Name: Vücut kompozisyonu ve metabolik Caging Analizi yüksek yağ Fed farelerde (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 28 s
Description: Öğrenin, farelerde vücut kompozisyonu ve metabolik parametreleri analiz etme yöntemini. Bu teknik, obezite modellerinde enerji harcaması ve yağ dağılımını incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz personel Alfred tıbbi araştırma ve eğitim seçim bölgesi hayvan Hizmetleri (AMREP AS) takım onların yardım için ve bu çalışmada kullanılan fare bakımı ve Kraliçe Viktorya dönemine ait devletin altyapı operasyonel destek programı destek için teşekkür ederiz Hükümet.

Tüm deneyler açıklanan Alfred tıbbi araştırma eğitim seçim bölgesi hayvan Etik Komitesi tarafından (AMREP AEC) kabul edildi ve fareler Ulusal Sağlık ve tıbbi araştırma Konseyi (NHMRC), Avustralya talimatların doğrultusunda insana ilişkin bakım sağlanmıştır Hayvan deney. Hayvanlar onların reçete diyet ve su ad libitum idare ve 12 h ışık ve 12 h-karanlık döngüsü ile ısı kontrollü ortamında (~ 21-22 ° C) yer alır. Yedi hafta eski erkek fareler (bir C57Bl/6J arka plan üzerinde) ya da normal normal yemek diyet beslenen (enerji içerik 14.3 MJ/kg, kJ %76 karbonhidrat, %5 yağ, % 19 protein; oluşan tablo malzemeleri görmek) veya yağ beslenme yüksek grubu için yüksek yağlı diyet (HFD) () enerji 19 MJ/kg, kJ %36 karbonhidrat, % 43 yağ, % 21 protein, özel Feeds oluşan içerik) için 3 hafta. Metabolik izleme analizi bir istiridye diyet 3 hafta sonra gerçekleşti ise vücut ağırlığı ve vücut kompozisyonu ölçümleri bir EchoMRI makine kullanarak haftalık yapıldı.
1. vücut kompozisyon Analyzer yordamı
Not: En iyi şekilde çalışması için EchoMRI 4-in-1 Bu iletişim kuralında kullanılan hava sıcaklığı kararlı ve değil dalgalanıyor nerede bir oda içinde bulunması. İdeal bir konuma sahip bu sürekli izlenmelidir. Makine ve kesintileri iktidara taşıma de mümkünse kaçınılmalıdır. Güç kaynağı kesildi ve sistemin başlatılması gerekir, en az 2-3 h tekrar kullanmadan önce ısınmak makine için izin verin. Başlamadan önce doğru kişisel koruyucu ekipman var emin olun.
<ol><li>Fareler tarama öncesinde, vücut kompozisyon analyzer makinede bir sistem testi gerçekleştirin. Bu bir kalibrasyon standart (kanola yağı sistem test örneği (maliyet) araç duyarlığını test etmek ve onun doğruluğu hiçbir drift oldu emin olmak için adlandırılır) kullanarak içerir.<ol>
<li>Açık sistem bilgisayar yazılımı, Sistem Test araç çubuğu düğmesini tıklatın veya "Alt + Y" aynı anda basmak.</li>
		<li>Sistem başlatma bilgisayar tarafından getirilmeden önce (Bu durumda fare özel maliyeti) doğru maliyeti yerleştirildi bu sistemi ( Şekil 1) Portal içinde doğrulamak bir uyarı mektubu bekleyin. Bu gerçekten durumda olduğunu onayladıktan sonra tamamlamak için birkaç dakika sürer testi ile devam etmek için kabul edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sistem testi geçtikten sonra ileri tarama ile devam edin.<ol>
<li>Sistem başlatma başarısız olursa, sistem sınama işlemini yineleyin.</li>
		<li>Makine (bir sapma olarak oluşan durumları gösteren) Aralık dışında olmaya devam ediyor, kalibrasyon durumu düzeltmek için gerekli olabilir. Bu istemleri izleyerek veya satın alma sırasında sağlanan kullanım kılavuzunda açıklandığı gibi tamamlayın. Sorun devam ederse, el ile3 denetleyin veya üreticinin destek ekibine sorunu bildirin ve daha fazla talimat aramak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fareler onları iken makine yer tutmak için bir küçük hayvan numune tutucu (uzun silindir) yerleştirin. Bunu yapmak için yer tutucu yatay olarak, fareyi kaldırıp ve silindir kafası açılış içine önce ekleyin. Silindir ve analiz için hazır altındaki faredir yavaş ve dikkatli sahibi dikey konuma getirin.</li>
	<li>Bir kez sahibi içinde fare hareket sırasında ölçüm dönemini sınırlandırmak için bir ayırıcı ekleyin. Bazı durumlarda, son derece etkin fareler ile senin parmak ucu ile yerde sınırlayıcı tutmak için gerekli olabilir. Not: stresi azaltmak için numune sahipleri onların ilk analiz önce yerleşimiyle fareler hakkında bilgi edinin. Fareler onlar karanlıkta hissediyorum gibi bir kırmızı renkli hayvan numune tutucu kullanılması da potansiyel stres tepkisi azaltabilir.</li>
	<li>İçinde belgili tanımlık bilgisayar yazılımı için verileri kaydetmek için bir klasör (klasör araç çubuğu) seçin ve bir dosya adı oluşturun.</li>
	<li>Gerekirse, tarama birincil birikimleri sayısını artırarak yağ ve yağsız ölçümlerde rasgele gürültü miktarını azaltmak. Bir kez yazılım başlatılır, birincil birikimleri genel günlük kullanım için önerilen varsayılan değer ayarlanır; Bu parametreleri değiştirmek için belirli bir neden olmadığı sürece, varsayılan duyarlık gerekli düzeyi kullanıcılara verecektir.</li>
	<li>Ücretsiz su ve toplam su için veri alma ilgi değil, su sahneden Hayır demek için sekmesini seçerek etkinleştirin. Böylece tarama süresini önemli ölçüde azaltmak ve üretilen işi artırmak.</li>
	<li>Tarama "tarama Başlat" seçerek veya klavyenin üzerindeki F5 tuşuna basarak başlatın. Hayvan ile ilgili tüm ilgili verileri girin (Örneğin, hayvan kimliği, vücut kitle, vb.) ve "ok" tuşuna basın veya yaklaşık 1 dakika sürer tarama başlamak için F5'e.</li>
	<li>Veri elde ettikten sonra fare makine içeren hayvan sahibi çıkarın ve onun kafes hayvan geri yerleştirin. Bütün hayvanlar taradıktan sonra verileri daha ayrıntılı bir çözümleme ve harmanlama için verin.</li>
	<li>Önce ve kullanımdan sonra üreticinin talimatlarına göre hayvan sahipleri iyice temizleyin. Bu sahipleri akrilik plastikten inşa edilir, onlar çatlama sahipleri ve/veya böylece kırılma olasılığı artmaktadır sahibinin hızlı bozulma neden olabilir izopropil alkol ve etil alkol kaçınılmalıdır. Bunun yerine, sıcak bulaşık yıkama su solüsyonu kullanabilir veya, daha da dezenfektan gerekiyorsa, F10 (at 1:125 seyreltme) veya diğer dezenfektan veya temizleme spreyleri ( Tablo malzemelerigörmek) kullanın ve sonra silin.</li>
</ol>2. metabolik hayvan sistem yordamı izleme
Not: ~ 2 h ve ısınmak için gereklidir. Makinenin kapatılmış, bu zirkon hücre 725 ° C'ye ısıtılmış izin vermek için açık olmalıdır Ayrıca biz genellikle fareler vücut kompozisyon analiz kısıtlama stres ile herhangi bir sorunları önlemek için izleme sistemi hayvan girerek gün önce bir yerleştirin.
<ol><li>Hayvan izleme sisteme bağlı bilgisayar açık ve kontrol programı açmak emin olun. "Oxymax yardımcı programı" seçeneği pompalar başlatmak için aracı menüsünden seçin.</li>
	<li>Su şişeleri uygun su ile doldurun, tartmak ve fareler sağlığını incelemek ve gıda organize etmek. Gıda alımı ölçüm sistemi içinde gıda pudralanmaya göz önünde bulundurun. Gıda hoppers yaylı platform ve ipucu gıda hopper karartıcı tarafından doldurun. Gıda hopper ve su şişesi yetecek kadaryemek ve suyumuz deneysel Tom'u son sağlamak için tamamen dolu olduğundan emin olun.</li>
	<li>Drierite/kurutucu durumunu kontrol edin; renk göstergesi kullanılıyorsa, bu mavi olmalı ve bu nedenle Kuru ama pembe/mor ise, bunu önemli nem absorbans olmuştur ve değiştirilmesi veya tepesinde.</li>
	<li>Amonyak tuzak ve soda kireç durumunu denetleyin ve gerekirse değiştirin. Amonyak tuzak bağlıysa ne zaman ikinci tuzak bir renk değişikliği belirtileri görüntüler, bir defada iki birincisinin yerini. CO2 ofset bir artış da soda kireç yerine gerek anlamına. Not: Kurutucu fırın kurutulmuş ve yeniden kullanılabilir, ancak her zaman taze kullanmak sistem üreticisinden önerileri uygulayın.</li>
	<li>Odaları montajı. Bunu yapmak için gıda hopper bakiyesine yeri sonra odası eklenen odası katında olur delikli platformu ile üzerine yerleştirin. Dikkatle odasında fareyi getirin ve sistem ön kapağını takın ve Klipler geri ve güvenli su şişesi konumlandırma ve tespitleme önce. Önlem olarak tüm odası kapakları, fare ve su (Şekil 2A-D) yeniden denetleyin. Not: muayene ediliyor fareler boyutuna bağlı olarak, fareler yiyecek ama onlar doğrudan besleyici üstünde uyuyabilir yeterli alanı erişimi gıda hopper yukarıdaki alanlarda yüksekliğini ayarlamak gerekli olabilir.</li>
	<li>Bu gaz sensörler her deneme önce ayarlanması önerilir gibi sistemi kalibre.<ol>
<li>Bir gaz bilinen kompozisyon (% 0.5 CO2, %20,5 O2, dengesi azot) kullanın. Kalibrasyon gaz tankı sistem yolu ile bir regülatör ve hortum bağlamak. Açmak ve tank çıkış basıncı 5-10 psişik okuma olun. Not: Bazı sistemlerde ikinci bir tank, hortum ve regülatör "mahsup" bir gaz olarak saf azot kullanımı için olacaktır. Ameliyat sistemi yerine soda kireç CO2 serbest hava oluşturmak için kullanır.</li>
		<li>O2 ve CO2 sensörleri ayarlamak için yordamları izleyin. "Kalibrasyon" Araçlar menüsünden seçin ve sırayla O2 ve CO2kalibre. Örnek 1) ayarlama önce emin olmak ve başvuru akar 0.400 LPM, 2) zirkon O2 sensör sıcaklık 725 ° C (± 1 ° C), 3) örnek ve referans daha kuru ve hava pompaları açık olduğundan ve 4) kalibrasyon gaz takılı ve açık olduğundan.</li>
		<li>Gerekirse, ne zaman O2 sensör kalibrasyonu biraz mahsup denetim ön zirkon oksijen sensörünün 1,0000 (± 0.0002) bir O2 oranı değerini elde etmek için ayarlayın. (Yeşil font bilgisayar ekranında yazılım görüntüsündeki vurgulanmış) kabul edilebilir sınırlar içinde olduğundan emin olmak için bu.</li>
		<li>Sonra başarılı O2 ve CO2 sensör kalibrasyonu, Kalibrasyon gaz silindir ve hortum düzenleyici kesin. Kalibrasyon sonra O2 başvuru hava (atmosferik) için 20.92 (± 00.02) okumalısınız. Kalibrasyon tolerans dışında yineleyin ve sorun giderme kılavuzları üretici bakın. Bu aksi taktirde daha fazla talimat için üreticiye başvurun.</li>
	</ol></li>
	<li>Deneysel kurulum ile devam edin. "Deneysel dosyasını açın" deney menüsünden seçin. (Örneğin, fare) uygun şablonu seçin. Deney menüde "Kur" altında kaydedilmesi gereken deneme parametrelerini tanımla (Örneğin, fare kimliği, ağırlık, Grup, vb) herhangi bir odaları kullanılmadığı seçeneğini temizleyin ve kaydedilmesi için deney konumunu seçin.</li>
	<li>Ölçekler ölçme gıda alımı Eğer şeytan ve deney menüsünden "Çalıştır"'ı seçerek veri yakalamayı başlatmak emin olun. Zaman fenotip, hayvan yalıtım ve sistem kullanım kurumsal kurallara bağlı olarak farklı uzunlukları için yakalanan verileri. Not: bizim ellerimizde deneme rutin olarak 48 saat için ilk 24 h acclimatisation yeni çevre ve ikinci 24 saat veri çözümlemesi için kullanılan olarak kullanılan ile çalıştırılır. Veri toplama dönemi ne kadar araştırmacı onların fareler tek başına barındırılıyor ve hayvan etik onay bağımlı tutmak istiyor üzerinde temel alır. Alternatif olarak, hükümler varsa, fareler olabilir sisteme konuyor önce odalarında acclimatised ve bağlı. 12 odası sistemi kullanılırken her odası yaklaşık her 13 dakikada ölçülür.</li>
	<li>Düzenli olarak kontrol edin ve fareler hayvan refahı sağlamak için sistemdeki uygun veri toplanan iken ve elde edilen sonuçları izleyebilirsiniz. Herhangi bir sorun bu aşamada tespit ve düzeltilmesi mümkün olabilir. Ne zaman onlar are içinde belgili tanımlık sistem her sabah ve akşam her fare kontrol edin.</li>
	<li>Gerçek zamanlı oksijen tüketimi, RER ve enerji harcama açısından her fare için toplanan veriler için veri dosya sayfasının en üstündeki metabolik sekmesini kontrol edin. Bu arada, sonları ışınla ve gıda tüketim verileri aktivite ve besleme sekmelerde sırasıyla bulunabilir. "O2 içinde" çevresinde okuma onay 20,90-20.94, "CO2 " içinde olan 0.040 - 0.050, RER 0,7 ile 1 arasında ve akış hızı 0.5 - 0.6 L/dk sabit.</li>
	<li>Düzenli aralıklarla kontrol fareler yiyecek ve su erişiminiz ve onlar her tüketiyorlar. Onlar sıkıntı delikli döşeme, kazma gibi belirtileri gösteren değil emin olun. Ayrıca, görüntülenen sonuçları izlemek.</li>
	<li>Tahsis edilen deneysel süre bitiminde "Dur" deney menüden seçin ve sonuçları dışa aktarabilirsiniz (CSV dosyaları, Dosya > Dışa Aktar > oluşturmak konu CSV'ın) analiz için.</li>
	<li>Fareler sağlığını incelemek, onları tartmak ve ev onların kafes dönün.<ol>
<li>Fareler doğru her diğer ayrılıktan sonra düşman olmak, birlikte tekrar yer almaktadır bir kez çok izlemek.</li>
		<li>Kafesleri sökmeye, aşırı yemek hoppers kaldırmak ve herhangi bir dışkı, idrar ve kafesleri gıdalardan ipucu. Şişe ve yudumlayanlar seyreltilmiş T-bac çözümde daldırın ıslatın ve sulandırılmış çamaşır suyu çözümündeki diğer bileşenler temiz. Temiz su ile durulayın ve hava kuru bırakın.</li>
	</ol></li>
	<li>Yazılımı ile metabolik parametreleri hesaplayın. Yazılım denklemler son verileri çıkış4sağlamak için bir dizi kullanır. Oksijen tüketimi ve karbon dioksit üretim hesaplanması için: oksijen tüketimi: VO2 (LPM)V =benO2i - VoO2o; Karbondioksit üretim: VCO2 (LPM)V =oCO2o-VbenCO2i Nerede:Ben V = giriş havalandırma oranı (LPM), Vo çıkış havalandırma oranı (LPM), O2i = O2 konsantrasyonu, giriş, O2o = O2 konsantrasyonu, çıkış, CO2i = CO2 = giriş, CO2o konsantrasyonu CO2 konsantrasyonu, çıkış =. RER hesaplanması için: RER = VCO2 / VO2. Protein oksidasyon değil ölçüldü ve bu nedenle RER bunun için ayarlandı değil unutmayın. Enerji harcaması hesaplanması için: enerji harcaması: CV = 3.815 + 1.232* RER Isı (Kcal/h)) CV = * VO2. Nerede: CV kalorifik değeri (sıcaklık ve oksijen tüketim hacmi arasındaki ilişki) olduğunu. Bu "öğeleri of Bilim Graham Lusk tarafından oluşan Lusk tablo adı verilen beslenme" türetilir.</li>
</ol>

<ol><li>Chen, W., Wilson, J. L., Khaksari, M., Cowley, M. A., Enriori, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+fat+analyzed+by+DEXA+scan+reflects+visceral+body+fat+and+improves+the+phenotype+description+and+the+assessment+of+metabolic+risk+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Abdominal fat analyzed by DEXA scan reflects visceral body fat and improves the phenotype description and the assessment of metabolic risk in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 303 (5), E635-E643 (2012).</li>
<li>Kovner, I., Taicher, G. Z., Mitchell, A. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21152249">Calibration and validation of EchoMRI whole body composition analysis based on chemical analysis of piglets, in comparison with the same for DXA.</a> Int J Body Compos Res. 8 (1), 17-29 (2010).</li>
<li>EchoMRI. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Software+User+Manual%3A+Whole+body+composition+analyzer%22">Software User Manual: Whole body composition analyzer</a>. , (2016).</li>
<li>Columbus Instruments. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Oxymax+for+Windows+User+Manual%22">Oxymax for Windows User Manual</a>. , September (2014).</li>
<li>Tschop, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+analysis+of+mouse+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A guide to analysis of mouse energy metabolism.</a> Nat Methods. 9 (1), 57-63 (2011).</li>
<li>Speakman, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+energy+metabolism+in+the+mouse+-+theoretical%2C+practical%2C+and+analytical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Measuring energy metabolism in the mouse - theoretical, practical, and analytical considerations.</a> Front Physiol. 4, (2013).</li>
<li>Swoap, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagal+tone+dominates+autonomic+control+of+mouse+heart+rate+at+thermoneutrality%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Vagal tone dominates autonomic control of mouse heart rate at thermoneutrality.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 294 (4), H1581-H1588 (2008).</li>
<li>Tian, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermoneutral+housing+accelerates+metabolic+inflammation+to+potentiate+atherosclerosis+but+not+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Thermoneutral housing accelerates metabolic inflammation to potentiate atherosclerosis but not insulin resistance.</a> Cell Metab. 23 (1), 165-178 (2016).</li>
<li>Giles, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermoneutral+housing+exacerbates+nonalcoholic+fatty+liver+disease+in+mice+and+allows+for+sex-independent+disease+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Thermoneutral housing exacerbates nonalcoholic fatty liver disease in mice and allows for sex-independent disease modeling.</a> Nat Med. 23 (7), 829-838 (2017).</li>
<li>Lee, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+type+2+innate+lymphoid+cells+regulate+beige+fat+biogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Activated type 2 innate lymphoid cells regulate beige fat biogenesis.</a> Cell. 160 (1-2), 74-87 (2015).</li>
<li>Kusminski, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MitoNEET-driven+alterations+in+adipocyte+mitochondrial+activity+reveal+a+crucial+adaptive+process+that+preserves+insulin+sensitivity+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">MitoNEET-driven alterations in adipocyte mitochondrial activity reveal a crucial adaptive process that preserves insulin sensitivity in obesity.</a> Nat Med. 18 (10), 1539-1549 (2012).</li>
<li>Judex, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+adiposity+in+small+rodents+using+micro-CT%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Quantification of adiposity in small rodents using micro-CT.</a> Methods. 50 (1), 14-19 (2010).</li>
<li>Chaurasia, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+ceramides+regulate+subcutaneous+adipose+browning%2C+inflammation%2C+and+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Adipocyte ceramides regulate subcutaneous adipose browning, inflammation, and metabolism.</a> Cell Metab. 24 (6), 820-834 (2016).</li>
<li>Matthews, V. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6-deficient+mice+develop+hepatic+inflammation+and+systemic+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6-deficient mice develop hepatic inflammation and systemic insulin resistance.</a> Diabetologia. 53 (11), 2431-2441 (2010).</li>
<li>Tschop, M., Smiley, D. L., Heiman, M. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11057670">Ghrelin induces adiposity in rodents.</a> Nature. 407 (6806), 908-913 (2000).</li>
<li>Garcia, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature-onset+obesity+in+interleukin-1+receptor+I+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Mature-onset obesity in interleukin-1 receptor I knockout mice.</a> Diabetes. 55 (5), 1205-1213 (2006).</li>
<li>Kowalski, G. M., Bruce, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+regulation+of+glucose+metabolism%3A+Implications+and+considerations+for+the+assessment+of+glucose+homeostasis+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">The regulation of glucose metabolism: Implications and considerations for the assessment of glucose homeostasis in rodents.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 307 (10), E859-E871 (2014).</li>
<li>McGuinness, O. P., Ayala, J. E., Laughlin, M. R., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+experiment+in+centralized+mouse+phenotyping%3A+the+Vanderbilt+experience+and+recommendations+for+evaluating+glucose+homeostasis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">NIH experiment in centralized mouse phenotyping: the Vanderbilt experience and recommendations for evaluating glucose homeostasis in the mouse.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 297 (4), E849-E855 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Kritik adımlar
Burada açıklanan protokoller hangi ölçü vücut kompozisyonu için yollar ve vücut kompozisyonu analiz ve metabolik bir hayvan izleme sistemi kullanarak farelerde çeşitli metabolik parametreleri için bir örnek sağlar. Her iki teknikleri için bunu en iyi şekilde işleme makinaları ve araştırmacı vücut kompozisyon analiz için bir sistem testi uygular ve metabolik bir bilinen gaz kompozisyon için ayarlamanın yanı sıra gerekiyor bunu yapmak için emin olmak kritik öneme ...

Metabolizma normal hücresel, organ ve tüm vücut Fizyoloji birçok açıdan destekler. Sonuç olarak, çeşitli patolojileri ortamda değişiklikler metabolizma doğrudan altta yatan durumuna katkıda bulunabilir veya bir yan etkisi patolojinin olumsuz etkilenebilir. Geleneksel olarak, metabolik araştırma ve çalışmalar içine enerji dengesi obezite ve insülin direnci, ön şeker hastalığı, gibi ilgili koşulları alanında glikoz intoleransı, kalp-damar hastalıkları ve Diyabet konsantre. Bu araştırma bu koşullar Dünya çapında ve bireysel, toplumsal, artan yaygınlığı verilen garanti ve ekonomik maliyeti bu koşullar indirebilmek. Bu nedenle, hedef obezite için yeni tedavi ve önleme stratejileri geliştirme dünya çapında araştırma laboratuarlarında devam eden bir hedeftir ve preklinik fare modelleri ağır bu çalışmalar için güvenerek.
Fareler ağırlığında ağırlık kazanç veya kayıp güvenilir bir değerlendirme sağlamasına karşın, tüm vücut kompozisyon (yağ kitlesi, yağsız kitle, ücretsiz su gibi kürk ve pençeleri gibi diğer bileşenleri) makyaj farklı bileşenleri bir dökümünü sağlamaz. Fare ölmüş olduğunu bir kez yağ yastıkları çalışmalar tamamlandığında, tartma farklı yağ depoları doğru bir ölçü sağlar ancak yalnızca veri için bir tek zaman noktası sağlayabilir. Sonuç olarak, obezite geliştirme süresi, önemli ölçüde artan hayvan sayıları, süresi ve maliyeti üzerinden araştırmak için birden çok tabur kayıt genellikle gereklidir. Dual enerji x-ışını Absorpsiyometri (DEXA) vücut yağ ve yağsız doku içeriği değerlendirmek için bir yaklaşım sağlar ve araştırmacı bir boyuna moda verileri elde etmek izin verir. Ancak, yordamı fareler imzalat1olmak ister ve anestezi tekrarlanan nöbetleri yağ dokusu birikimi etkisi veya metabolik regülasyon diğer yönleri etkisi. EchoMRI nükleer manyetik rezonans relaxometry yağ ve yağsız kütle, ücretsiz su ve toplam su içerik ölçmek için kullanır. Bu süre, genlik ve oluşturulan radyo frekans belirleme ve miktar her doku türünün sağlayan kayma dağıtım farklılıkları ile farklı doku bileşenleri arasındaki kontrast oluşturulması nedeniyle ulaşılabilir olduğunu. Bu teknik, non-invaziv, hızlı, basit, hiçbir anestezi veya radyasyon için ve önemlisi, olumlu kimyasal analiz2karşı doğrulandı olarak avantajlıdır.
Bir anahtar obezite ve ilgili araştırma enerji denge denklemi noktadır. Yağ birikimi tamamen (gıda alımı) enerji enerji (enerji harcaması) dışarı karşı daha karmaşık olmakla birlikte, onlar ölçmek için çok önemli faktörlerdir. Günlük enerji harcaması dört farklı bileşenleri toplamı olduğunu: (1) Bazal enerji harcaması (istirahat metabolizma hızı); (2 enerji harcaması gıda tüketim ısı termikli etkisi nedeniyle; (3) termoregülasyon için gerekli enerji; ve (4) enerji fiziksel faaliyete geçirdi. Enerji harcaması ısı üretir gibi ısı üretim (doğrudan Kalorimetre da bilinir) bir hayvan tarafından ölçme enerji harcaması değerlendirmek için kullanılabilir. Alternatif olarak, ölçüm esinlenerek ve O2 konsantrasyonları süresi ve CO2tüm vücut O2 tüketim ve CO2 üretim, belirlenmesi için sağlayan, dolaylı olarak (dolaylı ölçmek için bir yol olarak kullanılabilir Kalorimetre) üretim ısı ve sonuç olarak enerji harcaması hesaplamak. Gıda alımı artış veya azalma enerji harcaması fareler kilo alımı için yatkınlık ve bu parametreler değişiklikleri gözlemleri muhtemel mekanizmaları belirli modeller obezite eylem yararlı bilgiler sağlayabilir. Bir ilgili metabolik ilgi solunum değişim oranı (RER), substrat/metabolizma ve enerji üretmek için kullanılan geçiyor yakıt (Yani, karbonhidrat veya fat) oranı bir göstergesidir parametresidir. Sonuç olarak, fiziksel aktivite düzeyleri, O2 tüketimi, RER ve enerji harcaması ile birlikte gıda alımı (tüketilen enerji) ölçümü bir organizmanın metabolik profili geniş bir anlayış sağlar. Bu tür veri toplamak için bir yöntem izleme sistemi (istiridye), hangi enerji harcaması ölçmek için dolaylı Kalorimetre yöntemi dayanmaktadır ve fiziksel aktivite düzeyleri (ışın belirleme ek yeteneklere sahiptir kapsamlı laboratuvar hayvanı kullanmaktır sonları) ve gıda alımı ölçekleri ile ölçüm odanın içine dahil.
Bu protokol için fareler ve metabolizma yönlerini ölçmek için bir metabolik hayvan izleme sistemi vücut kompozisyonu değerlendirmek için bir vücut kompozisyon analiz kullanımı bir düz ileri tanımını girin. Konuları ve kısıtlamaları bu teknikler için analiz, yorum ve veri gösterimi önerilen yöntemlerin yanı sıra tartışılacaktır.

<table><tbody><tr><td>4'ü 1 arada sistem</td><td>EchoMRI</td><td>4'ü 1 arada sistem</td><td>Tüm vücut kompozisyonu analizörü</td></tr><tr><td>Kanola yağı test numunesi (MALİYETLER)</td><td>EchoMRI</td><td>Fareye özel (kedi numarası için şirketle iletişime geçin)</td><td></td></tr><tr><td>Hayvan örneği tutucusu&nbsp;</td><td>EkoMRG</td><td>103-E56100R</td><td></td></tr><tr><td>Sınırlayıcı&nbsp;</td><td>EchoMRI</td><td>600-E56100D</td><td></td></tr><tr><td>12 odacıklı sistem</td><td>Columbus Instruments</td><td>Özel yapım</td><td>Metabolik Kafes Sistemi; kontrol programını içerir</td></tr><tr><td>Drierite</td><td>Fisher Scientific</td><td>238988</td><td>CLAMS sarf malzemesi</td></tr><tr><td>Kalibrasyonu gaz tankı</td><td>Hava Sıvısı: Siparişe</td><td>göre karıştırılmış</td><td>Gaz kalibrasyonu (%0,5 CO2, %20,5 O2, denge nitrojen).& nbsp;</td></tr><tr><td>Normal chow diyeti</td><td>Özel Yemler</td><td>Işınlanmış fare ve sıçan diyeti</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek yağlı diyet</td><td>Özel Yemler</td><td>SF04-001</td><td></td></tr><tr><td>Terazi</td><td>Mettler Toledo</td><td>PL202-S</td><td>Fareleri tartmak için terazi</td></tr><tr><td>TexQ Dezenfektan sprey</td><td>TexWipe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen Peroksit temizleme solüsyonu</td><td>TexWipe</td><td>TX684</td><td></td></tr></tbody></table>

vücut kompozisyonu ve metabolik caging analizi yüksek yağ fed farelerde

Body Composition and Metabolic Caging Analysis in High Fat Fed Mice

Vücut kompozisyonu (yağlı veya yağsız kitle) değişiklik, tüm vücut oksijen tüketimi, enerji harcaması ve substrat kullanımı gibi metabolik parametreleri ve gıda alımı ve fiziksel aktivite gibi davranışlar-ebilmek sağlamak önemli bilgiler ile ilgili olarak hastalığın temel mekanizmaları. Vücut kompozisyonu ve metabolizma obezite ve onun sonraki sekel gelişimi için önemi göz önüne alındığında, bu parametreler doğru önlemler önceden klinik araştırma ayarında yapmak gereklidir. Son birkaç on yıl ele teknolojisindeki bu önlemlerin bir non-invaziv ve boyuna moda kemirgen modellerinde türetmek mümkün kılmıştır. Sonuç olarak, genetik manipülasyon (örneğin nakavt veya transgenik fareler, viral knock-down veya genlerin overexpression), deneysel ilaç/bileşik tarama ve diyet yanıtı değerlendirirken metabolizma gittiyseniz yararlı kanıtlamış, davranış ya da fiziksel aktivite müdahaleler. Burada, vücut kompozisyonu ve metabolik parametreleri izleme sistemi farelerde chow beslemeli ve yüksek yağlı diyet beslenen hayvan kullanarak ölçmek için kullanılan iletişim kurallarını açıklar.

Şekil 3 ' te görülen tipik bir değişiklik yüksek yağlı beslenme, üzerine vücut kompozisyonu parametrelerine EchoMRI yolu ile ölçülen gibi sonuçları görüntüleyin. Satır taban çizgisi herhangi bir parametre (Şekil 3A-F) ölçülen hiçbir fark vardı. Ancak, yüksek yağ besleme sadece 1 hafta sonra vücut ağırlığı, yağ kitlesi ve yağ kitle yüzdesi HFD grubunda (Şekil 3A,B,<st...

Bu iletişim kuralı bir vücut kompozisyon analiz ve metabolik hayvan izleme sistemi vücut kompozisyonu ve farelerde metabolik parametreleri tanımlamak için kullanımını açıklar. Yüksek yağlı beslenme tarafından indüklenen bir obezite modeli örnek olarak bu tekniklerin uygulanması için kullanılır.

Vücut kompozisyonu ve metabolik Caging Analizi yüksek yağ Fed farelerde

Alterations to body composition (fat or lean mass), metabolic parameters such as whole-body oxygen consumption, energy expenditure, and substrate ...

Bu prosedürün amacı, farelerden yağ ve yağsız kütle yüzdeleri ve enerji harcaması gibi vücut kompozisyonu ve metabolik ölçümleri toplamaktır. Bu yöntemler, farelerin metabolizması ile ilgili önemli soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir, örneğin, farelerim ne kadar şişman? Ve farelerim neden bu kadar şişman?Bu tekniklerin ana avantajı, canlı bilinçli farelerde tamamlanabilmeleri ve bu nedenle bir çalışma boyunca defalarca tekrarlanabilmeleridir. Fareleri taramadan önce, makine birkaç saat ısındıktan sonra vücut kompozisyonu analiz cihazında bir sistem testi yapın. Kanola Yağı Sistemi Test Örneği veya MALİYETLER adı verilen standartları kullanın.Sistem yazılımını açın, ardından Sistem Testi araç çubuğu düğmesini tıklayın veya klavyede alt+Y tuşlarına basın. Teste başlamadan önce, doğru standardı sistemin portalına yerleştirin. Ardından, gerektiğinde sistem istemlerini izleyerek tanılama testini çalıştırın.Sistem testi geçtikten sonra, bir farenin teşhisi ile devam edin. Şimdi fareyi bir tutucuya koyun. Kırmızı opak bir tutucu en az stresli olanıdır.Tutucuyu 45 derecelik bir açıyla konumlandırın ve fareyi yerleştirin. Ardından tutucuyu dikey olana kadar yavaş ve dikkatli bir şekilde kaldırın. Ardından, farenin hareketini sınırlamak için tutucuya bir sınırlayıcı yerleştirin.Bazı durumlarda, aşırı aktif farelerde, sınırlayıcıyı manuel olarak sabitlemek gerekebilir. Şimdi yazılım içinde, verileri kaydetmek için bir klasör seçin ve bir dosya adı oluşturun. Daha sonra gerekirse, taramanın Birincil Birikimlerinin sayısını artırarak yağ ve yağsız ölçümlerdeki rastgele gürültü miktarını azaltın.Bununla birlikte, genellikle varsayılan ayarlar gerekli hassasiyet seviyesini verecektir. Serbest su ve toplam su için verilere ihtiyaç duyulmuyorsa, uygun geçişi kullanarak su aşamasını kapatın. Bu, taramayı önemli ölçüde hızlandıracaktır.Şimdi Taramayı Başlat'ı seçerek veya klavyede F5 tuşuna basarak taramayı başlatın. Hayvanla ilgili tüm verileri girin ve yaklaşık bir dakika sürecek olan taramayı başlatmak için Tamam veya F5 tuşuna basın. Verileri topladıktan sonra hayvanı kafesine geri koyun.Akrilik tutucuyu ılık sabunlu su gibi kullanımlar arasında daima güvenli bir şekilde temizleyin. Daha sonra, tüm hayvanlar tarandıktan sonra, daha fazla analiz ve harmanlama için verileri dışa aktarın. Başlamadan önce, makinenin iki saatten fazla bir süredir açık olduğundan emin olun.Hayvan İzleme Sisteminde, kontrol programını açın ve pompaları başlatmak için araç menüsünden Oxymax yardımcı programı seçeneğini seçin. Ardından kurutucuyu kontrol edin ve gerekirse taze kuru malzeme ile değiştirin. Ayrıca, amonyak tuzağının ve sodalığın durumunu kontrol edin ve gerekirse değiştirin.Ardından, kalibrasyon gazı deposunu bir regülatör ve hortum kullanarak sisteme bağlayın. Ardından valfi açın ve beş ila 10 PSI gaz çıkışı yapın. Daha sonra yazılımda, Araçlar menüsünden Kalibrasyon'u seçin ve numune ve referans akışlarının dakikada tam olarak 0,4 litre olduğunu kontrol edin.Ardından zirkonya oksijen sensörünün 725 santigrat dereceye kadar ısıtıldığını kontrol edin, bir santigrat derece verin veya alın. Ardından, numune ve referans kurutucu ve hava pompalarının tümünün AÇIK olduğundan emin olun ve kalibrasyon gazının takılı ve ayarlı olduğunu iki kez kontrol edin. Şimdi kalibrasyona devam edin ve gerektiğinde, kabul edilebilir sınırlar içinde bir oksijen oranı değeri elde etmek için zirkonya oksijen sensörünün önündeki OFFSET kontrolünü hafifçe ayarlayın.Oksijen ve karbondioksit sensörlerini başarılı bir şekilde kalibre ettikten sonra, gaz standardını ayırın ve yaklaşık 20.92 olması gereken atmosferik gazın oksijen seviyelerini okuyun. Yiyecek alımını ölçüyorsanız, toz fare diyeti kullanmayı düşünün. Ardından yaylı platforma basarak yiyecek hunisini yükleyin.Sonra su şişelerini doldurun ve yiyecekleri düzenleyin. Şimdi odaları monte etmeye devam etmeden önce farelerin sağlığını tartın ve inceleyin. Ardından, yiyecek hunisini terazinin üzerine yerleştirin.Üzerine, odayı delikli platformla yerleştirin. Ardından fareyi dikkatlice hazneye yerleştirin ve ön ve arka klipsleri kullanarak bir kapak takın. Ardından kurulumu tamamlamak için su şişesine sabitleyin.Şimdi bir sonraki fareyi ayarlayın ve tüm fareler hazır olduktan sonra hazne kapaklarını, fareleri ve suyu iki kez kontrol edin. Denemeyi çalıştırmak için menüden Deneysel Dosya Aç'ı seçin. Ardından uygun şablonu seçin.Ardından, Kurulum altında, kaydedilmesi gereken deneyin parametrelerini tanımlayın ve kullanımda olmayan odaların seçimini kaldırın. Ardından, denemenin kaydedileceği konumu seçin. Yiyecek alımı ölçülecekse, tartıların darasını alın.Ardından, Deneme menüsünde Çalıştır'ı seçerek veri yakalamaya başlayın. İlk 24 saat bir akreditasyon aşaması olarak kullanılabilir ve sonraki 24 artı saat veri analizi için kullanılabilir. Günde en az iki kez hayvanları ve veri toplamayı kontrol edin.Her birinin yiyecek ve suya erişimi olduğundan emin olun ve delikli zeminin kazılması gibi sıkıntı belirtileri arayın. Yazılımda gerçek zamanlı veri toplamayı kontrol edin. Oksijen tüketimine, RER'ye ve enerji harcamasına bakmak için Metabolik sekmesine gidin.O2IN, 20.90 ile 20.94 arasında, CO2IN yaklaşık 0.04 okumalı, RER 0.7 ile bir arasında okumalı, akış hızı dakikada sabit 0.5 ila 0.6 litre olmalıdır. Etkinlik sekmesi altında, ışın kopmalarıyla ilgili gerçek zamanlı veriler görüntülenir. Besleme sekmeleri altında, gıda tüketimine ilişkin gerçek zamanlı veriler görüntülenir.Denemeyi tamamlamak için Deneme menüsünden Durdur'u seçin ve sonuçları analiz için CSV dosyaları olarak dışa aktarın. Daha sonra farelerin sağlığını kontrol edin, tartın ve ardından onları ev kafeslerine geri koyun. Aşağıdaki grafiklerde, siyah kareler yüksek yağlı diyetle beslenen fareleri temsil eder ve siyah daireler standart chow diyetiyle beslenen fareleri temsil eder.Yüksek yağlı beslenmenin neden olduğu vücut kompozisyonu parametrelerindeki değişiklikler, tarif edilen prosedürler kullanılarak EchoMRI ile ölçüldü. Yüksek yağlı diyette bir hafta sonra, üç hafta artan önemli bir kilo alımı oldu. Ağırlık değişimi açıkça yağ kütlesindeki bir değişikliğe bağlanabilir.Yağsız kütle, serbest su içeriği veya toplam su içeriğindeki bir değişiklikten kaynaklanmıyordu. Aşağıdaki çubuk grafiklerde, beyaz sütunlar yemle beslenen fareleri, siyah sütunlar ise yüksek yağla beslenen fareleri temsil eder. V02 ölçümleri, hayvan kütlesine normalize edildiğinde, üç haftalık süreden sonra herhangi bir değişiklik göstermedi.Benzer şekilde, hayvan kütlesine normalize edildiğinde enerji harcaması ölçümleri hiçbir değişiklik göstermedi. Işın kırılmaları ile ölçülen fiziksel aktivite, günün saatine göre değişmekle birlikte, her iki grup için de aynıydı. Vücut kütlesine normalize edildiğinde gıda alımı farklı değildi.Bu miktar, yüksek yağlı diyetle önemli ölçüde daha fazla enerji alımıdır. Bir kez kurulduktan sonra, non-invaziv olduğu için, vücut kompozisyonu analizi gerekirse günlük olarak yapılabilir. Uzun süreli hayvan metabolik izleme seansları, sosyal izolasyon nedeniyle fareler için daha stresli olarak kabul edilebilirken, bu analizler aynı zamanda bir dizi içinde birçok kez gerçekleştirilebilir. Bu tekniklerin etkileri, genetik manipülasyonlar veya ilaç tedavileri ile ilgili olarak farelerin dikkatli metabolik fenotiplemesi ile obezite ve tip iki diyabet gibi metabolik bozukluklar için terapötik hedeflerin belirlenmesine kadar uzanır.Sonuç olarak, bu yöntemler sadece obezite için değil, aynı zamanda sarkopeni, kanser kaşeksisi, kas distrofisi veya geniş distrofisi gibi diğer durumlar için de içgörü sağlayabilir.

body-composition-and-metabolic-caging-analysis-in-high-fat-fed-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz eğitim için sağlam biyokimyasal ve mikroskobik yöntemler...

Fat Kütle Biyokimyasal ve Yüksek Verimli Mikroskobik Değerlendirme<em&gt; Caenorhabditis Elegans</em

Kolon-26 (C26) karsinomu taşıyan fareler, kanser kaşeksisinin klasik bir modelini temsil eder. Progresif kas kaybı, tümör büyümesi, kasa özgü ubikitin ligazlarının aşırı ekspresyonu ve kas kesit alanında azalma ile ilişkili olarak ortaya çıkar. Yağ kaybı da gözlenir. Kaşeksi, artan israf şiddeti ile zamana bağlı bir şekilde incelenir.

Kolon-26 Karsinoma Tümör taşıyan Kanser Kaşeksi Araştırmaları Modeli Olarak Fare

Burada, hepatik steatozun in vivo ve in vitro modellerini oluşturmak ve steatotik fenotipleri ve ilgili fizyolojik parametreleri analiz etmek için optimize edilmiş yöntemler açıklanmaktadır.

Optimize Analizi<em&gt; İn Vivo</em&gt; ve<em&gt; İn Vitro</em&gt; Karaciğer Steatoz

Tek tek tekerlekliyse çalışan sınırlı erişim iken verilen gıda muhafaza fare gıda tüketim indirimleri geliştirmek ve çalışan direksiyonda aktivite artışı. Bu deneysel olguya etkinlik tabanlı anoreksiya denir. Bu paradigma Nörobiyoloji ve Anoreksiya Nervoza yönlerini temel davranışları eğitim için deneysel bir araçtır.

Etkinlik tabanlı anoreksiya farelerde değerlendirilmesi

Bu makalede, yabani tip ve ob/ob farelerde obezite ve bozulmuş glikoz metabolizmasına karşı korumak ve tedavi etmek için izokalorik 2:1 aralıklı oruç için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır.

Farelerde Izokalorik 2:1 Aralıklı Orucun Metabolik Etkilerinin Değerlendirilmesi

Bu protokol, kemirgenlerde aşırı yeme ve obeziteyi modellemek için son derece lezzetli, batı tarzı bir kafeterya diyetinin kullanımını açıklamaktadır. Burada, gıda seçimi, hazırlanması ve ölçümü nün ayrıntılı bir anahatını sağlamakta ve sağlam ve tekrarlanabilir bir fenotip oluşturmaya yardımcı olan metodolojik faktörleri açıklıyoruz.

Kemirgenlerde Diyetkaynaklı Obezitemodellemeiçin Güvenilir Bir Yöntem olarak Lezzetli Batı tarzı Kafeterya Diyet

Bu makale, farelerde lipid metabolizmasını değerlendirmek için üç kolay ve erişilebilir test sağlar.

Farelerde Tüm Vücut Lipid Taşıma Kapasitesinin Değerlendirilmesi

Bu makalede, obez farelerde termojenik adipositlerin bazal metabolizma hızını ve oksidatif kapasitesini ölçmek için bir protokol açıklanmaktadır.

Bazal Enerji Harcamasının Ve Termojenik Adipositlerin Obez Farelerde Enerji Harcama Kapasitesinin Belirlenmesi

Bu video post-mortem gözünde, insan vitreus vücudunun çeşitli yarı saydam yapıların ayrılması ve diseksiyon için etkili bir teknik gösterir.

Proteomik Analizi İnsan Vitreus Gövde Elemanları diseksiyonu

Hiperinsülinemik öglisemik kelepçe, ya da insülin kelepçe, insülin etkisini değerlendirmek için altın...

Bilinçli Mesnetlenmemiş Fare hiperinsülinemik öglisemik Kelepçeleri

Öğrenin, farelerde vücut kompozisyonu ve metabolik parametreleri analiz etme yöntemini. Bu teknik, obezite modellerinde enerji harcaması ve yağ dağılımını incelemek için kullanılır.

Vücut kompozisyonu ve metabolik Caging Analizi yüksek yağ Fed farelerde

Daha fazla video keşfet