Vücut kompozisyonu ve metabolik Caging Analizi yüksek yağ Fed farelerde

Bu prosedürün amacı, farelerden yağ ve yağsız kütle yüzdeleri ve enerji harcaması gibi vücut kompozisyonu ve metabolik ölçümleri toplamaktır. Bu yöntemler, farelerin metabolizması ile ilgili önemli soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir, örneğin, farelerim ne kadar şişman? Ve farelerim neden bu kadar şişman?

Bu tekniklerin ana avantajı, canlı bilinçli farelerde tamamlanabilmeleri ve bu nedenle bir çalışma boyunca defalarca tekrarlanabilmeleridir. Fareleri taramadan önce, makine birkaç saat ısındıktan sonra vücut kompozisyonu analiz cihazında bir sistem testi yapın. Kanola Yağı Sistemi Test Örneği veya MALİYETLER adı verilen standartları kullanın.

Sistem yazılımını açın, ardından Sistem Testi araç çubuğu düğmesini tıklayın veya klavyede alt+Y tuşlarına basın. Teste başlamadan önce, doğru standardı sistemin portalına yerleştirin. Ardından, gerektiğinde sistem istemlerini izleyerek tanılama testini çalıştırın.

Sistem testi geçtikten sonra, bir farenin teşhisi ile devam edin. Şimdi fareyi bir tutucuya koyun. Kırmızı opak bir tutucu en az stresli olanıdır.

Tutucuyu 45 derecelik bir açıyla konumlandırın ve fareyi yerleştirin. Ardından tutucuyu dikey olana kadar yavaş ve dikkatli bir şekilde kaldırın. Ardından, farenin hareketini sınırlamak için tutucuya bir sınırlayıcı yerleştirin.

Bazı durumlarda, aşırı aktif farelerde, sınırlayıcıyı manuel olarak sabitlemek gerekebilir. Şimdi yazılım içinde, verileri kaydetmek için bir klasör seçin ve bir dosya adı oluşturun. Daha sonra gerekirse, taramanın Birincil Birikimlerinin sayısını artırarak yağ ve yağsız ölçümlerdeki rastgele gürültü miktarını azaltın.

Bununla birlikte, genellikle varsayılan ayarlar gerekli hassasiyet seviyesini verecektir. Serbest su ve toplam su için verilere ihtiyaç duyulmuyorsa, uygun geçişi kullanarak su aşamasını kapatın. Bu, taramayı önemli ölçüde hızlandıracaktır.

Şimdi Taramayı Başlat'ı seçerek veya klavyede F5 tuşuna basarak taramayı başlatın. Hayvanla ilgili tüm verileri girin ve yaklaşık bir dakika sürecek olan taramayı başlatmak için Tamam veya F5 tuşuna basın. Verileri topladıktan sonra hayvanı kafesine geri koyun.

Akrilik tutucuyu ılık sabunlu su gibi kullanımlar arasında daima güvenli bir şekilde temizleyin. Daha sonra, tüm hayvanlar tarandıktan sonra, daha fazla analiz ve harmanlama için verileri dışa aktarın. Başlamadan önce, makinenin iki saatten fazla bir süredir açık olduğundan emin olun.

Hayvan İzleme Sisteminde, kontrol programını açın ve pompaları başlatmak için araç menüsünden Oxymax yardımcı programı seçeneğini seçin. Ardından kurutucuyu kontrol edin ve gerekirse taze kuru malzeme ile değiştirin. Ayrıca, amonyak tuzağının ve sodalığın durumunu kontrol edin ve gerekirse değiştirin.

Ardından, kalibrasyon gazı deposunu bir regülatör ve hortum kullanarak sisteme bağlayın. Ardından valfi açın ve beş ila 10 PSI gaz çıkışı yapın. Daha sonra yazılımda, Araçlar menüsünden Kalibrasyon'u seçin ve numune ve referans akışlarının dakikada tam olarak 0,4 litre olduğunu kontrol edin.

Ardından zirkonya oksijen sensörünün 725 santigrat dereceye kadar ısıtıldığını kontrol edin, bir santigrat derece verin veya alın. Ardından, numune ve referans kurutucu ve hava pompalarının tümünün AÇIK olduğundan emin olun ve kalibrasyon gazının takılı ve ayarlı olduğunu iki kez kontrol edin. Şimdi kalibrasyona devam edin ve gerektiğinde, kabul edilebilir sınırlar içinde bir oksijen oranı değeri elde etmek için zirkonya oksijen sensörünün önündeki OFFSET kontrolünü hafifçe ayarlayın.

Oksijen ve karbondioksit sensörlerini başarılı bir şekilde kalibre ettikten sonra, gaz standardını ayırın ve yaklaşık 20.92 olması gereken atmosferik gazın oksijen seviyelerini okuyun. Yiyecek alımını ölçüyorsanız, toz fare diyeti kullanmayı düşünün. Ardından yaylı platforma basarak yiyecek hunisini yükleyin.

Sonra su şişelerini doldurun ve yiyecekleri düzenleyin. Şimdi odaları monte etmeye devam etmeden önce farelerin sağlığını tartın ve inceleyin. Ardından, yiyecek hunisini terazinin üzerine yerleştirin.

Üzerine, odayı delikli platformla yerleştirin. Ardından fareyi dikkatlice hazneye yerleştirin ve ön ve arka klipsleri kullanarak bir kapak takın. Ardından kurulumu tamamlamak için su şişesine sabitleyin.

Şimdi bir sonraki fareyi ayarlayın ve tüm fareler hazır olduktan sonra hazne kapaklarını, fareleri ve suyu iki kez kontrol edin. Denemeyi çalıştırmak için menüden Deneysel Dosya Aç'ı seçin. Ardından uygun şablonu seçin.

Ardından, Kurulum altında, kaydedilmesi gereken deneyin parametrelerini tanımlayın ve kullanımda olmayan odaların seçimini kaldırın. Ardından, denemenin kaydedileceği konumu seçin. Yiyecek alımı ölçülecekse, tartıların darasını alın.

Ardından, Deneme menüsünde Çalıştır'ı seçerek veri yakalamaya başlayın. İlk 24 saat bir akreditasyon aşaması olarak kullanılabilir ve sonraki 24 artı saat veri analizi için kullanılabilir. Günde en az iki kez hayvanları ve veri toplamayı kontrol edin.

Her birinin yiyecek ve suya erişimi olduğundan emin olun ve delikli zeminin kazılması gibi sıkıntı belirtileri arayın. Yazılımda gerçek zamanlı veri toplamayı kontrol edin. Oksijen tüketimine, RER'ye ve enerji harcamasına bakmak için Metabolik sekmesine gidin.

O2IN, 20.90 ile 20.94 arasında, CO2IN yaklaşık 0.04 okumalı, RER 0.7 ile bir arasında okumalı, akış hızı dakikada sabit 0.5 ila 0.6 litre olmalıdır. Etkinlik sekmesi altında, ışın kopmalarıyla ilgili gerçek zamanlı veriler görüntülenir. Besleme sekmeleri altında, gıda tüketimine ilişkin gerçek zamanlı veriler görüntülenir.

Denemeyi tamamlamak için Deneme menüsünden Durdur'u seçin ve sonuçları analiz için CSV dosyaları olarak dışa aktarın. Daha sonra farelerin sağlığını kontrol edin, tartın ve ardından onları ev kafeslerine geri koyun. Aşağıdaki grafiklerde, siyah kareler yüksek yağlı diyetle beslenen fareleri temsil eder ve siyah daireler standart chow diyetiyle beslenen fareleri temsil eder.

Yüksek yağlı beslenmenin neden olduğu vücut kompozisyonu parametrelerindeki değişiklikler, tarif edilen prosedürler kullanılarak EchoMRI ile ölçüldü. Yüksek yağlı diyette bir hafta sonra, üç hafta artan önemli bir kilo alımı oldu. Ağırlık değişimi açıkça yağ kütlesindeki bir değişikliğe bağlanabilir.

Yağsız kütle, serbest su içeriği veya toplam su içeriğindeki bir değişiklikten kaynaklanmıyordu. Aşağıdaki çubuk grafiklerde, beyaz sütunlar yemle beslenen fareleri, siyah sütunlar ise yüksek yağla beslenen fareleri temsil eder. V02 ölçümleri, hayvan kütlesine normalize edildiğinde, üç haftalık süreden sonra herhangi bir değişiklik göstermedi.

Benzer şekilde, hayvan kütlesine normalize edildiğinde enerji harcaması ölçümleri hiçbir değişiklik göstermedi. Işın kırılmaları ile ölçülen fiziksel aktivite, günün saatine göre değişmekle birlikte, her iki grup için de aynıydı. Vücut kütlesine normalize edildiğinde gıda alımı farklı değildi.

Bu miktar, yüksek yağlı diyetle önemli ölçüde daha fazla enerji alımıdır. Bir kez kurulduktan sonra, non-invaziv olduğu için, vücut kompozisyonu analizi gerekirse günlük olarak yapılabilir. Uzun süreli hayvan metabolik izleme seansları, sosyal izolasyon nedeniyle fareler için daha stresli olarak kabul edilebilirken, bu analizler aynı zamanda bir dizi içinde birçok kez gerçekleştirilebilir. Bu tekniklerin etkileri, genetik manipülasyonlar veya ilaç tedavileri ile ilgili olarak farelerin dikkatli metabolik fenotiplemesi ile obezite ve tip iki diyabet gibi metabolik bozukluklar için terapötik hedeflerin belirlenmesine kadar uzanır.

Sonuç olarak, bu yöntemler sadece obezite için değil, aynı zamanda sarkopeni, kanser kaşeksisi, kas distrofisi veya geniş distrofisi gibi diğer durumlar için de içgörü sağlayabilir.