Name: Görüntüleme 11C DPA-713 iskemik inme bir fare Model kullanma Neuroinflammation evde beslenen hayvan (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 1 s
Description: Öğrenin iskemik inmeli fare modelinde TSPO-PET görüntüleme ile nöroinflamasyonu canlı ortamda nicel olarak analiz etme yöntemini. Bu protokol, araştırmacılara dinamik biyolojik süreçleri gerçek zamanlı gözlemleme imkanı sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar fare modeli sağlayan ve dMCAO ve sahte ameliyatları gerçekleştirmek için Buckwalter Laboratuarı (özellikle Dr. Todd Peterson) teşekkür etmek istiyorum. Ayrıca, Thomas Liguori Invicro dan VivoQuant görüntü analiz yazılımı, Dr Tim Doyle, Dr Laura Pisani, Dr Frezghi Habte Stanford tesisinde onların tavsiye için Imaging SCi3 küçük hayvan ile onun teknik destek için teşekkür etmek istiyorum ve Bu görüntüleme Protokolü ve Radiochemistry tesis (özellikle Dr. Jun Park) onların yardım için [11C] sentezi ile gelişmekte olan yardım DPA-713.

<ol><li>Benjamin, E. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28122885">Heart disease and stroke statistics-2017 update: A report from the american heart association.</a> Circulation. 135 (10), 146-603 (2017).</li>
<li>Jin, R., Yang, G., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+mechanisms+in+ischemic+stroke%3A+role+of+inflammatory+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammatory mechanisms in ischemic stroke: role of inflammatory cells.</a> J Leukoc Biol. 87 (5), 779-789 (2010).</li>
<li>Wang, Q., Tang, X. N., Yenari, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammatory+response+in+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">The inflammatory response in stroke.</a> J Neuroimmunol. 184 (1-2), 53-68 (2007).</li>
<li>Brown, R. C., Papadopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+peripheral-type+benzodiazepine+receptor+in+adrenal+and+brain+steroidogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Role of the peripheral-type benzodiazepine receptor in adrenal and brain steroidogenesis.</a> Int Rev Neurobiol. 46, 117-143 (2001).</li>
<li>Papadopoulos, V., Lecanu, L., Brown, R. C., Han, Z., Yao, Z. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral-type+benzodiazepine+receptor+in+neurosteroid+biosynthesis%2C+neuropathology+and+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Peripheral-type benzodiazepine receptor in neurosteroid biosynthesis, neuropathology and neurological disorders.</a> Neuroscience. 138 (3), 749-756 (2006).</li>
<li>Scarf, A. M., Kassiou, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21498529">The translocator protein.</a> J Nucl Med. 52 (5), 677-680 (2011).</li>
<li>Cerami, C., Perani, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neuroinflammation+in+ischemic+stroke+and+in+the+atherosclerotic+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Vasc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Imaging neuroinflammation in ischemic stroke and in the atherosclerotic vascular disease.</a> Curr Vasc Pharmacol. 13 (2), 218-222 (2015).</li>
<li>Stefaniak, J., O'Brien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+neuroinflammation+in+dementia%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Imaging of neuroinflammation in dementia: a review.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 87 (1), 21-28 (2016).</li>
<li>Gerhard, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4870295/">TSPO imaging in parkinsonian disorders.</a> Clin Transl Imaging. 4, 183-190 (2016).</li>
<li>Airas, L., Rissanen, E., Rinne, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neuroinflammation+in+multiple+sclerosis+using+TSPO-PET%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Imaging%22%5BJournal%5D)">Imaging neuroinflammation in multiple sclerosis using TSPO-PET.</a> Clin Transl Imaging. 3, 461-473 (2015).</li>
<li>Fan, J., Lindemann, P., Feuilloley, M. G., Papadopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+evolution+of+the+translocator+protein+%2818+kDa%29%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Structural and functional evolution of the translocator protein (18 kDa).</a> Curr Mol Med. 12 (4), 369-386 (2012).</li>
<li>James, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+in+vivo+evaluation+of+a+novel+peripheral+benzodiazepine+receptor+PET+radioligand%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Synthesis and in vivo evaluation of a novel peripheral benzodiazepine receptor PET radioligand.</a> Bioorg Med Chem. 13 (22), 6188-6194 (2005).</li>
<li>Boutin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((11C-DPA-713%3A+A+novel+peripheral+benzodiazepine+receptor+PET+ligand+for+in+vivo+imaging+of+neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">11C-DPA-713: A novel peripheral benzodiazepine receptor PET ligand for in vivo imaging of neuroinflammation.</a> J Nucl Med. 48 (4), 573-581 (2007).</li>
<li>Doyle, K. P., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+permanent+focal+ischemia%3A+distal+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A mouse model of permanent focal ischemia: distal middle cerebral artery occlusion.</a> Methods Mol Biol. 1135, 103-110 (2014).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B%2818%29F%5DDPA-714+PET+imaging+of+AMD3100+treatment+in+a+mouse+model+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">[(18)F]DPA-714 PET imaging of AMD3100 treatment in a mouse model of stroke.</a> Mol Pharm. 11 (18), 3463-3470 (2014).</li>
<li>Domercq, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27570548">PET Imaging with [(18)F]FSPG evidences the role of system xc(-) on brain inflammation following cerebral ischemia in rats.</a> Theranostics. 6 (11), 1753-1767 (2016).</li>
<li>Toth, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+neuroinflammation+in+a+clinically+relevant+focal+cortical+ischemic+stroke+model+in+rat%3A+longitudinal+positron+emission+tomography+and+immunofluorescent+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Acute neuroinflammation in a clinically relevant focal cortical ischemic stroke model in rat: longitudinal positron emission tomography and immunofluorescent tracking.</a> Brain Struct Funct. 221 (3), 1279-1290 (2016).</li>
<li>Walter, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+analysis+of+neuroinflammation+in+the+late+chronic+phase+after+experimental+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">In vivo analysis of neuroinflammation in the late chronic phase after experimental stroke.</a> Neuroscience. 292, 71-80 (2015).</li>
<li>Rojas, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17457364">Imaging brain inflammation with [(11)C]PK11195 by PET and induction of the peripheral-type benzodiazepine receptor after transient focal ischemia in rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 27 (12), 1975-1986 (2007).</li>
<li>Glazier, S. S., O'Rourke, D. M., Graham, D. I., Welsh, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+ischemic+tolerance+following+brief+focal+ischemia+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Induction of ischemic tolerance following brief focal ischemia in rat brain.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 14 (4), 545-553 (1994).</li>
</ol>

Yazarlar çakışma çıkarlarının bildirin.

Sunulan Protokolü [11C] kullanarak dMCAO ve sham farelerde neuroinflammation miktar için bir yöntemi açıklar DPA-713-Pet TSPO-evde beslenen hayvan görselleştirme ve neuroinflammation in vivo bugüne ölçme için en çok incelenen görüntüleme biyomarker olduğunu. TSPO ifade upregulated glia beyin üzerinde non-invaziv algılama ve neuroinflammation miktar erişimine izin verme sırasında iltihabıdır. Ayrıca, yapım o değerli bir araç hem klinik hem de önceden klinik araştırma son derece çevrilebilir bir teknik olduğunu. Bu iletişim kuralı ve temsilcisi sonuçları [11C] kullanarak uygunluğu vurgulamak DPA-713 algılamak ve kontur ve diğer nörolojik bozukluklar içinde vivoneuroinflammatory değişiklikler izlemek için evde beslenen hayvan.
Bu çalışmada, dMCAO cerrahi 3 aylık C57BL/6 dişi fareler kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Somatosensor korteks düşük değişkenlik kontur (Örneğin, orta serebral arter diğer modellerle karşılaştırıldığında ile kalıcı odak iskemi bir model sağlar, sınırlı bir son derece tekrarlanabilir enfarktüsü artış sağlar gibi bu model seçildi tıkanıklığı (MCAO) filaman yöntemi)14. Kontur modelleri evde beslenen hayvan görüntüleme beyin içinde kontralateral Yarımküre ROIs kullanarak her hayvan için bir iç başvuru bölgesinde içeren avantajına sahiptir. Yalnız cerrahi sonuçlarından, bu sayede sham ameliyat çalışma tasarım fareler kranyotomi dahil etmek önemlidir ve manipülasyon meninkslerde arter tıkanıklığı olmadan gerçekleştirildi iltihap olacağından. Kranyotomi yalnız bozulma temel nöronal doku ve giriş bağışıklık yanıtlarını kontur20bağımsız lider patojenlerin neden olabilir. Sham ameliyattan sonra iltihap ve bu nedenle bekleniyor paralel sinyal nedeniyle ameliyat tek başına olasılığını dışlamak için dMCAO olarak değerlendirilmesi. DMCAO kohort Analizi darbede ameliyatsız kaynaklanan iltihaplanma eklememek için Imaging Bay başarılı vuruş cerrahi ve enfarktüsü geliştirme onaylamak için yürütülmelidir. MRI da doğru bir şekilde enfarktüsü ve kontralateral ROIs çizmek için gerekli olan bir yapısal referans çerçevesi sağlar. Ayrıca, doğru görüntü işleme görüntü kayıt ve yatırım getirisi tanımı da dahil olmak üzere güvenilir miktar sağlamak için gerekli.
Ek sınırlamalar radiotracers evde beslenen hayvan ve autoradiography çalışmaları için etiketli C-11 ile çalışırken göz önünde tutulmalıdır. Genellikle araştırma enstitüleri bünyesinde cyclotron erişimi olan sınırlı kullanımı ile C-11, kısa yarılanma (20.33 min) düşünün zorunludur. Takım hızlı ve verimli bir şekilde çalışmak üzere uygun radyoaktivite ulaşım yolu, doz yönetim ve satın alma zaman-puan önceden önceden hazırlanmış ayrıntılı bir plan deneme iş akışı ile belirlenmelidir. Tasarım ve bu çalışmanın set-up özetlenen görüntüleme aynı anda veri çıkışı elde edilebilecek C-11 izleme aygıtı kullanırken artırmak için 4 farelerin karşılamak için. Mümkünse, tüm fareler cannulated için tavsiye edilir ve onların CT inceden inceye gözden geçirmek zaman ortasında C-11 izleyici görüntüleme tesiste en az radiotracer çürüme enjeksiyon önce emin olmak için geldi. Adım adım bu iletişim kuralı da en iyi hızlı cannulation, doz ölçüm, izleme enjeksiyon, evde beslenen hayvan tarama ve beyin önce önemli radyoaktif bozunma kesit için izin vermek için en az 3 araştırmacılar içeren bir ekip tarafından yürütülmektedir. PET taraması inisiyasyon ve enjeksiyon tüm 4 farelerin aynı anda yapmak iki kişi gerekir. Evde beslenen hayvan edinme enjeksiyon hemen önce başlayan nedeni farmakokinetik ve izleyici dağıtım kan dinamikleri ve bölgeler ilgi doğru bir şekilde ve tamamen yakalanır emin olmaktır. Birçok adım güçlü eğitim ve uygulama denemenin düzgün çalışmasını sağlamak için gerekebilir. Özellikle, bu protokolü başarılı kuyruk ven cannulation koyu saç kuyrukları üzerinde mevcut nedeniyle zor olabilir ve kontur ortaya çıktıktan sonra ya da birden çok kez noktalarda aynı fare Imaging daha zorlu hale gelebilir C57BL/6 fare bağlıdır .
Evde beslenen hayvan görüntüleme için diğer bir faktör ölçümlerin Ölçüm saati tam olarak dahil olmak üzere radiotracer doz ve kalan etkinlik, dikkatli kayıt içerir. Bu tarama anda enjekte doz doğru çürüme düzeltilmesi için gerekli olduğunu ve izleyici Alım (Yani, kimliği/g %) doğru bir ölçüm için her yatırım getirisi elde etmek için kullanılır. Her fare mevcut doğru görüntü analizi sağlamak için tarama sırasında radyoaktivite miktarı bilmek zorunludur. Bu nedenle, inceden inceye gözden geçirmek bilgisayar ve C-11 gibi kısa ömürlü izotoplar kullanırken hata önlemek için doz Kalibratör eşitleneceği tavsiye edilir.
Doğru evde beslenen hayvan görüntü miktar da inceden inceye gözden geçirmek ve set-up doğruluğunu tarafından sınırlı olabilir. Bu nedenle PET/CT görüntülerin doğru miktar emin olmak için evde beslenen hayvan ve BT tarayıcı bileşenleri için kalite kontrol denetimleri gerçekleştirmek önemlidir. X-ışını kaynağı Klima, karanlık/ışık ve merkezi kapalı set Kalibrasyonlar CT kalite kontrol denetimler içerir. Bu Kalibrasyonlar ölçmek ve gerçekleştirilen önceden satın alma için tarayıcı üreticisi tarafından önerilen sistem gürültü ve mutlaka doğru. Kalibrasyonlar için evde beslenen hayvan tarayıcı yapılmalıdır. Bu genellikle bilinen bir toplama radyoaktivite içeren bir "standart / PET hayalet" tarama tarama içerir. Standart hazırlanırken, buna benzer bir doz bir birimdeki bir fare ve aynı satın alma vücuda benzer tek bir fare için parametreleri olarak hayvan görüntüleme yönetilen çalışmada kullanılan aynı radyoizotop kullanmak en iyisidir. Suda seyreltilmiş radiotracer dolu bir 20 mL şırınga kalibrasyon dedektörü tarafından ölçülen gerçek doz dayalı bir düzeltme faktörü hesaplamak için kullanılan sonraki evde beslenen hayvan görüntüleme sonuçları ile bu iletişim kuralı, standart kullanılır. Evde beslenen hayvan görüntüleri ilgi bölgelerde Izleyici Alım doğru miktar sağlamak için deneyinde elde görüntüleme veri düzeltme oranı uygulanabilir. Bu ek olarak tarama gününde mevcut herhangi bir arka plan etkinliği dikkate alınarak radyonüklid pozitron aralığı için hesaplar. Doz Kalibratör Bu düzeltme faktörü nesil ayrılmaz bir parçası olduğu için bu cihaz aynı zamanda düzenli olarak üretici yönergelerine göre kalibre edilmiş olduğunu zorunludur.
Ex vivo autoradiography iletken zaman enjeksiyon yüksek sinyal-için-arka planda ilgi region(s) emin olmak için sonra ötenazi için uygun bir zaman noktası almak önemlidir. Otuz dakika sonrası enjeksiyon vivo içinde dinamik evde beslenen hayvan görüntüleme sırasında -Yani, alınan verileri kullanarak [11C] DPA-713 autoradiography için seçildi da C-11 ve zaman kısa yarılanma düşünüyor ise bir rehber olarak, dinamik TACs Bölüm ve beyin dokusu çıkarma sonra maruz dahil. Bu göz önüne alındığında [11C] DPA-713 autoradiography gerçekleştirilmesi gerekir üzerinde daha yüksek bir [11C] DPA-713 doz ve bir 30 dakika enjeksiyon için izin vermek için ayrı bir kohort farelerin perfüzyon ve ötenazi anestezi altında zaman noktası. Küçük vivo içinde performans ex vivo autoradiography iletken önce 3-4 fareler ile evde beslenen hayvan pilot çalışma autoradiography için uygun zaman noktası belirlemek için yardımcı olabilir. Ex vivo autoradiography için ek bir dikkate olup enjeksiyon sonra fareyi kurtarmak veya onları ötenazi kadar anestezi devam etmektir. Koruma onları anestezi tarama koşullarını taklit eder ve radiotracer dağıtım veya atılımı kinetik değil kurtarma tarafından değiştirilmiş sağlar. Ayrıca, bu fareler üzerinde ek yük kurtarma ve sonraki indüksiyon kaçınarak engeller. Son olarak, ex vivo protokolü için yararlı bir ek autoradiography immunohistokimyasal enfarktüsü konum yüksek çözünürlüklü bir görüntü oluşturmak için (sonra radyoaktif bozunma) boyama yoluyla için kullanılan Beyin dilimleri içinde bölgesel zarar değerlendirmek için olurdu ve birim.
Dayalı C-11 izleyici ile belgili tanımlık kullanma sınırlamaları gibi bu iletişim kuralı daha uygun konumlara yerinde bir cyclotron olmadan olabilir dayalı bir F-18 (109.77 min half-life) ile kullanmak TSPO izleyici için kolayca değiştirilebilir. Ayrıca, bu iletişim kuralı bir 4-fare görüntüleme tuzak açıklar. Bu yüksek aktarım yöntemi C-11 izleme aygıtı kullanırken en iyi olmasına rağmen bu iletişim kuralını da bu yataklar Imaging tek fare kullanarak değiştirilebilir. Dikkatli planlama ve sürekli eğitim bu protokol için özetlenen teknikleri [11C] kullanarak verileri bir zenginlik nesil sağlayacaktır DPA-713, neuroinflammation hastalığı tezahürü olarak rolünü araştırmak için kolayca uygulanabilen ve diğer kemirgen modelleri nörolojik bozukluklar, ilerlemesinde. Ayrıca, bu teknik vivo içinde yanıt-e doğru immunomodulatory tedavi microglia/makrofajlar hedef değerlendirmek için kullanılabilir.

İnme ölüm beşinci önde gelen nedenidir ve önemli bir nedeni, Amerika Birleşik Devletleri1özürlü olduğunu. İskemik inme (Örneğin, bir kan pıhtısı veya yağlı mevduat) beyin kan akımında yerelleştirilmiş bozulma olduğunda meydana gelen büyük bir çoğunluğu bu gibi durumlarda (~ %87), temsil eder. Oksijen ve besin kaynakları etkilenen alanlara daha sonra azalır ve karmaşık bir patolojik çağlayan çevresinde yanı sıra inme çekirdek (enfarktüsü) uzaktan nöronal ölüm sonuçlanan başlatılır. Neuroinflammation her iki yerleşik beyin bağışıklık hücreleri (microglia) ile bu zarar için önde gelen yolu çok önemli bir bileşenidir ve periferik bağışıklık hücreleri (nötrofil, T hücreleri, B hücreleri ve monosit/makrofajlar) sızmak için katkıda düşünülen yıkıcı art arda2,3. Aktif microglia ve makrofajlar Merkezi raporları iskemik inme2takip yararlı ve zararlı etkileri ile bu neuroinflammatory yanıt için. Böylece, bu hücrelerin kontur takip vivo içinde katkısını değerlendirmek için zorunludur.
Vivo içinde belirli molekülleri radyonükleidler 11C, 13N, gibi yayan pozitron (β +) ile etiketli aracılığıyla biyolojik görselleştirme sağlar bir güçlü 3 boyutlu moleküler görüntüleme teknik işler evde beslenen hayvan olduğunu 15O ve 18F. O yaşam olduğu gibi konularda, gerçek zamanlı olarak moleküler bilgi edinme izin verir ve boyuna soruşturma için izin verir bu non-invaziv yöntem ex vivo Yöntemler (Örneğin, immünhistokimya) üzerinde pek çok avantajı vardır. TSPO, bir işaretleyici aktif microglia ve periferik lineage myeloid hücre, evde beslenen hayvan görüntü bünyesinde doğuştan gelen bağışıklık hücre yanıt-e doğru izlemek ve ölçmek için bir yol sağlar ve kontur ve yanıt-e doğru tedavi sonra iltihap değerlendirmek için kullanılması gereken müdahaleler. TSPO, eski periferik tipi benzodiazepin reseptör bilinen kolesterol taşıma ve nörosteroidler4sentezi bir rol oynamak için inanılır bir 18 kDa proteindir. Ayrıca, TSPO neuroinflammation ve nöronal hayatta kalma5,6, iltihap kontur7de dahil olmak üzere ilgili birçok nörolojik hastalıklarda artış ifade raporlarla ilgili kanıtlar gösteriyor, demans8, Parkinson hastalığı9 ve multipl skleroz10. TSPO dış mitokondrial membranlar üzerinde bulunur ve son derece çevre, özellikle steroid ilişkili dokuları (Örneğin, bezleri) ve ara düzeyleri kalp, böbrekler ve akciğerler10' seen ile ifade edilir. Ancak sağlıklı beyin ve TSPO seviyeleri düşük ve esas olarak glia6,11sınırlı vardır. Darbede, gözlemlenen gibi nöronal yaralanma üzerine merkezi sinir sistemi (MSS) TSPO düzeyleri önemli ölçüde artırır. TSPO gözlenen bu upregulation görüntü neuroinflammation içinde vivo için iltihap önem doğru bir gösterge sağlayan ifade düzeyleriyle yararlanılabilir. Bu nedenle, bu yöntemin doğru bir şekilde neuroinflammation TSPO-Pet kullanarak iskemik inme, bir fare modelivivo içinde katkısını ölçmek için hedeftir
Birden çok TSPO izleyicileri geliştirilen neuroinflammation evde beslenen hayvan görüntüleme için. Burada, TSPO-evde beslenen hayvan görüntüleme [11C] DPA-71312, kullanılarak açıklanmıştır bir gelecek vaat eden ikinci nesil gelişmiş sinyal gürültü ve non-spesifik bağlama daha tarihsel olarak kullanılan [11C] daha düşük için göstermiştir TSPO izleyici PK11195 13 . Örneğin, bu yöntemi14için kontur dMCAO fare modeli seçildi. Bu model zamansal kranyotomi ve somatosensor korteksin odak iskemi sonucu distal orta serebral arter, kalıcı ligasyonu içerir. Bu önceden klinik kontur araştırma iskemik hasar ve bu modeli ile ilişkili düşük mortalite oranları yüksek tekrarlanabilirlik nedeniyle avantajlıdır. Bugüne kadar TSPO-evde beslenen hayvan görüntüleme çalışmaları henüz dMCAO kemirgen modelinde bildirilmesi gerekir. Ancak, önceki evde beslenen hayvan görüntüleme çalışmaları, Orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modelini kullanarak bir daha şiddetli ve değişken kontur modelinde, fare ve sıçanlar, bildirdin 3 gün ve 7 gün inme sonrası15çevresinde en yüksek artırmak için TSPO ifade, 16,17,18. Bu nedenle, 6 gün post-dMCAO görüntüleme PET yükseltilmiş TSPO ifade ile aynı tarihte gerçekleştirilen. [11C] DPA-713 alımını beyinde değerlendirildi içinde Ipsilateral (hazır) ve kontralateral hemisferlerin. TSPO-evde beslenen hayvan enfarktüsü kesin tarif ve ilgi (ROIs) kontralateral bölgeler için izin yapısal MRG ile kombine edildi. Burada bir atlas tabanlı ve [11C] DPA-713 alımını hesaplamak için bir MRI tahrik ROI yaklaşım açıklar. Dalak radiotracer Anlamazdın aynı zamanda iltihabı gruplar arasında çevresel düzeyde araştırmak için değerlendirildi. Bu yöntem kronolojik zamanmekansal dinamikleri ve rol kontur ve diğer nörolojik hastalıkların belirli neuroimmune etkileşimlerin önemli anlayışlar sağlamak potansiyeline sahiptir.

<table><tbody><tr><td>Inveon PET/CT tarayıcı</td><td>Siemens</td><td>Sürüm 4.2</td><td></td></tr><tr><td>MRI tarayıcı</td><td>Varian</td><td></td><td>7 Telsa</td></tr><tr><td>ParaVision yazılımı</td><td>Bruker</td><td>Sürüm 6.0.1</td><td>MRI işletim yazılımı</td></tr><tr><td>VivoQuant yazılımı</td><td>InVicro</td><td>Sürüm 2.5</td><td>Görüntü analiz yazılımı</td></tr><tr><td>Inveon Research Workspace yazılımı</td><td>Siemens</td><td>Sürüm 4.2</td><td>Tarayıcı işletim yazılımı. MicroQView, işlem sonrası yönetim yazılımı içerir</td></tr><tr><td>Doz kalibratörü</td><td>Capintech</td><td></td><td>CRC-15 PET</td></tr><tr><td>Typhoon fosfor görüntüleyici 9410</td><td>GE Healthcare</td><td>8149-30-9410</td><td></td></tr><tr><td>Kelebek kateterler</td><td>SAI İnfüzyon Teknolojileri</td><td>BFL-24</td><td>27,5 G iğne</td></tr><tr><td>1 mL şırınga</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnsülin şırıngaları</td><td>BD</td><td>329461</td><td>İğneli 0.5 mL insülin şırıngaları</td></tr><tr><td>20 mL şırınga&nbsp;</td><td>VWR</td><td>BD302831</td><td>BD Şırınga Kayma Ucu Dereceli</td></tr><tr><td>Doku tutkalı</td><td>Santa Cruz Hayvan Sağlığı</td><td>sc-361931</td><td>3 mL</td></tr><tr><td>Isı lambası</td><td>Fluker</td><td>27002</td><td>5.5" sürüngen ısı lambası, kelepçeli ve anahtarlı</td></tr><tr><td>% 0.9 steril salin</td><td>Pfizer</td><td>00409-4888-10</td><td>Enjeksiyon için% 0.9 sodyum klorür, 10 mL</td></tr><tr><td>Göz yağlayıcı</td><td>Watson Rugby PV926977</td><td></td><td>Suni Gözyaşı Kayganlaştırıcı Göz Merhemi, 1/8 oz</td></tr><tr><td>Chux emici levhalar</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>1420662</td><td>Tek kullanımlık emici dolgu</td></tr><tr><td>İris makası</td><td>World Precision Instruments</td><td>503708-12</td><td>11,5 cm, Düz, 12'li</td></tr><tr><td>paket Cerrahi bant</td><td>3M Durapore</td><td>1538-0</td><td>1/2" x 10 yarda rulo, ipek, hipoalerjenik</td></tr><tr><td>Fare PET yatak</td><td>Evde</td><td></td><td>4 fare PET yatak</td></tr><tr><td>Çakmak</td><td>Bic</td><td>UDP2WMDC</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Henry Schein</td><td>NDC 11695-6776-2</td><td>İzotezi, inhalasyon anestezik, 250 mL</td></tr><tr><td>Oksijen</td><td>Praxiar</td><td>UN1072</td><td>Sıkıştırılmış gaz</td></tr><tr><td>Otoradyografi kaseti</td><td>Cole Palmer</td><td>EW-21700-34</td><td>Alüminyum, 8" x 10"</td></tr> <tr><td>Otoradyografi filmi</td><td>GE Yaşam Bilimleri</td><td>28-9564-78</td><td>Depolama Fosfor Ekran BAS-IP SR 2025 E Süper Çözünürlük, 20 > 25 cm, yalnızca ekran</td></tr><tr><td>Mikrotom bıçakları</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>30-508-35</td><td>MB35 Premier Tek Kullanımlık, 34 derece kesme açısı</td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Microm</td><td></td><td>HM 550</td></tr><tr><td>Mikroskop slaytları</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td>Superfrost ve ticaret; Plus Mikroskop Slaytları</td></tr><tr><td>OCT sıvısı</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>-10&°C sıcaklıklarda kriyostat kesitleme için suda çözünür glikollerin ve reçinelerin formülasyonu; C (14&derece; F) ve altı</td></tr><tr><td>Dondurma kalıpları</td><td>Poli bilimler</td><td>18646A-1</td><td>Tek kullanımlık parafin kalıpları</td></tr><tr><td>Saran sargı</td><td>Saran</td><td>25700001300</td><td></td></tr><tr><td>Dezenfektan</td><td>Virkon S</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

görüntüleme [11c] dpa-713 iskemik inme bir fare model kullanma neuroinflammation evde beslenen hayvan

PET Imaging of Neuroinflammation Using [11C]DPA-713 in a Mouse Model of Ischemic Stroke

Neuroinflammation iskemik inme sonrasında patolojik cascade için merkezi bir noktada bulunuyor. Non-invaziv moleküler görüntüleme yöntemleri zamansal dinamiği ve rol İnmede belirli neuroimmune etkileşimlerin önemli anlayışlar sağlamak potansiyeline sahip. Özellikle, ışınlama protein 18 kDa (TSPO), bir işaretleyici aktif microglia ve periferik lineage myeloid hücre, pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntüleme algılamak ve neuroinflammation içinde vivoizlemek için bir yol sağlar. Burada, doğru bir şekilde neuroinflammation kullanarak ölçmek için bir yöntem mevcut [11C]N,N-Diethyl-2-[2-(4-methoxyphenyl)-5,7-dimethylpyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl]acetamide ([11C] DPA-713), bir gelecek vaat eden ikinci nesil TSPO-evde beslenen hayvan radiotracer, sham çalışan fareler için karşılaştırıldığında distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) içinde. MRI kontur onaylamak ve hacmi ve enfarktüsü konumunu tanımlamak için gerçekleştirilen 2 gün sonrası-dMCAO ameliyat oldu. Evde beslenen hayvan/Computed tomografi (CT) görüntüleme 6 gün post-dMCAO kontur takip TSPO düzeyleri en yüksek artış yakalamak için yapılmıştır. Evde beslenen hayvan görüntülerin Nefelometri [11C] alımını değerlendirmek için gerçekleştirilmiştir DPA-713 beyin ve dalak dMCAO ve sham farelerin merkezi ve periferik inflamasyon düzeylerini değerlendirmek için. Vivo [11C] DPA-713 beyin alımını ex vivo autoradiography kullanılarak doğrulandı.

Fareler uygulandı MRI başarılı kontur ve [11C] doğrulamak için DPA-713 PET 4 fareler aynı anda tarama tarafından gerçekleştirildi. Evde beslenen hayvan, CT ve Bay görüntüleri önce el ile beyin ROIs çizim ve izleyici alımı Ipsilateral ve kontralateral bölgelerinde (Şekil 2) araştırmak için yarı otomatik bölünmüş beyin atlas analizi, performans Co kayıtlı.
PET/CT görüntüler ve saat etkinlik eğrileri (şeker-radiotracer etkinlik zaman bir fonksiyonu olarak) artan [11C] DPA-713 alımı Ipsilateral karşı kontralateral hemisferlerin (Şekil 3A) görüntüler. 50-60 dk, verilerden toplanır miktar kullanarak dinamik evde beslenen hayvan beyin görüntüleri ortaya kontralateral Yarımküre dMCAO ama değil el ile çizilmiş kullanarak sahte fareler karşılaştırıldığında izleyici Anlamazdın (% kimliği/g) Ipsilateral (hazır) önemli bir artış Yatırım getirisi yaklaşım (Şekil 3B). Artan alımını da dMCAO ve sham fareler arasında Ipsilateral yarımkürede gözlendi. Ipsilateral ve kontralateral hemisferlerin arasında önemli bir fark yoktur büyük olasılıkla nedeniyle bu nedenle sulandrarak (genellikle sınırlı somatosensor korteks) enfarktüsü boyutundan büyük varlık ROIs atlas atlas yaklaşımı kullanarak tespit edildi sinyal. Ancak, sahte için karşılaştırıldığında dMCAO genel artan Anlamazdın tüm ROIs için hangi enfarktüsü19dışındaki bölgelerde artan TSPO ifade gösteren MCAO model fare kullanarak önceki raporları ile hizalar gözlendi. Ipsilateral/kontralateral oranları her iki yaklaşımın kullanarak sahte fareler karşı dMCAO artış; Ancak, bu fark sadece beyin atlas yaklaşım daha büyük farkı nedeniyle yatırım getirisi yaklaşımı kullanarak kortekste önemliydi. Bu fareler her grup sayısını artırarak üstesinden. Miktar [11C] DPA-713 Alım dalak içinde gruplar (Şekil 4) arasında önemli bir fark yoktur gösterdi.
Beyin dMCAO fare evde beslenen hayvan görüntüleme sonuçları ex vivo yüksek çözünürlüklü dijital autoradiography (Şekil 5) tarafından teyit edildi. Artan [11C] DPA-713 alımı hazır dokusunda çevreleyen sağlıklı beyin dokusu içinde ihmal edilebilir sinyal ile gözlenmiştir. Bu görüntülerin Nefelometri kontralateral oranları 1.4 2,09 dMCAO farelerde arasında değişen Ipsilateral ortaya koydu.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig1.jpg"> Şekil 1: Evde beslenen hayvan inceden inceye gözden geçirmek ve çalışma alanı Set-up. Tüm çalışma alanlarını steril bir ortam oluşturmak için koruyucu emici doldurma kaplıydı. (A) Kalibrasyonlar sonra inceden inceye gözden geçirmek ve burun koni anesteziye bağlı tüm 4 fareler için 4 fareler aynı anda görüntüleme için donatılmış bir fare 3D basılı yatak ulaşamadılar. (B) evde beslenen hayvan görüntüleme için gerekli ekipman hazırlanan önceden, serum dolu 27,5 G kateterler, göz yağ, etanol temizleme bezi, ısı abajur, cerrahi bant, doku yapıştırıcı, 0.5 mL doz şırınga, makas ve çakmak gibi. (C) radiotracer enjeksiyon için serum-flush şırıngalar ve tarayıcının arka makas yerleştirin. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig2.jpg"> Resim 2: Ipsilateral/kontralateral yatırım getirisi ve sağ/sol-Split Yarımküre beyin Atlas evde beslenen hayvan görüntü analiz süreci. Yazılım kullanarak el ile ilgi (ROIs) Ipsilateral ve kontralateral bölgelerde Izleyici alımını belirlemek için kullanılan görüntü analizi ROIs ve yarı otomatik 3D split-brain atlas yaklaşım çizilmiş. Beyin MRI CT görüntüde tanımlanan karşılık gelen fare kafatası içinde el ile kayıt ve ardından otomatik 3D PET/BT kayıt gerçekleştirilmiştir. 3D ROI Aracı el ile Ipsilateral (kırmızı) çizmek için kullanılan ve kontralateral (yeşil) ROIs enfarktüsü MRI üzerinde bir referans olarak kullanarak. Split-brain yaklaşım için 3D sol/sağ-split fare beyin atlas yüklü ve kafatası içinde CT görüntü tarafından tanımlandığı şekilde donatılmış. Bu 3D fare beyin atlas miktar için kullanılan beyin ROIs sol korteks (koyu gri), sol Hippocampus (peygamber çiçeği mavi), sol Striatum (derin pembe), sağ korteks (kırmızı domates), sağ Hippocampus (yeşil) ve sağ Striatium (mavi) dahil. [11C] alımını DPA-713 her bölgedeki ncı/cc elde edildi ve daha sonra %ID/g için her fare için tarama anda çürüme düzeltilmiş doz normalleştirme tarafından dönüştürüldü. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig3.jpg"> Şekil 3 : DMCAO ve Sham fareler temsilcisi Vivo içinde [11C] DPA-713 beyin anlamazdın. (A) dinamik PET/BT görüntüleri ve TACs göstermek artan [11C] DPA-713 alımı DMCAO uygulanan farelerin Ipsilateral korteks (n = 3) ve sham için hafif bir artış (n = 3) fare, önemli ölçüde daha fazla gösteren DMCAO fareler ile işletilen enfarktüsü ve beyin (%ID/g) kontralateral tarafı arasında kontrast yüzde enjekte dozda. (B) evde beslenen hayvan miktar (50-60 dakika özetlenebilir) önemli ölçüde artmış alımı ROI yaklaşımı kullanarak Ipsilateral yatırım getirisi ve split-brain atlas yaklaşımı kullanarak korteks (Ctx) saptandı. Hiçbir önemli farklılıklar hippocampus (HC) veya striatum (Str) bulundu. Artan Ipsilateral için kontralateral oranları her iki analiz kullanarak yaklaşıyor ama sadece beyin atlas yaklaşımı kullanarak Ctx istatistiksel olarak anlamlı görüldü. * (p &lt; 0,05), *** (p &lt; 0.001) <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig4v2.jpg"> Şekil 4: Temsilcisi In Vivo [11C] DPA-713 dalak Anlamazdın dMCAO ve Sham fareler. (A) dalak ROIs dMCAO içinde gösterilen [11C] DPA-713 dinamik PET/BT görüntüleri (n = 3) ve sham (n = 3) fareler. (B) kantitatif sonuçlar dalak alımı dMCAO ve sham fareler arasında hiçbir önemli sonuçlar gösterilmektedir. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig4v2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57243/57243fig5v2.jpg"> Şekil 5 : Temsilcisi Autoradiography sonuçları. Dijital autoradiography görüntüleri için kontralateral Yarımküre göre artan [11C] DPA-713 Anlamazdın Ipsilateral göstermektedir. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57243/57243fig5v2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntü yerleştirici protein 18 kDa (TSPO), beyin hastalıkları ilerleme ve Kalkınma neuroinflammation dinamik rolü görselleştirmek için non-invaziv bir araç sağlar. Bu iletişim kuralı bir iskemik inme fare modelinde neuroinflammation algılamaya TSPO-evde beslenen hayvan ve ex vivo autoradiography açıklar.

Görüntüleme [11C] DPA-713 iskemik inme bir fare Model kullanma Neuroinflammation evde beslenen hayvan

Neuroinflammation is central to the pathological cascade following ischemic stroke. Non-invasive molecular imaging methods have the potential to provide ...

Bu deneyin genel amacı, TSPO-PET ve MR görüntüleme kullanarak iskemik inme fare modelinde nöroinflamasyonun mekansal dağılımını ve derecesini doğru bir şekilde ölçmek ve bu in vivo bulguları ex vivo otoradyografi kullanarak doğrulamaktır. Canlı bir denekte nöroinflamasyonu görselleştirmek için PET görüntülemenin nasıl kullanılacağına dair bu adım adım kılavuzu sizinle paylaşmaktan gerçekten heyecan duyuyorum. Burada örnek olarak bir fare vuruş modeli kullanıyoruz.Şimdi, neden bu tekniği kullanmak isteyebilirsiniz? Bunun birkaç nedeni var. Birincisi, sadece merkezi sinir sisteminde meydana gelen iltihaplanma olan nöroinflamasyonun yakından ilişkili olduğu ve aslında inme de dahil olmak üzere birçok beyin hastalığının altında yatan bir şey olduğu düşünülüyor, aynı zamanda Alzheimer hastalığı, multipl skleroz, Parkinson ve liste uzayıp gidiyor.Bu nedenle, bu biyolojik fenomenleri incelememize gerçekten izin veren bu tekniklere sahip olmamız inanılmaz derecede önemlidir. İkinci olarak, PET görüntüleme, daha geleneksel tekniklerin bazılarına göre bir dizi avantaj sunar. Örneğin, bu geleneksel tekniklerin çoğu, hem insan hem de fare ölüm sonrası beyin dokusunu kullanmaya dayanır ve bir dizi önemli içgörü sağlamış olsalar da, bu teknikler doğası gereği statiktir, yani bize yalnızca bir an hakkında gerçekten bilgi verebilirler.Hem beynin hem de bağışıklık sisteminin son derece dinamik olduğunu bildiğimiz için, bu moleküler süreçleri canlı, bozulmamış sistemlerde, yani doğal ortamlarında gerçek zamanlı olarak yakalamamıza izin veren bir tekniğe sahip olmak istememiz mantıklıdır ve PET görüntülemenin yaptığı da tam olarak budur. Burada size, TSPO veya translokatör proteinine bağlandığı bilinen belirli bir PET radyoizleyici olan DPA-713'ü nasıl kullandığımızı göstereceğiz. Size özellikle bir görüntüyü sadece bir fareye değil, aynı anda dört fareye dinamik olarak nasıl enjekte ettiğimizi ve bunun neden bu kadar önemli olduğunu, aynı izleyici grubuyla herhangi bir günde görüntüleyebileceğiniz fare sayısını artırmaya gerçekten yardımcı olduğunu göstereceğiz, böylece deneylerinizi gerçekten kolaylaştırın.Bu teknik olarak zor olsa da, bu videonun bunu kendi laboratuvarınızda gerçekleştirebilmeniz için size rehberlik edebileceğini umuyoruz. Anestezi uygulanmış fareleri PET/CT tarayıcı yatağına yüzüstü yatırarak başlayın, burun konilerinde düzleştiklerinden ve güvenli bir şekilde yerleştirildiklerinden emin olun. Her farenin başını ve gövdesini yumuşak cerrahi bantla yatağa bantlayın ve bandın yerleştirilmesiyle solunumun kısıtlanmamasını sağlayın.Hayvanlar yatakta güvende olduklarında ve solunum stabil hale geldiğinde, lazer artı işaretlerini açın ve tarama yatağını dört farenin de beyni ile aynı hizada olacak şekilde hareket ettirin. Tarayıcı yatağını, farelerin beyinleri görüş alanının merkezine mümkün olduğunca yakın olacak şekilde çekim konumuna getirin. Konumlarını doğrulamak için farelerin izci görünümü görüntüsünü alın ve gerekirse arayüzdeki görüş alanı kutusunu sürükleyerek konumu ayarlayın.Son olarak, CT taramasını başlatmak için tarayıcı yazılımında İş Akışını Başlat'a tıklayın ve PET taramasının izleyici enjeksiyonundan önce manuel olarak başlatılabilmesi için etkileşimli kullanıcı istemlerini görüntüle'yi seçtiğinizden emin olun. Fareler otomatik olarak CT'den PET'e ilerlediğinde, radyoizleyici enjeksiyonu için tarayıcının arkasını ayarlayın. Koruyucu, emici dolguyu bir çıkıntıya yerleştirin ve makas ve çakmağın elinizin altında olduğundan emin olun.Mühürlü kateter borusunu makasla kesin. Kateter hatlarında herhangi bir kabarcık olmadığını kontrol edin ve 10 ila 20 mikrolitrelik bir tuzlu su yıkama yaparak kanülün hala damar içinde olduğunu onaylayın, ardından önceden ölçülen doz şırıngalarını dört kateterin her birine yükleyin ve her fareye hangi dozun verildiğini takip edin. PET taraması başlamaya hazır olduğunda ve aynı anda 10 saniyelik bir zamanlayıcı başlatırken Tamam'a tıklayın.Tarayıcının arkasında, zamanlayıcı sıfıra ulaştığında dört fareyi de aynı anda enjekte etmek için doz şırıngaları ile iki araştırmacı bulundurun. Tam dozun kuyruk damarına girdiğinden emin olmak için her kateteri 50 ila 100 mikrolitre salinle yıkayın ve bir çakmak kullanarak boruyu bir kez daha kapatın. Daha sonra, artık bir radyoaktivite değeri elde etmek için bir doz kalibratörü kullanarak doz şırıngalarını ölçün.Değerleri ve kaydedildikleri zamanı not edin. Tarama tamamlandıktan sonra, Hareket Kontrolü panelindeki Yatay Ana Sayfa düğmesini kullanarak PET yatağını orijinal konumuna geri getirin. Fareleri tarayıcıdan çıkarın ve kateteri dikkatlice çıkarın.Aşırı kanamayı önlemek için kanülasyon bölgesine hafifçe baskı uygulayın. Daha sonra bir doz kalibratörü kullanarak kateterdeki kalıntı aktiviteyi ölçün. Son olarak, ilk dosyadan oluşturulan histogram verilerini kullanarak her taramayı otomatik olarak yeniden oluşturacak olan işlem sonrası yönetim yazılımını açarak verileri yeniden oluşturun.PET analizi için, görüntü analiz yazılımını açarak, CT görüntüsünü yüklemek için Açık Veri simgesine tıklayarak ve dinamik PET'i yüklemek için Veri Ekle simgesini seçerek başlayın. Açılır menüdeki zaman serisi operatörü aracılığıyla verilerin görsel kalite kontrolünü gerçekleştirin. Referans ve genel'i seçin ve renk skalası için uygun bir minimum ve maksimum değer uygulayın.Dinamik PET verilerini kare kare görselleştirin, radyoaktivite alımını doğrulayın ve tarama sırasında herhangi bir hareket karışıklığı olup olmadığını kontrol edin. Ardından, Aritmetik işlevini kullanarak ortalama bir PET görüntüsü oluşturun. Ortalama seçileni seçin, Referans'ın seçimini kaldırın ve tüm PET çerçevelerinin ortalamasını oluşturmak için Giriş 1, Giriş 2 ve Giriş'in seçili olduğundan emin olun.Veri Yöneticisi sekmesine gidin ve ortalama PET görüntüsünü kullanarak PET sinyalinin görselleştirilmesine izin vermek için ortalama görüntüyü Giriş 1 konumuna sürükleyin. Ardından, Min/Maks aracındaki otomatik hesaplamaya tıklayarak renk ölçeğini yeniden dağıtın. Ardından, Yeniden Oryantasyon Kaydı açılır menüsündeki otomatik 3D işlevini kullanarak CT'yi ortalama PET dosyasına kaydedin.Ref ve Input 1'i seçin ve Ref kaydı için Rigid, Fast, Input 1'i seçin. Her üç boyutta da kaydı görsel olarak kontrol edin ve gerekirse Çevirme ve Döndürme işlevlerini kullanarak Manuel 3D sekmesinde manuel olarak ayarlayın. Kayıttan memnun kaldığınızda, Giriş 2 ve Giriş'i seçin ve onay işaretine tıklayarak tüm PET çerçevelerine uygulayın.DM'deki CT ve PET dosyalarına sağ tıklayın ve ham olarak kaydedin. Ardından, açılır menüden Kırpma'yı seçin ve her seferinde bir farenin kafasını beyin sapının altında kırpmak için görüntü sınırlarını sürükleyin. PET ve CT görüntülerini, kafatası tüm boyutlarda düz olacak şekilde manuel olarak yeniden yönlendirin.Arayüzün sol üst kısmındaki Veri Ekle düğmesini kullanarak bu fare için MR görüntüsünü yükleyin. Manuel 3D yeniden yönlendirmeyi kullanarak MR'yi hareket ettirin ve BT görüntüsündeki kafatasına sığdırın. Ardından, Görsel Denetleyici sekmesinde seçimini kaldırarak PET görselleştirmesini kapatın ve ilgilenilen bölgeyi veya yatırım getirisini çizmek için yalnızca MR ve CT'yi kullanın.3D ROI aracında, yeni bir ROI oluşturmak ve bunu Inenfarkt olarak adlandırmak için ROI Ekle düğmesine tıklayın. Eğri aracını seçin, ROI kenarlığını çizmek için sol tıklayın ve kapatmak için sağ tıklayın. Bunu takiben, yeni bir yatırım getirisi oluşturun ve bunu karşı taraflı olarak etiketleyin.Enfarktüs ROI'ye sağ tıklayın ve Dışa Aktar'ı seçin. Ardından, yeni yatırım getirisinin görselleştirilmesine ve manuel olarak yeniden yönlendirilmesine izin vermek için yatırım getirisini 2, Giriş 1 konumuna taşıyın. Yalnızca Giriş 1 seçiliyken, ROI kutusunu işaretleyin ve Enfarktüs ROI'nin yeniden yönlendirilmeden görselleştirilmesine izin vermek için Yalnızca Görüntüle'yi seçin.Yeniden Yönlendirme Kaydı menüsünde, Operatör işlevini kullanarak bir sola-sağa çevirme uygulayın ve yeni ROI'yi karşı taraftaki aynı bölgeye manuel olarak taşıyın. Ardından, Aritmetik işlecini seçin ve yeni ROI'ye ikinin skaler bir çarpımını uygulayarak ROI'lerin bağımsız olarak nicelleştirilmesine izin verin. 3D ROI aracına geri dönün.Uzman ve Deneysel sekmesine gidin ve ROI'yi İçe Aktar düğmesine tıklayın. Yeni birimi kontralateral ROI olarak yüklemek için İletişim kutusundan Giriş 1'i seçin. Son olarak, ortalama PET görüntüsüne sağ tıklayın ve boşaltın ve PET'i tekrar açın.3D ROI aracındaki Sonuçları Dışa Aktar simgesini kullanarak nicel alım sonuçlarını oluşturun. Elde edilen PET/BT görüntüleri ve zaman aktivitesi eğrileri, ipsilateral ve kontralateral hemisferlerde artmış radyoizleyici tutulumunu göstermektedir. 50 ila 60 dakika arasında toplanan veriler kullanılarak dinamik PET beyin görüntülerinin nicelleştirilmesi, dMCAO'daki kontralateral hemisfere kıyasla ipsilateralde izleyici alımında önemli bir artış olduğunu ortaya koydu, ancak manuel olarak çizilen ROI yaklaşımını kullanan sahte farelerde değil.Bu tekniği izledikten sonra, hem otomatik hem de manuel görüntü analizi yöntemlerini kullanarak, TSPO-PET aracılığıyla iskemik inme fare modelinde nöroinflamasyonun doğru ve verimli bir şekilde nasıl ölçüleceğini iyi anlamalısınız. Daha da önemlisi, bu in vivo bulguları ex vivo dijital otoradyografi kullanarak da doğrulayabilmeniz gerekir. Karbon 11 yarı ömrü çok kısa olduğundan, verilerinizin miktarını ve kalitesini en üst düzeye çıkarmak için bu prosedürü denemeden önce net bir deneysel plan ve zaman çizelgesi belirlemek çok önemlidir.Bu prosedürü takiben, glial aktivasyon ve TSPO ekspresyonu arasındaki korelasyon gibi ek soruları yanıtlamak için immünohistokimya gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Radyoaktivite kullanmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın. Maruziyetinizi en aza indirmek için koruyucu giysi, kurşun kalkan kullanın ve bu prosedürü gerçekleştirirken mesafenizi artırın.

pet-imaging-neuroinflammation-using-11cdpa-713-mouse-model-ischemic

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kaynak: Chaney, A. M., et.al.  İskemik inme fare modelinde [11{{}}C]DPA-713 kullanılarak PET görüntüleme. J. Vis. Uzm.  (2018).  Bu video, TSPO'ya özgü bir radyoizleyici kullanarak iskemik inme fare modelinde nöroinflamasyonun in vivo görüntülenmesi için bir tekniği göstermektedir. Enjeksiyonu takiben, radyoizleyici, dış mitokondriyal zarda bulunan ve aktive edilmiş bağışıklık hücrelerinde aşırı eksprese edilen bir protein olan TSPO'ya bağlanır. Bir PET/CT tarayıcısı, radyoizleyicinin...

İskemik İnme Fare Modelinde Enfarktüs Oluşumunu Tespit Etmek için TSPO-PET/BT Görüntüleme

Kaynak: Ouyang, Y., et al. Fare Serebral Hipoksi-iskemisi Sırasında Eş Zamanlı PET/MRG Görüntüleme. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, eşzamanlı pozitron emisyon tomografisi (PET) ve manyetik rezonans görüntüleme (MRI) yoluyla serebral hipoksi hasarını değerlendirmek için bir teknik göstermektedir. Anestezi uygulanmış bir fare, ortak karotis arter (CCA) ligasyonuna tabi tutulur, bu da bir beyin yarım küresine kan akışını azaltır ve onu hipoksiye bağlı yaralanmaya yatkın hale getirir. PET ve MRG...

Bir fare modelinde serebral hipoksi-iskeminin neden olduğu beyin hasarının görüntülenmesi

Serebral iskemiden kaynaklanan beyin hasarı, enjekte edilebilir radyoaktif prob, 18F-florodeoksiglukoz ile birleştirilmiş klinik öncesi pozitron emisyon tomografisi kullanılarak sıçanlarda non-invaziv olarak görüntülenebilir ve incelenebilir. Ayrıca, ilgi hacmi (VOI) beyin şablonlarını içeren modern yazılım araçlarının kullanılması, bu çalışmalardan elde edilen nicel bilgileri önemli ölçüde artırmaktadır.

Pozitron Emisyon Tomografi ile kullanma Non-invaziv Görüntüleme ve Serebral iskemi Analizi Yaşam Sıçanlarda<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Burada sunulan yöntem, eşzamanlı pozitron emisyon tomografisi ve manyetik rezonans görüntüleme kullanır. Serebral hipoksi-iskemi modelinde, difüzyon ve glukoz metabolizması dinamik değişimler sırasında ve yaralanma sonrası ortaya çıkar. Anlamlı multi-modal görüntüleme verileri elde edilecek iseniz bu modelde gelişen ve 'tekrarı hasar eşzamanlı edinimi gerektirir.

Fare Serebral Hipoksi-iskemi sırasında Eşzamanlı PET / MR Görüntüleme

Burada, geri dönüşümsüz bir endotelyal nitrik oksit sentaz (eNOS) inhibitörünün (L-Nio) lokal enjeksiyonu ile murin beyaz cevherinde fokal inme üretimi için metodoloji sunuyoruz. Bu tekniğin potansiyel uygulamalarını genişleten iki stereotaktik varyasyon, retrograd nöronal izleme ve taze doku etiketleme ve diseksiyon sunulmaktadır.

Aksonal Dejenerasyon ve Beyaz Cevher Nörobiyoloji Çalışması Çok Yönlü Fare Modeli subkortikal beyaz madde İnme

Bir kemirgen modelinde [14C]-iyodoantipirin (IAP) alımını ölçmek ve merkezi inme sonrası ağrıda (CPSP) yer alan nöral substratların aktivasyonunu değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

otoradyografik Ölçümler [<sup&gt; 14</sup&gt; Orta İnme Sonrası Ağrı ardından Rat Beyin C] -Iodoantipyrine

Bu protokol serebral emboli görselleştirmek için kombine yakın kızılötesi floresan (NIRF) görüntüleme ve mikro-bilgisayarlı tomografi (mikroBT) uygulanmasını açıklar. Bu teknik trombüs yükü ve evrim ölçümü sağlar. MikroBT'lerin tekniği altın nanopartiküller kullanarak canlı hayvan içinde trombüs görüntüler ise NIRF görüntüleme tekniği floresan, eksize beyinde trombüs etiketli görselleştirir.

Doğrudan Serebral emboli görselleştirme için Kombine Yakın kızılötesi Floresan Görüntüleme ve Mikro bilgisayarlı Tomografi

Bu çalışma, iskemik inmenin noninvaziv görüntülenmesi için multimodal ultrason tabanlı bir görüntüleme platformunun kullanımını göstermektedir. Bu sistem, fotoakustik görüntüleme yoluyla kan oksijenasyonunun ölçülmesine ve akustik anjiyografi ile beyindeki bozulmuş perfüzyonun ölçülmesine izin verir.

İskemik İnmenin Nonİnvaziv Tüm Beyin Görüntülemesi için Entegre Fotoakustik, Ultrason ve Anjiyografik Tomografi (PAUSAT)

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Tamamen optik bir yaklaşım kullanılarak, uyanık, davranan bir farenin ortaya çıkan inme çekirdeğinde ortaya çıkan bir floresan biyosensör kullanılarak nöronalCa2+ aktivitesi aynı anda kaydedilirken iskemik inme indüklenir.

Davranan farelerde iskemik inmeyi indüklemek ve izlemek için eşzamanlı fototromboz ve lif fotometrisi

Öğrenin iskemik inmeli fare modelinde TSPO-PET görüntüleme ile nöroinflamasyonu canlı ortamda nicel olarak analiz etme yöntemini. Bu protokol, araştırmacılara dinamik biyolojik süreçleri gerçek zamanlı gözlemleme imkanı sunar.

Görüntüleme [¹¹C] DPA-713 iskemik inme bir fare Model kullanma Neuroinflammation evde beslenen hayvan

Daha fazla video keşfet