Kısmi Lobular Hepatectomy: Morfolojik karaciğer rejenerasyonu için cerrahi bir Model

Bu cerrahi prosedürün genel amacı, parsiyel lobüler hepatektomi yoluyla morfolojik karaciğer rejenerasyonunu indüklemektir. Bu yöntem, kök hücre biyolojisi ve rejeneratif tıp alanlarında morfolojik karaciğer rejenerasyonu ve karaciğere özgü kök hücreler hakkında önemli sorulara cevap verebilir. Bu tekniğin temel avantajları, minimal invaziv olması ve kimyasal hakaret veya koterizasyon gerektirmemesidir.

Hayvanlara dokunmadan önce, annenin kafesindeki yatak takımlarını eldivenlere sürün. Daha sonra tüm yavruları ve bazı yatak takımlarını annenin kafesinden bir ısıtma yastığının üstündeki boş bir kafese aktarın. Ardından, bir diseksiyon mikroskobu altına bir yavru yerleştirin.

Ayak parmağı sıkışmasına yanıt verilmemesi nedeniyle uygun sedasyon seviyesini onayladıktan sonra, hayvanın arka karın duvarını betadin ile dezenfekte etmek için küçük bir gazlı bez kullanın. Göğüs kafesinin hemen altında sol orta klaviküler yarım santimetrelik bir kesi yapmak için mikro diseksiyon makası ve forseps kullanın. Cildi nazikçe ayırmak için forseps kullanın.

Daha sonra periton boşluğuna daha derin ikinci bir kesi yapın ve mikro diseksiyon makasının ve forsepsin arka künt kenarını kullanarak karnın her iki tarafına hafif yanal basınç uygulayın ve sol lobun apeksi periton boşluğundan dışarı çıkmaya zorlayın. Sol lobun sol apeksi göründüğünde, lobdan uygun deneysel miktarda dokuyu kesin ve dokuyu buz üzerinde 1.5 mililitrelik bir PBS tüpüne yerleştirin. Haddelenmiş bir gazlı bez parçası kullanarak, sol lobu yavaşça periton boşluğuna geri koyun.

Kanama durduğunda gazlı bezi çıkarın ve ameliyat bölgesini ve çevresini PBS ile ıslatılmış gazlı bezle ıslatın. Ameliyat bölgesini dikişler ve akan bir dikişle kapatın. Daha sonra, PBS'ye batırılmış bir gazlı bezi yavru ve yara bölgesinin üzerine nazikçe ama iyice yuvarlayın, kan veya betadin kalmadığından emin olun.

Yavrunun, annenin dışkısına ve idrarına maruz kalan gazlı bez pedlerinin yakınında iyileşmesine izin verin. Tüm yavrular hepatektomize edildiğinde, tüm hayvanları ve yatak takımlarını annenin kafesine geri koyun. Lobları tarttıktan sonra, doku örneklerini oda sıcaklığında bir saat boyunca% 2 paraformaldehit içinde sabitleyin.

Fiksasyonun sonunda, dokuları kuru buz üzerinde dondurmak için en uygun kesme sıcaklığı ortamını içeren ayrı ayrı dondurma kalıplarına aktarın. Ve herhangi bir standart kriyostat kullanarak her lobun 7-10 mikrometre kesitini elde edin. Yaralarının kapalı kaldığını doğrulamak için yavruları en az 56 gün boyunca günlük olarak kontrol edin ve ameliyattan 24 ve 48 saat sonra analjezi enjekte edin.

Uygun deneysel son noktada, blok üzerindeki her yavrudan karaciğeri hasat edin ve tartın. Daha sonra her bir lobu proksimal bağlantısında dikkatlice ayırın ve her lobdaki rejenerasyonun derecesini belirlemek için ampute sol lobun kütlesini tüm karaciğerin kütlesiyle karşılaştırın. Sol lobun hafif rejenerasyonu ameliyattan 7-14 gün sonra gözlenebilir ve tam rejenerasyon genellikle 56 gün sonra gözlenir.

Histolojik analiz ile ortaya çıkan rejenere karaciğerdeki hepatosit alanlarında anlamlı bir fark yoktur. Ayrıca, EdU ile yenidoğan fare enjeksiyonları, yaralı rejenere sol lobdaki çoğalan hücrelerin sayısında, yaralanmamış kontrollere kıyasla önemli bir artış olduğunu gösterir, bu da hücre proliferasyonunun yenidoğanlarda sol lob rejenerasyonuna katkıda bulunduğunu düşündürür. Bununla birlikte, doğum sonrası 14. gün genç farelerde hepatektomi, sol lobda rejenerasyonun azalmasına ve yaralanmamış loblardan artan bir tazminata neden olur.

14 gün içinde akut rezeksiyona yaralanma yanıtının lob spesifik rejenerasyondan küresel kompanzasyona geçtiğini gösterir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde uygulanırsa 15 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü denerken, anne veya yavrular için ekstra strese neden olmamak için mümkün olduğunca dikkatli olmak önemlidir.

Bu prosedürü takiben, karaciğerin rejeneratif potansiyelini daha fazla değerlendirmek için seri hepatekomiler veya kronik karaciğer yaralanmaları gibi diğer yöntemler yapılabilir. Geliştirilmesinden sonra, bu teknik, kök hücre biyolojisi alanındaki araştırmacıların yenidoğan faresinde karaciğer rejenerasyonunu keşfetmesinin yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, yenidoğan fare karaciğerinin loba özgü kontrollü bir amputasyonunun nasıl tamamlanacağını iyi anlamış olmalısınız.

İzofluran ile çalışmanın son derece tehlikeli olduğunu ve bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman yüz maskesi ve eldiven gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.