitörlerin pluripotent kök hücrelerden farklılaşmasına neden olmak için standartlaştırılmış bir yaklaşım sağlamaktır. Bu prosedürün kullanıma hazır ortam formülasyonları ile geliştirilmesi, kullanıcıya biyomedikal araştırma ve çeviri için insan karaciğer hücreleri üretmek için bir facile sistemi sunmaktadır.

Tanımlanmış Bir Farklılaşma Sistemi Kullanarak Pluripotent Kök Hücrelerden Hepatik Progenitör Spesifikasyonu

Bu makalede, hESC farklılaşması sırasında Activin A ve CHIR99021'in kesin endoderm (DE) olarak sürekli olarak takviye edilmesiyle insan embriyonik kök hücrelerinin (hESC' ler) fonksiyonel hepatosit benzeri hücrelere (HLC) farklılaştırılması için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır.

İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinden Yönlendirilmiş Hepatosit Benzeri Hücre İndüksiyonu İçin Etkili Bir Yöntem

Burada, kararlı durumdaki periferik kandan izole edilen mononükleer hücreleri kullanarak insan otolog karaciğer sferoidleri üretmek için genetik olmayan bir yöntem sunuyoruz.

Karaciğer Hastalığı Çalışmaları için Periferik Kandan İnsan Karaciğer Sferoidleri

Bu protokol, hızlı ve tekrarlanabilir endodermal hepatik organoidlerin (eHEPO'lar) oluşumunu tanımlar. Bu protokol ile eHEPO'lar 2 hafta içinde üretilebilmekte ve farklılaşma ve işlevselliklerini kaybetmeden uzun vadede (1 yıldan fazla) genişleyebilmektedir.

Fonksiyonel Endodermal Hepatik Organoidlerin Üretimi

Pluripotent kök hücrelerden türetilen hepatositler, mitokondriyal ve aktive edilmiş lökosit hücre adezyon molekülünün (CD166 olarak da bilinen ALCAM) bir kombinasyonu kullanılarak hücre sıralama yoluyla saflaştırılabilir.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Türetilen Hepatositleri Saflaştırmak İçin Hücre Sıralamasında Canlı Mitokondri Boyamanın Uygulanması

Öğrenin, insan iPSC'lerini hepatosit benzeri hücrelere farklılaştırma ve yüksek verimli tarama için ilaç keşfi yapma yöntemini. Bu teknik, karaciğer hastalıkları için kişiselleştirilmiş tedavi araştırmalarını kolaylaştırır.

İnsan kullanarak Pluripotent kök hücre kaynaklı hepatosit benzeri hücreler indüklenen ilaç bulma için

Daha fazla video keşfet