Name: Tükürük bezi işlevi farelerde ölçülmesi için bir yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Öğrenin farelerde pilokarpin stimülasyonu sonrası tükürük üretimini ölçme yöntemini. Bu teknik, Sjögren sendromu ve tükürük bezi rejenerasyonu çalışmaları için tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışma Ulusal Sağlık enstitüleri, Ulusal Enstitüsü diş ve Fasiyal araştırma (DE025030) bir hibe tarafından desteklenmiştir.

Aşağıda açıklanan protokol kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından kabul edildi ve ulusal sağlık Enstitüleri tarafından kurulan etik kuralları izler. Bu raporda sunulan tüm veri 10-12 hafta-in yaş vardı kadın fare kullanarak oluşturulan. Fareler aşağıdaki suşları kullanılmıştır: C57BL/6, BALB/c, DBA1, 129S ve (B6XA/J) F1. Bütün fareler bariyer kafeslerde (kafes başına 5 hayvanlar) patojen-Alerjik spesifik koşullar içerisinde yer alan ve yem ve su ad libitum sağlanan.
1. hazırlık
<ol><li>Pilokarpin hidroklorür stok çözeltisi hazırlamak için bahçedeki 10 mg tartmak ve 1.776 mL steril izotonik salin 5.63 mg/mL stok çözeltisi vermek vortexing tarafından çözülür. Bu çözüm sterilize etmek için gerek yoktur. Ancak istenirse, 0.2 µM filtreden filtre. Bu hisse senedi çözüm birden çok aliquots bir-80 oC dondurucuda 3 aya kadar saklayın. Donmuş her hissenin tek kullanıma yöneliktir. Bir kez çözdürülen Pilokarpin çözüm refreeze değil.</li>
	<li>Microfuge tüpler 0.6 mL al ve dikkatlice ısıtmalı bir 18'lik iğne ile her tüpün dibinde küçük bir delik yumruk. Bu tüpler 2 mL tüpler içine ayarlayın. Tüpler steril olması gerekmez.</li>
	<li>Keskin, steril jilet kullanarak, silindirik emici bezlerden yaklaşık 2 cm uzunluğunda parçalara kesilmiş. Çapraz olarak 2 konik şekilli temizleme bezi vermek için her 2 cm parça kesti. Bir çubukla her 0.6 mL microfuge tüpler içinde yerleştirin.</li>
	<li>Kuru Pamuklu çubuk içeren 0.6 mL microfuge tüp tartın.</li>
	<li>Fareler belirlenmesi için su şişeleri ile yeni bir temiz kafes içine aktarın. Toplanan tükürük kirletici gıda parçacıkları önlemek için tükürük toplama başlamadan önce fareler yemeden en az 2 h tutun. Not: Bu yordam için kafes başına 1 fare tutmak gerekli değildir. Ancak, belirli kurum ve kuralları hayvan kullanmak için fare her kafese yerleştirilen sayısını bağlıdır.</li>
	<li>2 h sonundan önce çalışan Pilokarpin çözüm (0.0563 mg/mL) steril serum fizyolojik içinde hisse senedi çözüm 100 x sulandrarak hazırlayın. Daha fazla filtre uygulamak için gerekli değildir bu çözüm sterilize. Her zaman çalışan Pilokarpin çözüm buz üzerinde tutun. Not: Tablo 1 fare vücut ağırlıkları son doz 0.375 mg/kg vücut ağırlığı vermek için bir dizi için enjekte edilir Pilokarpin miktarını verir.</li>
</ol>2. yordam
<ol><li>Her fare tartmak ve anestezik karıştırmak için her fare kullanarak Tablo 1doz belirlemek. Birinci fare mayi yoldan anestezik mix uygun hacmi ile enjekte et. 2 (Bu protokol için test çoğu fare suşları tarafından 2 dk uyu) dk. fırının saatini kurdu. Fare düzgün olmaması düz bir yüzeye yerleştirildiğinde yürüme anestezi emin olun. Fare hala yürüyor, bir sonraki adıma devam etmeden önce ek 2 dk bekleyin. Bir damla yağ oftalmik merhem kurutma önlemek için her iki gözde uygulama. Not: Tablo 1' de, anestezik mix doz 0,007 mL/gr vücut ağırlığında olduğunu. Bu yordam için optimum menzili 0.006 0.008 mL/g vücut ağırlığı var. Ancak, sonra 4 fare hala yürüme ya sarsıntılı hareketler sergileyen min, konsültasyon ile uygun anesteziyle dozunun artırılması için kurumsal hayvan hastalıklarıyla ilgili.</li>
	<li>Tablo 1 kullanarak fare Pilokarpin doz belirlemek ve mayi yoldan uygun miktarda enjekte. 2 min için zamanlayıcı ayarlamak ve baş ve kulaklar kesim sonunda dışarı sopa kadar fareyi 50 mL restrainer tüp içine sokun. Tüp ile baş aşağı, 45 derecelik bir açıyla ve ventral yüzeyde yukarı bakacak şekilde yerleştirin. Yordamı kurulu hareket etmesini engellemek için tüp teyp. Not: Bu yordam 17 g ağırlığında fareler üzerinde çalışılmıştır değil gibi Tablo 1 doz 17 g, daha fareler için sağlar.</li>
	<li>2 dk sonunda, yavaşça ağzına forseps dissekan mikro kapalı bir çift eklemek ve yukarı doğru ağız açmak için alt çene kaldırın. Forseps 1-2 mm daha fazla dil forseps üst kol dinlenme görülür emin ağız, içine itin. Bir çift daha iyi Forseps ile önceden ağırlığını kuru bez konik ucu yakın tutun.</li>
	<li>Yavaşça çubukla konik ucunu ağzına kaydırın. Forseps ağız boşluğunda Pamuklu çubuk ucu bırakarak geri alıyorum.</li>
	<li>Daha geniş ağız dışında uzanan çubukla sonuna kavramak ve maksimum alan kişinin ağzı ile izin vermek için döndürün. Pamuklu çubuk 15 dakika bu pozisyonda tutun. Not: Bu çubukla koleksiyon süresince ağızda kalmasını sağlar. Pamuklu çubuk konik ucunu bir fitil ve pamuklu çubuk daha geniş kısmı gibi davranan Not ağız dışında kalır.</li>
	<li>15 dk sonunda, nazikçe değil absorbe olmuştur herhangi bir tükürük toplamak için çubukla döndürmek ve ıslak bez 0.6 mL microfuge tüpte yerleştirin. Tüp kapatın ve buz üzerinde yerleştirilen 2 mL tüp içinde ayarlayın. Not: şu anda, oral mukoza tamamen kuru görünür. Fare şimdi geri onun kafes anestezi kurtarma için taşınabilir.</li>
	<li>Fare içinde belgili tanımlık kafes aktarın. Yer içinde belgili tanımlık kafes gıda granül daha hızlı rehidrasyon yardımcı olmak için tükürük toplandıktan sonra nemlendirilmiş. Not: Fareler içinde 10 dk sonra sonuna uyan. 0.2 mL Önceden ısıtılmış izotonik salin Subkutan Enjeksiyon kurtarma hızlandırmak için verilebilir.</li>
	<li>Sonraki fare için devam edin. Tüm onlar tamamen iyileşti kadar fareyi takip edilmelidir ve Ambulatuvar vardır.</li>
</ol>3. ölçümleri
<ol><li>Tüm koleksiyonlar sonunda 0.6 mL tüpler ıslak bez ile tartın. Islak ağırlık ve üretilen tükürük kilo almak için Kuru ağırlık farkı hesaplar. Tükürük ile 0.6 mL tüp 2 mL tüp içine yerleştirin.</li>
	<li>2 ml tüpler kapaklar kapalı kesti. Sonra 2 mL tüpler için tükürük kurtarmak için mikro santrifüj 4oC'de 7500 x g, 2 dk santrifüj kapasitesi. Bir micropipette kullanılarak elde tükürük hacmi ölçmek.</li>
	<li>Tükürük ağırlığı (mg)10 15 dk ya da tükürük ağırlığı (mg) oranında olarak sonuçları hızlı / vücut ağırlığı (g) fare. Not: ölçülen çubukla dışına çıkarılan tükürük hacmi Eğer sonuçları tükürük (mL) kurtarılan birim veya tükürük hacmi (mL) oranı ifade / fare vücut ağırlığı (g).</li>
</ol>

<ol><li>Proctor, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiology+of+salivary+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontol+2000%22%5BJournal%5D)">The physiology of salivary secretion.</a> Periodontol 2000. 70 (1), 11-25 (2016).</li>
<li>Fox, R. I. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16039337">Sjögren's syndrome.</a> Lancet. 366 (9482), 321-331 (2005).</li>
<li>Eisbruch, A., Kim, H. M., Terrell, J. E., Marsh, L. H., Dawson, L. A., Ship, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xerostomia+and+its+predictors+following+parotid-sparing+irradiation+of+head-and-neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">Xerostomia and its predictors following parotid-sparing irradiation of head-and-neck cancer.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 50 (3), 695-704 (2001).</li>
<li>Marmary, Y., Fox, P. C., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+secretion+rates+from+mouse+and+rat+parotid+glands+are+markedly+different+following+pilocarpine+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Fluid secretion rates from mouse and rat parotid glands are markedly different following pilocarpine stimulation.</a> Comp Biochem Physiol A Comp Physiol. 88 (2), 307-310 (1987).</li>
<li>Lin, A. L., Johnson, D. A., Wu, Y., Wong, G., Ebersole, J. L., Yeh, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+short-term+gamma-irradiation+effects+on+mouse+salivary+gland+function+using+a+new+saliva+collection+device%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Measuring short-term gamma-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device.</a> Arch Oral Biol. 46 (11), 1085-1089 (2001).</li>
<li>Scofield, R. H., Asfa, S., Obeso, D., Jonsson, R., Kurien, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+short+peptides+from+the+60-kDa+Ro+antigen+recapitulates+the+serological+and+pathological+findings+as+well+as+the+salivary+gland+dysfunction+of+Sjogren%27s+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunization with short peptides from the 60-kDa Ro antigen recapitulates the serological and pathological findings as well as the salivary gland dysfunction of Sjogren's syndrome.</a> J Immunol. 175 (12), 8409-8414 (2005).</li>
<li>Deshmukh, U. S., Nandula, S. R., Thimmalapura, P. R., Scindia, Y. M., Bagavant, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+innate+immune+responses+through+Toll-like+receptor+3+causes+a+rapid+loss+of+salivary+gland+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Pathol+Med%22%5BJournal%5D)">Activation of innate immune responses through Toll-like receptor 3 causes a rapid loss of salivary gland function.</a> J Oral Pathol Med. 38 (1), 42-47 (2009).</li>
<li>Deshmukh, U. S., Ohyama, Y., Bagavant, H., Guo, X., Gaskin, F., Fu, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+stimuli+accelerate+Sj%C3%B6gren%27s+syndrome-like+disease+in+%28NZB+x+NZW%29F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Inflammatory stimuli accelerate Sjögren's syndrome-like disease in (NZB x NZW)F1 mice.</a> Arthritis Rheum. 58 (5), 1318-1323 (2008).</li>
<li>Szczerba, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+innate+immunity+and+Ro52-induced+antibody+causes+Sj%C3%B6gren%27s+syndrome-like+disorder+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rheum+Dis%22%5BJournal%5D)">Interaction between innate immunity and Ro52-induced antibody causes Sjögren's syndrome-like disorder in mice.</a> Ann Rheum Dis. 75 (3), 617-622 (2016).</li>
<li>Takakura, A., Moreira, T., Laitano, S., De Luca Júnior, L., Renzi, A., Menani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+muscarinic+receptors+signal+pilocarpine-induced+salivation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Central muscarinic receptors signal pilocarpine-induced salivation.</a> J Dent Res. 82 (12), 993-997 (2003).</li>
<li>Yao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide-induced+elevation+and+secretion+of+interleukin-1beta+in+the+submandibular+gland+of+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide-induced elevation and secretion of interleukin-1beta in the submandibular gland of male mice.</a> Immunology. 116 (2), 213-222 (2005).</li>
<li>Knudsen, J., Nauntofte, B., Josipovic, M., Engelholm, S. A., Hyldegaard, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+isoflurane+anesthesia+and+pilocarpine+on+rat+parotid+saliva+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Radiat+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of isoflurane anesthesia and pilocarpine on rat parotid saliva flow.</a> Radiat Res. 176 (1), 84-88 (2011).</li>
<li>Kohrs, R., Durieux, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine%3A+teaching+an+old+drug+new+tricks%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Ketamine: teaching an old drug new tricks.</a> Anesth Analg. 87 (5), 1186-1193 (1998).</li>
<li>Cold Spring Harbor Protocols. Cold Spring Harb Protoc. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://cshprotocols.cshlp.org/">http://cshprotocols.cshlp.org/</a> (2006).</li>
<li>Kozaki, T., Hashiguchi, N., Kaji, Y., Yasukouchi, A., Tochihara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+saliva+collection+using+cotton+swab+on+cortisol+enzyme+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of saliva collection using cotton swab on cortisol enzyme immunoassay.</a> Eur J Appl Physiol. 107 (6), 743-746 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.

Tükürük üretim karmaşık bir süreçtir ve birçok faktör tarafından etkilenir. Bu nedenle, Tükürük bezi işlevi laboratuvar hayvanlarda ölçme bir meydan okuma olabilir. Tükürük bezi fonksiyonunu kullanabilirsiniz aynı hayvan tekrarlanan ölçüler hastalığın başlangıcı kurmak için veya tedavi aşağıdaki kurtarma göstermek için gerekli olan bir ek mücadeledir.
Bu raporda açıklanan çubukla yöntem teknik olarak verileri göstermek için birden çok seçenek ile gerçekleştirmek basittir. Elde edilen sonuçlar ...

Tükürük bezlerinin tükürük yanıt olarak nörolojik ve mekanik uyaranlara1çeşitli üretmek. Uyaranlara için bezi adrenergic ve kolinerjik reseptörler sempatik ve parasempatik sinir sistemi aracılığıyla taşınır. Pilokarpin muscarinic reseptörleri üzerinde ağırlıklı olarak davranır kolinerjik, para sempatomimetik bir ajandır. Tükürük bezi bu muscarinic asetilkolin reseptörü M31üzerinde hareket ederek tükürük üretimini neden olmaktadır. Tükürük üretim Pilokarpin yönetim takip tükürük bezleri uyarmaya tepki yeteneğini bir göstergesidir ve tükürük bezi işlevi bir ölçüsü olarak yaygın olarak kullanılır.
Tükürük üretim doğru ölçüm Tükürük bezi hastalıkları Sjoegren Sendromu2 ve baş ve boyun kanser tedavi3takip radyasyon hasarı da dahil olmak üzere çalışma odasında önemlidir. Tükürük üretim Rodents ölçmek için birkaç farklı yöntem geliştirilmiştir. Bunlar doğrudan cannulation boşaltım tükürük kanal4, tükürük ağız boşluğu altında vakum5üzerinden topluluğu ve cam kılcal6 veya bir micropipette7,8, kullanarak toplama içerir 9. cannulation tükürük kanalının en doğru ve saf tükürük sağlar doğrudan. Ancak, bu teknik olarak zor bir işlemdir ve tekrarlayan tükürük koleksiyonları aynı hayvan duktal yaralanma neden için potansiyel engellemektedir. Vakum altında tükürük toplama tükürük tüp kurutma nedeniyle değişken sonuçları yol açabilir. Bu kaybı daha da indirimli salya ile farelerde abartılı olduğunu. Cam kılcal damarlar koleksiyonunu tükürük daha sonraki analizler için izin verir, ancak, viskozite hastalıklı durumda salgılanan tükürük değişimler kılcal verimli dolgu engeller. Ayrıca, artık tükürük toplamak için ağız boşluğu süpürme girişimlerini yaralanmalara yol açabilir. Damlalıklı yöntemi için tam toplama sağlar ve aynı işleci için deneyler arasında son derece tutarlı. Ancak, bilinmeyen nedenlerden dolayı bu yöntem farklı operatörler arasında önemli değişimleri gösterir. Bu nedenle, uygun karşılaştırma izin vermek için bu aynı işleç belirli bir projeyle ilgili tüm deneylerin gerçekleştirir şart olur. Açıkçası, bu bir laboratuvar için büyük bir dezavantaj temsil eder.
Bu sorunları aşmak için bir yordam birleştiren tükürük toplama yöntemleri insanlar ve kemirgen için kullanılan geliştirilmiştir. Tükürük Pilokarpin kaynaklı cilt ölçmek için aşağıda açıklanan çubukla yöntemi, operatör tarafından akıttıkları basit, tekrarlanabilir ve tekrar tekrar aynı hayvan gerçekleştirilebilir. Ayrıca, proteinler, immünglobulin veya diğer biomolecules daha sonraki analizler için tükürük toplama sağlar.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Tükürük toplama kimyasalları< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Pilokarpin hidroklorür</td><td>Alfa Aesar, Tewksbury, MA, ABD</td><td>B21410</td><td>Steril izotonik salin içinde seyreltin. 100X stokun tek kullanımlık alikotlarını -80oC</td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Company</strong</td><td>>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Anestezi Karışımı solüsyonu</td><td></td><td></td><td>Steril bir şişede 1 mL ketamin hidroklorür + 0.5 mL ksilazin + 8.5 mL steril izotonik salin karıştırın. 3 ay boyunca kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Zetamin (Ketamin hidroklorür)</td><td>Vet One, Boise, Idaho, ABD</td><td>C3N VT1</td><td>Stok 100 mg/mL'dir</td></tr><tr><td>Anased (Xylazine)</td><td>Med-Vet International, Mettawa, IL, ABD</td><td>RXANASED-20</td><td>Stok 20 mg / mL</td></tr><tr><td>İzotonik steril salin</td><td>Vet One, Boise, Idaho, ABD</td><td>501032</td><td>Seyreltici olarak kullanılır</td></tr><tr><td>Suni gözyaşı (kayganlaştırıcı oftalmik merhem)</td><td>Henry Schien, Dublin, OH, ABD</td><td>48272</td><td>İşlem sırasında gözlerin kurumasını önlemek için kullanılır</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Tükürük toplama malzemeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SalivaBio Çocuk sürüntüsü</td><td>Salimetrics, LLC Carlsbad, CA, ABD</td><td>N/A</td><td>Ayrı ayrı sarılmış swablar</td></tr><tr><td>50 mL polipropilen tüpler</td><td>VWR, Radnor, PA, ABD</td><td>89004-364</td><td>Tüpün alt 1 cm'sini kesin. Kesilen kenarın pürüzsüz olduğundan emin olun.</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri 0.6 mL</td><td>VWR, Radnor, PA, ABD</td><td>87003-290</td><td>Isıtılmış 18 gauge iğnelerle tüpün dibinde delikler açın</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri 2 mL</td><td>VWR, Radnor, PA, ABD</td><td>87003-298</td><td></td></tr><tr><td>Kalıcı olarak takılmış iğneli İnsülin Şırıngaları</td><td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td>324702</td><td></td></tr><tr><td>18 gauge düzenli konik iğneler</td><td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>Steril neşter bıçağı #11</td><td>Integra York Inc PA, ABD</td><td>4-311</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiseksiyon forseps</td><td>Roboz, Gaithersburg, MD, ABD</td><td>RS-5139</td><td>Tırtıklı açısal 0,8 mm uç, 4" uzunluk</td></tr><tr><td>Etiket bandı</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji, Dallas, TX, ABD</td><td>SC-224487</td><td></td></tr><tr><td>3 kanallı zamanlayıcı</td><td>Amazon.com, Seattle, WA, ABD</td><td>B06W2KCYVN</td><td></td></tr><tr><td>Analitik Terazi</td><td>Mettler Toledo, Columbus OH, ABD</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>strong>Name</strong</td><td>>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Tükürük disfonksiyonunu indüklemek için kimyasallar / reaktifler< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Invivogen, San Deigo, CA, ABD</td><td>tlrl-b5lps</td><td>Endotoksin içermeyen suda çözün ve stok çözeltisini 5 mg / mL'de saklayın. steril HBSS 100 ug / mL içinde seyreltin - 100 uL / moue ip enjekte edin</td></tr><tr><td>Imject Şap adjuvanı</td><td>Thermo Scientific</td><td>77161</td><td>Steril tuzlu su içinde 1: 1 oranında seyreltin. İntraperitoral olarak 0.1 mL / fare enjekte edin</td></tr><tr><td>Tavşan anti-Ro52 antiserumu</td><td>Laboratuvarda</td><td></td> üretilmiştir <td>Rekombinant fare Ro52 ile tavşanların aşılanması</td></tr> <tr><td>Name</td> <td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Yorumlar< / strong</td></tr><tr><td>>Kimyasallar / Tükürük analizleri için kitler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü > Tükürük lizozim tahmini< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EnzChek Lizozim Test Kiti</td><td>Moleküler Problar, Eugene, OR, ABD</td><td>E-22013</td><td>Üreticinin talimatlarına göre kullanılır</td></tr> <tr><td>Name<</td><td>strong>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td> Comments </td></tr><tr><td><sandviç ile güçlü>Tükürük IgA tahmini ELISA</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mouse IgA Southern</td><td>Biotech, Birmingham, AL, ABD</td><td>0106-01</td><td>Sandviç için standartlar ELISA - aralık 30 ng/mL ila 0,5 ng/mL</td></tr><tr><td>Keçi anti-fare IgA etiketsiz</td><td>Southern Biotech, Birmingham, AL, ABD</td><td>1040-01</td><td>Bikarbonat tamponunda 1 ug / mL'de kaplayın</td></tr><tr><td>Keçi anti-fare IgA HRP</td><td>Southern Biotech, Birmingham, AL, ABD</td><td>1040-05</td><td>1:4000 seyreltme</td></tr><tr><td>TMB substratında</td> kullanılan tespit antikoru <td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td>555214</td><td>Üreticinin talimatlarına göre kullanılır</td></tr><tr><td>Immulon 4HBX Microtiter 96 kuyulu plakalar</td><td>Thermo Scientific, Rochester, NY, ABD</td><td>3855</td><td></td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Tükürük proteini tahmini</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad Protein Tahlili Boya Reaktif Konsantresi</td><td>BioRad, Herkül, CA, ABD</td><td>5000006</td><td>Üreticinin talimatlarına göre protein tahmini için</td></tr></tbody></table>

tükürük bezi işlevi farelerde ölçülmesi için bir yöntem

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Sjoegren Sendromu, ekzokrin bezleri etkileyen otoimmün bir hastalığı olan hastalarda Tükürük bezi iltihabı geliştirmek ve tükürük üretimi azalttı. Benzer şekilde, tükürük üretim ciddi baş ve boyun kanserlerinin için radyasyon tedavisi alan hastalarda güvenilir değil. Kemirgen modelleri, bu klinik durumlar ve taklit etmek için geliştirilen hastalık patogenezinde anlamayı kolaylaştırmak ve yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için izin verir. Bu nedenle, doğru tekrarlanarak ve art arda Tükürük bezi işlevi hayvan modellerinde ölçmek için kritik yeteneğidir. Literatürde daha önce açıklanan yordamları hakkında oluşturmak, bu kriterleri karşılayan ve tükürük bezi işlevi farelerde değerlendirmek için kullanılan bir yöntem geliştirilmiştir. Ek bir avantaj bu yeni yöntemin bu kolayca hakim ve küçük arası operatör varyasyon vardır olduğunu. Tükürük bezi işlevi miktar (ağırlık veya hacim) veya tükürük Pilokarpin stimülasyon üretti oranını (mL/dk) olarak değerlendirilir. Toplanan tükürük analizleri protein içeriği, immünglobulin konsantrasyonları ve diğer biomolecules için iyi bir kaynaktır.

Deneysel fare modeli sistemlerinde yeteneği tükürük Pilokarpin stimülasyon yanıt üretmek için Tükürük bezi işlevi bir göstergesi olarak kullanılır. Tükürük üretim 11-hafta-yaşlı C57BL/6 dişi farelerde çubukla yöntemi tarafından ölçüldü. Şekil 1A', sonuçları tükürük (mg) artan doz Pilokarpin takip toplanan tutar ifade edilir. Doz 1 mg/kg vücut ağırlığı bazı fareler (istemsiz sallayarak ve titreyerek) sıkıntı sergilenmesi başladı. Bu nedenle daha yüksek doz Pil...

Tükürük bezi hypofunction otoimmün hastalığı ve radyasyon terapisi sık bir sonucudur. Bu hastalıkların fare modellerinde Tükürük bezi ile tekrarlanabilir değerlendirilmesi teknik bir sorundur. Burada, tükürük üretim farelerde doğru ve tekrarlanabilir ölçüm için basit bir yöntem açıklanmıştır.

Tükürük bezi işlevi farelerde ölçülmesi için bir yöntem

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Bu prosedürün genel amacı, Pilokarpin stimülasyonunu takiben fare tükürüğünü doğru ve tekrarlanabilir bir şekilde toplamak ve ölçmektir. Kemirgenlerde tükürük üretiminin ölçülmesi zorlu bir prosedürdür ve yüksek değişkenliğe eğilimlidir. Bu yöntem basittir ve tüm çalışmanın birden fazla zaman noktasında aynı hayvan üzerinde tekrarlanabilir.Bu yöntem sadece üretilen tükürüğün hacmini ölçmekle kalmaz, aynı zamanda tükürükte salgılanabilecek biyoaktif moleküllerin daha fazla analizi için tükürüğü toplamak için de kullanılabilir. Sonuç olarak, bu, kemirgen model sistemlerinde Sjögren Sendromu, tükürük bezi fibrozu veya tükürük bezi rejenerasyonunu araştırırken çok faydalı olacaktır. Bu prosedür için, Pilokarpin hidroklorür alikotlarını üç aydan eski olmayacak şekilde hazırlayın ve dondurun.Çözülmüş alikotları tekrar dondurmayın. 0.6 mL mikrofüj tüpleri hazırlayarak başlayın. Isıtılmış 18 gauge iğne ile tüplerin altına dikkatlice küçük bir delik açın.Fare başına bir tüp yapın. Daha sonra bu tüpleri 2 mL'lik tüplere yerleştirin. Sterilite bir endişe kaynağı değildir.Daha sonra, aseptik yöntemler kullanarak, silindirik emici çubukları iki santimetre uzunluğunda kesin. Ardından, konik şekilli iki çubuk yapmak için her iki santimetrelik parçayı çapraz olarak kesin. Hazırlanan mikrofüj tüplerinin her birine bir konik çubuk yerleştirin.Ardından, her 0,6 mL'lik tüpü kuru çubukla tartın. Şimdi, çalışma için fareleri yeni ve temiz bir kafese aktarın. Birlikte barındırılabilirler.Önümüzdeki iki saat boyunca onlara buzlu su verin, ama yiyecek vermeyin. İki saatlik süre sona ermeden hemen önce, steril salin içinde 100x stoğun bir alikotunu 1x'e kadar seyrelterek çalışan Pilocarpine solüsyonunu hazırlayın. Tüpü girdaplayın ve çözeltiyi buz üzerinde tutun.Başlamak için, dozları hesaplamak için her fareyi tartın. Daha sonra, fareleri intraperitoneal ketamin artı ksilazin enjeksiyonları ile uyuşturun. Dört dakika sonra bir fare uyuşturulmazsa, dozu ayarlayın.Şimdi, kurumayı önlemek için her iki göze de talmik bir merhem sürün. Daha sonra, hesaplanan pilokarpin dozunu intraperitoneal bir yol kullanarak fareye verin ve zamanlayıcıyı iki dakikaya ayarlayın. Bu iki dakikalık aralıkta, fareyi 50 mL'lik bir kısıtlayıcı tüpe yerleştirin, böylece yalnızca baş ve kulaklar dışarı çıkar.Tüpü, farenin başı aşağıda ve ventral yüzey yukarı bakacak şekilde 45 derecelik bir açıyla konumlandırın. Ardından tüpü bantla sabitleyin. İki dakika sonra, ağzı açmak için alt çeneyi kaldırın ve yavaşça ağzına bir ila iki milimetre kapalı bir diseksiyon forseps yerleştirin.Dilin forsepsin üst kolunda durduğundan emin olun. Öte yandan, önceden tartılmış kuru çubuğu konik ucuna yakın tutmak için bir çift ince forseps kullanın. Ardından, swabın konik ucunu yavaşça ağza kaydırın ve swabın ucunu ağız boşluğunda bırakırken forsepsleri geri çekin.Şimdi, swabı ağızla maksimum temas edene kadar ve düşmemesi için tutun ve döndürün. Swabın geniş ucu ağzın dışında kalmalıdır. Swabı on beş dakika bu pozisyonda tutun.On beş dakika sonra, emilmemiş tükürüğü toplamak için swabı yavaşça döndürün. Ardından, tükürükle ıslatılmış swabı 0,6 mL mikrofüj tüpüne aktarın. Tüpü kapatın ve buzun üzerine yerleştirilmiş 2 mL'lik tüpe yerleştirin.Şimdi, fareyi bir kurtarma kafesine geri aktarın. Yeniden nemlendirilmesine yardımcı olmak için kafeste diyet jeli veya nemli yiyecek peletleri sağlayın. İyileşmeyi hızlandırmak için deri altından 0.2 mL izotonik salin enjeksiyonu da verilebilir.Tüm tükürük örneklerini topladıktan sonra, toplanan tükürük kütlesini belirlemek için tartın. Daha küçük tükürük örneği tüpünü içeren 2 mL'lik tüplerin kapaklarını kesin ve daha sonra bunları soğutmalı bir santrifüje yükleyin ve 7.500 g'da ve dört santigrat derecede iki dakika döndürün. Tükürük iki mL'lik tüpe toplanacaktır.Ardından, bir mikropipet kullanarak numunelerin hacimlerini ölçün. Tükürük üretimi, tarif edilen yöntem kullanılarak on bir haftalık C57 siyah altı dişi farede ölçüldü. Vücut ağırlığının gramı başına 1 mikrogram pilokarpin dozunda, bazı fareler sıkıntı belirtileri göstermeye başladı.Pilokarpin ve tükürük üretimi arasında iyi bir doz yanıt ilişkisi vardı. Tükürük ağırlığı ve hacmi arasında da önemli bir uyum vardı. Tarif edilen tekniği kullanarak, tükürükte zorlanma ve gerilme farklılıkları bulundu.129 S6 fare suşu en az miktarda tükürük üretti. Tükürük bezi hipofonksiyonunu tespit etmek için yapılan bir deneyde, doğuştan gelen bir bağışıklık tepkisini aktive etmek için lipopolisakkaritler enjekte edildi. Yanıt sırasında, fareler daha az tükürük üretti.Tükürük bezi hipofonksiyonunu indüklemek için başka bir taktik, farelere bir adjuvan Şap artı anti-Ro52 antikorları enjekte etmekti. Araç kontrolü sadece Şap ile tedavi edildi. Bu aynı zamanda tarif edilen teknikle de tespit edilebilirdi.Bu videoyu izledikten sonra, farelerde tükürük üretimini doğru ve tekrarlanabilir bir şekilde nasıl ölçeceğinizi iyi anlamış olmalısınız. Bir kez ustalaştıktan sonra, on fare yaklaşık iki buçuk saat içinde değerlendirilebilir. Bu prosedürü denerken, intraperitoneal enjeksiyonlardan swabın yerleştirilmesine ve her adım için zaman aralıklarının yönetilmesine kadar her adımda son derece tutarlı olmayı hatırlamak önemlidir.Pilokarpin hidroklorürün kardiyovasküler sisteme etki ederek bradikardi ve hipotansiyona neden olduğunu unutmayın. Bu nedenle, farelere pilokarpin enjekte etmek dikkatli bir şekilde yapılmalıdır.

a-method-for-the-measurement-of-salivary-gland-function-in-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kemirgen solunum fizyolojisi ve solunum yolu inflamatuar hücrelerin örnekleme tekrarlanan ölçümler arzu edilir, ancak genellikle mümkün değildir. Burada sözlü havayolu inflamatuar hücrelerin havayolu hiperreaktivite ve örnekleme tekrarlanan ölçümler izin verir fareler Entübasyon için tekrarlanabilir bir yöntem açıklanmaktadır.

Havayolu Direnci Ölçümleri ve Fare Bronkoalveolar Lavaj Sıvısı Örnekleme için, geri dönüşümlü, Non-invaziv Yöntemi

Farenin tükürük bezi kök hücrelerin izolasyonu için optimize edilmiş bir protokol açıklanmıştır. Yöntemi, enzimatik ve mekanik sindirim istihdam ve hücrelerin kök hücre özelliklerini içeren salispheres izolasyonu izin verir.

Fare Tükürük Bezi Kök Hücre İzolasyonu

Bu yöntem, farelerde meme bezi gelişimi ve işlevi incelemek ve değerlendirmek anlatılmaktadır. Eksize meme bezleri süt ejeksiyon bir oksitosin tabanlı miyoepitelyal hücre daralma tahlil kullanılarak değerlendirilmiştir ise bütün montaj kullanarak geliştirme derecesi değerlendirilir.

Fare Modeller Meme Bezi Geliştirme ve Fonksiyon Değerlendirme

Wharton kanalı üzerinden fare submandibular tükürük bezi kanülasyonu için bir protokol açıklanmıştır. Bu deneme için, tripan mavi çözümü, bu tekniği etkin bir şekilde hedeflenen bezine infüzyonları dağıtımını nasıl göstermek için, bu yeni yaklaşımın güvenilirliğini ve tükürük bezlerinin rejenerasyonu için potansiyel bir klinik ilaç / hücre tedavisi olarak önermek için bir boyacı olarak kullanılır.

Wharton Kanalı üzerinden Fare Submandibular Tükürük Bezi kanülasyonu

Intravital mikroskopi canlı hayvanlarda çeşitli biyolojik süreçleri görüntüleme sağlayan güçlü bir araçtır. Bu yazıda, canlı farelerde tükürük bezlerinde bu salgılama granüller gibi alt-hücresel yapıların, dinamiklerini görüntüleme için ayrıntılı bir yöntem sunuyoruz.

Floresan Proteinler ifade Canlı Farelerde Görüntüleme hücrealtı Yapıların Intravital Mikroskopi

Biz cerrahi olarak ortaya çıkarmak ve fare submandibular Tükürük bezi dik intravital mikroskobu kullanılarak intravital görüntüleme için stabilize etmek için bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı diğer ekzokrin bezleri için baş ve boyun bölgesinin fareler ve diğer küçük kemirgen kolayca uyarlanabilir.

Dik Intravital mikroskopi için fare Submandibular Tükürük bezi hazırlanması

Biz tükürük toplama, fare trakeostomi ve üç büyük tükürük bezleri yalıtımı da dahil olmak üzere performans detaylı bir yaklaşım sunuyoruz.

Fare tükürük işlevsel değerlendirme Pilokarpin stimülasyon aşağıdaki yolu ile radyasyon şeker

Bu protokolde, submandibuler bezin (SMG) endotel bariyer fonksiyonu, iki fotonlu lazer taramalı mikroskop altında test hayvanı modellerinin açısal damarlarına in vivo olarak farklı moleküler ağırlıklı floresan izleyiciler enjekte edilerek değerlendirilmiştir.

İn Vivo Fare Submandibuler Bezinde Vasküler Geçirgenlik Tespiti

İmmünofloresan görüntüleme, karmaşık, zamana bağlı biyolojik süreçleri zaman içinde tek bir anlık görüntüde gözlemleme yeteneği ile sınırlıdır. Bu çalışma, hassas kesilmiş fare submandibular bez dilimleri üzerinde yürütülen canlı görüntüleme yaklaşımını özetlemektedir. Bu yaklaşım, homeostaz ve rejenerasyon ve onarım süreçleri sırasında hücre-hücre etkileşimlerinin gerçek zamanlı olarak gözlemlenmesine izin verir.

Tükürük bezindeki hücre-hücre etkileşimlerinin ex vivo canlı hücre görüntüleme ile sorgulanması

Burada, mikropipet kılavuzluğunda ilaç uygulamasını (MDA), araştırma hayvanını minimum stres ve rahatsızlıkla tedavileri kolayca yutmaya teşvik eden oral gavaja alternatif bir yöntem olarak tanımlıyoruz.

Kemirgen Modellerinde Oral Gavaja Alternatif Bir Yöntem Olarak Mikropipet Kılavuzluğunda İlaç Uygulamasının Kullanımı

Burada, noninvaziv ve gerçek zamanlı bir tüm vücut pletismografi (WBP) sistemi kullanılarak öksürük ölçümünü ve farelerin doku örneklerinin toplanması için normatif prosedürleri açıklıyoruz ve hava yolu iltihabını değerlendirmek için bazı yöntemler sunuyoruz.

Farelerde öksürük ve hava yolu iltihabını tespit etme yöntemleri

Öğrenin farelerde pilokarpin stimülasyonu sonrası tükürük üretimini ölçme yöntemini. Bu teknik, Sjögren sendromu ve tükürük bezi rejenerasyonu çalışmaları için tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

Tükürük bezi işlevi farelerde ölçülmesi için bir yöntem

Daha fazla video keşfet