İnsülin mimetic bileşikler test etmek için bir Ovo içinde modeli

Sunulan modifiye civciv embriyo modelinin genel amacı, canlı bir organizmada insülin-mimetik özelliklere sahip maddeleri karakterize etmektir. Bu yöntem, diyabet araştırmaları alanında, yan etkileri olmadan kan şekeri seviyelerini düşüren insülin-mimetik özelliklere sahip bitkisel özlerin bulunması gibi önemli soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, bileşiklerin etkinliğinin yeterli verim oranlarına sahip canlı bir organizmada test edilebilmesi ve bir etik kurulun izninin gerekli olmamasıdır.

Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi çok önemlidir, çünkü hazırlık ve kesme adımlarının öğrenilmesi zordur, çünkü kaplar kolayca hazırlanmaz veya genellikle tamamen kesilir ve kaybolur. 38 santigrat derecede kuluçkadan sonra ortalama yüzde 40 ila 60 nem oranıyla 11 güne kadar yumurtaları döllenme açısından kontrol edin. Bunu yapmak için, şekerleme lambasının saçaklarını bir mürekkep pedine batırın, ardından yumurtanın sivri tarafını mumlayın.

Hava kesesini tanımlamak için, yumurtanın üst kısmındaki parlaklık farklılıklarını kontrol edin. Hava kesesi yuvarlak, daha şeffaf bir bölge olarak görünürken, albümin daha koyu görünür. Lambayı önceden uygulanmış mürekkeple yumurtaya hafifçe bastırarak hava kesesinin yerini işaretleyin.

Albümin ve hava kesesi arasında parlaklık farkı göstermeyen döllenmemiş yumurtaları hariç tutun. İnsülin-mimetik veya insülini, Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisinde istenen konsantrasyona seyrelterek hazırlayın. Seçilen bileşiği uygulamak için, iğne şırınga çapına eşit bir delik oluşturmak için hava kesesinin işaretli alanındaki yumurta kabuğunu dikkatlice gagalamak için sivri uçlu bir cımbız kullanın.

İlgilenilen maddeyi içeren tampon çözeltisinin 300 mikrolitresini enjekte etmek için steril bir mililitrelik şırınga kullanın. Bir maddenin kan şekerini düşürücü etkisini belirlemek için, yumurtaları tekrar kuluçka makinesine yerleştirin ve 60, 120 ve 180 dakika sonra kan şekerini ölçün. Uygun zaman noktasında, hava kesesinin üzerindeki yumurta kabuğunu dikkatlice çıkarın ve tüm zarı kaplayacak kadar PBS tamponu ekleyerek yumurta kabuğu zarını dengeleyin.

Fazla PBS'yi döktükten sonra, yumurta kabuğu zarını dikkatlice çıkarmak için sivri uçlu bir cımbız kullanın. Zardaki büyük damarlardan kaçınırken koryoallantoik zarı kesmek ve çıkarmak için bir mikro makas kullanın. Embriyonun karnından çıkan büyük damarı bulun.

Bu kabı kapalı bir mikro makasla albüminden kaldırın ve plastik bir pH şeridi üzerine yerleştirin. PH şeridini kabın altına getirin ve mikro makası dikkatlice geri çekin. Karından kaynaklanan büyük kan damarının hazırlanması önemlidir, çünkü daha küçük olanlar parçalanarak kan alımını imkansız hale getirebilir.

Kanın seyreltilmesini önlemek için damarı çevreleyen sıvıyı bir pipetle çıkarın. Ardından, kabı ve pH şeridini kurutmak için filtre kağıdı kullanın. Kan alımı için damarın tamamen kesilmemesi önemlidir çünkü kaybolacaktır.

Ardından, kan damarını bir taraftan dikkatlice kesmek için bir mikro makas kullanın. Kabı tamamen kesmekten kaçınmak için kabın yarısından fazlasını kesmeyin. PH şeridine sızan kanı bir pipet ile toplayın.

Kan şekeri ölçüm cihazını kullanarak glikoz seviyelerini belirlemek için 10 mikrolitre kan gereklidir. Seçilen bileşiğin 24 saat boyunca uygulanmasından sonra, yumurta kabuğu zarını daha önce olduğu gibi en az 30 saniye boyunca PBS ile dengeleyin. Fazla PBS arabelleğini dökerek çıkarın.

Ardından, yumurta kabuğu zarını sivri uçlu bir cımbızla dikkatlice çıkarın. Kan damarlarında lezyon olup olmadığını kontrol edin ve civciv embriyosunun hareketini gözlemleyerek canlılığı onaylayın. Bu deneyler için combretum indicum veya Rangoon sarmaşıktan hazırlanan ekstraktlar ve 0845 numaralı ekstrakt etiketli açıklanmayan bir ekstrakt kullanıldı.

Bu şekilde gösterildiği gibi, Rangoon sarmaşıktan elde edilen ekstrakt, ovo'da önemli bir kan şekeri azalmasına neden olmamıştır. Bununla birlikte, kan şekeri konsantrasyonu, inkübasyon süresi uzadığında gözlenen önemli bir etki ile ekstrakt 0845 ile başarılı bir şekilde azaltıldı. Tedavi edilmemiş yumurtalarla karşılaştırıldığında, yumurtaların 10. günde 24 saat boyunca toksik bir bitki özü ile muamelesi, koryoallantoik membranda ciddi kan damarı lezyonlarına yol açmıştır.

Tedavi edilen embriyoda normal kontrole kıyasla lezyonlar da belirgindi. Bir kez ustalaştıktan sonra, uygun şekilde yapılırsa iki yumurta beş dakika içinde glikoz seviyeleri ve toksisite açısından analiz edilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, doğal veya sentetik bileşiklerin kan şekerini düşürücü etkilerini ölçmek için tavuk embriyo modelinde kan damarlarının nasıl hazırlanacağını ve kan toplanacağını iyi anlamış olmalısınız.