Name: Embriyolardan kromozomların böcek Spermatocytes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-22T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 45 s
Description: Öğrenin canlı hücrelerde kromozomları mikromanipülasyonla yeniden konumlandırma yöntemini. Bu ölümcül olmayan teknik, gerilim uygulayarak hücre biyolojisinde iğ iplikçik kontrol noktasını incelemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Jessica Hall onu değerli tartışma için teşekkür ederiz.

1. embriyolardan için birincil böcek Spermatocyte hücre kültürü hazırlanması
<ol><li>Slayt hazırlama<ol>
<li>75 x 25 mm cam slayt slayt Merkezi Kes şunu 20 mm çapında dairesel delik olan elde edilir. Not: Bu pencere cam merkezi bir deliği olan bir cam slayt boyutu kadar tek bir sayfaya gelen kesilmiş.</li>
		<li>25 x 25 mm #1.5 coverslip koşmak-den geçerek Bunsen burner alev 2 s.</li>
		<li>Cam slayt delik kenarındaki vakum gres uygulayın</li>
		<li>Coverslip olduğu gibi resim 1delik yerleştirin. O tuşuna basın ve sıkı bir mühür oluşturmak emin olun.</li>
		<li>Cam slayt flip ve diseksiyon de halocarbon petrol ile doldurmak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Spermatocyte kültür hazırlama için görüş üstünde mikroskop Not: Burada, çekirge veya kriket hücre kullanarak kültür hazırlama yöntemi açıklanmaktadır. Diğer eklembacaklılar içeriğini testis benzer bir yöntem kullanarak kültürlü.<ol>
<li>Subadult erkek cırcır (veya çekirge) elde edilir. Soğuk-anestezi için yaklaşık 2 dakika için bir buzdolabında yaşayan böcek yer. Diseksiyon makası kullanarak, hızlı bir şekilde dorsal yüzey karın kanat tomurcukları doğrudan arkasında uzun eksenine paralel kesti. El ile yavaşça itin testis exoskeleton (Şekil 2) kesim ile karın sık.</li>
		<li>Forseps kullanarak, izole testis de halocarbon yağ içeren bir diseksiyon yerleştirin.</li>
		<li>Gerekirse, testis diseksiyon mikroskop altında görüntüleyin. Onları testis kapsayan herhangi bir yağ kaldırma, ince sivri uçlu forseps kullanarak daha küçük parçalara bölün ve ince sivri uçlu forseps (Şekil 3A ve 3B) testisler eritmek için kullanıyorum. Testis içeriği petrol, coverslip (Şekil 3 c) yüzeyi altında yayılır.</li>
		<li>Testis yayılmış kısmı gözler (Şekil 3 c) zorlukla fark kadar testisler içeriği yaymak. Ek petrol yüklü ayrılma wells gerekirse kullanın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. embriyolardan
<ol><li>Microneedle imalatı<ol>
<li>(Dış çapı, 0,65 mm iç çapı 0,85 mm) cam tüp bir ucunu Bunsen burner alev içinde yerleştirin. Cam boru sonuna 150 ° açı oluşur ve bir genişletilmiş alan dar cam boru oluşturulur böyle bir şekilde çekin. Tüp ince bölgede break açıdan uzanan ince yaklaşık 10 mm uzun (Şekil 4A) bölgedir.</li>
		<li>Bir microforge kullanarak (Powell27 göre özel ya da ticari olarak kullanılabilir-bkz: Malzemeler tablo), cam ucundaki eritmek için sıcak platin tel için cam iğne ucu dokunma. Formu bir iğne ve microforge (Şekil 4B) platin tel arasında yaklaşık 45° açı. Cam parçalarından uzak sıcak tel tel ≤1.5 mm cam iğne ucundaki ince ucu şekillendirme, kaloriferi kapatma sırasında çek. Not: Uç çapı ölçmek zor olacak ama bu uzunluğu ucu embriyolardan için de uygun bir firma ama esnek iğne üretmek olasıdır. Alternatif olarak, bir micropipette çektirmenin cam boru (deneyci bir uygun şekilde sert ama esnek microneedle iş için üretmek için farklı çekerek yemek tarifleri test etmek için vardır) bir uygun uç çapı ile oluşturmak için kullanılabilir. İğne benzer şekilde için yukarıda açıklanan yöntemine göre oluşturulan manipülasyon iğne şeklinde bir tutucu yerleştirilmiş olabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Micromanipulator konumlandırma<ol>
<li>Hazırlanmış slayt bir ters, faz kontrast mikroskobu sahnesinde yerini. Sayesinde bunun bölünen hücreler bulmak ve onları görüş alanı içinde merkezi. Olası en düşük büyütme kullanarak hücreleri üzerinde odaklanın. Not: Biz bir 16 X faz kontrast objektif kullandık.</li>
		<li>Microneedle iğne bağı micromanipulator üzerine yerleştirin.</li>
		<li>İğne ucu (Şekil 5B) ışıkla aydınlatılmış el ile microneedle mikroskop ışık yolunu gösterecek şekilde konumlayın.</li>
		<li>Mikroskop hangi hücreleri yalan uçak yukarıda birkaç odak uçaklar odaklan.</li>
		<li>Oyun çubuğu denetleyicisi düşük duyarlılık X - ve y-axes içinde iğne gölgesi bulmak için birkaç kez kullanma microneedle yeniden konumlandırın. İpucu konumunu görünene kadar konumunu yeniden ayarlamak devam edin. İğne ucu odakta olana z ekseni boyunca iğne konumunu ayarlamak.</li>
		<li>Hücrelerin yönlendirmesi, sonra hücreleri sadece odağını ve görünmez olması hücre uçak üstünde mikroskop odak. Böylece ucu odak bu odak düzlemi içinde iğne konumunu yeniden düzenlemek.</li>
		<li>Mikroskop büyütme gerektiği gibi ayarlayın. Not: Biz embriyolardan için 100 X 1.4 sayısal diyafram (NA) faz kontrast objektif kullandık.</li>
		<li>Hücreleri sadece odağını ve görünmez olması daha yüksek büyütme objektif kullanarak hücreleri üzerinde odaklanarak sonra hücre uçak üstünde mikroskop tekrar odaklan. Böylece ucu odakta ve hangi hücreleri yalan uçak üzerinde odak düzlemi merkezli bir daha yüksek hassasiyet ayarı kullanarak, iğne konumunu yeniden düzenlemek.</li>
		<li>Görüş alanı ortasında kalırlar bu yüzden konumlarını ayarlayarak hücreleri üzerinde yönlendirmesi. İğne şimdi embriyolardan için hazırdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Embriyolardan kromozom<ol>
<li>Yüksek büyütme oranında iyi konumlandırma gelince aynı hassasiyet ayarı kullanarak, microneedle kontrol ve hücre içinde kromozomlar itip için joystick'i kullanýn. İğne ucu hücreleri uçak yukarıda tut.</li>
		<li>Çekin veya bir kromozom taşımak için hücrenin üstündeki bir kromozom odaklanmak. Not: Bu kromozomlar yakın coverslip iğne ve hücre patlama deneyi sona coverslip eziyet olası kılan işlemek manipüle kromozomlar için daha kolaydır.</li>
		<li>Z-ekseni üzerinde joystick odak ve o zaman hareket iğne ucu x joystick ile iğne ucunu getirmek için ayarlamak ve Y. manipüle edilebilir ve manipülatör repositi için izin vermek için istenilen yönde itmek için doğrudan kromozom üzerinde iğne ucu yerleştirin kromozom üzerinde.</li>
		<li>Bağlı olarak ne kadar kromozom itilir, gerginlik kromozom için uygulama veya bir kromozom mil üzerinden ayırmak için yeterli gerilim uygulanır. Bir kez bir kromozom bir mil kaldırılır, hücre içinde herhangi bir yere yerleştirebilirsiniz.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Chambers, R. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/jez.1400230302">Microdissection studies II. The cell aster: a reversible gelation phenomenon.</a> Journal of Experimental Zoology. 23 (3), 483-505 (1917).</li>
<li>Carlson, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdissection+studies+of+the+dividing+neuroblast+of+the+grasshopper%2C+Chortophaga+viridifasciata%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Microdissection studies of the dividing neuroblast of the grasshopper, Chortophaga viridifasciata.</a> Chromosoma. 5 (3), 199-220 (1952).</li>
<li>Nicklas, R. B., Staehly, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome+micromanipulation.+I.+The+mechanics+of+chromosome+attachment+to+the+spindle%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Chromosome micromanipulation. I. The mechanics of chromosome attachment to the spindle.</a> Chromosoma. 21 (1), 1-16 (1967).</li>
<li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome+micromanipulation.+II.+Induced+reorientation+and+the+experimental+control+of+segregation+in+meiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Chromosome micromanipulation. II. Induced reorientation and the experimental control of segregation in meiosis.</a> Chromosoma. 21 (1), 17-50 (1967).</li>
<li>Nicklas, R. B., Koch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome+micromanipulation.+3.+Spindle+fiber+tension+and+the+reorientation+of+mal-oriented+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Chromosome micromanipulation. 3. Spindle fiber tension and the reorientation of mal-oriented chromosomes.</a> Journal of Cell Biology. 43 (1), 40-50 (1969).</li>
<li>Nicklas, R. B., Ward, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elements+of+error+correction+in+mitosis%3A+microtubule+capture%2C+release%2C+and+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Elements of error correction in mitosis: microtubule capture, release, and tension.</a> Journal of Cell Biology. 126 (5), 1241-1253 (1994).</li>
<li>Li, X., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitotic+forces+control+a+cell-cycle+checkpoint%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mitotic forces control a cell-cycle checkpoint.</a> Nature. 373 (6515), 630-632 (1995).</li>
<li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurements+of+the+force+produced+by+the+mitotic+spindle+in+anaphase%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Measurements of the force produced by the mitotic spindle in anaphase.</a> Journal of Cell Biology. 97 (2), 542-548 (1983).</li>
<li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+forces+that+move+chromosomes+in+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biophysics+and+Biophysical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">The forces that move chromosomes in mitosis.</a> Annual Review of Biophysics and Biophysical Chemistry. 17, 431-449 (1988).</li>
<li>Nicklas, R. B., Koch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome+micromanipulation.+IV.+Polarized+motions+within+the+spindle+and+models+for+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Chromosome micromanipulation. IV. Polarized motions within the spindle and models for mitosis.</a> Chromosoma. 39 (1), 1026(1972).</li>
<li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+chromosomes+and+centrosomes+on+spindle+assembly+as+observed+in+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The impact of chromosomes and centrosomes on spindle assembly as observed in living cells.</a> Journal of Cell Biology. 129 (5), 1287-1300 (1995).</li>
<li>Nicklas, R. B., Lee, G. M., Rieder, C. L., Rupp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+cut+mitotic+spindles%3A+clean+cuts+and+stable+microtubules%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Mechanically cut mitotic spindles: clean cuts and stable microtubules.</a> Journal of Cell Science. 94 (Pt 3), 415-423 (1989).</li>
<li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosomes+initiate+spindle+assembly+upon+experimental+dissolution+of+the+nuclear+envelope+in+grasshopper+spermatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Chromosomes initiate spindle assembly upon experimental dissolution of the nuclear envelope in grasshopper spermatocytes.</a> Journal of Cell Biology. 131 (5), 1125-1131 (1995).</li>
<li>Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome+distribution%3A+experiments+on+cell+hybrids+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+of+London+B%22%5BJournal%5D)">Chromosome distribution: experiments on cell hybrids and in vitro.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London B. 227 (955), 267-276 (1977).</li>
<li>Paliulis, L. V., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reduction+of+chromosome+number+in+meiosis+is+determined+by+properties+built+into+the+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The reduction of chromosome number in meiosis is determined by properties built into the chromosomes.</a> Journal of Cell Biology. 150 (6), 1223-1232 (2000).</li>
<li>Church, K., Nicklas, R. B., Lin, H. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2114567/">Micromanipulated bivalents can trigger mini-spindle formation in Drosophilamelanogaster spermatocyte cytoplasm.</a> Journal of Cell Biology. 103 (6), 2765-2773 (1986).</li>
<li>Forer, A., Koch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+autosome+movements+and+of+sex-chromosome+movements+on+sex-chromosome+segregation+in+crane+fly+spermatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Influence of autosome movements and of sex-chromosome movements on sex-chromosome segregation in crane fly spermatocytes.</a> Chromosoma. 40 (4), 417-442 (1973).</li>
<li>Camenzind, R., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+non-random+chromosome+segregation+in+spermatocytes+of+Gryllotalpa+hexadactyla.+A+micromanipulation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">The non-random chromosome segregation in spermatocytes of Gryllotalpa hexadactyla. A micromanipulation analysis.</a> Chromosoma. 24 (3), 324-335 (1968).</li>
<li>Ault, J. G., Felt, K. D., Doan, R. N., Nedo, A. O., Ellison, C. A., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-segregation+of+sex+chromosomes+in+the+male+black+widow+spider+Latrodectus+mactans+%28Araneae%2C+Theridiidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Co-segregation of sex chromosomes in the male black widow spider Latrodectus mactans (Araneae, Theridiidae).</a> Chromosoma. 126 (5), 645-654 (2017).</li>
<li>Felt, K. D., Lagerman, M. B., Ravida, N. A., Qian, L., Powers, S. R., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+the+amphitelically+attached+univalent+X+chromosome+in+the+spittlebug+Philaenus+spumarius%5BTitle%5D)+AND+%22Protoplasma%22%5BJournal%5D)">Segregation of the amphitelically attached univalent X chromosome in the spittlebug Philaenus spumarius.</a> Protoplasma. 254 (6), 2263-2271 (2017).</li>
<li>Golding, A. E., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Karyotype%2C+sex+determination%2C+and+meiotic+chromosome+behavior+in+two+pholcid+%28Araneomorphae%2C+Pholcidae%29+spiders%3A+implications+for+karyotype+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Karyotype, sex determination, and meiotic chromosome behavior in two pholcid (Araneomorphae, Pholcidae) spiders: implications for karyotype evolution.</a> PLoS One. 6, e24748(2011).</li>
<li>Doan, R. N., Paliulis, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micromanipulation+reveals+an+XO-XX+sex+determining+system+in+the+orb-weaving+spider+Neoscona+arabesca+%28Walckenaer%29%5BTitle%5D)+AND+%22Hereditas%22%5BJournal%5D)">Micromanipulation reveals an XO-XX sex determining system in the orb-weaving spider Neoscona arabesca (Walckenaer).</a> Hereditas. 146 (4), 180-182 (2009).</li>
<li>Paliulis, L. V., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micromanipulation+of+chromosomes+reveals+that+cohesion+release+during+cell+division+is+gradual+and+does+not+require+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Micromanipulation of chromosomes reveals that cohesion release during cell division is gradual and does not require tension.</a> Current Biology. 14 (23), 2124-2129 (2004).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biology+Micromanipulator.+DIY+High+Precision+Micromanipulator%22">Biology Micromanipulator. DIY High Precision Micromanipulator</a>. , 
 <a target="_blank" href="http://micromanipulator.scholar.bucknell.edu">http://micromanipulator.scholar.bucknell.edu</a> (2018).</li>
<li>Ellis, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezoelectric+micromanipulators%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Piezoelectric micromanipulators.</a> Science. 138 (3537), 84-91 (1962).</li>
<li>Ellis, G. W., Begg, D. A. Chromosome micromanipulation studies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEllis%2C+GW+%22Mitosis%2FCytokinesis%22">Mitosis/Cytokinesis</a>. Zimmerman , A. M., Forer, A. , Academic Press. 155-179 (1981).</li>
<li>Powell, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microforge+attachment+for+the+biological+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Journal.+Royal+Microscopical+Society%22%5BJournal%5D)">A microforge attachment for the biological microscope.</a> Journal. Royal Microscopical Society. 72 (4), 214-217 (1953).</li>
<li>Alsop, G. B., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtubules+continuously+dictate+distribution+of+actin+filaments+and+positioning+of+cell+cleavage+in+grasshopper+spermatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Microtubules continuously dictate distribution of actin filaments and positioning of cell cleavage in grasshopper spermatocytes.</a> Journal of Cell Science. 117 (Pt 8), 1591-1602 (2004).</li>
<li>Zhang, D., Nicklas, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaphase%27+and+cytokinesis+in+the+absence+of+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Anaphase' and cytokinesis in the absence of chromosomes.</a> Nature. 382, 466-468 (1996).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Uygulama ile kromozomlar hücre içinde hareket etme ikinci doğa olabilir. Yeterince sert ve yeterince ince uçlu iğneler "püf noktası," zor imalatı, ama bu yetenek aynı zamanda uygulama ile geliyor. Halocarbon yağda taşındığında deforme ince iğneler hücrede kromozomlar itmek için yararlı olmayacaktır. Çok iğneler onların ipuçları görülebilir ve gibi büyük olarak 1/3 bir kromozom genişliğinin (ya da daha büyük) hücre öldürmek çok büyük olasılıkla künt. Kromozomlar itmek yeterince iyi ama çok hücre öldürmek olarak künt bir i...

Embriyolardan bir kromozom congression, iğ denetim noktası ve anafaz kromozom taşımalar için mekanizma parçaları ortaya koymuştur. Embriyolardan deneylerin sonuçlarını açıklayan ilk yayın Robert Chambers1tarafından yapıldı. Chambers mekanik bir micromanipulator bir ekli cam iğneyle sitoplazma, farklı hücre tipleri birkaç soruşturma eskiden. Kromozomlar ve birçok diğer hücresel bileşenleri canlı hücrelerdeki görselleştirme izin kontrast yöntemleri ne yazık ki, o zaman mevcut değildi, bu yüzden Chambers deneyler gibi hücresel bileşenleri yeniden konumlandırma etkileri göstermiyor. Kromozom konumu değişmiş erken micromanipulations Chambers aparatı böyle manipülasyonlar anafaz çekirge neuroblasts2 kromozom silah konumunu değiştirmek gösterilen iğ midzone anafaz hücrelerdeki süpürme eskiden . Nicklas ve işbirlikçileri kromozom3germe, onları iğ ayırma ve sabitleme bir hale gelmesini3,4, inducing kromozom, iyi micromanipulations gerçekleştirmek için ilk idi bir gerginlik kromozom5,6,7uygulama ve anafaz8,9mil sayısı tarafından üretilen kuvvetleri ölçerek malorientation. Diğer iş Nicklas laboratuvar tarafından sitoplazmik granüller işlenmiş10 de olabileceğini ve centrosomes embriyolardan11tarafından yeniden konumlandırılmış gösterdi. Embriyolardan sadece kromozomlar ve diğer hücresel bileşenleri taşımak için kullanışlı değildir. Embriyolardan iğne temiz bir şekilde mitotik iğ demembranated hücreler12 yoluyla kesebilir veya nükleer zarf13dağıtılması için kullanılabilir. Buna ek olarak, bitişik hücreleri embriyolardan14,15tarafından erimiş.
Böyle bir yelpazede yapılabilir ilginç deneyler ile embriyolardan kullanarak, ilk bakışta şaşırtıcı embriyolardan deneyler çok az kromozom biyologlar tarafından yapılmıştır. Bu eksikliği için bir nedeni omurgalı dokulardan türetilir ve kromozom hareketleri eğitimi için yaygın olarak kullanılan mitotically bölme kültürlü hücreleri micromanipulate için son derece zor olmasıdır. Bu doku kültürü hücreler genellikle bir kortikal sitoiskeleti "embriyolardan engel" iğne ve kromozomlar da iğne tarafından erişilemiyor veya bir hücre rüptürü ve ölüm önde gelen hücreye iğne biler var. Biz ve embriyolardan, kullanan diğer Denemecileri embriyolardan için mükellef olması için eklem bacaklılar hücreleri bulduk. Eklem bacaklılar spermatocytes kolayca halocarbon yağ tabakası altında yayılır ve daha az güçlü bir kortikal sitoiskeleti hücre membran hücre bölünmesi sırasında temel gibi görünüyor. Böylece, eklem bacaklılar testis meiotically bölünmesi hücre (spermatocytes) iyi bir kaynağı sağlamak ve mitotically bölme (spermatogonia) embriyolardan için kolayca erişilebilir kromozom ile hücreleri. Düzenleme sırasında sabit bir çekirge spermatocyte bir seri kesit iğneyi asla hücre zarı nüfuz ortaya; hücre zarının iğne (Nicklas R.B., kişisel iletişim) deforms. Spermatocytes böcek ve örümcek özellikleri bir dizi micromanipulated başarıyla, çekirge, dua eden mantids, meyve sinekleri, Vinç sinekler, cırcır, spittlebugs, pervane, kara dul örümcekler, Bodrum örümcekler ve küre-dokuma örümcekler edilmiştir 3,7,17,18,19,20,21,22. Böcekler kültürlü, mitotically bölme hücrelerden micromanipulated olabilir. Örneğin, birincil bir kültür çekirge neuroblasts kromozomlar kolayca-ebilmek var olmak micromanipulated2,23kromozom var. Biz bu hücreler ile teknik test etmedim ama mevcut Drosophila elde edilen satırları kültürlü ve diğer böcekler-ecek da var olmak micromanipulatable, şüpheli. Biz nasıl çekirge ve cırcır böcekleri hücre bölünmesi için embriyolardan hazırlanabilir gösterir. Cırcır böcekleri en evde beslenen hayvan stok--dan yılın herhangi bir zamanda elde etmek kolaydır. Çekirge, sadece sürece araştırmacı bir laboratuvar koloni erişebilir, ama kullanılan türler (Melanoplus sanguinipes) kolayca hücreleri ve uzun, kolay manipüle kromozomlar basık yaz aylarında kolayca elde edilebilecek.
Başka bir nedeni neden embriyolardan deneyler biyologlar küçük bir avuç tarafından yapılmıştır kromozomlar iyi hareket micromanipulators pazarda nadiren kullanılabilir olmasıdır. Biz bir joystick kontrol edilen piezoelektrik micromanipulator hiçbir titreşim, drift veya gecikme arasında joystick hareketi ve iğne hareketi ile iğne hareketi kontrol eder ama manipülatörler diğer türleri de başarıyla kromozomlar zorlayabilir bulduk çevresinde hücre. Eski teknolojiyi kullandıkları rağmen Ellis ve Begg25,26 tarafından tasarlanmış micromanipulators kromozomlar, embriyolardan için idealdir. Piezoelektrik micromanipulators mevcut ve yaygın olarak kullanılan Elektrofizyoloji içinde. Ancak, bu micromanipulators genellikle joystick kontrol edilen değildir. Joystick kontrolü için başarılı bir embriyolardan gerekli düzgün hareketleri anahtarıdır ve çok özel bir joystick için kromozom embriyolardan işe Şu anda mevcut piezoelektrik micromanipulators yapmak için inşa edilmelidir. En iyisi joystick kontrol edilen piezoelektrik micromanipulators joystick hareketi doğrudan bir iğne hareket çevirir doğrudan pozisyon kontrol var.
Yeni tasarlanmış piezoelektrik micromanipulator piyasada bulunan yerlerinden kolayca değiştirilebilir ve bazı küçük 3-b yazdırılan bileşenleri inşa ve de kromozom embriyolardan24için çalışıyor. Micromanipulator ayarlanabilir duyarlılık, el ile kaba konumlandırma ve hiçbir titreşim, drift veya doğrudan pozisyon kontrol iğne ve iğne hareket gecikme vardır. Bilim adamları talimatları mevcut online24kullanarak micromanipulator gerçekleştirebilmesi. Aşağıda bir birincil spermatocyte hücre kültür hazırlama ve micromanipulating yöntemler vardır o kültür hücreleri içinde kromozomlar.

<table><tbody><tr><td>VWR mikro kapak camı</td><td>VWR</td><td>48366 249</td><td>25 mm x 25 mm, hayır 1.5</td></tr><tr><td>Dow Corning Yüksek Vakumlu Gres</td><td>VWR</td><td>AA44224-KT</td><td></td></tr><tr><td>KEL-F Yağ #10</td><td>Ohio Valley Özel Kimyasal</td><td>10189</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiseksiyon Makası, Paslanmaz Çelik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3271-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 ince foreceps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>0,85 mm dış çap, 0,65 mm iç çap Pyrex cam tüp&nbsp;</td><td>Drummond Scientific</td><td>Özel sipariş -</td> 10X veya 16X düşük büyütme objektifi ve 60X veya 100X yüksek büyütme objektifi ile Ters, Faz kontrast mikroskobu talep <td></td>etmek için arayın</tr><tr><td></td><td>Özel yapım veya Narashige</td><td>MF-900</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td> mikromanipülatör özel yapım veya özel piezo kontrollü joystick PCS-6300 ile Burleigh PCS-6000 <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

embriyolardan kromozomların böcek spermatocytes

Micromanipulation of Chromosomes in Insect Spermatocytes

Kromozomların embriyolardan kromozom congression, iğ denetim noktası ve anafaz kromozom taşımalar için mekanizma aydınlatıcı için gerekli bir yöntem olmuştur ve ne kromozom hareketlerini kontrol anlamanın anahtarı olmuştur hücre bölünmesi sırasında. Yetenekli bir biyolog bir micromanipulator kromozomlar iğ, kromozomlar hücrenin içinde yeniden konumlandırmak için ve kuvvetler küçük cam iğne ile çok iyi bir ipucu kullanarak kromozomlar uygulamak için gelen ayırmak için kullanabilirsiniz. Süre tedirginlikler kromozomlar optik yakalama gibi diğer yöntemleri ve diğer kullanımlar bir lazer kullanılarak yapılmış, bugüne kadar başka bir yöntem onlarca yüzlerce mikron az hücre hasar yok olan ölçekte hücresel bileşenleri yeniden konumlandırma sağlar .
Seçim ve özellikle canlı hücre görüntüleme ve embriyolardan, kullanımda çekirge ve kriket spermatocyte birincil kültürlerinin hazırlanması açıklayan kromozomların embriyolardan için uygun hücre hazırlık Burada açıklanan. Buna ek olarak, biz ona bağlı bir cam iğne ile kromozomlar hücrenin ve bir joystick kontrol edilen piezoelektrik micromanipulator kullanımı içinde hareket etmek için kromozomlar sayesinde bunun bölünen hücreler içinde yeniden konumlandırmak için kullanılmak üzere bir iğne inşaatı gösteriyor. Bir örnek sonuç bir kromozom bir mil içinde bir birincil spermatocyte dan ayırmak için ve bu kromozom hücre içinde yeniden konumlandırmak için bir micromanipulator kullanımını göstermektedir.

Şekil 6 2 bitişik çekirge birincil spermatocytes bir örnek embriyolardan embriyolardan olası kullanımlar çeşitli örnekler gösterir. Bu deney yapıldı bir ters, faz kontrast mikroskop kullanarak. 0:00 (gösterilen çırpınış içinde min:s) görüntü manipülasyon önce her iki hücreleri gösterir. Alt hücredeki bir kromozom embriyolardan iğne tarafından uygulanan gerilim altında gösterilir (0:05; siyah ok) ve o zaman tamamen müstakil iğ (0:10; siyah ok). (6:25; sarı ok)...

Bu protokol için seçim ve uygun hücreler embriyolardan için hazırlanması ve piezoelektrik micromanipulator kullanımı bu hücrelerde kromozom yeniden konumlandırmak için açıklar.

Embriyolardan kromozomların böcek Spermatocytes

The micromanipulation of chromosomes has been an essential method for illuminating the mechanism for chromosome congression, the spindle checkpoint, and ...

Bu yöntem hücre biyolojisinde, mil kontrol noktasını tatmin ederken gerilimin ne kadar önemli olduğu ve miosiste kromozom davranışında mil eki üzerindeki rolün ne olduğu gibi anahtar soruların yanıtlatımı na yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, deneycinin canlı hücredeki kromozomlara gerilim uygulamasına veya yeniden konumlandırılmasına olanak tanıyan öldürücü olmayan bir teknik olmasıdır. Başlamak için, merkezinden kesilmiş 20 milimetre çapında dairesel delik ile 75 tarafından 25 milimetrelik bir slayt hazırlayın.Sonra, bir 25 ile 25 milimetre lik bir kapak 1.5 kapak iki saniye boyunca bir bunsen brülör alev ile yarık çalıştırın. Cam kaydıraktaki deliğin kenarına vakum yağı uygulayın. Daha sonra, kapağı deliğin üzerine yerleştirin ve sıkı bir mühür oluşturmak için bastırın.Kaydırağı ters çevirin ve yeni oluşturulan diseksiyonu halokarbon yağıyla doldurun. Bazı yetişkin erkek kriket elde ettikten sonra, doğrudan kanat tomurcukları arkasında, karın uzun eksenine paralel dorsal yüzeyi kesmek için diseksiyon makas kullanın. Daha sonra, yavaşça dış iskelet içinde kesim yoluyla testisleri itmek için karın sıkmak.Forceps kullanarak, diseksiyon kuyusu içine izole testisler ye

micromanipulation-of-chromosomes-in-insect-spermatocytes

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu protokol, mikroenjeksiyon ve yüksek çözünürlüklü görüntüleme kullanımı...

Mitoz incelenmesi için Mikroenjeksiyon Teknikleri Drosophila melanogaster Sinsityal Embriyo

Oosit mayotik olgunlaşması sırasında kromozom segregasyon hataları nedeniyle anöploidi yatkındır. Anöploid yumurta, kısırlık, düşüklere veya gelişimsel bozukluklar, Down sendromu gibi neden olabilir. Burada, yumurta ve mayotik olgunlaşma incelemek ve Ploidi değerlendirmek için yöntemler seçim malzemeleri tanıtmak için yöntemler açıklanmaktadır.

Fare Oosit Mikroenjeksiyon, olgunlaşması ve ploidi Değerlendirmesi

Izole edilmesi ve faz kontrast ve floresan mikroskobu ile görüntüleme için Drosophila testis örnekleri (canlı ve sabit) hazırlanması için yöntemler burada tarif edilmiştir.

Spermatogenez sitolojik analizi: Canlı ve Sabit Hazırlıklar<em&gt; Drosophila</em&gt; Testisler

Kromozom boyama, hücre çekirdeğinin organizasyonunu ve karyotipin evrimini incelemek için yararlı bir yöntemdir. Burada, daha sonra iki ve üç boyutlu floresan in situ hibridizasyon (FISH) için kullanılan tek politen kromozomlarından belirli ilgi alanlarını izole etmek ve güçlendirmek için bir yaklaşım sergiliyoruz.

Sıtma Sivrisineklerinde 2D ve 3D Kromozom Boyama

Mayoz hangi gamet DNA ikileşmesi bir turu ve kromozom ayrışma birbirini izleyen iki tur üzerinden kurulan gelişimsel işlemidir. Memeli mayoz segregasyonun kromozom yayılır hazırlamak için bir teknik kullanarak incelenebilir. Burada, yüzey-yayılım çekirdeği fare spermatocytes üzerinden hazırlama yöntemi göstermektedir.

Fare Spermatocytes segregasyonun kromozom hazırlanması yayılır

Bu tübül squash teknik hızla hücresel bütünlüğünü koruyarak fare spermatocytes geliştirme saytolojik özellikleri değerlendirmek için hedeftir. Bu yöntem tüm aşamalarında spermatogenez çalışma için izin verir ve diğer biyokimyasal ve moleküler biyolojik yaklaşımlar için fare mayoz çalışmanın yanında kolayca uygulanabilir.

Seminifer tübül Squash tekniği fare modeli kullanarak sperma saytolojik analizi için

Nükleer yüzey spreadleri, kekozis sırasında kromozom olaylarını incelemek için vazgeçilmez bir araçtır. Burada zebrabalığı spermatositlerinden profaz I sırasında meyotik kromozomları hazırlamak ve görselleştirmek için bir yöntem göstermek.

Zebrabalığı Spermatositlerinden Meiotik Kromozom Spreadlerinin Hazırlanması

Burada yetişkin fare testislerinden canlı meiotik ve post-meyotik mikrop hücrelerini izole etmek için basit ve etkili bir yöntem salıyoruz. Düşük sitotoksisite, menekşe heyecanlı DNA bağlayıcı boya ve floresan-aktive hücre sıralama kullanarak, bir birçok downstream uygulamaları için son derece zenginleştirilmiş spermatojenik hücre popülasyonları izole edebilirsiniz.

Mor-Heyecanlı Hücre-Geçirgen DNA Bağlayıcı Boya Kullanılarak Murine Spermatojenik Hücrelerin İzolasyon

Burada, CRISPR / Cas9 tabanlı genom düzenlemesi yoluyla genomlarını değiştirmek veya germline dönüşümü yoluyla işaretli transpoze edilebilir elementlerin eklenmesi amacıyla hücre öncesi mısır planthopper embriyolarının toplanması ve mikroenjekte edilmesi için protokoller bulunmaktadır.

Mısır Planthopper Mikroenjeksiyonu, Peregrinus maidis, CRISPR / Cas9 Genom Düzenleme için Embriyolar

Bu makalede, erkek mayotik bölünmesi için değerli bir model olan abdominal cerrahi ve testiküler GSK923295 enjeksiyonu yoluyla CENP-E'nin in vivo inhibisyonu bildirilmiştir. İmmünofloresan, akım sitometrisi ve transmisyon elektron mikroskobu tahlillerini kullanarak, CENP-E inhibisyonunun fare spermatositlerinde kromozom yanlış hizalaması ve genom instabilitesi ile sonuçlandığını gösterdik.

Kinesin-7 CENP-E'nin In Vivo İnhibisyon, İmmünofloresan ve Akım Sitometrisi Kullanılarak Spermatositlerde Fonksiyonel Değerlendirilmesi

Basit anatomileri göz önüne alındığında, Anofel testisleri spermatogenezi incelemek için iyi bir sitolojik model sunar. Bu protokol, bu biyolojik süreci araştırmak için kullanılan bir teknik olan tam montajlı floresan in situ hibridizasyonun yanı sıra sperm üretiminde yer alan genlerde mutasyonları barındıran transgenik suşların fenotipini açıklar.

Anofel Sivrisineklerinde Spermatogenezi İncelemek için Tam Montajlı Floresan In Situ Hibridizasyon

Öğrenin canlı hücrelerde kromozomları mikromanipülasyonla yeniden konumlandırma yöntemini. Bu ölümcül olmayan teknik, gerilim uygulayarak hücre biyolojisinde iğ iplikçik kontrol noktasını incelemeye olanak tanır.

Embriyolardan kromozomların böcek Spermatocytes

Daha fazla video keşfet