Name: Kısmi Lobular Hepatectomy: Morfolojik karaciğer rejenerasyonu için cerrahi bir Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Öğrenin kısmi lobuler hepatektomi tekniğini yenidoğan farelerde morfolojik karaciğer rejenerasyonunu incelemek için. Bu minimal invaziv yöntem kök hücre biyolojisi ve rejeneratif tıp alanlarında araştırmalara olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

S. Chu H & E ve histoloji gerçekleştirmek için teşekkür ederiz; ve C. Wang ve A. McCarty yararlı tartışmalar için. Araştırma Virginia ve D. K. Ludwig Fonu kanser araştırma için fon aracılığıyla destek verdi; Ulusal Kalp, akciğer ve kan Enstitüsü (R01HL058770 ve U01HL099999); ve California Institute I.W. yr rejeneratif tıp (RC1 00354) hibe için desteklenen insan sınır bilim Program kariyer geliştirme Ödülü ' (CDA00017), Alman Araştırma Vakfı (RI 2787/1), Siebel kök hücre Enstitüsü tarafından ve Thomas ve Stacey Siebel Foundation (1119368-104-GHBJI). J.M.T. Yeni Amerikalılar için NIH (T32GM007365), Ulusal Araştırma hizmet Ödülü (1F30DK108561), Paul ve Daisy Soros bursu tarafından desteklenmiştir.

Tüm hayvan deneyleri sıkı uygun olarak ileri değerlendirme ve Akreditasyon, laboratuvar hayvan bakımı International (AAALAC) ve Stanford Üniversitesi'nin yönetim paneli üzerinde laboratuvar hayvanı Derneği tarafından belirlenen kuralları ile yapılmıştır Bakım (APLAC), (protokol numarası #10266) ve Amerika Birleşik Devletleri'nde veya Avrupa hayvan refah Yasası, yönergesi 2010/63/EU. Protokol devlet Bavyera, Almanya, hayvan deneyleri Etik Komitesi tarafından onaylanmış ve Hayır izni aldı: 55.2-1-54-2532-150-2015.
1. hayvan hazırlık
<ol><li>Bir Isıtma yastık üzerinde uygun yatak takımları ile boş bir kafes hazırlayın.</li>
	<li>Eldiven hayvanlarla dokunmadan önce annenin yatak eldiven üzerine sür.</li>
	<li>Tüm pups onların anne ve yer boş kafesin içine çıkarın. Annenin yatak bazılarını kaldırın ve yavrular ile boş kafes yerleştirebilirsiniz.</li>
	<li>Cerrahi alan uzak ayrı, temiz, Kuru bir kafeste annesi yerleştirin.</li>
	<li>Cerrahi alan hazırlık önce Don yeni, temiz steril eldiven.</li>
</ol>2. cerrahi alan hazırlık
<ol><li>10 mL pipet kullanarak fosfat tamponlu tuz (PBS) 10 mL 10 cm Petri kabına için ekleyin.</li>
	<li>2 mL betadin veya eşdeğer bir anti-septik çözeltisi içinde 10 cm Petri kabına pipet.</li>
	<li>Parçalanmış bir kapsam cerrahi alana. Kapsam lamba dissekan açmak ve ışık için cerrahın konfor düzeyini ayarlamak. Bir yavru diseksiyon kapsam lamba altında cerrahi alanındaki yerleştirilebilir. Yeterli ışık gölgeler yavru fok ventral yüzeyinde yokluğunda tarafından onaylanabilir.</li>
	<li>İsoflurane anestezi odası hazırlamak ( Tablo malzemelerigörmek) burun konisi ile. Odası idrar veya dışkı kanıtı temizlenmelidir. Burun konisi ve ilişkili boru cerrahi alanındaki diseksiyon kapsam altına yerleştirin. Oksijen ve burun konisi için yalnızca isoflurane akışını başka yöne çek.</li>
	<li>Yaklaşık olarak 37 ° C'de ayarla bir ısıtma yastığı ile ameliyat sonrası kurtarma alan hazırlamak Ameliyat sonrası kurtarma gazlı bez ısıtma yastığını üzerine yerleştirilen 4 adet oluşmalıdır. Mümkünse, gazlı bez yastıkları annenin yatak, dışkı ve idrar anne kokusu korumak için RUB'dir. Not: Bu sıcaklık kontrol etmek zor yapar gibi a ısı lamba kullanmak anlayacaksın. Ateşi yükselen yenidoğan fareler ölüme neden.</li>
	<li>Hazırlamak ve bir otoklav ile tüm cerrahi aletler sterilize. Araçlarda: mikro diseksiyon makası, mikro-anatomi forseps, gazlı bez, hemostat ve herhangi bir 6-0 monofilament absorbe olmayan dikiş. Cerrahi aletler resterilzed herhangi bir cam boncuk ısıtıcı ile olabilir.</li>
</ol>3. kısmi Lobular Hepatectomy
<ol><li>Yavru fok onun geri ve yavaşça onun ayak ve ellerde yer çekimi üzerinde burun konisi yerleştirerek anestezi. Yavru köpek-meli var olmak almak %5 isoflurane oksijen.<ol>
<li>Bir ayak çimdik testi tarafından doğrulanabilir 5 dk ya kadar yeterli anestezi, oturup yavru izin.</li>
		<li>5 mg/kg carprofen subkutan kesi önce enjekte. Not: 30 dk Poorer çıktıları üzerinde 30 dk için genel anestezi altında olan yenidoğanlarda gözlenen daha tüm ameliyat uzun sürmeyecektir. Cerrahi kapsamlı alan hazırlık ile uzunluğu ve ıslatma kapatma önce deri dikiş indüklenen deri gözyaşı en aza indirmek için en aza indirmek önlemler alın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yavaşça posterior abdominal duvardan betadin ile ıslak bir küçük gazlı bez yastık ile temizleyin. 1 dakika kurumaya betadin izin.</li>
	<li>Göğüs kafesi altındaki sol orta klavikular 0.5 cm kesi mikro diseksiyon makası ve forseps ile olun. Yavaşça deri forseps kullanarak ayırın ve ikinci bir daha derin kesik periton boşluğuna (bkz: Şekil 1 c, sol ve merkez) yapmak</li>
	<li>Yavaşça sol lob dışında peritoneal kavite apeks zorlamak için sırt, künt biter mikro diseksiyon makası ve forseps kullanarak karın her iki taraftan lateral basınç uygulayın. Sol lob sol apeks-meli var olmak kolayca görüntülenmeyecektir (Şekil 1 c, sağ).</li>
	<li>
Tepe, kesmek ve kaldırılacak doku miktarını tartın.
	<ol>
<li>Mikro-diseksiyon makası kullanarak, yavaşça sol lob apeks dokudan istenilen miktarda kesmek.</li>
		<li>PBS ile dolu bir 1.5 mL tüp takma doku yerleştirin. Bir analitik denge kullanarak uzvunu doku tartmak ( Tablo malzemelerigörmek). Not: bir parça gazlı bez ya da kağıt üzerinde denge yer ve o Dara. O zaman uzvunu doku gazlı bez veya kağıt üzerine yerleştirin ve kütlesi ölçün.</li>
		<li>% 2 paraformaldehyde 1 h için oda sıcaklığında uzvunu alanında ve yer üzerinde kuru buz dondurulmuş bölüm analizi için en uygun kesme sıcaklığında (OCT) bileşik düzeltmek. Herhangi bir standart cryostat kullanma kesme 7-10 µm bölümlerine göre dondurulmuş bölümler analiz.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gazlı bez rulo bir parça kullanılarak, yavaşça sol lob periton boşluğuna değiştirin. Gazlı bez boşluğunda kanama durur kadar bırakın.</li>
	<li>Gazlı bez çıkarın ve cerrahi sitesi ve çevresini PBS ile ıslatılmış gazlı bez ile ıslak.</li>
	<li>6-0 monofilament ile cerrahi sitesi, bir çalışan dikiş ile absorbe olmayan dikiş yakın. Karın zarını ve cilt ayrı olarak kapatılması gerekir. Not: Hafifçe PBS ile ıslatılmış gazlı bez ile deri ıslatma indüklenen dikiş gözyaşları en aza indirmek.</li>
	<li>Yavaşça ama iyice yavru fok PBS ile ıslatılmış gazlı bez ile temizleyin ve hiçbir kan veya betadin kalır emin olun. Batırılmış gazlı bez pad rulo ve herhangi bir kan veya betadin temiz yara işareti üzerine hafifçe fırçalayın. Not: Bu özellikle yetersiz temizlenir Eğer anne belgili tanımlık pups parçaladık kadar önemli olduğunu.</li>
	<li>Yavru fok burun konisi çıkarın ve annenin dışkı ve idrar maruz gazlı bez yastıkları içerir kurtarma alanında yerleştirin. Bir kez yavru fok kurtarır, boş kafeste yavru anne yatak ile değiştirin. Not: a ısı lamba kullanmayın. A ısı lamba kullanımını kardiyolojik aşırı ısınmasına neden olabilir.</li>
	<li>Yavrular için istediğiniz sayıyı yordamı yineleyin. Tüm pups kullanılabilmesine rağmen genellikle birkaç pups ile birlikte çalışan pups değiştirilmesi için ameliyat değil bırakmak tavsiye edilir.</li>
	<li>Tüm pups aynı anda annesinin yatak anne kafeste değiştirin.</li>
</ol>4. kurtarma ve analiz
<ol><li>
Fareler üzerinde her gün takip etmek.
	<ol>
<li>Yara kapalı kalır denetleyin ve herhangi bir ölü yavru varsa kaldırın.</li>
		<li>Yara yeniden açar, cerrahi sitesi ve kurtarma alanında daha önce açıklanan ve tekrar adımları 3,8-3.12 hazırlamanız.</li>
		<li>5 mg/kg carpofen subkutan 24 ve 48 h aşağıdaki yordamı enjekte.</li>
		<li>Pups 56 gün veya daha uzun süre izleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hayvanlar ameliyat sonrası gün istenilen miktarda sonra karbondioksit (CO2) maruz kalma ve servikal çıkığı tarafından ötenazi.<ol>
<li>İndüksiyon fareler koyun / ötenazi odası ve fareler kadar CO2 açmak stop nefes.</li>
		<li>Ötenazi servikal çıkığı tarafından emin olun. Ön-parmak ve başparmak kullanarak fare dorsal boynunda basın ve diğer el kullanarak, kuyruk üzerinde açılan menüden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Tüm karaciğer en bloc kaldırmak ve tartmak.
	<ol>
<li>Dikkatle her lob ayırmak ve ayrı ayrı tartmak. Not: karaciğer tarafından diyafram ve hepatik ve portal damarları dikkatli diseksiyon kaldırın. Loblar birbirinden dikkatle her lob proksimal onun eki, anatomi tarafından ayırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Rejenerasyon ölçüde uzvunu sol lobda kitle bütün karaciğer ayine karşılaştırarak belirle. Zarar görmemiş bir sol lob bütün karaciğer yaklaşık % 30'dur.</li>
</ol>

<ol><li>Michalopoulos, G. K., DeFrances, M. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2701258/">Liver Regeneration.</a> Science. 276 (80), 60-66 (1997).</li>
<li>Ponfick, V. A. Surgery of the Liver. Lancet. 1, 881(1890).</li>
<li>Higgins, G., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="https://www.scienceopen.com/document?vid=57858414-5eff-4c8d-a028-ccb3fc1c44a6">Experimental Pathology of the liver. Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch. Pathol. 12, 186-202 (1931).</li>
<li>Miyaoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertrophy+and+unconventional+cell+division+of+hepatocytes+underlie+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Hypertrophy and unconventional cell division of hepatocytes underlie liver regeneration.</a> Curr. Biol. 22, 1166-1175 (2012).</li>
<li>Miyaoka, Y., Miyajima, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+divide+or+not+to+divide%3A+revisiting+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Div%22%5BJournal%5D)">To divide or not to divide: revisiting liver regeneration.</a> Cell Div. 8, 8(2013).</li>
<li>Tsai, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localized+hepatic+lobular+regeneration+by+central-vein-associated+lineage-restricted+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Localized hepatic lobular regeneration by central-vein-associated lineage-restricted progenitors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 114, 3654-3659 (2017).</li>
<li>Porrello, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+regenerative+potential+of+the+neonatal+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart.</a> Science. 331, 1078-1080 (2011).</li>
<li>Shyh-Chang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lin28+enhances+tissue+repair+by+reprogramming+cellular+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Lin28 enhances tissue repair by reprogramming cellular metabolism.</a> Cell. 155, 778-792 (2013).</li>
<li>Yin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+of+tumor+necrosis+factor+alpha+in+alcohol-induced+liver+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Essential role of tumor necrosis factor alpha in alcohol-induced liver injury in mice.</a> Gastroenterology. 117, 942-952 (1999).</li>
<li>Gao, B., Bataller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcoholic+liver+disease%3A+pathogenesis+and+new+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Alcoholic liver disease: pathogenesis and new therapeutic targets.</a> Gastroenterology. 141, 1572-1585 (2011).</li>
<li>Uesugi, T., Froh, M., Arteel, G. E., Bradford, B. U., Thurman, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+4+is+involved+in+the+mechanism+of+early+alcohol-induced+liver+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 4 is involved in the mechanism of early alcohol-induced liver injury in mice.</a> Hepatology. 34, 101-108 (2001).</li>
<li>Coen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+integrated+metabonomic+investigation+of+acetaminophen+toxicity+in+the+mouse+using+NMR+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Res.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">An integrated metabonomic investigation of acetaminophen toxicity in the mouse using NMR spectroscopy.</a> Chem. Res. Toxicol. 16, 295-303 (2003).</li>
<li>Oz, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+antioxidants+protect+against+acetaminophen+hepatotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biochem.+Mol.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Diverse antioxidants protect against acetaminophen hepatotoxicity.</a> J. Biochem. Mol. Toxicol. 18, 361-368 (2004).</li>
<li>Ruepp, S. U., Tonge, R. P., Shaw, J., Wallis, N., Pognan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomics+and+proteomics+analysis+of+acetaminophen+toxicity+in+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Genomics and proteomics analysis of acetaminophen toxicity in mouse liver.</a> Toxicol. Sci. 65, 135-150 (2002).</li>
<li>Gunawan, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((c-Jun+N-terminal+kinase+plays+a+major+role+in+murine+acetaminophen+hepatotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">c-Jun N-terminal kinase plays a major role in murine acetaminophen hepatotoxicity.</a> Gastroenterology. 131, 165-178 (2006).</li>
<li>Manibusan, M. K., Odin, M., Eastmond, D. a <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postulated+carbon+tetrachloride+mode+of+action%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Environ.+Sci.+Health.+C.+Environ.+Carcinog.+Ecotoxicol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Postulated carbon tetrachloride mode of action: a review.</a> J. Environ. Sci. Health. C. Environ. Carcinog. Ecotoxicol. Rev. 25, 185-209 (2007).</li>
<li>Recknagel, R. O., Glende, E. a, Dolak, J. a, Waller, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+carbon+tetrachloride+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of carbon tetrachloride toxicity.</a> Pharmacol. Ther. 43, 139-154 (1989).</li>
<li>Sell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+and+plasticity+of+hepatocyte+lineage+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity and plasticity of hepatocyte lineage cells.</a> Hepatology. 33, 738-750 (2001).</li>
<li>Malato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+tracing+of+mature+hepatocytes+in+mouse+liver+homeostasis+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Fate tracing of mature hepatocytes in mouse liver homeostasis and regeneration.</a> J. Clin. Invest. 121, 4850-4860 (2011).</li>
<li>Greene, A. K., Puder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+hepatectomy+in+the+mouse%3A+technique+and+perioperative+management%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Surg%22%5BJournal%5D)">Partial hepatectomy in the mouse: technique and perioperative management.</a> J. Invest. Surg. 16, 99-102 (2003).</li>
<li>Kan, N. G., Junghans, D., Belmonte, J. C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensatory+growth+mechanisms+regulated+by+BMP+and+FGF+signaling+mediate+liver+regeneration+in+zebrafish+after+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Compensatory growth mechanisms regulated by BMP and FGF signaling mediate liver regeneration in zebrafish after partial hepatectomy.</a> FASEB J. 23, 3516-3525 (2009).</li>
<li>Red-Horse, K., Ueno, H., Weissman, I. L., Krasnow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+arteries+form+by+developmental+reprogramming+of+venous+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Coronary arteries form by developmental reprogramming of venous cells.</a> Nature. 464, 549-553 (2010).</li>
<li>Muzumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Global+Double-Fluorescent+Cre+Reporter+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">A Global Double-Fluorescent Cre Reporter Mouse.</a> Genesis. 605, 593-605 (2007).</li>
<li>Poley, W. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.3758/BF03199187">Emotionality related to maternal cannibalism in BALB and C57BL mice.</a> Anim. Learn. Behav. 2, 241-244 (1974).</li>
<li>Smotherman, W. P., Bell, R. W., Starzec, J., Elias, J., Zachman, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+responses+to+infant+vocalizations+and+olfactory+cues+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Biol%22%5BJournal%5D)">Maternal responses to infant vocalizations and olfactory cues in rats and mice.</a> Behav. Biol. 12, 55-66 (1974).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir açıklamalar var.

Akut karaciğer hasarı geleneksel kimyasal (asetaminofen, etanol, karbon tetraklorür) ya da cerrahi modelleri (% 70 kısmi hepatectomy) kullanarak çalışılmıştır. Rejeneratif yanıt % 70 kısmi hepatectomy sonra küresel hepatosit hipertrofisi ve hücre bölünmesi4,5birden fazla mermi dahil etmek ile karakterizedir. Büyük damarları rejenerasyon için anormal bir ortam bırakarak bakmaksızın gerekir gibi kanama durdurmak için ancak, bu model sınırlıdır. Birçok çalışma bu ne...

Bir organ yeniden veya form ve fonksiyon, geri yüklemek için yetenek çoğunlukla evrimsel zamanla kaybolur düşünülmektedir. Yetişkin memeli karaciğer akut kimyasal veya fiziksel yaralanma sonra yeniden üretim potansiyelini hipertrofisi dalgaları ve hücre bölünmesi, işlevsel bir ama kaynaklanan kaç tur sonuçlanan tüm kalan tetkikine seferberlik dahil tespit edilmiştir mimari farklı organ1,2,3,4,5. Son zamanlarda, yaralanma yaşam6,7,8ayının ilk haftası içinde rejeneratif cevaben yenidoğan memeli organların karakterize etmek çalışmalar başladı. Bu çalışmalar yenidoğan geliştirme sırasında yaralı zaman bazı memeli organlar yerine telafi edici büyüme veya fibrozis7,8morfolojik yenilenme ile yanıt göstermiştir.
Son yıllarda yapılan çalışmalarda genel yapısı ve işlevi rejenerasyon erken neonatal dönem6,7,8sırasında oluştuğunu göstermiştir. Kimyasal yaralanma veya yönetim etanol9,10,11, asetaminofen12,13,14,15 kurulan karaciğer hasarı protokolleri içerir , karbon tetraklorür16,17,18,19, % 70 kısmi hepatectomy4,20,21veya sol kaldırılması ve medyan loblar. Kimyasal yönetim hepatosit hücre ölüme yol açar, ama genellikle mikro ve makro yapıları olduğu gibi bırakır. Genel olarak hepatik mimarisi değil oblitere gibi morfolojik rejenerasyon kolayca bu bağlamda okudu olamaz. % 70 kısmi hepatectomy dikiş tüp ligasyonu kanamayı durdurmak gerekli olan büyük gemilerin içerir ancak fizyolojik olmayan bir çevre damarlara kalıcı bozulma ile bırakır. Ayrıca, bu yöntem yalnızca yetişkin kemirgenler kullanılan ve yenidoğan bebeklerin onun uygulamaya Teknik olarak son derece zordur. Sol lob apeks 20-30 oranında bir yeni doğan P0 fare kaldırıldı bir yöntem bu düşünceyle geliştirdiğimiz (Şekil 1A-1B). Bu yöntem cerrahi olarak muhafazakar, minimal invaziv, teknik olarak zor ve morfoloji damarlara, rejenerasyon gerçekleşmesi için oda bırakarak ligasyonu olmadan kaybı brüt yol açar. Aşağıda açıklanan adım adım iletişim kuralı elde edilen herhangi bir araştırmacı bir kısmi lobular hepatectomy Doğum sonrası yaşam erken dönemlerinde memeli yenidoğan yenilenme eğitim için yenidoğan fareler üzerinde gerçekleştirmek izin verir. Gibi yaşamın daha sonraki evrelerinde karaciğerde kullanılabilmesi için bu yöntem aynı zamanda rejeneratif tıp ve kök hücre biyolojisi, karşılaştırmalı çalışmalar için açık uygulamaları var.
En yaygın akut karaciğer hasarı çalışmalar kimyasal kaynaklı hasar, Yetişkin karaciğer amputasyon veya % 70 kısmi hepatectomy vardır. Kimyasal hasar kez asetaminofen, karbon tetraklorür veya etanol intravenöz mayi veya sözlü yönetim içerir ve nispeten kolay ve non-invaziv yaralanma modelidir. Daha önce tartışılan, kimyasal zarar sonuçlarında hepatosit hücre ölümü, ama sık sık yaprakları stroma ve parankimi yapıları sağlam, morfolojik rejenerasyon hakkında iddiada zorlaştırır. Kimyasal zarar kez Hepatik damarları üzerinde mevcuttur ve hücre özgü yaralanma, eğitim için yararlı bir yöntem yapım merkezleri ancak aynı zamanda bütün organ düzeyinde, gemiler daha fazla--dan yer alan ve bu olabilir diğer nüfus sorgulamaya zorlaştırır yenilenmesine katkıda bulunur. Bu sınırlamaları rağmen kimyasal hasar hala bir fizyolojik açıdan son derece uygun ve faydalı yaralanma model kalır.
Yetişkin % 70 kısmi hepatectomy hepatik damarlara ligasyonu takip sol ve medyan loblar kaldırılmasını içerir. Hepatectomy cevaben de karakterize: uzvunu karaciğer 14 gün sonrası % 70 kısmi hepatectomy kalan sağ ve kaudat lob tetkikine özgün hasarsız lob bundan fena halde farklı bir mimari geliştirir hipertrofisi ve hücre bölünmesi4,5birkaç tur tabi. Bu kayıp kitle ve fonksiyonu, yapar ama iki uzvunu loblar yeniden oluşturmak başarısız olur ve bu nedenle brüt morfoloji yerini almaz. Sonuç olarak, % 70 kısmi hepatectomy yaralanma yanıt telafi edici büyüme mekanizmaları sınırlı yenilenme ile çalışmak yararlıdır.
Burada, tam bir yenidoğan kısmi lobular hepatectomy için bir protokol açıklayın. Uygun hayvan seçimi ve hazırlık, cerrahi alan hazırlık, cerrahi ve kurtarma yordamı içerir. En iyi duruma getirme ve bu adımların her biri uyum Protokolü'nün farklı uygulamalar için gerekli olabilir.
Biz kapsamlı bir şekilde gerçekleştirilen ve bu protokol üzerinde vahşi türü C57BL/6J pups (JAX 000664) en iyi duruma getirilmiş, ancak, farklı hücre popülasyonlarının ve mekanizmaları rejenerasyon çalışmaya, ayrıca çeşitli Cre yataklık fareler de dahil olmak üzere çeşitli transjenik hayvanlar kullanılır ve CreERT2 transgenes ve/veya knock-ins (Axin2CreERT2 JAX 018867, ve Sox9CreERT2 JAX 018829) gibi gökkuşağı ve mTmG sistemleri (R26VT2/GK3, floresan gazetecilere ile birlikte R26 mT/mG) 22 , 23. sağkalım sonuçları ya da yeniden üretim potansiyeli yok farklılıkları tespit edildi gibi farklı fare suşları, bu yöntemi değiştirmek gerek yok bulduk.
Farklı hayvan suşları kullanmaya ek olarak, biz de kısmi lobular hepatectomies 4-hidroksi-Tamoksifen ve 5-ethynyl-2 '-deoxyuridine (EdU) gibi küçük moleküller ile tedavi yenidoğan fareler üzerinde yapılır. O Mısır yağı morbidite önemli bir sebebi bulundu gibi dimetil sülfoksit (DMSO) ve etanol solvent kullanılmıştır. Aksi takdirde küçük moleküllerin mayi yönetim hayatta kalma veya rejeneratif sonuç etkilemedi bulduk. Bu iletişim kuralı yeniden oluşturma işlemi, çeşitli açılardan sorguya çekmek için diğer küçük moleküller ile kullanmak için adapte olacağını tahmin ediyorum.
Yenidoğan fare cerrahi teknik olarak zor olabilir ve hayvan işleme ve mikroskobik diseksiyon özel uzmanlık gerektirebilir. Hayvancılık uzmanlığı anne yamyamlık önlemek için gerekli cerrahi ve acil kurtarma süresi boyunca.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Hayvanlar</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anne gün çöpü olan 0 yenidoğan yavruları (herhangi bir tür)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Taşıyıcı anne ve vekil altlık (isteğe bağlı)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Ad</güçlü></td>güçlü<td><güçlü>Şirket<>güçlü</td><td><güçlü>Katalog Numarası</güçlü></td><td><güçlü>Yorumlar</ güçlü</td></tr><tr><td>><güçlü>Standart Reaktifler< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Serum (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sağlanan iyot veya eşdeğer antiseptik çözelti</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Ad<</td><td>strong>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Yorumlar</ güçlü></td></tr><tr><td><güçlü>Cerrahi Ekipman</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>ZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000</td><td></td></tr><tr><td>3mm düz yaylı mikro makas</td><td>Vannas</td><td>72932-01</td><td></td></tr><tr><td>5SF Forseps</td><td>Dumont</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Düz Kelly forseps</td><td>Grainger</td><td>17-050G</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>Güneş Işını</td><td>000771-810-000</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Abbott Labs</td><td>0044-5260-05</td><td></td></tr><tr><td>Kemirgen Anestezi Sistemi</td><td>Kent Scientific</td><td>1205S</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı Bez, 10.16 x 10.16cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-761-52</td><td></td></tr><tr><td>İsim</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</ güçlü></td><td><güçlü>Yorumlar</güçlü></td></tr><tr><td><güçlü>Standart Ekipman</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5ml mikrosantrifüj tüpü</td><td>Eppendorf</td><td>22363204</td><td></td></tr><tr><td>6-0 monokril sütürler</td><td>Ethicon</td><td>MCP489G</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Fisher Scientific</td><td>S35839</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Yardımı, Düz, 110V</td><td>Drummond</td><td>4-000-110</td><td></td></tr><tr><td>Mettler Toledo NewClassic ME Analitik Teraziler</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-912-402</td><td></td></tr><tr><td>Düşük Maliyetli İndüksiyon Odası</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0730</td><td></td></tr></tbody></table>

kısmi lobular hepatectomy: morfolojik karaciğer rejenerasyonu için cerrahi bir model

Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

Morfolojik organ rejenerasyon akut doku kaybı aşağıdaki alt Omurgalılar arasında yaygındır, ama memeli postnatal hayatta nadiren görülmektedir. Yetişkin karaciğer rejenerasyonu % 70 kısmi hepatectomy sonra kalan loblar restorasyon metabolik aktivite, ama kalıcı kaybı yaralı lob'ın Morfoloji ve mimarisi ile bazı çoğaltması ile hepatosit hipertrofisi sonuçları. Burada, fizyolojik bir çevre rejenerasyon için elverişli bırakır kardiyolojik yeni bir cerrahi yöntem ayrıntılı. Bu model sol lob tepe ve bir sonraki muhafazakar yönetimi rejimi amputasyon içerir ve ligasyonu önemli karaciğer damarlarını veya kimyasal yaralanma, nerede rejenerasyon oluşabilir fizyolojik bir ortam bırakmak için gerekliliğini yoksun. Biz bu protokol sırasında yaralı karaciğer tarafından hipertrofisi için telafi edici büyüme organ rejenerasyon geçişler Juvenil (P7-14) fareler üzerinde ampütasyonlar için uzatmak. Sunulmuştur, kısa 30 dk protokolü yeniden oluşturma işlemi, memeliler yılında yaş ilişkili düşüş ve sözde hepatik kök veya ataları karakterizasyonu mekanizmaları incelemek için bir çerçeve sağlar.

Şekil 1A yenidoğan kısmi lobular hepatectomy ( Şekil 1Badımında şematik) genel bir zaman çizelgesi ve rejenerasyon gözlenen beklemek beklenen süreyi ayrıntıları. Sol lob ince rejenerasyon gözlenen 7-14 gün sonrası cerrahi olabilir. Sonra 56 gün ameliyat sonrası tam rejenerasyon kez gözlendi. Fareler fizyolojik anormallik belirtisi yok ameliyattan sonra göstermelidir.
Kı...

Burada, yenidoğan (0 gün) farelerde karaciğer sol lob kısmi rezeksiyon için yeni bir yöntem mevcut. Bu yeni iletişim kuralı akut karaciğer hasarı ve yaralanma yanıt yenidoğan ortamda çalışmak için uygundur.

Kısmi Lobular Hepatectomy: Morfolojik karaciğer rejenerasyonu için cerrahi bir Model

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult ...

Bu cerrahi prosedürün genel amacı, parsiyel lobüler hepatektomi yoluyla morfolojik karaciğer rejenerasyonunu indüklemektir. Bu yöntem, kök hücre biyolojisi ve rejeneratif tıp alanlarında morfolojik karaciğer rejenerasyonu ve karaciğere özgü kök hücreler hakkında önemli sorulara cevap verebilir. Bu tekniğin temel avantajları, minimal invaziv olması ve kimyasal hakaret veya koterizasyon gerektirmemesidir.Hayvanlara dokunmadan önce, annenin kafesindeki yatak takımlarını eldivenlere sürün. Daha sonra tüm yavruları ve bazı yatak takımlarını annenin kafesinden bir ısıtma yastığının üstündeki boş bir kafese aktarın. Ardından, bir diseksiyon mikroskobu altına bir yavru yerleştirin.Ayak parmağı sıkışmasına yanıt verilmemesi nedeniyle uygun sedasyon seviyesini onayladıktan sonra, hayvanın arka karın duvarını betadin ile dezenfekte etmek için küçük bir gazlı bez kullanın. Göğüs kafesinin hemen altında sol orta klaviküler yarım santimetrelik bir kesi yapmak için mikro diseksiyon makası ve forseps kullanın. Cildi nazikçe ayırmak için forseps kullanın.Daha sonra periton boşluğuna daha derin ikinci bir kesi yapın ve mikro diseksiyon makasının ve forsepsin arka künt kenarını kullanarak karnın her iki tarafına hafif yanal basınç uygulayın ve sol lobun apeksi periton boşluğundan dışarı çıkmaya zorlayın. Sol lobun sol apeksi göründüğünde, lobdan uygun deneysel miktarda dokuyu kesin ve dokuyu buz üzerinde 1.5 mililitrelik bir PBS tüpüne yerleştirin. Haddelenmiş bir gazlı bez parçası kullanarak, sol lobu yavaşça periton boşluğuna geri koyun.Kanama durduğunda gazlı bezi çıkarın ve ameliyat bölgesini ve çevresini PBS ile ıslatılmış gazlı bezle ıslatın. Ameliyat bölgesini dikişler ve akan bir dikişle kapatın. Daha sonra, PBS'ye batırılmış bir gazlı bezi yavru ve yara bölgesinin üzerine nazikçe ama iyice yuvarlayın, kan veya betadin kalmadığından emin olun.Yavrunun, annenin dışkısına ve idrarına maruz kalan gazlı bez pedlerinin yakınında iyileşmesine izin verin. Tüm yavrular hepatektomize edildiğinde, tüm hayvanları ve yatak takımlarını annenin kafesine geri koyun. Lobları tarttıktan sonra, doku örneklerini oda sıcaklığında bir saat boyunca% 2 paraformaldehit içinde sabitleyin.Fiksasyonun sonunda, dokuları kuru buz üzerinde dondurmak için en uygun kesme sıcaklığı ortamını içeren ayrı ayrı dondurma kalıplarına aktarın. Ve herhangi bir standart kriyostat kullanarak her lobun 7-10 mikrometre kesitini elde edin. Yaralarının kapalı kaldığını doğrulamak için yavruları en az 56 gün boyunca günlük olarak kontrol edin ve ameliyattan 24 ve 48 saat sonra analjezi enjekte edin.Uygun deneysel son noktada, blok üzerindeki her yavrudan karaciğeri hasat edin ve tartın. Daha sonra her bir lobu proksimal bağlantısında dikkatlice ayırın ve her lobdaki rejenerasyonun derecesini belirlemek için ampute sol lobun kütlesini tüm karaciğerin kütlesiyle karşılaştırın. Sol lobun hafif rejenerasyonu ameliyattan 7-14 gün sonra gözlenebilir ve tam rejenerasyon genellikle 56 gün sonra gözlenir.Histolojik analiz ile ortaya çıkan rejenere karaciğerdeki hepatosit alanlarında anlamlı bir fark yoktur. Ayrıca, EdU ile yenidoğan fare enjeksiyonları, yaralı rejenere sol lobdaki çoğalan hücrelerin sayısında, yaralanmamış kontrollere kıyasla önemli bir artış olduğunu gösterir, bu da hücre proliferasyonunun yenidoğanlarda sol lob rejenerasyonuna katkıda bulunduğunu düşündürür. Bununla birlikte, doğum sonrası 14. gün genç farelerde hepatektomi, sol lobda rejenerasyonun azalmasına ve yaralanmamış loblardan artan bir tazminata neden olur.14 gün içinde akut rezeksiyona yaralanma yanıtının lob spesifik rejenerasyondan küresel kompanzasyona geçtiğini gösterir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde uygulanırsa 15 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü denerken, anne veya yavrular için ekstra strese neden olmamak için mümkün olduğunca dikkatli olmak önemlidir.Bu prosedürü takiben, karaciğerin rejeneratif potansiyelini daha fazla değerlendirmek için seri hepatekomiler veya kronik karaciğer yaralanmaları gibi diğer yöntemler yapılabilir. Geliştirilmesinden sonra, bu teknik, kök hücre biyolojisi alanındaki araştırmacıların yenidoğan faresinde karaciğer rejenerasyonunu keşfetmesinin yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, yenidoğan fare karaciğerinin loba özgü kontrollü bir amputasyonunun nasıl tamamlanacağını iyi anlamış olmalısınız.İzofluran ile çalışmanın son derece tehlikeli olduğunu ve bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman yüz maskesi ve eldiven gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.

partial-lobular-hepatectomy-surgical-model-for-morphologic-liver

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Karaciğer metastazlarının rezeksiyonu sonrası tümör nüksü insidansının yüksek olması çözülmemiş bir sorun olmaya devam etmektedir. Resimli fare modeli, bu tür nükslerin nedenlerini araştırmak için yararlı olabilir. Karaciğer rezeksiyon modelini ilk kez intrahepatik tümör hücresi enjeksiyonu ile birleştirir.

İntrahepatik Tümör Büyümesi Üzerine Karaciğer Rezeksiyon Etkisi

Karaciğer bölümü ilişkilendirme ve Portal ven ligasyonu için aşamalı hepatectomy kullanarak hızlı karaciğer hipertrofisi inducing (ALPPS) sınır çizgisi çevrimsel karaciğer tümörü rezeksiyonu için teklif edildi. Bu model mekanizmalar hızlı hipertrofisi yer aydınlatmak ve teşvik veya rejenerasyon ivme engellemek uyuşturucu testi sağlar.

Karaciğer bölümü ilişkilendirme ve Portal ven ligasyonu hazırlanmış Hepatectomy (ALPPS) yordamı için fare modeli

Kısmi hepatectomy (PHx) ve hücre transplantasyonu dalak ile NOD gerçekleştirmek için bir protokol anlatmıştık. SCID (BAŞINI SALLAMAK. CB17-Prkdcscid/J) fareler. Bu protokol için ortaya çıkarmak ve hücre intrasplenic nakli için başka bir kesi ardından karaciğer sol lob çıkarabileceğim için bir kesi yapılır.

Hepatositlerin intrasplenic nakli düğümde kısmi Hepatectomy sonra. SCID fareler

Biz daha fazla vivo içinde kısmi karaciğer gelecekte mühendislik eğitimi için bir önkoşul olarak köstebeğiyle vivo içinde tek karaciğer lob perfüzyon modeli için yeni bir cerrahi teknik kurmak.

Sıçan Vivo içinde kısmi karaciğer Dairesi'nde için bir temel olarak yeni bir cerrahi teknik

Bu protokol, karaciğer yenilenmesinin incelenmesini sağlamak için yetişkin zebra balıklarında karaciğerin ventral lobunun çıkarılması prosedürünü açıklar.

Yetişkin Zebra Balıklarında Kısmi Hepatektomi

Lipid yüklü hepatositler karaciğer rejenerasyonuna özgüdür, ancak genellikle yoğunluk gradyan santrifüjleme ile kaybolurlar. Burada, steatotik hepatositleri tutan ve farelerde parsiyel hepatektomi sonrası rejenere hepatositlerin temsili popülasyonlarını veren optimize edilmiş bir hücre izolasyon protokolü sunuyoruz.

Farelerde Parsiyel Hepatektomi Sonrası Rejenere Hepatositlerin İzolasyonu

Çok sayıda çalışma anatomik rezeksiyonun avantajlarını göstermiştir. Bununla birlikte, anatomik rezeksiyonun R0 rezeksiyon oranlarını artırıp artıramayacağı tartışmalıdır. Sonuç olarak, bu çalışmada laparoskopik hepatektomide anatomik rezeksiyon ile birlikte en blok kavramını içeren, postoperatif nüks ve metastazı azaltabilen yenilikçi bir prosedür tanımlanmıştır.

Laparoskopik Hepatektomide Anatomik Rezeksiyon ile Kombine En Blok Kavramının Uygulanması

Aşamalı Hepatektomi (ALPPS) için Karaciğer Bölünmesi ve Portal Ven Ligasyonunun İlişkilendirilmesinin, birinci aşama ameliyattan birkaç hafta sonra kayda değer karaciğer rejenerasyonu ile sonuçlandığı gösterilmiştir. ALPPS uygulanan hayvan modelleri, potansiyel karaciğer rejenerasyon yeteneğini araştırmak ve olumlu klinik sonuçlar elde etmek için geliştirilmiştir.

Mikroskopi Destekli Aşamalı Hepatektomi Prosedürü için İlişkilendirici Karaciğer Bölünmesi ve Portal Ven Ligasyonunun Bir Fare Modeli

Hasta tümörlerinden üretilen organoidler ortotopik olarak fare karaciğerine enjekte edilir. Tümör olmayan karaciğer dokusunun rezeksiyonu, tümörün bulunduğu karaciğer dokusunda rejeneratif bir ortama yol açar.

Karaciğer Rejenerasyonunun Tümör Büyümesi Üzerindeki Etkisini Araştırmak İçin Hepatosellüler Kanser Hastasından Elde Edilen Bir Organoid Ksenogreft Modeli

Parsiyel 2/3 (%66) hepatektominin fare modeli literatürde iyi tanımlanmıştır, ancak karaciğer transplantasyonundan sonra boyuta göre küçük sendromu taklit eden daha geniş hepatektomiler nadiren kullanılmıştır. Sağlıklı farelerde yaklaşık %50 postoperatif ölümcüllük ile sonuçlanan bir fare modelinde genişletilmiş %78'lik bir hepatektomi prosedürünü tanımladık.

Bir Fare Cerrahi Modelinde Genişletilmiş %78 Hepatektomi

Öğrenin kısmi lobuler hepatektomi tekniğini yenidoğan farelerde morfolojik karaciğer rejenerasyonunu incelemek için. Bu minimal invaziv yöntem kök hücre biyolojisi ve rejeneratif tıp alanlarında araştırmalara olanak tanır.

Kısmi Lobular Hepatectomy: Morfolojik karaciğer rejenerasyonu için cerrahi bir Model

Daha fazla video keşfet