Name: Optogenetics gen nakavt etkileri olduğu gibi nöronal devreler içinde Presynaptic işlevi karakterize etmek için yapay mikroRNAlar birleştirme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-14T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: Keşfedin optogenetik ve yapay mikroRNA birleşimiyle presinaptik işlevi karakterize etme yöntemini. Bu teknik, akut beyin dilimlerinde sinaptik iletimi seçici olarak izlemeyi ve gen fonksiyonlarını in vivo araştırmayı mümkün kılar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz F. Benfenati (Istituto Italiano di teknoloji, IIT) destek ve Carmela Vitale için gösteri ile yardımcı olduğunuz için teşekkür ederiz. Bu eser IIT ve Compagnia San Paolo (hibe No 9734 LAC) tarafından finanse edildi.

<ol><li>Lam, J. K., Chow, M. Y., Zhang, Y., Leung, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((siRNA+Versus+miRNA+as+Therapeutics+for+Gene+Silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther-Nucl+Acids%22%5BJournal%5D)">siRNA Versus miRNA as Therapeutics for Gene Silencing.</a> Mol Ther-Nucl Acids. 4, e252(2015).</li>
<li>Kohl, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemisphere-specific+optogenetic+stimulation+reveals+left-right+asymmetry+of+hippocampal+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Hemisphere-specific optogenetic stimulation reveals left-right asymmetry of hippocampal plasticity.</a> Nat Neurosci. 14 (11), 1413-1415 (2011).</li>
<li>Maejima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+loss+of+P%2FQ-type+channels+confined+to+rhombic-lip-derived+neurons+alters+synaptic+transmission+at+the+parallel+fiber+to+purkinje+cell+synapse+and+replicates+genomic+Cacna1a+mutation+phenotype+of+ataxia+and+seizures+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Postnatal loss of P/Q-type channels confined to rhombic-lip-derived neurons alters synaptic transmission at the parallel fiber to purkinje cell synapse and replicates genomic Cacna1a mutation phenotype of ataxia and seizures in mice.</a> J Neurosci. 33 (12), 5162-5174 (2013).</li>
<li>Mark, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+postnatal+loss+of+P%2FQ-type+calcium+channels+recapitulates+the+absence+epilepsy%2C+dyskinesia%2C+and+ataxia+phenotypes+of+genomic+Cacna1a+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Delayed postnatal loss of P/Q-type calcium channels recapitulates the absence epilepsy, dyskinesia, and ataxia phenotypes of genomic Cacna1a mutations.</a> J Neurosci. 31 (11), 4311-4326 (2011).</li>
<li>Thalhammer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+Splicing+of+P%2FQ-Type+Ca2%2B+Channels+Shapes+Presynaptic+Plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Alternative Splicing of P/Q-Type Ca2+ Channels Shapes Presynaptic Plasticity.</a> Cell Rep. 20 (2), 333-343 (2017).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium-phosphate-mediated+Transfection+of+Eukaryotic+Cells+with+Plasmid+DNAs%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Calcium-phosphate-mediated Transfection of Eukaryotic Cells with Plasmid DNAs.</a> CSH Protoc. 2006 (1), (2006).</li>
<li>Chung, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polycistronic+RNA+polymerase+II+expression+vectors+for+RNA+interference+based+on+BIC%2FmiR-155%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Polycistronic RNA polymerase II expression vectors for RNA interference based on BIC/miR-155.</a> Nucleic Acids Res. 34 (7), e53(2006).</li>
<li>McClure, C., Cole, K. L., Wulff, P., Klugmann, M., Murray, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+and+titering+of+recombinant+adeno-associated+viral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production and titering of recombinant adeno-associated viral vectors.</a> J Vis Exp. (57), e3348(2011).</li>
<li>Cingolani, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-dependent+regulation+of+synaptic+AMPA+receptor+composition+and+abundance+by+beta3+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Activity-dependent regulation of synaptic AMPA receptor composition and abundance by beta3 integrins.</a> Neuron. 58 (5), 749-762 (2008).</li>
<li>Huang, H., Xu, Y., Cheng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+alternative+splicing+during+epithelial-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Detection of alternative splicing during epithelial-mesenchymal transition.</a> J Vis Exp. (92), e51845(2014).</li>
<li>Vandesompele, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+normalization+of+real-time+quantitative+RT-PCR+data+by+geometric+averaging+of+multiple+internal+control+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes.</a> Genome Biol. 3 (7), (2002).</li>
<li>Cetin, A., Komai, S., Eliava, M., Seeburg, P. H., Osten, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+gene+delivery+in+the+rodent+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic gene delivery in the rodent brain.</a> Nat Protoc. 1 (6), 3166-3173 (2006).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. (2012).</li>
<li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Rat+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. (2013).</li>
<li>Gunaydin, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrafast+optogenetic+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ultrafast optogenetic control.</a> Nat Neurosci. 13 (3), 387-392 (2010).</li>
<li>Bourinet, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Splicing+of+alpha+1A+subunit+gene+generates+phenotypic+variants+of+P-+and+Q-type+calcium+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Splicing of alpha 1A subunit gene generates phenotypic variants of P- and Q-type calcium channels.</a> Nat Neurosci. 2 (5), 407-415 (1999).</li>
<li>Chaudhuri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+splicing+as+a+molecular+switch+for+Ca2%2B%2Fcalmodulin-dependent+facilitation+of+P%2FQ-type+Ca2%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Alternative splicing as a molecular switch for Ca2+/calmodulin-dependent facilitation of P/Q-type Ca2+ channels.</a> J Neurosci. 24 (28), 6334-6342 (2004).</li>
<li>Soong, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+identification+of+splice+variants+in+human+P%2FQ-type+channel+alpha1%282.1%29+subunits%3A+implications+for+current+density+and+Ca2%2B-dependent+inactivation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Systematic identification of splice variants in human P/Q-type channel alpha1(2.1) subunits: implications for current density and Ca2+-dependent inactivation.</a> J Neurosci. 22 (23), 10142-10152 (2002).</li>
<li>Berndt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+channelrhodopsins+for+fast+neuronal+stimulation+at+low+light+levels%5BTitle%5D)+AND+%22P+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">High-efficiency channelrhodopsins for fast neuronal stimulation at low light levels.</a> P Natl Acad Sci USA. 108 (18), 7595-7600 (2011).</li>
<li>Klapoetke, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+optical+excitation+of+distinct+neural+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Independent optical excitation of distinct neural populations.</a> Nat Methods. 11 (3), 338-346 (2014).</li>
<li>Lin, J. Y., Lin, M. Z., Steinbach, P., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+engineered+channelrhodopsin+variants+with+improved+properties+and+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Characterization of engineered channelrhodopsin variants with improved properties and kinetics.</a> Biophys J. 96 (5), 1803-1814 (2009).</li>
<li>Zhang, Y. P., Oertner, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+induction+of+synaptic+plasticity+using+a+light-sensitive+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Optical induction of synaptic plasticity using a light-sensitive channel.</a> Nat Methods. 4 (2), 139-141 (2007).</li>
<li>Fowler, D. K., Williams, C., Gerritsen, A. T., Washbourne, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+knockdown+from+artificial+microRNAs+in+an+enhanced+miR-155+backbone%3A+a+designer%27s+guide+to+potent+multi-target+RNAi%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Improved knockdown from artificial microRNAs in an enhanced miR-155 backbone: a designer's guide to potent multi-target RNAi.</a> Nucleic Acids Res. 44 (5), e48(2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bir optogenetic sonda ve miR ilgi presynaptic bir gen karşı ortak ifadesi gen nakavt etkisi presynaptic işlev içinde sağlam nöronal devreler karakterize etmek için güçlü bir yaklaşım sunmaktadır. Bu deneysel yaklaşım için tanımlamak ve son derece verimli ve yerel sistemler ilgi gen aşağı knocking seçici miRs karakterize önemlidir. Mümkünse, iki veya daha fazla bağımsız miRs ilgi aynı mRNA karşı kontrol etmek için nihai hedef kapalı efektleri kullanılmalıdır. Kurtarma deneyler, hangi miR dayanıklı bir gen sisteminde yeniden ortaya çıkar bir denetim olarak özgüllük için kullanılabilir.
Bir optogenetic ifade etmek için aynı yapıyı kullanarak sonda ve bir miR sağlar optik manipüle sadece presynaptic nöronlar uyarıcı için. Bu nedenle karışık ve seyreltilmiş sonuçlar üreten bulaşmış ve sigara enfekte nöronlar arasında ayrım yapmamak için bu elektrik elektrodlar ile mümkün değildir. Optik elektrodlar birden çok aksiyon potansiyelleri15neden olabilir çünkü bir genişleyen paleti15,19,20,21arasında sadece en hızlı optogenetic sondalar seçmek önemlidir. Buna ek olarak, optik stimülasyon presynaptic boutons doğrudan bir depolarizasyon teşvik değil, sinaptik iletimi adımlardan bazıları atlayarak önlemek için bir22araştırmak dilek sağlamak için önemlidir.
Biz burada, tarif deneysel yaklaşım paralel olarak sınırlı sürede (4-6 ay) birden çok presynaptic genler ilgi fizyolojik uygunluğunu değerlendirmek mümkün kılar. Ancak, nakavtlar nadiren % 100 ulaşmak aklınızda tutmanız önemlidir. Dahası, rAAVs maksimal devirme ve tam ifade bir süre sınırlaması ne zaman erken gelişimsel süreçleri soruşturma temsil edebilir optogenetic soruşturma için izin vermek en az iki hafta boyunca ifade edilmesi gerekir. Genellikle daha fazla zaman alıcı, koşullu nakavt fareler presynaptic nöronlar için sınırlı sonuçlanır rağmen faiz gen kaldırmayı tamamlamak ve bu nedenle geçerli tamamlayıcı bir yaklaşım sunuyoruz.
Birden fazla miRs aynı organizatörü üzerinden ifade sağlar miR teknolojinin belirli bir avantaj sağlıyor. Bu özellik, birden çok kopyasını aynı miR veya farklı miRs karşı aynı hedef gen ekleyerek devirme verimliliğini artırmak için esas olarak kullanılmıştır. Ancak olabilir karşı farklı hedef genlerin7,23miRs ifade ederek nakavt için birden çok gen kullanılıyor. Bu özellik presynaptic sinyal yolları incelemek için birden çok presynaptic proteinler susturmak için kullanılabilir olur.
Burada, akut Hipokampal dilimler presynaptic işlevinde gen nakavt etkilerini karakterize etmek için yapay miRs ile optogenetics birleştirdik. Benzer bir yaklaşım, değiştirmek ve nöronal devreler vivo içindeyoklama için de kullanılabilir. Buna ek olarak, yapay miRs chemogenetic ile birleştirerek yaklaşımlar bir uzun zaman ölçeklerde nöronal devreler sorgulamaya sağlayacak.

Bu iletişim kuralı gen nakavt etkisi presynaptic işlev içinde sağlam nöronal devreler karakterize etmek için yeni bir yaklaşım açıklar. Presynaptic işlevinde olduğu gibi nöronal devreler araştıran pek çok presynaptic boutons çok küçük olduğundan ve uzak kombine moleküler ve Elektrofizyolojik müdahaleler izin vermek için soma meydan okuyor. RNA müdahale devirme sinaptik proteinler1için güçlü ve esnek bir araç içerse bu yaklaşım idareli giriþi özelliðini kullanarak nakavt etkileri tespit etmek zordur çünkü presynaptic işlevi araştırmak için kullanılmıştır arasında ayrım yapmamak elektrik elektrodlar manipüle ve saf presynaptic boutons2. Burada, biz nasıl yapay mikroRNA (miR) birleştirmek açıklayın-akut beyin dilimleri içinde işlenmiş presynaptic boutons seçici uyarılması elde etmek için son zamanlarda geliştirilen optogenetic teknolojisi ile RNA müdahale aracılı.
Koşullu nakavt fareler Elektrofizyoloji ile birlikte aynı zamanda presynaptic proteinler3,4işlevi araştırmak için kullanılabilir gibi görünse, bizim strateji geliştirme ve bakım genetik olarak gerektirmez fare satırları değiştirilmiş ve aynı zamanda kolayca belirli bir gen izoformlarının vurmak için istihdam edilebilir. Göreli daha yaygın olarak kullanılan kısa saç tokası RNA'ların (shRNAs), biz burada istihdam, yapay miRs nöronlar içinde nakavt için önemli avantajlar sunuyoruz. ShRNAs, onlar bir polimeraz II organizatörü1kontrol altında ifade edilebilir. Böylece, tek bir organizatörü miR ve floresan bir muhabir ile birlikte bir optogenetic sonda ifadesi sürücü için kullanılabilir. Bu şekilde, yapı boyutu rekombinant adeno ilişkili virüs (rAAV, şekil 1A) ambalaj sınırları içinde tutulabilir. Ayrıca, miR, optogenetic sonda ve sabit bir oranda floresan muhabir ifadesi izin veren bir yayın için tek bir yapı ve tek bir organizatörü kullanımı deneysel değişkenliği azaltır.
Son zamanlarda presynaptic kalsiyum kanal Hipokampus5alternatif olarak spliced izoformlarının rolünü incelemek için bu teknolojiyi başvurdum. Bu tür bir strateji genellikle fizyolojik alaka ilgi herhangi bir beyin devre presynaptically ifade diğer proteinlerin eğitim için geçerlidir.

<table><tbody><tr><td>Akrilamid</td><td>Sigma</td><td>Akrilamid/Bis-akrilamid, %30'luk çözelti</td><td>Isı</td></tr><tr><td>yastıklı Toksik Hayvan Sıcaklık Kontrol Cihazı</td><td>WPI</td><td>ATC2000</td><td></td></tr><tr><td>BCA protein tahlil kiti</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>BLOCK-iT Pol II miR RNAi İfade Vektörü kiti</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>K4936-00</td><td></td></tr><tr><td>Beyin dilimleri Ön Bölme</td><td>Harvard Apparatus</td><td>BSC-PC</td><td></td></tr><tr><td>, CCD kamera tabanlı görüntüleyici</td><td>Bio-Rad</td><td>ChemiDoc & trade; MP</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Kültürü reaktifleri</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kemilüminesan substrat</td><td>GE Helthcare</td><td>ECL Western Blotting Reaktifleri, RPN2106</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Sigma</td><td>C2432</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>Sitozin ve beta;-D-arabinofuranosid</td><td>Sigma</td><td>C6645</td><td></td></tr><tr><td>Matkap</td><td>Foredom</td><td>K.1030</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>Gentamisin merhem</td><td>Yerel eczane</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma</td><td>54459</td><td></td></tr><tr><td>Enjeksiyon mikropipetleri</td><td>Narishige</td><td>GD1</td><td></td></tr><tr><td>İnorganik tuzlar ve deterjanlar</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>K2- kreatin fosfat</td><td>Calbiochem</td><td>237911</td><td></td></tr><tr><td>KGluconate</td><td>Fluka</td><td>60245</td><td></td></tr><tr><td>Lazer</td><td>Laserglow Teknolojileri</td><td>LRS-0473-GFM-00100-03</td><td></td></tr><tr><td>Membran</td><td>Amersham</td><td>Protran ve ticaret; 0.2 ve mikro; m NC</td><td></td></tr><tr><td>MgATP</td><td>Sigma</td><td>A9187</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipet tutucu</td><td>Narishige</td><td>IM-H1</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipet çektirme</td><td>Narishige</td><td>PC-100</td><td></td></tr><tr><td>Na3GTP</td><td>Sigma</td><td>G8877</td><td></td></tr><tr><td>NaPiruvat</td><td>Sigma</td><td>P5280</td><td></td></tr><tr><td>Oküler kayganlaştırıcı</td><td>Yerel eczane</td><td>Lacrigel</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat inhibitörleri</td><td>Sigma</td><td>P0044, P5726</td><td></td></tr><tr><td>Proteaz inhibitörleri</td><td>Sigma</td><td>cOmplete&, EDTA içermeyen Proteaz İnhibitörü Kokteyli</td><td></td></tr><tr><td>Protein jeli elektroforez ve lekeleme cihazları</td><td>Bio-Rad</td><td>Mini-Protean III Hücre Providone iyot</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Yerel eczane</td><td>Betadine</td><td></td></tr><tr><td>Qiazol Lizis Reaktifi</td><td>Qiagen</td><td>79306</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>QuantiTect Ters Transkripsiyon Kiti</td><td>Qiagen</td><td>205311</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Mikro Kiti</td><td>Qiagen</td><td>74004</td><td></td></tr><tr><td>Spektrofotometre</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Nanodrop 2000</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktik aparat</td><td>WPI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tetrodotoksin</td><td>Tocris</td><td>1069</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>Vibratom</td><td>Leica</td><td>VT1200S</td><td></td></tr></tbody></table>

optogenetics gen nakavt etkileri olduğu gibi nöronal devreler içinde presynaptic işlevi karakterize etmek için yapay mikrorna'lar birleştirme

Combining Optogenetics with Artificial microRNAs to Characterize the Effects of Gene Knockdown on Presynaptic Function within Intact Neuronal Circuits

Bu iletişim kuralı gen nakavt etkisi presynaptic işlev içinde sağlam nöronal devreler karakterize amacıdır. Biz nasıl yapay mikroRNA (miR) birleştirmek için bir iş akışı tarif-RNA müdahale ile optogenetics akut beyin dilimleri içinde işlenmiş presynaptic boutons seçici uyarılması ulaşmak için aracılık. Deneysel bir tek viral yapı ve bir optogenetic sonda ve yapay miR(s) presynaptic gene(s) karşı ifade sürücü için tek bir nöron özel organizatörü kullanımını gerektirir. Stereotactically faiz beyin bölgesi enjekte edildiğinde ifade yapısı ışıkla sadece nöronlar gene(s) soruşturma altında azaltılmış ifade ile teşvik olanak sağlar. Bu strateji geliştirme ve genetiği değiştirilmiş fare satırlarının Bakım gerektirmez ve diğer organizmalar ve nöronal herhangi bir gen seçim için prensip olarak uygulanabilir. Biz son zamanlarda nasıl CA3 adlı kısa vadeli sinaptik plastisite CA1 eksitatör sinapslarda akut Hipokampal dilimleri içinde için alternatif splice izoformlarının presynaptic P/Q-tipi voltaj kalsiyum kanal (VGCCs) nakavt düzenleyen araştırmak için başvurdum. Benzer bir yaklaşım, değiştirmek ve nöronal devresi içinde vivoyoklama için de kullanılabilir.

Yukarıda açıklanan yordamlar nasıl sinaptik iletimi değerlendirmek için sağlam bir yöntem presynaptic nöronlar sinaptik proteinlerin nakavt etkiler sağlar. Nasıl alternatif nakavt splice izoformlarının presynaptic Cav2.1 temsilcisi sonuçlarında (P/Q-tipi) VGCCs CA3 CA1 eksitatör sinapslarda örnek olarak aşağıda verilmiştir için kısa vadeli sinaptik plastisite düzenlemektedir.
CAv2.1 (P/S-type) kanallar vardır, merkezi sinir sistemi içinde en hızlı sinapslarda baskın presynaptic VGCCs. Alternatif Uçbirleştirme dışlayan ekzonlar 37a ve 37b bir gözenek oluşturan α1 alt Cav2.1 (α1A) birimi üreten iki ana çeşidi, Cav2.1 [EFa] ve Cav2.1 [EFb]16,17 ,18. CAv2.1 [EFa] ve Cav2.1 [EFb] differentially sinaptik iletimi ve sıçan Hipokampal piramidal nöronların plastisite düzenleyen olup olmadığını belirlemek için ilk izoformu özgü miRs nakavt için seçmeli olarak geliştirdiğimiz Cav 2.1 [EFa] veya Cav2.1 [EFb]5. Kısa boyutuna karşın (97 bp) ve yüksek benzerliği (a.86 kimlik nükleotit düzeyinde) arasında ekzonlar 37a 37b, biz tasarım ve üç miR dizileri karşı Cav2.1 [EFa] fare (miR EFa1: TCCTTATAGTGAATGCGGCCG; miR EFa2: ATGTCCTTATAGTGAATGCGG; miR EFa3: TTGCAAGCAACCCTATGAGGA) ve iki fare Cav2.1 [EFb] karşı (miR EFb1: ATACATGTCCGGGTAAGGCAT; miR EFb2: ATCTGATACATGTCCGGGTAA) öngörülen yüksek devirme verimlilik ile. (MiR denetim) negatif kontrol bilinen herhangi bir omurgalı gen hedef değil bir sıra içeren pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-negatif plazmid kullandık. İlk ekran Contegra kanalları karşı HEK 293 hücrelerdeki bağlı olarak, seçili miR EFa1, miR EFa3 ve miR EFb2 ve içine 3' UTR rAAVs üretimi için tasarlanmış vektör pAAV-Syn-ChETA-TdT-miR-X, onların ifade kaset klonlanmış ve nerede synapsin organizatörü ultrafast channelrhodopsin ChETA, kırmızı floresan protein TdTomato ve eklenen miR (şekil 1) ifade ediyor. Biz de miR bu miR devirme verimliliğini artırmak için EFb2 ve ifade kaset çoğaltılamaz.
Ardından, rAAV1/2 yukarıdaki dört yapıları için hazırlanan ve devirme etkinlik ve seçicilik izoformu özgü qRT-PCR kullanarak birincil fare nöronal kültürlerde sayılabilir. miR EFb mRNA yerel Cav2.1 [EFb] ~ 60 oranında ama bu Cav2.1 [EFa] (Şekil 2) azaltılmış iken miR EFa1 ve miR EFa3 mRNA yerel Cav%2.1 ~ 70 [EFa] ama bu Cav2.1 [EFb], azaltılmış.
Biz daha sonra stereotactically her biri dört rAAV1/2 P18 fareler (şekil 3A-C), Hipokampus CA3 alanına (A-P/M-L/D-V Bregma gelen) −2.6 koordinatları ile enjekte / ± 2.9 / −2.9. On beş yirmi dört gün sonrası enjeksiyon, akut Hipokampal dilimler rAAV1/2-Injected sıçanlarından emir hazırlanmış ve TdTomato floresan ifade ve rAAVs (3B rakam) lokalizasyonu onaylamak için kullanılan. Presynaptic nakavt [EFb] Cav2.1 [EFa] veya Cav2.1 CA3 adlı kısa vadeli sinaptik plastisite CA1 sinapslarda için etkilenen olup olmadığını araştırmak için biz seçmeli olarak enfekte CA3 nöronlar kısa 473 nm lazer ışık darbeleri (2 ms-uzun ile uyarılmış ; Şekil 3 c) ve piramidal nöronların proksimal medial yolu CA1 bölgesinin (şekil 3 c) için yama tarafından elde edilen EPSCs kaydedildi. Cav2.1 splice izoformlarının nakavt yanıt için eşleştirilmiş-nabız stimülasyon ters yönde etkilenen bulduk: nakavt [EFa] (miR EFa1 veya miR EFa3) Cav2.1 artırdığını eşleştirilmiş-nabız kolaylaştırma (PPF) ise Ca'nın devirme v2.1 [EFb] (miR EFb2) o (şekil 3D, E) kaldırıldı.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57223/57223fig1.jpg"> Resim 1: Şeması yapıları ultrafast optogenetic sonda ChETA ve izoformu özgü miRs Cav2.1 [EFa] ve Cav2.1 [EFb] karşı kombine ifade için. (A) rAAV haritası oluşturmak pAAV-Syn-ChETA-TdT-miR-X, synapsin organizatörü (Syn) içeren, TdTomato ve içinde proksimal 3' UTR, bir Cav2.1 splice izoformu özgü miR ChETA ultrafast channelrhodopsin erimiş. Kısıtlama gösterilen tek kesiciler enzimlerdir. (B) en iyi, düzeni ifade kaset. Synapsin düzenleyici ChETA-TdTomato ve bir izoformu özgü miR ifade ediyor. Alt, miR kaset parçası 21-nükleotit hedef sıralarının geriye doğru tamamlayıcı. MiR EFb2 için iki özdeş miR kaset birbiri ardına bir tandem ifade edildi. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57223/57223fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57223/57223fig2.jpg"> Şekil 2. Devirme verimliliği ve izoformu özgü miRs Cav2.1 [EFa] ve Cav2.1 [EFb] selectivity değerlendirilmesi. 17-18 DIV birincil kültürler 6 DIV ya Cav2.1 [EFa] (miR EFa1 ve miR EFa3) hedefleme miRs ifade rAAVs ile enfekte izole RNA izoformu özgü qRT-PCR analiz veya Cav2.1 [EFb] (miR EFb2). Veri negatif kontrol (miR denetim) normalleştirilmiş. miR EFa1 miR EFa3 önemli ölçüde ve seçmeli olarak azaltmak ve mRNA Cav2.1 [EFa] (n = 8 ve 7 kültürleri, sırasıyla), miR EFb önemli ölçüde ve seçmeli olarak azaltır [EFb] mRNA Cav2.1 iken (n 4 kültürler; = *** p &lt; 0,001; tek yönlü analizi Varyans testi) Tukey Kramer sonrası test tarafından takip. Veri ± SEM demek olarak sunulan Bu rakam Thalhammer, A. ve ark. adapte edilmiş 5. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57223/57223fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57223/57223fig3.jpg"> Şekil 3. Rolü Cav2.1 [EFa] ve Cav2.1 [EFb] tarafından yerel Hipokampus değerlendirirken hedef çaldı aşağı nöronlar optogenetics ile uyarılması. Vivo enfeksiyonu için kullanılan rAAV yapıları ve ifade kaset (A) şeması. ((B)) Hipokampal bölümünde gösterilen TdTomato floresan CA3 bölge ve onun projeksiyonlar ile sınırlıdır. (C) deneysel yapılandırma: lazer ışını CA3 somata Yönetmen: ve yama kelepçe kayıtları CA1 piramidal nöronların gerçekleştirilen. (D) 2 ms-uzun mavi (473 nm) lazer ışık darbeleri 20 Hz parlıyordu uyandırmak kimin PPF Cav2.1 [EFa] hedefleme miRs tarafından arttı ve miR Cav2.1 [EFb] tarafından kaldırılmış EPSCs. (E) gösterilen bir artış miR denetim göreli PPF miR EFa1 ve miR EFa3 ve bir düşüş miR EFb2, için için özetini eşleştirilmiş-nabız oranı (D), olduğu gibi deneyler için (n = 9-11 kayıtları; * p 0,02; = ** p = 0,01; *** p &lt; 0.0004; Kovaryans analizi). Veri ± SEM demek olarak sunulan Bu rakam Thalhammer, A. ve ark. adapte edilmiş 5. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57223/57223fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Bu iletişim kuralı, yapay mikroRNA aracılı RNA müdahale optogenetics özellikle presynaptic boutons selektif gene(s) sağlam nöronal devreler içinde azaltılmış ifade ile uyarmak için birleştirmek bir iş akışı sağlar.

Optogenetics gen nakavt etkileri olduğu gibi nöronal devreler içinde Presynaptic işlevi karakterize etmek için yapay mikroRNA'lar birleştirme

The purpose of this protocol is to characterize the effect of gene knockdown on presynaptic function within intact neuronal circuits. We describe a ...

Yapay mikroRNA aracılı RNA girişimini optogenetik ile birleştirmenin genel amacı, gen yıkımının sağlam nöronal devreler içindeki presinaptik fonksiyon üzerindeki etkisini karakterize etmektir. Bu yöntem, sağlam beyin devrelerinde presinaptik proteinlerin fizyolojik rolünü ele almak gibi sinaptik fizyoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, incelenen presinaptik proteinin ekspresyonunun azaldığı nöronlarda sinaptik iletimin seçici olarak izlenmesini mümkün kılmasıdır.Ayrıca, akut beyin dilimlerinde presinaptik fonksiyonu araştırmak için bu yöntemi kullandık. Nöronal güvenliği in vivo olarak manipüle etmek ve araştırmak için de uygulanabilir. Prosedürü gösteren, laboratuvarımızdan bir yüksek lisans öğrencisi olan Carmela Vitale olacaktır.MikroRNA'ları tasarladıktan ve mikroRNA'ları ve optogenetik probu eksprese etmek için rekombinant bir vektör oluşturduktan sonra, ilgilenilen beyin bölgesinden birincil nöronal kültürler hazırlayın. Bunu yapmak için, L.A.Cingolani and Company tarafından aşağıdaki değişikliklerle oluşturulmuş bir kortikokültürleme protokolünü izleyin. İlk olarak, altı oyuklu plakalar kullanın, oyuk başına yarım milyon nöron plaka kullanın ve oyuk başına 2,5 mililitre bağlantı ortamı kullanın.Plakayı dört saat inkübe ettikten sonra, oyuk başına 3,3 mililitre bakım ortamına geçin ve astrosit aşırı büyümesi gözlenirse, üç ila dört DIV'de 7,5 mikromolar AraC ile desteklenen 0,5 mililitre bakım ortamı ekleyin. Beş ila altı DIV'de, test etmek için her mikroRNA için üç kuyuyu enfekte edin. Nöronların en az% 99'unu enfekte edecek en düşük bulaşıcı dozu kullanın.Virüsü doğrudan nöronlara ekleyin, hafifçe karıştırın ve plakaları 37 santigrat derecede inkübatöre geri yerleştirin. 17 ila 18 DIV'de, bir RNA ekstraksiyonu için nöronları parçalar. Plakaları eğin ve her bir oyuktan tüm ortamı çıkarmak için cam pipetler kullanın.Ardından, hemen her bir oyuğa 700 mikrolitre lizis reaktifi ekleyin. Kısa bir karıştırmadan sonra, hücre lizatını her bir oyuktan ve ayrı 1.5 mililitrelik tüplere aktarın. Ardından, her lizata 140 mikrolitre kloroform ekleyin.İçeriği emülsifiye etmek için tüpleri hızlı bir şekilde kapatın ve 15 saniye kuvvetlice çalkalayın. Daha sonra, tüpleri dört santigrat derecede 15 dakika boyunca 12.000 kez G'de santrifüjleyin. Ardından, RNA içeren üst sulu fazı dikkatlice yeni bir tüpe aktarın.Pipet ucunun organik faza temas etmesine izin vermeyin. Sulu faza 1.5 hacim% 100 etanol ekleyin ve karıştırmak için çözeltiyi üç kez yavaşça pipetleyin. Ardından, ticari olarak temin edilebilen bir kit kullanarak RNA'yı saflaştırın ve verimleri ölçün.Örnek başına en az 3.5 mikrogram bekleyin. Proteinler ve organik bileşikler üzerindeki saflık oranlarının her ikisi de en az 1.9 olmalıdır. Ardından, 250, 500 veya 1.000 nanogram RNA'yı retro-transkribe etmek için bir kit kullanın.Ardından, kantitatif RTPCR ile ilgilenilen endojen gen için knockdown verimliliğini ölçün. En az %60'lık bir nakavt verimliliği hedefleyinBu protokol için, A.Cetin and Company tarafından daha önce yayınlanan bir protokole göre, 15 gün veya daha uzun süre önce beyne RAAV12 enjekte edilmiş bir hayvan kullanın. Beyni izole edin ve vibratom ve gaz verilmiş buz gibi ACFF ile akut beyin dilimleri yapın.İlgilenilen bölgenin dilimlerini toplayın ve optogenetik probun aktivasyonunu önlemek için ışığa maruz kalmalarını en aza indirin. Dilimlerin aynı ACFF'de 37 santigrat derecede 30 dakika iyileşmesine izin verin. Beyin dilimlerini tutmak için özel olarak tasarlanmış bir oda kullanın.Ardından, dilimleri altı ila sekiz saat boyunca sağlıklı kalacakları oda sıcaklığına getirin. Devam etmek için, bir dilimi kayıt odasına aktarın ve dakikada iki mililitre ACFF'de süperfüzyon yapın. Ardından, enfeksiyonun lokalizasyonunu ve yoğunluğunu belirlemek için ifade edilen floresan raportörünün sinyalini kısaca kontrol edin.Ardından, bir yama elektrodunu hücre içi çözelti ile doldurun. Şimdi, kızılötesi aydınlatma altında, enfekte nöronlardan sinaptik girdiler alan bir nöron üzerinde sıkı bir şekilde kapatılmış bir toptan konfigürasyon elde edin. Seri direnç telafi edilmeden bırakılabilir, ancak sabit ve düşük olmalıdır.Örneğin, CA3 piramidal nöronları enfekte olmuşsa, CA1 bölgesinin proksimal ila medial yolundaki piramidal nöronları yamalayın. Hücreler küçülmüş veya şişmiş görünmeye başladığında, yama zorlaştığında veya partiler kararsız olduğunda, seçilen dilimler artık kayıt için yeterince sağlıklı değildir. Daha sonra, incelenen sinaptik akımları izole etmek için farmakolojiyi kullanın.Örneğin, amaç uyarıcı sinaptik iletimi araştırmaksa, banyoya bikükülin ekleyerek inhibitör sinaptik iletimi engelleyin. Daha sonra, enfekte nöronların somaması üzerine yerleştirilmiş bir optik fibere bağlı 473 nanometre mavi bir lazer kullanarak, uyarıcı postsinaptik akımlar gibi sinaptik akımları uyandırın. Lazeri nöronların aksonlarına yöneltmeyin.Örneğin, Shaffer teminatlarına ışık tutmaktan kaçının. Aksonların doğrudan depolarizasyonu arzu edilmez. Ardından, ışık darbesi başına birden fazla aksiyon potansiyeli uyandırma olasılığını azaltmak için stimülasyon uzunluğunu minimuma ayarlayın.Ardından, küçük ama net bir şekilde tespit edilebilir sinaptik akımı uyandırmak için lazerin yoğunluğunu iyileştirin. Örneğin, CA3 ve CA1 piramidal nöronları arasındaki uyarıcı sinaptik iletim için, lazerin yoğunluğunu 20 ila 50 pikoamperlik sinaptik akımları uyandıracak şekilde ayarlayın. Deneyin sonunda, sodyum kanallarını bloke etmek için 0.5 mikromolar derecede tetrodotoksin uygulayın.Optik olarak uyarılan akımların tetrodotoksine duyarlılığı, bunların aksiyon potansiyeli güdümlü olduğunu gösterir. En az üç farklı hayvandan belirli bir durum için en az sekiz nöron yamalanana kadar veri toplamaya devam edin. Bu, sonuçları analiz etmek için gereken minimum veridir.Tarif edilen yöntem kullanılarak, presinaptik P / Q tipi voltaj kapılı kalsiyum kanallarının alternatif ek izoformları parçalandı. Bu kanalların CA3 ila CA1 uyarıcı sinapslarda kısa süreli sinaptik plastisiteyi düzenlediği düşünülmektedir. İzoforma özgü mikroRNA'ları ifade eden dört farklı yapı yapıldı; her biri floresan proteini Td-Tomato ile birlikte ultra hızlı bir kanal rhodopsin ile birlikte eksprese edildi.İlk olarak, her yapının, izoforma özgü kantitatif RTPCR kullanılarak birincil sıçan nöronal kültürlerinde yeterli yıkım verimliliğine ve seçiciliğe sahip olduğu doğrulandı. Daha sonra, her yapı P18 sıçanlarının hipokampusuna enjekte edildi. Sonuç olarak, yapıların CA3 ila CA1 sinapslarında kısa süreli sinaptik plastisite üzerindeki etkisi, enfekte CA3 piramidal nöronlarının 473 nanometre ışıklı kısa darbelerle uyarılması ve elde edilen EPSC'lerin CA1 bölgesinin piramidal nöronlarından toptan konfigürasyonda kaydedilmesiyle araştırıldı.Farklı ek izoformlarının yıkılması, zıt yönlerde eşleştirilmiş nabız stimülasyonuna verilen yanıtları etkiledi. A izoformunun yıkılması, eşleştirilmiş nabız kolaylaştırmasını artırdı; B izoformunun yıkılması ise onu ortadan kaldırdı. RNA girişimlerini optogenetikle birleştirmek, sinaptik fizyoloji alanındaki araştırmaların, presinaptik proteinlerin sağlam devrelerde kısa süreli sinaptik plastisiteyi nasıl düzenlediğini keşfetmesine olanak tanır.Bu videoyu izledikten sonra, RNA etkileşimi için mikroRNA'ların nasıl doğrulanacağını ve akut beyin dilimlerinde sinaptik iletimi araştırmak için bunları optogenetik ile nasıl birleştireceğinizi iyi anlamış olmalısınız.

combining-optogenetics-with-artificial-micrornas-to-characterize

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, fare hipokampal beyin dilimlerinde uyarıcı sinaptik akımların mikroRNA aracılı inhibisyonunu göstermektedir. CA3 nöronları, bir floresan raportörü eksprese etmek için bir yapıyı, ışıkla aktive olan bir membran kanalını ve voltaj kapılı kalsiyum kanallarının ekspresyonunu aşağı regüle eden bir mikroRNA'yı barındıran rekombinant bir viral vektör ile enfekte edildi. Bir kayıt odasına bir dilim yerleştirildikten ve bir CA1 nöronunu bir kayıt pipeti ile yamaladıktan sonra, ışıkla aktive...

Fare Hipokampal Dilimlerinde Uyarıcı Postsinaptik Akımların MikroRNA Aracılı İnhibisyonu

MicroRNA beyin yapısı ve fonksiyonu önemli rolleri vardır. Burada aşırı ifadesi bir mühendislik miRNA-ifade lentivirüs stereotaktik enjeksiyonu kullanılarak hipokampal miRNA uygulamak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, değerlendirmek için nispeten hızlı bir yöntem olarak hizmet...

Bir Stereotaktik Enjeksiyon MicroRNA-ifade Fare Hippocampus CA1 Bölgesi Lentiviruses ve Davranış Sonuç Değerlendirilmesi

Genetik ve optik birleştirmek nörobilim araçlarının son gelişmeler, mekansal ve zamansal çözünürlük görülmemiş bir düzeye ile nöral devre faaliyet üzerinde kontrol sağlayan, "optogenetics" olarak adlandırılır. Burada prefrontal korteks ve subicular piramidal nöronların genetik tanımlanmış alt kümelerinin optogenetic manipülasyon ile vivo kayıtta entegre etmek için bir protokol sağlar.

Bireysel piramidal nöronlar High Fidelity optogenetic Kontrolü için Bir Yöntem<em&gt; In vivo</em

Nöronal popülasyonları in vitro olarak fotostimül etmek için optogenetik bir yaklaşım kullanarak ön beyin devrelerinin fonksiyonel topografyasını ve sinaptik özelliklerini karakterize etmek için bir yöntem açıklıyoruz.

Optogenetically Hedeflenen Önbeyin Devreler Lazer tarama photostimulation

Optogenetik, davranışsal sinirbilim deneylerinde kullanım için güçlü bir araç haline geldi. Bu protokol, lazer sistemlerinin tasarımı ve kurulumu için adım adım bir kılavuz sunar ve çoğu kemirgen davranışsal test paradigmasıyla uyumlu çoklu ve eşzamanlı in vivo optogenetik stimülasyonların gerçekleştirilmesi için tam bir protokol sağlar.

Kemirgen Santral Sinir Sistemi vivo optogenetic Stimülasyon içinde

İndüklenmiş pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler), birincil kortikal nöronlardan ve astrositlerden türetilen nöronlardan oluşan bir ko-kültür sistemi oluşturmak için bir protokol tanımlanmıştır. Bu ko-kültür sistemi, yeni, iPSC'den türetilmiş nöronlar ve channelrhodopsin-2'yi eksprese eden önceden var olan kortikal nöronlar arasında sinaptik kontakların ve devrelerin oluşumunun tespit edilmesini sağlar.

Bir Co-kültür Sistemde nöronal bağlantıları Oluşumunda değerlendirilmesi için bir optogenetic Yaklaşım

Burada, biz farelerde uyku/uyanıklık devletlerin izlenmesi sırasında nöronların belirli türlerinin optogenetik manipülasyon yöntemlerini açıklamak, bir örnek olarak stria terminalis yatak çekirdeği üzerinde son çalışma sunma.

Farelerde uyku/uyanıklık durumları Izleme sırasında nöral devrelerin optogenetik manipülasyon

Bu protokolün amacı, belirli bir lokal nöral devrenin kemogenetik manipülasyonuna yanıt olarak yetişkin nöral kök/progenitor hücrelerin davranışını analiz etmek için bir yaklaşım tanımlamakta.

Yetişkin hipokampal sinirsel precursor hücrelerinin devre spesifik Yönetmeliği

Belirli nöronal popülasyonların veya beyin bölgelerinin optogenetik manipülasyonu ile, davranış serbestçe hareket eden hayvanlarda yüksek zamansal ve mekansal çözünürlük ile değiştirilebilir. Kronik implante optik lifler ile birlikte farklı optogenetik araçlar kullanılarak, nöronal modülasyonlar ve davranışsal testler çeşitli yapılabilir.

SerbestÇe Hareket Eden Farelerde Davranışı Modüle Etmek Için Nöronal Aktivitenin Optogenetik Manipülasyonu

Burada, akut kemirgen beyin dilimlerinde sinapsa özgü elektrofizyolojik karakterizasyona izin vermek için optogenetik yapılara sahip ayrık beyin bölgelerinin viral transdüksiyonunu tanımlayan bir protokol sunuyoruz.

Eski Vivo Medial Prefrontal Korteksten Lateral Entorinal Kortekse Uzun Menzilli Sinaptik İletim ve Plastisitenin Optogenetik Sorgulanması

Burada, uyanık farelerde mikroglial dinamiklerin ve nöronal aktivitenin eşzamanlı görüntülenmesi için adeno ilişkili virüs enjeksiyonunu kraniyal pencere implantasyonu ile birleştiren bir protokolü tanımladık.

Uyanık Farelerde Mikroglial Dinamiğin ve Nöronal Aktivitenin Eşzamanlı Görüntülenmesi

Keşfedin optogenetik ve yapay mikroRNA birleşimiyle presinaptik işlevi karakterize etme yöntemini. Bu teknik, akut beyin dilimlerinde sinaptik iletimi seçici olarak izlemeyi ve gen fonksiyonlarını in vivo araştırmayı mümkün kılar.

Optogenetics gen nakavt etkileri olduğu gibi nöronal devreler içinde Presynaptic işlevi karakterize etmek için yapay mikroRNAlar birleştirme (Video) | JoVE Journal

Optogenetics gen nakavt etkileri olduğu gibi nöronal devreler içinde Presynaptic işlevi karakterize etmek için yapay mikroRNA'lar birleştirme

Daha fazla video keşfet