Name: Bir sıçan modelinde en iyi duruma getirilmiş yapısı ile Electrospun vasküler greft implantasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Öğrenin, sıçan abdominal aortasında elektrospun vasküler greft implantasyonu ve uzun vadeli performans değerlendirmesi için optimize edilmiş yöntemi. Bu teknik, yüksek hayvan sağkalım oranı ve iyi tekrarlanabilirlik sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser mali NSFC projeler (81522023, 81530059, 91639113, 81772000, 81371699 ve 81401534) tarafından desteklenmiştir.

Deneysel hayvan kullanımı hayvan deneyleri Etik Komitesi Nankai Üniversitesi tarafından onaylanmış ve bakım ve Laboratuvar hayvanlarının kullanmak için Kılavuzu uygun olarak yürütülmektedir.
1. Electrospun PCL Greftler imalatı
Not: Burada, vasküler Greftler imal etmek bir electrospinning tekniği kullanılmıştır.
<ol><li>PCL çözümleri 25 wt % ve 10 wt %, sırasıyla, metanol ve kloroform, karışımı PCL çözülerek hazırlamak (1:5 hacim oranı), oda sıcaklığında (RT) 12 h için.</li>
	<li>PCL çözüm 10 mL Cam şırınga yükleyin.</li>
	<li>Şırınga ile 21-G iğne yerleştirin.</li>
	<li>Paslanmaz çelik mandrel (2 mm çapında, uzunluğu 25 cm) koleksiyon araç üzerinde yerleştirin.</li>
	<li>Lif kalın Greftler için kullanın PCL çözüm 25 wt %, çalışma mesafesi toplayıcı için iğne ucu 17 cm, 8 mL/h debi ve gerilim 11 kV electrospinning parametre olarak. İnce lifli greft için 10 wt %, iğne ucu 20 cm toplayıcı için çalışma mesafesi, 2 mL/h debi ve gerilim 18 PCL çözüm kullanın kV electrospinning parametre olarak.</li>
	<li>Elde edilen Greftler gecede kalan solvent kaldırmak için vakum yerleştirilir emin olun. Önce yordamı tüm aletleri sterilize ve aseptik teknik boyunca korumak.</li>
	<li>İmplantasyon öncesinde Greftler dezenfekte onları 10 ml % 75 etanol için 30 dk çeker ve sonra onları ifşa UV ışığı gecede.</li>
	<li>Lif ve gözenek boyutu ölçüleri: ImageJ yazılım elektron mikroskobu (SEM) görüntüleri taramak tabanlı kullanarak ortalama lif çapı hesaplamak.</li>
	<li>Mekanik iskele test:<ol>
<li>Bir tıraş bıçağı kullanarak uzunluğu 3 mm bölümlere borulu iskele kesti. Bir mikrometre kullanarak iskele kalınlığını ölçmek.</li>
		<li>100 N. yük kapasiteli bir gerilme test makinede borulu iskele yerleştirin</li>
		<li>1 mm arası kelepçe mesafe ve 10 mm/dk hızında boyuna çekme ile iskele rüptürü kadar kelepçe. Çekme dayanımı ve kopma nihai uzama ölçmek. Young katsayısı ilk doğrusal bölgesinden hesaplamak (en fazla % 5 zorlanma) stres gerginlik eğrisi.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. fare Abdominal aort implantasyon modeli
Not: Tüm malzeme ve kullanılan aletler steril. Ameliyat sırasında operatör bir gazlı bez maske ve enfeksiyonları önlemek için steril eldiven giyer emin olun. Oda sıcaklığında hayvan vücut ısısını korumak için 27-30 ° C'de tutulur emin olun. Analjezi ile ilgili yerel IACUC yönergeleri izleyin.
<ol><li>Vasküler greft alıcıları 240-270 g ağırlığında erkek Sprague Dawley rat kullanın. Fareyi ameliyattan önce 24 saat oruç emin olun. 24 h açlık sıçanlara amacı boş dışkı bağırsak yeterince, böylece operatörün ufku genişletmek.</li>
	<li>Sıçan arka boyun kavramak ve kafasını aşağıya doğru tutmak, alt karın karın boşluğuna springe iğne yerleştirin. Kloral hidrat (330 mg/kg) ile anestezi için fare mayi iğne tarafından ikna etmek.</li>
	<li>Yeterli anesthetization sıçan kasları ve düzenli nefes rahat sağlayarak onaylayın. Çalışma mikroskop altında fare sırtüstü pozisyonda yerleştirin.</li>
	<li>Petrolatum oftalmik veteriner merhem Gözlerde kuruluk anestezi iken altında önlemek için geçerlidir. AntiCoagulation (100 UI/kg) ameliyattan önce kuyruk ven enjeksiyonla heparinized fizyolojik serum çözüm (50 UI/mL) ile yönetebilirsiniz.</li>
	<li>Bir tıraş bıçağı kullanarak ön karın duvarındaki kürk kapalı tıraş ve deri iyot çözüm ve Tıbbi alkol çözümü kullanarak temiz.</li>
	<li>Laparotomi ensizyon cerrahi makas ile gerçekleştirmek ve belgili tanımlık kesme yaklaşık 4-5 cm uzunluğunda olduğundan emin olun ve karın boşluğu karşı karşıya.</li>
	<li>Geri çekmek ve bağırsak ile tuzlu çözüm tercihen ıslatılmış gazlı bez ile sarın.</li>
	<li>Abdominal aort dikkatle incelemek.</li>
	<li>Tanımlamak ve tüm küçük dalları 9-0 monofilament naylon dikiş kullanarak ligate.</li>
	<li>İzole bölüm kelepçe (ilâ 1 cm uzunluğunda) iki damar kelepçeler kullanılarak aort. Aorta için 20-30 dk klempe kalabilir.</li>
	<li>İki kelepçeler anastomoz siteleri oluşturmak için mikro-makas kullanarak arasında karın aortu transect.</li>
	<li>Artık kan kaldırmak için heparinized serum fizyolojik (50 UI/mL) çözüm kullanarak aort iki ucunun floş.</li>
	<li>Mikro-makas kullanarak adventitia soyma.</li>
	<li>Greft ile 2 mm iç çap ve 1 cm uzunluğunda sıçan abdominal aort için 9-0 monofilament naylon dikiş kullanarak bir sekiz şekli dikiş desen ile anastomose.</li>
	<li>İlk olarak, dört anastomoses, 9, 3, 12 ve 06: 00 proksimal yan konumlarda sırasına göre oluşturmak, sonra iki dikiş arasında 4 dikiş kesilmiş kenarları anastomose. Proksimal dikiş bittikten sonra aynı yöntemle distal yan dikiş. Not: Her dikiş yerli yan biraz greft gömülü olduğu için gereklidir.</li>
	<li>Kan nakli akışını sağlamak için distal klempi kaldırın, sonra proksimal klemp kaldırın.</li>
	<li>Dikiş biter steril bir pamuk veya bir küçük gazlı bez sünger kullanarak kanamayı durdurmak için tuşuna basın. Yaklaşık 3 dakika için hemostazın kadar basın.</li>
	<li>Bağırsak karın boşluğuna dönün.</li>
	<li>Karın boşluğu sıcak fizyolojik serum çözüm gentamisin ile (320 U/mL) kullanarak floş.</li>
	<li>3-0 naylon dikiş kas ve deri katmanının içinde sırasıyla kullanarak karın duvarına kadar dikmek.</li>
	<li>Fareyi bir temiz ve kuru kafesin içine yerleştirin ve bir ısıtma yastığı hayvan vücut ısısını korumak için kafes altında koymak; daha sonra fareyi anesteziden kurtarmak bekleyin. Sternal recumbency korumak için yeterli kendine geldi kadar hayvan için katılmak.</li>
	<li>Bilinci yerine sonra yiyecek ve su ile tek bir kafes içinde fare koydu. İyot ameliyattan sonra enfeksiyonu önlemek için yaranın üzerine uygulayın. Tamamen iyileşene kadar fareyi diğer hayvanlar şirkete geri.</li>
	<li>Fareler önceden belirlenmiş zaman noktalarda kurumsal esaslarına göre ötenazi.</li>
</ol>

<ol><li>Coombs, K. E., Leonard, A. T., Rush, M. N., Santistevan, D. A., Hedberg-Dirk, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+effect+of+material+stiffness+on+valvular+interstitial+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+A%22%5BJournal%5D)">Isolated effect of material stiffness on valvular interstitial cell differentiation.</a> J Biomed Mater Res A. 105 (1), 51-61 (2017).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sandwich+tubular+scaffold+derived+from+chitosan+for+blood+vessel+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+A%22%5BJournal%5D)">A sandwich tubular scaffold derived from chitosan for blood vessel tissue engineering.</a> J Biomed Mater Res A. 77 (2), 277-284 (2006).</li>
<li>Thottappillil, N., Nair, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffolds+in+vascular+regeneration%3A+current+status%5BTitle%5D)+AND+%22Vasc+Health+Risk+Manag%22%5BJournal%5D)">Scaffolds in vascular regeneration: current status.</a> Vasc Health Risk Manag. 11, 79-91 (2015).</li>
<li>Pektok, E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19029464">Degradation and healing characteristics of small-diameter poly (e-caprolactone) vascular grafts in the rat systemic arterial circulation.</a> Circulation. 118 (24), 2563-2570 (2008).</li>
<li>Innocente, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paclitaxel-eluting+biodegradable+synthetic+vascular+prostheses%3A+a+step+towards+reduction+of+neointima+formation%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Paclitaxel-eluting biodegradable synthetic vascular prostheses: a step towards reduction of neointima formation?</a> Circulation. 120 (11 Suppl), S37-S45 (2009).</li>
<li>de Valence, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+of+bilayered+vascular+grafts+for+surgical+applicability+and+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Advantages of bilayered vascular grafts for surgical applicability and tissue regeneration.</a> Acta Biomater. 8 (11), 3914-3920 (2012).</li>
<li>Assmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+autologous+in+vivo+recellularization+of+decellularized+aortic+conduits+by+fibronectin+surface+coating%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Acceleration of autologous in vivo recellularization of decellularized aortic conduits by fibronectin surface coating.</a> Biomaterials. 34 (25), 6015-6026 (2013).</li>
<li>Hasan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospun+scaffolds+for+tissue+engineering+of+vascular+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Electrospun scaffolds for tissue engineering of vascular grafts.</a> Acta Biomater. 10 (1), 11-25 (2014).</li>
<li>Baker, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+to+improve+cell+infiltration+in+composite+fiber-aligned+electrospun+scaffolds+by+the+selective+removal+of+sacrificial+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The potential to improve cell infiltration in composite fiber-aligned electrospun scaffolds by the selective removal of sacrificial fibers.</a> Biomaterials. 29 (15), 2348-2358 (2008).</li>
<li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+macropores+in+electrospun+silk+fibroin+scaffolds+using+sacrificial+PEO-microparticles+to+enhance+cellular+infiltration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">Creation of macropores in electrospun silk fibroin scaffolds using sacrificial PEO-microparticles to enhance cellular infiltration.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 101 (12), 3474-3481 (2013).</li>
<li>Lee, B. L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femtosecond+laser+ablation+enhances+cell+infiltration+into+three-dimensional+electrospun+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Femtosecond laser ablation enhances cell infiltration into three-dimensional electrospun scaffolds.</a> Acta Biomaterialia. 8 (7), 2648-2658 (2012).</li>
<li>Rnjak-Kovacina, J., Weiss, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+the+pore+size+of+electrospun+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Increasing the pore size of electrospun scaffolds.</a> Tissue Eng Part B Rev. 17 (5), 365-372 (2011).</li>
<li>Zhong, S., Zhang, Y., Lim, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+large+pores+in+electrospun+nanofibrous+scaffolds+for+cellular+infiltration%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Fabrication of large pores in electrospun nanofibrous scaffolds for cellular infiltration: a review.</a> Tissue Eng Part B Rev. 18 (2), 77-87 (2012).</li>
<li>Pham, Q. P., Sharma, U., Mikos, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospun+poly%28epsilon-caprolactone%29+microfiber+and+multilayer+nanofiber%2Fmicrofiber+scaffolds%3A+characterization+of+scaffolds+and+measurement+of+cellular+infiltration%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Electrospun poly(epsilon-caprolactone) microfiber and multilayer nanofiber/microfiber scaffolds: characterization of scaffolds and measurement of cellular infiltration.</a> Biomacromolecules. 7 (10), 2796-2805 (2006).</li>
<li>Rnjak-Kovacina, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailoring+the+porosity+and+pore+size+of+electrospun+synthetic+human+elastin+scaffolds+for+dermal+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Tailoring the porosity and pore size of electrospun synthetic human elastin scaffolds for dermal tissue engineering.</a> Biomaterials. 32 (28), 6729-6736 (2011).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+thick+fibers+and+large+pores+of+electrospun+poly%28epsilon-caprolactone%29+vascular+grafts+on+macrophage+polarization+and+arterial+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effect of thick fibers and large pores of electrospun poly(epsilon-caprolactone) vascular grafts on macrophage polarization and arterial regeneration.</a> Biomaterials. 35 (22), 5700-5710 (2014).</li>
<li>Hutcheson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genesis+and+growth+of+extracellular-vesicle-derived+microcalcification+in+atherosclerotic+plaques%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Mater%22%5BJournal%5D)">Genesis and growth of extracellular-vesicle-derived microcalcification in atherosclerotic plaques.</a> Nat Mater. 15 (3), 335-343 (2016).</li>
<li>Tara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Well-organized+neointima+of+large-pore+poly%28L-lactic+acid%29+vascular+graft+coated+with+poly%28L-lactic-co-epsilon-caprolactone%29+prevents+calcific+deposition+compared+to+small-pore+electrospun+poly%28L-lactic+acid%29+graft+in+a+mouse+aortic+implantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Well-organized neointima of large-pore poly(L-lactic acid) vascular graft coated with poly(L-lactic-co-epsilon-caprolactone) prevents calcific deposition compared to small-pore electrospun poly(L-lactic acid) graft in a mouse aortic implantation model.</a> Atherosclerosis. 237 (2), 684-691 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir çakışan mali ilgi alanlarına sahip.

Hücre infiltrasyonu rejenerasyon için kritik ve remodeling vasküler greft vivo içinde16. Sınırlı hücre infiltrasyonu kez hücreleri geçiş greft duvara engel greft nispeten küçük gözeneklerin ilgilidir. Bu zorluk adrese, electrospun PCL vasküler greft büyük gözenek yapısı ile hazırlamak için değiştirilmiş bir yöntem geliştirdi. Ayrıntılı olarak, kolayca işleme parametreleri tarafından kontrol edilebilir fiber kalınlığı artış ile gözenek boyutu artmıştır. Sonuçlar konak hücreleri kolayca...

Vasküler Greftler sentetik polimerler yapılan yaygın olarak klinik kardiyovasküler hastalıklar (CVDs) tedavisi için kullanılmaktadır. Ne yazık ki, söz konusu olduğunda küçük çaplı vasküler Greftler (D < 6 mm) mevcuttur herhangi başarılı bir ürün nedeniyle sık sık kan pıhtılaşması, intimal hiperplazi ve diğer yol açar azaltılmış kan akım hızı tarafından tetiklenen düşük açıklık komplikasyonlar1.
Doku mühendisliği uzun vadeli açıklık ve bir iskele güdümlü vasküler yenilenme ve yeniden yapılanma dayalı homeostazı gerçekleştirmek için alternatif bir strateji sağlar. Ayrıntılı olarak, vasküler greft, üç boyutlu bir şablon olarak mekanik destek ve dahil hücre adezyon, göç, yayılması, damar dokusu ve etkisi hücresel fonksiyonları yeniden oluşturma sırasında yapısal rehberlik sağlayabilir ve hücre dışı matriks2salgılanmasını. Şu ana kadar çeşitli sentetik polimerler damar doku mühendisliği uygulamalarında değerlendirilir. Bu polimerler arasında poly(ε-caprolactone) (PCL) yoğun bir şekilde iyi hücre uyumluluk ve birkaç ay sonra iki yıl3' e kadar yavaş bozulması nedeniyle soruşturma. Mükemmel yapısal bütünlüğü ve açıklık ve neovaskülarizasyon içinde de kadar sürekli artan hücre işgal PCL vasküler greft electrospinning tarafından işlenen bir sıçan aort modeli4,5,6' da sergilenen greft duvar 6 aya kadar için. Ancak, olumsuz doku, hücre ve kılcal damarlar ve kalsifikasyon, regresyon dahil olmak üzere remodeling Ayrıca gözlendi daha uzun timepoints yukarı 18 ay.
Cellularization vasküler greft doku rejenerasyonu belirlenmesi ve7remolding önemli bir faktördür. Electrospinning, çok yönlü bir teknik olarak yaygın nano-lifli yapısı8ile vasküler greft hazırlanması için istihdam edilmiştir. Ne yazık ki, nispeten küçük gözenek yapısı genellikle yetersiz hücre infiltrasyonu sonraki doku rejenerasyonu sınırlar electrospun vasküler greft içinde yol açar. Bu sorunu gidermek için çeşitli teknikler gözenek boyutu ve9,10, toplayıcı cihazları, lazer radyasyon11 tarafından tedavi sonrası modifikasyonu leaching tuz/polimer dahil olmak üzere toplam gözeneklilik artırmak için kurulması denenen , vs. Aslında, electrospun Greftler (lif çapı, gözenek boyutu ve porozite dahil) yapısını işleme koşulları12,13ile yakından ilgilidir. Electrospinning sırasında lif çapı kolayca Polimer çözüm, akış hızı, voltaj, vbkonsantrasyonu gibi parametreleri değiştirerek kontrol edilebilir. 14 , 15, ve bu nedenle, gözenek boyutu ve porozite buna göre geliştirilmiştir.
Biz son zamanlarda değiştirilmiş bir PCL electrospun greft macroporous yapısı (5-7 µm çapını ve 30-40 µm gözeneklerin lifleri) ile bildirdi. Karın sıçan Aortası değiştirerek in vivo implantasyon 3 ay ameliyat sonrası16, açıklık, hem de iyi endothelialization ve düz kas yenilenme oranı yüksek gösterdi. Daha da önemlisi, hiçbir olumsuz doku kalsifikasyon ve hücre regresyon dahil olmak üzere remodeling implantasyon bile bir yıl sonra gözlenen.

<table><tbody><tr><td>Poli(&epsilon;-kaprolakton) (PCL) peletleri (Mn=80.000)</td><td>Sigma</td><td>704067</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Tianjin Kimyasal Reaktif Şirketi</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>Alkol</td><td>Tianjin Kimyasal Reaktif Şirketi</td><td>1083</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Tianjin Kimyasal Reaktif Şirketi</td><td>A1007</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Tianjin Fengchuan Şirket</td><td>2296</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Alfa Aesar</td><td>A16046</td><td></td></tr><tr><td>Sprague Dawley sıçanları</td><td>Askeri Tıp Bilimleri</td><td></td><td></td>Akademisi Laboratuvar Hayvanları Merkezi</tr><tr><td>Normal salin</td><td>Hebei Tiancheng İlaç şirketi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kloral hidrat</td><td>Tianjin Ruijinte kimya şirketi</td><td>2223</td><td></td></tr><tr><td>Heparin sodyum Enjeksiyonu</td><td>Tianjin Biochem İlaç şirketi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gentamisin Sülfat Enjeksiyonu</td><td>Jiangsu Lianshui İlaç şirketi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fare anti-&alfa;-SMA birincil antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab7817</td><td></td></tr><tr><td>Fare anti-pürüzsüz MYH birincil antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab683</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan poliklonal anti-sıçan elastin antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab23748</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan anti-von Willebrand faktörü birincil antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab6994</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-fare IgG (Alexa Fluor 488)</td><td>Invitrogen</td><td>ab150117</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-tavşan IgG (Alexa Fluor 488)</td><td>Invitrogen</td><td>ab150077</td><td></td></tr><tr><td>%5 normal keçi serumu</td><td>Zhongshan Golden bridge</td><td>ZLI9022</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilen ve eozin (H& E)</td> <td>Pekin leagene biyoteknoloji</td><td>DH0006</td><td></td></tr><tr><td>Masson'un trikrom</td><td>Pekin leagene biyoteknoloji</td><td>DC0032</td><td></td></tr><tr><td>Verhoeff-van Gieson (VVG)</td> <td>Pekin leagene biyoteknoloji</td><td>DC0059</td><td></td></tr><tr><td>Von Kossa</td><td>Pekin leagene biyoteknoloji</td><td>DS0003</td><td></td></tr><tr><td>İplikli cerrahi sütür iğneleri, 3-0 ipek</td><td>Şangay Jinhuan tıbbi malzeme şirketi</td><td>G3002b</td><td></td></tr><tr><td>İplik ile cerrahi sütür iğneleri, 9-0 ipek</td><td>Şangay Jinhuan tıbbi malzeme şirketi</td><td>H901</td><td></td></tr></tbody></table>

bir sıçan modelinde en iyi duruma getirilmiş yapısı ile electrospun vasküler greft implantasyonu

Implantation of Electrospun Vascular Grafts with Optimized Structure in a Rat Model

Burada, macroporous PCL vasküler greft imal ve abdominal aort değiştirme bir fare modeli kullanarak bir değerlendirme protokolü tanımlamak için bir iletişim kuralı mevcut. Electrospun vasküler Greftler kez hücre infiltrasyonu Greftler içine sınırlamak ve yenilenme ve neo-damarların remodeling engel nispeten küçük gözenekleri, sahip. Bu çalışmada, PCL vasküler Greftler kalın elyaf (5-6 µm) ve daha büyük gözenekler (~ 30 µm) ile modifiye işleme tekniği kullanarak fabrikasyon. Uzun vadeli performansı greft implantasyonu bir sıçan abdominal aort modeli tarafından incelendi. Ultrason analiz Greftler patent anevrizması veya stent implantasyonu bile 12 ay sonra meydana gelen olmadan kaldı gösterdi. Macroporous yapısı hücre ingrowth geliştirilmiş ve böylece 3 ayda yeniden doku terfi. Daha da önemlisi, olumsuz, 12 ay sonra greft duvar içinde kireçlenme gibi şeklinin değiştiğine dair işaret yok oldu. Bu nedenle, electrospun PCL vasküler Greftler değiştirilmiş macroporous işleme ile bir arter yerine uzun vadeli implantasyon için olmak potansiyel tutun.

PCL Greftler 3 ay ve 12 ay post-operatively explanted ve hematoksilen eozin (H &amp; E) için standart histolojik teknikler Masson trichrome, Verhoeff-van Gieson (VVG), Von Kossa ve α-SMA için boyama ayirt analiz, MYH, vWF ve elastin. Histolojik görüntüleri dik bir mikroskop kullanarak alındı ve ﬂuorescence mikroskop kullanarak ayirt görüntüleri alındı.
Tüm verileri ± SD demek gibi ifade edildi Eşleştirilmiş iki kuyruklu öğrenci ...

Burada, PCL vasküler Greftler kalın elyaf ve iri gözenekli ile imal ve abdominal aort değiştirme bir sıçan modelinde vivo içinde performansını değerlendirmek için bir iletişim kuralı tanımlamak için modifiye electrospinning yöntemi mevcut.

Bir sıçan modelinde en iyi duruma getirilmiş yapısı ile Electrospun vasküler greft implantasyonu

Here, we present a protocol to fabricate macroporous PCL vascular graft and describe an evaluation protocol by using a rat model of abdominal aorta ...

Bu cerrahi müdahalenin genel amacı, elektroeğrilmiş bir vasküler grefti bir sıçan abdominal aortuna nakletmek ve greftin uzun vadeli performansını değerlendirmektir. Bu yöntem, Profesör Deling Kong ve grubumuzdaki diğer meslektaşları tarafından kurulmuştur ve elektroeğrilmiş vasküler greftlerin çalışmasında, greftin yapısı ve yüzey özelliklerinin vasküler rejenerasyon üzerindeki etkisi gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, iyi tekrarlanabilirliğe ve yüksek hayvan hayatta kalma oranına sahip olmasıdır.Ayrıca, hayvan modelinin düşük maliyetle yönetilmesi kolaydır. Bu çalışma meslektaşımız Doktor Wang tarafından yürütülecek. Başlamak için, polikaprolaktonu 1 ila 5 metanol ve kloroform karışımı içinde çözerek ve oda sıcaklığında 12 saat karıştırarak polimer çözeltisini hazırlayın.Polimer çözeltisini 10 mililitrelik bir cam şırıngaya yükleyin ve künt 21 gauge iğne ile donatın. Ardından, toplama aletinin üzerine paslanmaz çelik bir mandrel yerleştirin ve uygun şekilde topraklandığından emin olun. %25 polikaprolakton çözeltisi için iğne ucundan kollektöre olan çalışma mesafesini 17 santimetreye ayarlayın.Ardından, şırınga pompasındaki akış hızını saatte sekiz mililitreye ayarlayın. Ardından, güç kaynağındaki voltajı 11 kilovolta ayarlayın ve uygun elyaf dağılımı için elektroeğrilmiş elyafları toplamak için mandrel eğirme kuvvetini 40 RPM'de başlatın. Artık her şey ayarlandıktan sonra, elektroeğrilmiş lifleri toplamaya başlamak için güç kaynağını ve şırınga pompasını açın.4.5 dakika sonra şırınga pompasını, güç kaynağını ve mandrel motorunu kapatın. Greftin başlıkta bir saat kurumasını bekleyin. Ardından, mutlak alkol kullanarak grefti mandrelden çıkarın ve kalan çözücüyü çıkarmak için gece boyunca vakuma koyun.Grefti etilen oksit ile sterilize edin ve steril bir biyolojik muhafaza başlığında kurumasını bekleyin. Standart teknikleri kullanarak, greftlerin lümeninin SEM görüntülerini elde edin ve bunları ImageJ'ye aktarın. Numuneler arasında tutarlılık sağlamak için her görüntüde hem elyaf çapını hem de ortalama gözenek boyutunu ölçmek için ölçüm araçlarını kullanın.Greft malzemesinin mekanik özellikleri hakkında bilgi edinmek için önce boru şeklindeki bir iskeleyi bir tıraş bıçağı kullanarak üç milimetrelik bölümlere kesin. Ardından, iskelelerin kalınlığını ölçmek için kumpas kullanın. Ardından, iskeleleri, tutamaklar arasında bir milimetre olacak şekilde bir çekme test makinesinin kulplarına yükleyin.İskeleleri yırtılana kadar dakikada 10 milimetre hızında eksenel olarak tutun. Numuneler için hem çekme mukavemetini hem de nihai kopma uzamasını kaydettiğinizden emin olun. Ameliyattan önce, implantasyon ameliyatından 24 saat önce 240 ila 270 gram ağırlığındaki hızlı erkek Sprague Dawley sıçanları.Fareyi uyuşturun ve ekteki metin protokolünde açıklandığı gibi ameliyat için hazırlayın. Sıçanın gevşemiş kaslara ve sabit nefes almaya sahip olduğundan emin olarak yeterli anesteziyi onaylayın. Ardından, fareyi ameliyat mikroskobunun altına sırtüstü pozisyonda yerleştirin.Cerrahi makas kullanarak dört ila beş santimetre uzunluğunda orta hat laparotomi kesisi yapın ve karın boşluğunu ortaya çıkarın. Bağırsakları dikkatlice geri çekin ve tuzlu su çözeltisi ile nemlendirilmiş gazlı bezle sarın. Ameliyat mikroskobundan bakarken, abdominal aortu bitişik dokulardan soyun.9-0 monofilament naylon sütürler kullanarak inen aortun tüm küçük dallarını tanımlayın ve bağlayın. Daha sonra, aortun izole edilmiş bir bölümünü bir santimetreye kadar klemplemek için vasküler kelepçeler kullanın. Ardından, abdominal aortu kelepçeler arasından geçirmek için bir çift mikro makas kullanın.Kalan kanı çıkarmak için aortun iki ucunu heparinize salin solüsyonu kullanarak yıkayın. Mikro makas kullanarak klemplenmiş aortun adventitiasını soyun. Ardından, sterilize edilmiş greftin bir santimetre uzunluğundaki bir bölümünü, aortun çıkarılan bölümünün oluşturduğu boşluğa yerleştirin.9-0 monofilament naylon sütürler kullanarak, proksimal tarafın saat dokuz, saat üç, 12 ve ardından saat altı pozisyonunda sekiz şeklinde bir sütür deseni kullanarak dört anastomoz oluşturun. Daha sonra, proksimal taraftaki dikişlerin her biri arasında diğer dört anastomozu oluşturun. Ameliyat mikroskobu altında sekiz dikiş arasındaki eşit aralığı gösterecek şekilde grefti dikey olarak yerleştirin.Proksimal sütürü bitirdikten sonra, işlemi distal tarafta tekrarlayın. Greft takıldıktan sonra, kanın grefte akmasına izin vermek için distal klempi çıkarın, ardından proksimal klempi çıkarın. Steril bir pamuk topu kullanarak, dikiş noktalarında gözlenen kanamayı durdurmak için basınç uygulayın.Hemostaz oluşana kadar yaklaşık üç dakika basın. Daha sonra, bağırsakları karın boşluğuna geri koyun ve gentamisin içeren ılık fizyolojik tuzlu su çözeltisi kullanarak karın boşluğunu yıkayın. Daha sonra kas ve cilt katmanlarında 3-0 naylon dikiş kullanarak karın duvarını dikin.Ameliyattan sonra insizyonda iyot kullanın. Fareyi tamamen iyileştikten sonra başkalarının şirketine iade edin. Elektrospinning solüsyonundaki polikaprolakton konsantrasyonu, greftlerin hem lif çapını hem de mekanik özelliklerini etkileyebilir.Daha yüksek konsantrasyonlu %25'lik çözelti, %10'luk çözeltiden daha kalın liflere ve daha büyük gözeneklere sahip vasküler greftler üretir. Üç ay sonra in vivo, histolojik boyama, greftin lümeni üzerinde oluşan yeni bir doku tabakası ve greftin kendisinde önemli miktarda kollajen birikimi ortaya çıkardı. Bu yeni doku tabakası, altında hem düz kas hücrelerinin hem de çevresel olarak hizalanmış elastinin bir tabakası bulunan endotel hücreleri ile kaplıdır.12 ay sonra in vivo, yeni doku iyi entegre olmuş gibi göründü ve endotel ve düz kas tabakaları sağlam kaldı. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa bir ila iki saat içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü takiben, renkli doppler ultrason gibi diğer önlemler, aşağıdaki gibi ek soruları yanıtlamak için gerçekleştirilebilir: Bu videoyu izledikten sonra, elektrospun vasküler greftlerin nasıl üretileceğini iyi anlamalı ve bir sıçan abdominal arter replasman modelinde in vivo performansını değerlendirmelisiniz.

implantation-electrospun-vascular-grafts-with-optimized-structure-rat

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Burada, atriyoventriküler (AV) bir yetişkin Lewis sıçan oluk mühendislik doku implant kardiyak cerrahi işlem açıklar.

Sıçan Kalp Engineered Doku implantasyonu

Hücresel ve moleküler neotissue oluşumu hakkındaki bilgi geliştirmek için, TEVG bir fare modeli yakın zamanda geliştirilmiştir. Greftler C57BL / 6 farelerinde Infrarenal vena kava araya girme greft olarak implante edildi. Bu model bizim klinik araştırmada elde edilenlere benzer sonuçlar elde, ama çok kısaltılmış zaman zarfında.

Fare Modeli Inferior Vena Cava İnterpozisyon Greft İmplantasyonu

Burada, biz çift tohumlama kısmen uyarılmış pluripotent kök hücre ile farelere aşılama için fonksiyonel doku mühendisliği gemi greft oluşturmak için bir protokol mevcut (PiPSC) - Bir decellularized damar iskele biyoreaktör üzerinde elde edilen endotel hücreleri - düz kas hücreleri ve PiPSC türetilmiş.

Bir Fare Modeli Doku mühendisliği Kapların Üretimi ve Tırnak

Hayvan modelleri, doku mühendisliği yapılmış greftlerin değerlendirilmesi için önemli araçlardır. Bu makale, ön çapraz bağ dokusu mühendisliğinde kullanılmak üzere elektroeğrilmiş biyobozunur polimer greft hazırlama protokolünün yanı sıra bir sıçan modelinde implantasyon için bir cerrahi protokol sunmaktadır.

Engineered Ön Çapraz Bağ Greftlerinin Değerlendirme Atimik Rat Modeli

Bu izole edilmiş ve iyi karakterize edilmiş bir ortamda in vivo damarlanmayı analiz etmek için bir model olarak bir arteriovenöz (AV) döngü üretilmesi için bir mikro yaklaşımı açıklar. Bu model yalnızca anjiyojenezde araştırılması için yararlıdır, ama aynı zamanda en iyi şekilde mühendislik eksenel vaskülarize ve transplante dokuların için uygundur.

Bir Küçük Hayvan Modelinde Arteriovenöz (AV) Döngü Anjiogenez ve Vaskülarize Doku Mühendisliği Eğitim için

Bu video, sıçanlarda venöz interpozisyon cerrahisi sonrası miyointimal hiperplazi gelişimini incelemek için bir model göstermektedir.

Ven interpozisyonu Model: baypas açıklığının Eğitim için uygun bir model

Özofagus rekonstrüksiyonu zorlu bir işlemdir ve özofagus mukozası ve kasının yenilenmesini sağlayan ve yapay greft olarak implante edilebilen doku mühendisliğiöz bir özofagusun geliştirilmesi gereklidir. Burada, iskele imalatı, biyoreaktör ekimi ve çeşitli cerrahi teknikler de dahil olmak üzere yapay bir özofagus oluşturmak için protokolümüzü saklı yız.

Sıçanlarda Çevresel Özofagus Rekonstrüksiyonu için Doku-Mühendislik Greft

Bu protokol, ven greftleri kullanılarak revaskülarizasyon cerrahisi sonrası venöz intimal hiperplaziyi zayıflatmak için stratejiler geliştirmek için damarları arteriyel kan basıncına maruz kalarak deneysel olarak venöz intimal hiperplazi yaratmayı amaçlamaktadır.

Arteriyel Kan Basıncı Altında İntimal Hiperplazi değerlendirmek için Ven Greftleri kullanarak Revaskülarizasyon Cerrahisi Taklit Bir Tavşan Venöz Interposition Modeli

Bu çalışma, kritik aort darlığı veya hipoplastik sol kalp sendromu gibi konjenital kardiyak defektlerde görüldüğü gibi, endotelyal-mezenkimal geçişe bağlı fibrozun bir hayvan modelini sunar, bu da ayrıntılı histolojik doku değerlendirmesine, düzenleyici sinyal yollarının tanımlanmasına ve tedavi seçeneklerinin test edilmesine olanak tanır.

Endotelyal-mezenkimal geçiş çalışması için yenidoğan heterotopik sıçan kalp nakli modeli

Burada, doku mühendisliği yapılmış bir vasküler greftin manşet tekniği kullanılarak fare karotis arterine implantasyonu için bir protokol sunulmakta ve vasküler doku rejenerasyon mekanizmalarının araştırılması için uygun bir hayvan modeli sağlanmaktadır.

Fare Karotis Arterine Manşet Tekniği ile Doku Mühendisliği Yapılmış Vasküler Greft İmplantasyonu

Bu çalışma, femoral arterlerdeki küçük çaplı greftleri değerlendirmek için bir domuz modeli sunmaktadır. Model, insan vasküler dinamiklerini taklit eder ve greft açıklığını, hemodinamiği ve vasküler yeniden şekillenmeyi kapsamlı bir şekilde değerlendirir. Vasküler greftleri test etmek ve Doppler ultrason ve anjiyografi ile izlemek için değerli bir platform sunar.

Küçük çaplı vasküler greftleri test etmek için bir domuz modelinde femoral vasküler greft implantasyonu

Öğrenin, sıçan abdominal aortasında elektrospun vasküler greft implantasyonu ve uzun vadeli performans değerlendirmesi için optimize edilmiş yöntemi. Bu teknik, yüksek hayvan sağkalım oranı ve iyi tekrarlanabilirlik sunar.

Bir sıçan modelinde en iyi duruma getirilmiş yapısı ile Electrospun vasküler greft implantasyonu

Daha fazla video keşfet