Tavşan manken dayanıklı Transgene ifade juguler ven ortak karotid arter interpozisyonu Greftler için

Bu yöntem, ven grefti yetmezliğinin patogenezi ile ilgili önemli soruları cevaplayabilir. Örneğin, greft yetmezliğinin aracılarını ve greft yetmezliğini önlemeyi amaçlayan test stratejilerini belirleyebilir. Bu tekniğin ana avantajı, ven grefti endotelyumunda dayanıklı, stabil transgen ekspresyonu elde etme yeteneğidir.

Metin protokolüne göre bir tavşanı uyuşturduktan sonra, hayvanı sternal çentikten mandibulanın kenarına kadar tıraş edin. Cerrahi kurulumun tamamlanmasının ardından, sternal çentik ile mandibula arasındaki orta hat boyunca cildi yaklaşık yedi ila dokuz santimetre uzunluğunda kesmek için elektrokoter kullanın. Ardından kesiği açık tutmak için havlu kelepçelerini takın.

Tüm orta hat boyunca fasya altında künt bir şekilde diseksiyon. Daha sonra, orta hat boyunca diseke edilmiş fasiyal tabakayı kesmek için elektrokoter kullanın. Daha sonra, sağ taraftan başlayarak, ortak karotis arteri ortaya çıkarmak için trakeanın üzerindeki sternal hyoid kas ile sternoefali kas arasında diseksiyon yapın.

Daha sonra, ortak karotis arterin dört ila beş santimetrelik bir segmentini ve daha büyük dallarını çevre dokulardan arındırılmış olarak dikkatlice inceleyin. Dikişe distal her dalı kesmeden önce ana karotis arterin daha büyük dallarını bağlamak için 5-0 ipek sütür kullanın. Sol ortak karotis üzerinde diseksiyonu tekrarladıktan sonra, deri altı doku tabakasını geçici olarak kapatmak için doku tutma forsepsleri kullanın.

Daha sonra yüzeysel fasyayı sağ taraftaki deriden dış juguler ven açığa çıkana kadar inceleyin. Dış juguler venin dört ila beş santimetrelik bir segmentini inceleyin ve dallarını çevreleyen dokudan serbest bırakın. Dalları bağlamak için 5-0 ipek dikişler kullanın, ardından dalları kesin.

Daha sonra izole edilmiş damarı her iki uçta bağlayın, kraniyal ucu kesin ve lümeni heparinize salin ile yıkayın. Damar grefti yapmak için, izole segmentin kraniyal ucunda sağ ortak karotis arteri klemplemek için vasküler bir klips kullanın. Ardından kaudal uca vasküler bir klips yerleştirin.

Şimdi kaudal klempin hemen kraniyal olanı, damar segmentinin kraniyal ucunun çapına eşit uzunlukta bir kaudal arteriyotomi yapın. Daha sonra kaudal arteriyotomi yoluyla heparinize normal salin şırıngasına bağlı bir IV kateter yerleştirin ve karotis arter lümenini yıkayın. Sıvı, arteriyotomi yoluyla çıkacaktır.

Şah damarına geri dönerek, damarı eksize edin ve karotik arterin yanına yerleştirin. 7-0 polipropilenin tek dikişleri kullanılarak kaudal arteriyotominin kaudal ucunu ven segmentinin kraniyal ucuna diker. Ardından, kaudal arteriyotominin kraniyal kenarını damar segmentinin kraniyal ucuna dikmek için ilk dikişten 180 derece ikinci bir dikiş yerleştirin.

Anastomozun yan tarafındaki ilk iki dikişten eşit uzaklıkta bir noktaya üçüncü bir dikiş yerleştirin. Daha sonra anastomozun medial tarafına, ilk iki dikişten eşit uzaklıkta ve üçüncü dikişin karşısına dördüncü bir dikiş yerleştirin. Bir ila dört dikişlerin her biri arasına dört ek dikiş yerleştirin.

Kraniyal arteriyotomiyi distal klipsin kaudal tarafında gerçekleştirin. Kraniyal arteriyotominin kranial ucu ile kaudal arteriyotominin kaudal ucu arasındaki mesafe, ven segmentinin uzunluğu ile aynı olmalıdır. Kraniyal arteriyotominin uzunluğu, damar segmentinin kaudal ucunun çapına eşittir.

Damar, karotis boyunca anastomozdan kraniyal olarak uzatılırken, damarın bükülmediğinden emin olun. Daha sonra karotid arteri ve damarı kraniyal arteriyotomi yoluyla yıkamak için heparinize normal salin kullanın. Daha sonra, kraniyal arteriyotominin kaudal ucunu ven segmentinin kaudal ucuna dikmek için ilk dikişi yerleştirin.

Ardından, kraniyal arteriyotominin kraniyal kenarını damar segmentinin kaudal ucuna dikmek için ilk dikişten 180 derece ikinci bir dikiş yerleştirin. Anastomozu videoda daha önce gösterildiği gibi tamamlayın. Damar greftinin kanla dolmasına izin vermek için kraniyal klipsi geçici olarak serbest bırakın ve herhangi bir kanamayı durdurmak için kuru gazlı bezle hafif bir baskı uygulayın.

Anastomoz artık kanamayana kadar bu adımı tekrarlayın. Ardından hem kraniyal hem de kaudal klipsleri çıkarın. Anastomozda herhangi bir ek kanamayı durdurmak için gazlı bez kullanın.

Anastomozlar arasındaki ortak karotis arter segmentinin her iki ucunu bağlamak için 3-0 ipek sütür kullanın. Ardından karotisi ligatürler arasında yarıya kadar bölün. Damar greftinde tempolu nabızlar görülmelidir.

Sol taraftaki ven grefti yerleşimini tekrarlayın. 5-0 PGA sütür ile cilt altı dokusunu sürekli bir desenle kapatın. Daha sonra cildi intradermal bir desenle kapatmak için 3-0 PGA sütür kullanın ve düğümleri her iki uca gömün.

Ameliyat sonrası bakım ve transkutanöz ultrasonu metin protokolüne göre gerçekleştirin. Gen transferi ameliyatı yapmak için, hem kraniyal hem de kaudal tarafta grefte bitişik karotis arterin 1,5 ila iki santimetresi dahil olmak üzere sağ ven greftini dikkatlice izole edin. Sol taraftaki diseksiyonu aynı şekilde tekrarlayın.

Ses dalgalarının iletimini sağlamak için sağ taraftaki cerrahi yara boşluğunu doldurmak için normal salin kullanın. İki milimetrelik bir perivasküler akış probunu bir hacim akış ölçere bağlayın ve probu yara boşluğundaki salinin içine daldırın. Akış hızını sıfıra ayarlayın.

Akış probunu, damar greftine kaudal veya kraniyal karotis arterin etrafına yerleştirin. Ardından, akış probundan veri kaydetmek için bir elektronik veri toplama sistemi kullanın. IV kateter yoluyla tavşana heparin enjekte ettikten ve salinle yıkadıktan sonra, ven greftinin kraniyal ucundaki ortak karotis arteri klemplemek için vasküler bir klips kullanın.

Daha sonra arteriyotomiye yer bırakmak için karotide yaklaşık 10 milimetre kaudal kaudal ikinci bir klips uygulayın. Ardından, damar greftinin hemen kaudal olan karotis arterin etrafına gevşek bir şekilde iki ipek bağ yerleştirin. Daha sonra, önceden hazırlanmış bükülmüş 21 gauge bir iğne kullanarak, karotis kaudalini grefte delin ve sadece kaudal vasküler klipse kraniyal olarak delin.

Lümenin temiz olduğundan emin olmak için iğneyi lümene iki kez ileri geri ilerletin. Ardından iğneyi dikkatlice geri çekin. Metin protokolüne göre DMEM'li bir şırınga ve IV kateter hazırladıktan sonra ortak karotis arteriyotomiye bükülme noktasına kadar yerleştirin ve ven greft lümenini iki kez 0.5 mililitre DMEM ile doldurarak yıkayın.

Greftin kraniyal ucuna hafifçe bastırmak için eldivenli bir parmak kullanarak DMEM'i greftten çıkarın. Ardından, luminal içeriği arteriyotomi yoluyla dışarı atmak için parmağınızı greft boyunca greftin kaudal ucuna doğru dikkatlice kaydırın. Kateteri damarda bırakarak DMEM şırıngasını kateterden çıkarın.

Virüs solüsyonunu içeren şırıngayı bağlayın ve katetere hava girmediğinden emin olun. Gevşek düğümlü ipek bağları kateter ucunun etrafına gelene kadar arterden aşağı doğru hareket ettirin, ancak sıkmayın. Kalan DMEM'i kateterden dışarı itmek için 0.03 mililitre virüs solüsyonu infüze edin.

Daha sonra bir parmağınızı kullanarak, kranialden kaudal olana hafifçe bastırarak ven grefti lümenindeki tüm sıvıyı çıkarın. Lümeni kapatmak için arter ve kateter ucunun etrafındaki iki bağı sıkın. Daha sonra damar şişene kadar virüs solüsyonunu demleyin.

Şırıngayı yavaşça bir gazlı bez yuvasına yerleştirin. 20 dakika sonra, damar çökene kadar virüs içeren çözeltiyi greftten nazikçe aspire etmek için boş bir şırınga kullanın. Kateteri yerinde bırakarak şırıngayı çıkarın.

Daha sonra ipek dikişleri kesin ve çözün ve kateteri damardan çekin. Şimdi arteriyotomiyi kapatmak için X modelinde 7-0 polipropilen sütür kullanın. Daha sonra dikiş uçlarını yavaşça çekin ve iki kare düğümle birbirine bağlayın.

Metin protokolünde tarif edildiği gibi sağ ven greftinde kan akışını yeniden sağladıktan sonra, sol taraftaki virüs infüzyonunu tekrarlayın. Dönüştürülen greftleri toplamak için, ven greftlerini ve ortak karotis arterlerini diseksiyon yapın ve daha önce gösterildiği gibi hem sol hem de sağ tarafta akış ölçümleri yapın. Grefte sağ ortak karotis arter kraniyalini bağlamak için 3-0 ipek sütür kullanın.

Daha sonra karotis kaudalini grefte bağlamak için 3-0 ipek sütür kullanın. Bitişik karotis arteri ligasyonların her biri ve bitişik anastomoz arasında bölerek sağ ven greftini eksize edin. Daha sonra damar greftini tavşandan çıkarın ve lümeni yıkamak için salin kullanın.

Yeni bir operatörün ulaşması gereken ilk kilometre taşı, hem ilk ven greftleme ameliyatından hem de müteakip gecikmiş transdüksiyon ameliyatından sonra tutarlı ven grefti açıklığıdır. Bir damar grefti patent aldığında, ultrason muayenesi, kaudaldan kraniyal kan akışına sahip canlı bir kan damarını ortaya çıkaracaktır. Greftler transdüksiyondan üç gün sonra toplandı, bölümlere ayrıldı ve X-gal ile boyandı.

Luminal yüzeylerin en-face görüntülemesinde etkin transdüksiyonlu ve kötü transdüksiyonlu ven greftleri görüldü. Bu grafikte gösterildiği gibi, yeni operatör tarafından dönüştürülen ven greftlerindeki beta galaktosidaz mRNA seviyeleri, deneyimli bir operatör tarafından transdüksiyon edilen ven greftlerindeki beta galaktosidaz mRNA seviyelerinden önemli ölçüde farklı değildi. Bu protokolü gerçekleştirirken, anastomozu kasılmadan önce ven grefti kraniyalini kaudal olarak tersine çevirmeyi unutmamak önemlidir.

Bu, venöz bolus tarafından kan akışının engellenmesini önlemek için gereklidir. Bir kez ustalaştıktan sonra bu ameliyatlar damar grefti işlemi için yaklaşık üç saatte, damar grefti gen transferi işlemi için iki saatte ve hasat işlemi için 45 dakikada tamamlanabilir. Bu protokol viral vektörler ve kesici aletlerle çalışmayı gerektirdiğinden, uygun biyogüvenlik ve kesici alet prosedürlerinin izlenmesi gerektiğini unutmayın.