Name: Modüle ve kök hücre sunmak için elektriksel olarak iletken iskele (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-13T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: Öğrenin, iletken polimer iskele üzerinde kök hücreleri elektriksel olarak uyarmak ve in vivo implantasyon için optimize etmek amacıyla bu yöntemi. İnme araştırmalarında ve hücre terapisinde yeni uygulamalar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dr. Kati Andreasson (Nöroloji ve nörolojik bilimler, Stanford Üniversitesi) qRT-PCR makinesi kullanımı için teşekkür ederiz. İş Ulusal kurumları K08NS098876 sağlık hibe (için P.M.G.) ve Stanford Tıp Fakültesi Dekan'ın doktora sonrası bursu (için Bo) tarafından desteklenmiştir.

Tüm kök hücre ve hayvan yordamlar Stanford'un kök hücre araştırma Gözetim Komitesi tarafından ve laboratuvar hayvan bakım (SCRO-616 ve APLAC-31909) Stanford Üniversitesi'nin Yönetim Panel tarafından kabul edildi.
1. gravür Ito cam
<ol><li>İndiyum kalay oksit (ITO) hazırlamak-cam iletken yan tarafa bir maskeleme ajanı yerleştirerek kaplı cam kaymak. Not: Çoğu ticari şeffaf bantlar bir maskeleme ajanı olarak kullanılabilir.<ol>
<li>Bir bıçak kullanarak aşırı maskesi kaldırmak için yalnızca istediğiniz şekli son ITO tasarım bırakarak cam kaplı.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Nitrik asit (v/v) %5 ve % 45'i (v/v) HCl bir duman başlık içinde bir cam ölçek büyütme çözüm hazırlamak için birleştirir.<ol>
<li>Çözüm aşındırma sıcaklık 70 ° C'de korunur emin olmak için elektrikli Ocak ve bir termometre kullanın</li>
	</ol>
</li>
	<li>70 ° C Dağlama çözüm ulaştıktan sonra maskeli-ITO cam slayt 2 dakika fazla ITO kat kaldırmak çözüm içine yerleştirin. Not: Bant maskeleme asit solüsyonu maruz ITO katman korur.</li>
	<li>Slayt çözümden kaldırmak ve deiyonize (DI) H2ile O. durulayın</li>
	<li>Kalan ITO sağlam olduğundan emin olmak için bir multimetre kullanarak maske ve ölçü direnç dikkatli bir şekilde çıkarın. Sonuçlar istenilen kazınmış alanının yaklaşık 0 Ω olmalıdır.</li>
</ol>2. Pyrrole çözüm hazırlanması
<ol><li>1000 mL cam şişe 70 g sodyum dodecylbenzenesulfonate (NaDBS) 600 mL DI H2O. geçiyoruz.</li>
	<li>Bir kez NaDBS çözülür, 14 mL 0,2 M pyrrole ve DI H2O 386 mL ekleyin.</li>
	<li>Alüminyum folyo ile çözüm kapak ve 4 ° C'de depolayın</li>
</ol>3. galvanik Polypyrrole ITO camına,
<ol><li>NaDBS tamamen redissolved kadar oda sıcaklığında pyrrole çözümünü sıcak. Not: Bu yaklaşık 15-20 dakika sürer.</li>
	<li>25 mL pyrrole çözeltisi bir kabı dökün.</li>
	<li>Kazınmış ITO cam için bir multimetre bağlanmak ve slayt pyrrole çözüm içine daldırın.<ol>
<li>0 Ω direnci ile yüzün Platin kafes referans elektrot doğru dönük olduğundan emin olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bir elektrik akımı bir multimetre (3 mA/cm2 ' de 4 saat boyunca kontrollü akım) kullanarak ITO yüzeyinde PPy galvanik başlatmak için geçerlidir.</li>
	<li>ITO cam multimetre ve yıkama alaşımlı-PPy kalan yüzey aktif kaldırmak için DI H2O kaldırın.</li>
	<li>Yavaşça bir jilet kullanarak ITO cam alaşımlı PPy tabaktan ayırın.<ol>
<li>PPy plaka oda sıcaklığında saklayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Polydimethylsiloxane (PDMS) hazırlanması
<ol><li>Bir spatula ve tartmak çanak kullanarak, temel Aracısı 18 g kür Ajan 2 g ile mix ve iki 10 cm x 8 cm cam kalıpları içine karışımı dökün.</li>
	<li>Kabarcıklar vakum odası 15-20 dakika kullanarak kalıplar kaldırın.</li>
	<li>Kalıpları 3 h 70 ° C fırında yerleştirin.</li>
	<li>Soğutmalı sonra düz bir spatula PDMS kalıpları kaldırmak için kullanabilirsiniz.</li>
</ol>5. Vitro elektriksel stimülasyon odası imalatı
<ol><li>Otoklav metal levhalar (WxL, 2.5 cm x 12,5 cm) ve akışı vanalar 120 ° C'de 1 saattir.</li>
	<li>Odası slayt şablon olarak kullanıp, iki adet PDMS kesti. Not: Tek parça PDMS hücre odası çevre kesik iki bitişik kareler içinde hücre odası ile hizmet vermektedir. Diğer PDMS odası 's çevre bir taslağını parçasıdır.<ol>
<li>Kesmek iç hücre odası böylece kare şeklinde ve hücre odası şeklinde eşleşir. PDMS iki adet genel şekli dikdörtgen ve odası slayt uygun emin olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Malzeme--dan dip aşağıdakine üst olarak katman: (1) Metal plaka, (2) PDMS (olmadan kesik), (3) PPy plaka (PDMS için dikey), PDMS (4) (ile kesik) ve (5) hücre odası.</li>
	<li>Bir kez tam olarak hizalanır aparatı birlikte kelepçe.</li>
	<li>Bir metal tel iki 60 cm parçalar koparıp ve gümüş hamur odası dışarıdan protrudes PPy plaka her sonu için bir kablo bağlamak için kullanın. Teller cihaz bir kuluçka dışa doğru genişletmek yeterince uzun olduğundan emin olun.</li>
	<li>Bir kez gümüş Yapıştır tedavi güçlendirmek ve epoksi ile tel bağlantı mühür.<ol>
<li>Direnç uygulanan alanını her odasında aynı olduğundan emin olmak için bir multimetre kullanarak kaydedin.</li>
		<li>İmplantasyon için kabloları çıkarın; hücre odaları unclamp ve iletken iskele PDMS ve sonra onları ayrı. İmplante iskele yaklaşık 1 x 3 x 0,25 mm boyuttur.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. insan nöral progenitör hücre (hNPCs) PPy kaplama
<ol><li>UV ışık altında birleştirilmiş chambers sterilize etmek için 2 saat.<ol>
<li>1 saat sonra monte döndürün 90 ° Odaları.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sterilizasyon sonra PPy odası alt kaplama substrat 800 µL ile yüzey kat ve 1 h için % 5 CO2 37 ° C'de bir kuluçka PPy tabakta kuvvetlendirmek belgili tanımlık substrate sağlar.</li>
	<li>1 saat sonra süpernatant odaları kaldır ve yavaşça DPBS + Ca + Mg 1 mL de başı ile durulayın. Not: Bu kaplama substrat dekolmanı neden olur gibi zorla PPy yüzey yıkama kaçının.</li>
	<li>Taze hücre medyayı kullanarak, mekanik olarak kültürlü hücreler nazik pipetting ile doku kültürü plaka chambers ile kullanmak için ayırmak. Not: Hücreleri % 90-100 birleşmesi ayrılma üzerine olmalıdır.</li>
	<li>Santrifüjü kullanarak de 8000 x g 5 dakika hNPC granül toplamak.</li>
	<li>Bir hemasitometre kullanarak, say ve hücreleri 100.000 hücreler/cm2ses seviyesinde resuspend.</li>
	<li>Her odaya iyi (100.000 hücreler/cm2 ' medya 1 mL) 100.000 hücreleri plaka.</li>
	<li>Kuluçka makinesi %5 37 ° C'de Chambers dönmek CO2.
</li>
</ol>7. elektrik hNPCs uyarılması
<ol><li>Bir gün chambers, hücrelerdeyse tohum sonra bir dalga formu jeneratör elektrik stimülasyonu hücrelere uygulamak için kullanın.</li>
	<li>Stimülasyon önce eski medya de her odasından kaldırın ve taze medya 800 µL ile doldurmak.</li>
	<li>Medya değiştirildikten sonra odaları da kuluçka yerleştirin, kuluçka makinesi dışında teller genişletmek ve onları bir dalga formu jeneratör takmak</li>
	<li>Bir kare dalga sinyali için 1 h 100 Hz ile ±400 mV, hücrelerle stimülasyon uygulanır.</li>
	<li>Stimülasyon sonra kabloları çıkarın ve odaları ile % 5 CO237 ° C'de ayarla bir kuluçka başka bir gün için kuluçkaya.</li>
	<li>Hücre canlılığı ve nicel gerçek zamanlı Polimeraz zincir tepkimesi (PCR qRT) üreticinin protokol sonrası dahil olmak üzere sonraki biyolojik çözümlemesi gerçekleştirin.</li>
</ol>8. içinde Vivo PPy implantasyon
<ol><li>Distal orta serebral arter (dMCA) tıkanıklığı felç modelleri T hücre eksikliği üzerinde gerçekleştirmek yetişkin erkek çıplak rats (NIH-RNU 230 ± 30 g) olarak açıklanan daha önce2. İmplantasyon bir hafta sonrası dMCA tıkanıklığı gerçekleştirin.</li>
	<li>Bir gün önce ameliyat, onların kafes suda sıçanlar için Ampisilin (1 mg/mL) ver.</li>
	<li>Fareyi kullanarak bir indüksiyon odası içinde anestezi 0.5 - % 3 mg/kg isoflurane inhalasyon yolu ile yönetilen.</li>
	<li>Anesthetization farenin burun çimdik refleks yanıt alınamaması tarafından onaylayın.<ol>
<li>Hayvan anestezi altında olmakla birlikte, onun membran renk, nefes desen ve rektal sıcaklık 15 dakikada izlemeye devam edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Anesthetization onayladıktan sonra suni gözyaşı kuruluğu önlemek için fare gözünü uygulanır.</li>
	<li>Aseptik teknik steril eldiven ve steril cerrahi örtüsü13kullanarak bu yordamı sırasında korunur emin olun. Steril cerrahi aletlerin steril alan içinde tutun.</li>
	<li>Fareyi anestezi altında olmakla birlikte, kraynektomi yukarıda sol korteks matkap. Beyin zarı açın.<ol>
<li>Dura mater beyin cerrahi mikro-ince iğne kullanarak kaldırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sıçan korteks vitro sisteminden iletken iskele implant. Not: bizim deneyler için iskele vitro gün 3 hNPC kaplama sonra implante.<ol>
<li>İmplant öncelikle halkalı korteks üzerinde medial kontur lezyon için yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İskele yerleştirildikten sonra surgicel hareket cilt kapatma ile önlemek için implant üzerine getirin.</li>
	<li>Yara kapa ve subkutan buprenorfin SR, stereotaksik cerrahi ve dMCA tıkanıklığı ile ilgili ağrı yönetmek için 1 mg/kg doz ile farelere enjekte dikiş.</li>
	<li>Bilinci yerine gibi fare kurtarma kafese koyun.<ol>
<li>Asla baygın durumdayken hayvan çalıştırın.</li>
		<li>O tamamen bilinç kazanmıştır kadar başkaları ile hayvan koymayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hayvanlar günlük vücut kilo kaybı, düşük gıda/su alımı, azaltılmış bakım/dağınık ceket, spontan aktivite azaldı/arttı, anormal postür, dehidratasyon/cilt çadır, batık gözler, gizleme, öz sünneti de dahil olmak üzere ağrı belirtileri için izlemek, Hızlı solunum, açık ağızlı nefes, seğirmesi, titreyen, tremor ve seslendirme.<ol>
<li>Onlar yeme, içme, damat ve kilo olduğunu görünene kadar hayvanlar her gün izlemek; ve sonra haftalık sonra kilo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>CO2 inhalasyon ve euthanization (hayvan değil normal oksijen kaynağı yazı CO2 inhalasyon nedeniyle canlandırmak sağlamak için) bir ikincil onay ile erken euthanization içme yemek değil, görünür herhangi bir hayvan gerçekleşir ve ilk cerrahi işlem sonrası kilo; acı içinde görünür; veya davranış testleri büyük bir motor korteks açığı beklenenden daha nedeniyle tamamlayamadı görünür.</li>
</ol>

<ol><li>Moskowitz, M. A., Lo, E. H., Iadecola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Science+of+Stroke%3A+Mechanisms+in+Search+of+Treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The Science of Stroke: Mechanisms in Search of Treatments.</a> Neuron. 67 (2), 181-198 (2010).</li>
<li>George, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+Preconditioning+of+Stem+Cells+with+a+Conductive+Polymer+Scaffold+Enhances+Stroke+Recovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Electrical Preconditioning of Stem Cells with a Conductive Polymer Scaffold Enhances Stroke Recovery.</a> Biomaterials. 142, 31-40 (2017).</li>
<li>Steinberg, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Outcomes+of+Transplanted+Modified+Bone+Marrow-Derived+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Stroke%3A+A+Phase+1%2F2a+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Clinical Outcomes of Transplanted Modified Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells in Stroke: A Phase 1/2a Study.</a> Stroke. 47 (7), 1817-1824 (2016).</li>
<li>George, P. M., Steinberg, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Stroke+Therapeutics%3A+Unraveling+Stroke+Pathophysiology+and+Its+Impact+on+Clinical+Treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Novel Stroke Therapeutics: Unraveling Stroke Pathophysiology and Its Impact on Clinical Treatments.</a> Neuron. 87 (2), 297-309 (2015).</li>
<li>Schabitz, W. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+Brain-Derived+Neurotrophic+Factor+Enhances+Poststroke+Sensorimotor+Recovery+and+Stimulates+Neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Intravenous Brain-Derived Neurotrophic Factor Enhances Poststroke Sensorimotor Recovery and Stimulates Neurogenesis.</a> Stroke. 38 (7), 2165-2172 (2007).</li>
<li>Liauw, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombospondins+1+and+2+Are+Necessary+For+Synaptic+Plasticity+and+Functional+Recovery+After+Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Thrombospondins 1 and 2 Are Necessary For Synaptic Plasticity and Functional Recovery After Stroke.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 28 (10), 1722-1732 (2008).</li>
<li>Cantu, D. A., Hematti, P., Kao, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Encapsulating+Biomaterial+Regulates+Mesenchymal+Stromal%2FStem+Cell+Differentiation+and+Macrophage+Immunophenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cell Encapsulating Biomaterial Regulates Mesenchymal Stromal/Stem Cell Differentiation and Macrophage Immunophenotype.</a> Stem Cells Translational Medicine. 1 (10), 740-749 (2012).</li>
<li>Chaudhuri, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogels+with+Tunable+Stress+Relaxation+Regulate+Stem+Cell+Fate+and+Activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Mater%22%5BJournal%5D)">Hydrogels with Tunable Stress Relaxation Regulate Stem Cell Fate and Activity.</a> Nat Mater. 15 (3), 326-334 (2016).</li>
<li>Ballios, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Hyaluronan-Based+Injectable+Hydrogel+Improves+the+Survival+and+Integration+of+Stem+Cell+Progeny+following+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">A Hyaluronan-Based Injectable Hydrogel Improves the Survival and Integration of Stem Cell Progeny following Transplantation.</a> Stem Cell Reports. 4 (6), 1031-1045 (2015).</li>
<li>Mothe, A. J., Tam, R. Y., Zahir, T., Tator, C. H., Shoichet, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+the+Injured+Spinal+Cord+by+Transplantation+of+Neural+Stem+Cells+in+a+hyaluronan-based+hydrogel%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Repair of the Injured Spinal Cord by Transplantation of Neural Stem Cells in a hyaluronan-based hydrogel.</a> Biomaterials. 34 (15), 3775-3783 (2013).</li>
<li>Saini, M., Singh, Y., Arora, P., Arora, V., Jain, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implant+Biomaterials%3A+A+Comprehensive+Review%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Clin+Cases%22%5BJournal%5D)">Implant Biomaterials: A Comprehensive Review.</a> World J Clin Cases. 3 (1), 52-57 (2015).</li>
<li>Huang, Y., Li, Y., Chen, J., Zhou, H., Tan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+Stimulation+Elicits+Neural+Stem+Cells+Activation%3A+New+Perspectives+in+CNS+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Hum+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Electrical Stimulation Elicits Neural Stem Cells Activation: New Perspectives in CNS Repair.</a> Front Hum Neurosci. 9, (2015).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R., Mulder, G. B., Luo, Y., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+Rodent+Surgery+for+the+New+Surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.</a> J Vis Exp. (47), (2011).</li>
<li>Abdelwahid, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+Cell+Death+and+Survival+in+Heart+Regeneration+and+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Stem Cell Death and Survival in Heart Regeneration and Repair.</a> Apoptosis. 21 (3), 252-268 (2016).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Clinical+Status+of+Stem+Cell+Therapy+for+Ischemic+Cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">The Clinical Status of Stem Cell Therapy for Ischemic Cardiomyopathy.</a> Stem Cells Int. 2015, (2015).</li>
<li>George, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+and+Biocompatibility+of+Polypyrrole+Implants+Suitable+for+Neural+Prosthetics%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Fabrication and Biocompatibility of Polypyrrole Implants Suitable for Neural Prosthetics.</a> Biomaterials. 26 (17), 3511-3519 (2005).</li>
<li>Aravamudan, B., Thompson, M., Pabelick, C., Prakash, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-Derived+Neurotrophic+Factor+Induces+Proliferation+of+Human+Airway+Smooth+Muscle+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Brain-Derived Neurotrophic Factor Induces Proliferation of Human Airway Smooth Muscle Cells.</a> J Cell Mol Med. 16 (4), 812-823 (2012).</li>
<li>Lopes, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombospondin+2+Regulates+Cell+Proliferation+Induced+by+Rac1+Redox-Dependent+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Thrombospondin 2 Regulates Cell Proliferation Induced by Rac1 Redox-Dependent Signaling.</a> Mol Cell Biol. 23 (15), 5401-5408 (2003).</li>
<li>Ploughman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-Derived+Neurotrophic+Factor+Contributes+to+Recovery+of+Skilled+Reaching+After+Focal+Ischemia+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Brain-Derived Neurotrophic Factor Contributes to Recovery of Skilled Reaching After Focal Ischemia in Rats.</a> Stroke. 40 (4), 1490-1495 (2009).</li>
<li>Baker, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+Pluripotent+Stem+Cell-Derived+Neural+Stem+Cell+Therapy+Enhances+Recovery+in+an+Ischemic+Stroke+Pig+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Stem Cell Therapy Enhances Recovery in an Ischemic Stroke Pig Model.</a> Sci Rep. 7 (1), 10075(2017).</li>
<li>Bacigaluppi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+Stem+Cell+Transplantation+Induces+Stroke+Recovery+by+Upregulating+Glutamate+Transporter+GLT-1+in+Astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neural Stem Cell Transplantation Induces Stroke Recovery by Upregulating Glutamate Transporter GLT-1 in Astrocytes.</a> J Neurosci. 36 (41), 10529-10544 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar yok bu iş ile bildirmek için çıkar çatışması var.

Kanıt büyüyen kök hücre vaadi bir roman kontur terapi olarak göstermiştir. Bu söz kök hücre therapeutics yatağımın en az 40 tamamlanmış veya devam eden klinik çalışmalar ile ilerlemek için önemli bir çalışma sonuçlandı. Kontur patoloji çünkü akut hakaret sonra kurtarma engelleyen hiçbir nörodejeneratif işlem ödünç vermek kendisi için kök hücre tedavisi benzersiz bir nörolojik bozukluk sunmaktadır. Kök hücre gelişmiş inme kurtarma tam mekanizmasının belirsizdir. Anjiogenez, synaptogenesis ve sinaptik remodeling tüm önemli...

İnme dünyada ölüm ikinci önde gelen nedenidir ve ölüm beşinci önde gelen nedenidir Amerika Birleşik Devletleri olduğunu. Bu yüksek ölüm oranlarını rağmen tedaviler inme kurtarma için şu anda bir sorun yok uygun tıbbi seçenekler mevcut1kalır. Orada şu anda yaklaşık 300 klinik çalışmalarda hangi kök hücreler sadece 40 kullanmak iskemik inme ile ilgili. Önceki çalışmalarda kök hücre tedavileri kontur onarım2,3üzerinde yararlı bir etkisi olduğunu ortaya koymuştur. Parakrin faktörler beyin kaynaklı Nörotrofik faktör (BDNF) ve Transplante insan nöral progenitör hücre (hNPCs) yayımlanan trombospondin-1 (THBS-1) gibi bir artış ile ilgili mekanizmalar yoluyla geliştirilmiş fonksiyonel iyileşme göstermiştir oluşumu, anjiogenez, dendritik dallanma ve yeni aksonal projeksiyonlar sinaps gibi bağışıklık sistemi4,5,6modülasyonlu. Ancak, kök hücrelerin en uygun teslimat yöntemlerinin zor kalır.
Başarılı kök hücre teslim beyin için bir meydan okuma olarak kalır. Şu anda, enjekte edilebilir hidrojel ve polimerik İskele sistemleri kök hücre sunmak için getirilmiştir. Bu teslim yöntemi kök hücre nakli sırasında korumak hem de ana bilgisayarın inflamatuar yanıt ve hipoksik koşullar7,8,9 gibi sert inme sonrası çevre koruma , 10. ancak, en yaygın olarak kullanılan malzemeler hangi hücreleri11sürekli Modülasyon (Yani, elektriksel stimülasyon) kısıtlar etkisiz,. Elektriksel stimülasyon farklılaşma, iyon kanal yoğunluğu ve kök hücre12neurite akıbet etkiler bir ipucudur. İnert polimerler ile karşılaştırıldığında, elektriksel stimülasyon ve kök hücre2manipülasyon için geçerli bir izin iletken polimerler taşıyabilir. Ancak, hangi tarafından Nörotrofik faktör sürümü (Yani, BDNF ve THBS-1) elektriksel stimülasyon modüle kesin mekanizması hala tam keşfedilmeden.
Bu protokol için bir iletken polimer iskele, vitro için elektriksel stimülasyon sağlar polypyrrole (PPy), oluşan bir hücre kültür sistemi oluşturmak için adımları açıklar. Hangi hücre kültür sistemi fabrikasyon olduğunu şekilde nedeniyle, peri-enfarktüsü korteks üzerine kök hücre numaralı seribaşı iskele sonraki implantasyonu mümkündür. Bu sistem için biz elektrikle kök hücre iskele üzerinde kısa bir süre önce implantasyon için yaygõn. Elektriksel stimülasyon hücreleri taşıyan iletken polimer iskele intracranially minimal invaziv bir yöntem kullanarak başarılı bir şekilde yerleştirilir.

<table><tbody><tr><td>FGF-Temel</td><td>İnvitrojen</td><td>CTP0261</td><td>çalışma ortamı için 20 ng/mL</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>cb40234a</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>LIF Proteini, Tavsiye Hum. (10 & mikro; g/mL)</td><td>EMD Millipore</td><td>LIF1010</td><td>çalışma ortamı için 10 ng/mL</td></tr><tr><td>Sylgard 184 silikon 3,9 kg</td><td>Fisherbrand</td><td>NC0162601</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>Fisherbrand</td><td>SA56-4</td><td></td></tr><tr><td>Nitrik Asit Konsantresi (Sertifikalı) ACS, Fisher Chemical</td><td>Fisherbrand</td><td>SA95</td><td></td></tr><tr><td>ITO Cam</td><td>Delta Teknolojileri</td><td>CG-40IN-0115</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum dodesilbenzensülfonat</td><td>Sigma</td><td>289957-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Pirol</td><td>Sigma</td><td>131709-500ML</td><td>Pirol çözeltisini ışıktan ve oda sıcaklığından koruyun</td></tr><tr><td>8 kuyulu cam slayt odası</td><td>Thermo Sci Nuc&nbsp;</td><td>125658</td><td>Hücre odasını ayırın ve sterilize edilmiş koşullar altında tutun</td></tr><tr><td>Düz Yüzey Braketi, 3 "x1"</td> <td>McMaster-Carr&nbsp;</td><td>1030A4</td><td></td></tr><tr><td>İKİ PARÇALI GÜMÜŞ BOYA 14G Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri&nbsp;</td><td>1264214</td><td>İki parçayı (1: 1) plastik plaka</td></tr><tr><td>DPBS, 1x, Ca ve Mg ile, Fenol Kırmızı Gen İçermez</td><td>ve nbsp;</td><td>25-508C</td><td></td></tr><tr><td>AB2 ArunA Nöral Hücre Kültürü Medya Kiti</td><td>Aruna Biyomedikal&nbsp;</td><td>ABNS7013.2</td><td></td></tr><tr><td>hNP1 İnsan Nöral Progenitör Genişletme Kiti</td><td>Aruna Biyomedikal&nbsp;</td><td>&nbsp; hNP7013.1</td><td></td></tr><tr><td>Temassız akış ayar vanası, nikel kaplı pirinç, 3/32" ila 5/8" boru için OD</td><td>McMaster-Carr&nbsp;</td><td>5330K22</td><td></td></tr><tr><td>Multimetre</td><td>Keysight&nbsp;</td><td>E3641A</td><td></td></tr><tr><td>Wavefoam jeneratörü</td><td>Keysight</td><td>33210A-10MHz</td><td></td></tr><tr><td>Pt ağları</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>298107-425MG</td><td>Boyutlarında referans elektrodu, 1x1 cm</td></tr><tr><td>CANLI/ÖLÜ Canlılık/Sitotoksisite Kiti, memeli hücreleri için</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>BDNF</td><td>Thermo Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td></td><td></td>Hs02718934_s1</tr><tr><td>THBS1</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>Hs00962908_m1</tr><tr><td>GAPDH</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>Hs02758991_g1</tr><tr><td>RNeasy Mini Kiti (250)</td><td>Qiagen</td><td>74106</td><td></td></tr><tr><td>QIAparçalayıcı (250)</td><td>Qiagen</td><td>79656</td><td></td></tr><tr><td>RNaz İçermeyen DNaz Seti (50)</td><td>QIAGEN</td><td>79254</td><td></td></tr><tr><td>iScript cDNA Sentez Kiti, 100 x 20 ve mikro; L rxns</td><td>BIORAD</td><td>1708891</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gen Ekspresyonu Master Mix</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>4369510</tr><tr><td>7-8 Haftalık, erkek, RNU Sıçanlar</td><td>NCI-Frederick</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4-0 Ethicon İpek Sütür</td><td>eSutures.com</td><td>683G</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Henry Schein</td><td>29405</td><td></td></tr><tr><td>V-1 Masa Üstü Laboratuvar Hayvanı Anestezi Sistemi</td><td>VetEquip</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>Surgicel Orijinal Emilebilir Hemostat</td><td>Ethicon</td><td>1952</td><td></td></tr><tr><td>Laboratuvar Standardı Stereotaksik Alet, Sıçan</td><td>Çalma</td><td>51600</td><td></td></tr><tr><td>Kimberly-Clark Professional&nbsp; Safeskin Mor Nitril Steril Muayene Eldivenleri</td><td>Fisherbrand</td><td>19-063-130</td><td></td></tr><tr><td>Steril Örtü</td><td>Medline</td><td>DYNJSD1092</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific&nbsp; Shandon Paslanmaz Çelik Neşter Bıçak Sapı, 20-25 No'lu Bıçakları Tutar</td><td>Fisherbrand</td><td>53-34</td><td></td></tr><tr><td>Walter Stern Neşter Bıçak Serisi 300</td><td>Fisherbrand</td><td>17-654-456</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio 6 Flex Gerçek Zamanlı PCR Sistemi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4484642</td><td></td></tr><tr><td>Frazier Mikro Diseksiyon Kancası</td><td>Harvard Aparatı</td><td>52-2706</td><td></td></tr></tbody></table>

modüle ve kök hücre sunmak için elektriksel olarak iletken iskele

Electrically Conductive Scaffold to Modulate and Deliver Stem Cells

Kök hücre tedavisi heyecan verici bir kontur olarak terapötik çıkmıştır ama en uygun Teslimat yöntemi belirsizdir. Mikroenjeksiyon tekniği kök hücre kontur modellerinde sunmak için yıllardır kullanılan iken, bu teknik enjeksiyon önce kök hücre işleme yeteneği eksikliği ile sınırlıdır. Bu kağıt bir elektriksel olarak iletken polimer iskele kök hücre teslim için kullanma yöntemi ayrıntıları. Bir iletken polimer iskele kullanarak kök hücrelerin elektriksel stimülasyon kök hücrenin genler hücre hayatta kalma, inflamatuar yanıt ve sinaptik remodeling yer değiştirir. Elektrik Önkoşullanma sonra iskele üzerinde kök hücre intracranially distal orta serebral arter tıkanıklığı sıçan modelinde nakledilen. Bu iletişim kuralı bir iletken polimer iskele üzerinden kök hücre işlemek için güçlü bir teknik anlatılmaktadır ve daha fazla kök hücre tabanlı terapisi geliştirmek için yeni bir araç oluşturur.

Şekil 1 ' de gösterilen şematik genel iş akışını hNPCs ve potansiyel aşağı akım uygulamaları elektriksel stimülasyon ve temsil eder. Bir geçerli kök hücre tedavisi, kök hücre iltihabı ve iskemik koşulları gibi sert bir sonrası nakli ortamına maruz kısıtlamadır. Bu zor koşullar büyük olasılıkla onların tedavi edici etkinliği14,15sınırlayın. Bu ortamdan hNPCs korumak için bir iletken iskele kullanımı el...

Bu iletişim kuralı bir iletken polimer iskele vitro elektriksel stimülasyon ve kök hücre numaralı seribaşı iskele kullanarak sonraki vivo içinde implantasyon için üzerinde kök hücrelerin tohum izin vermek için bir hücre kültür sistemi imalatı açıklar bir minimal invaziv tekniği.

Modüle ve kök hücre sunmak için elektriksel olarak iletken iskele

Stem cell therapy has emerged as an exciting stroke therapeutic, but the optimal delivery method remains unclear. While the technique of microinjection ...

Bu prosedürün genel amacı, kök hücrelerin iletken bir polimer iskele üzerinde in vitro elektriksel stimülasyonu için bir platform oluşturmak ve ardından in vivo implantasyon yapmaktır. Bu yöntem, kök hücreleri modüle etmek için bir araç sağlayarak inme araştırmaları ve kök hücre biyolojisindeki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Ana avantajı, kök hücrelerin in vitro olarak optimize edilebilmesi ve daha sonra implante edilebilmesidir.Bu yöntem inme iyileşmesi hakkında bir fikir verebilse de, yeni bir hücre verme yöntemi olarak diğer sistemlere de uygulanabilir. Genel olarak, bu tekniğe yeni olan kullanıcılar, hücre odası montajı için gereken hassasiyet ve kraniektomi ile ilgili teknik nedeniyle mücadele edeceklerdir. Hazırlık olarak, 2,5 x 12,5 santimetre metal plakaları ve akış valflerini otoklavlayın.Ardından, şablon olarak bir oda slaytı kullanarak iki parça PDMS kesin. Bir parça, odanın çevresinin ana hatlarını çizmeye hizmet eder. İkinci parçada, hazne sürgüsünün içinden iki bitişik parça kesin.Her iki parça da dikdörtgen olmalı ve hazne kızağına uygun olmalıdır. Şimdi, malzemeleri katmanlayın. Metal plaka ile başlayın, ardından kesilmemiş PDMS, ardından dik olarak y

electrically-conductive-scaffold-to-modulate-and-deliver-stem-cells

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

İnsan perivasküler kök hücreler (PSC'ler) mezenkimal kök hücreler (MKH) benzer iskelet doku yenilenmesine yönelik yeni bir kök hücre sınıfı vardır. PSC'ler standart bir yağ emme prosedürleri sırasında temin adipoz dokusu FACS (floresans aktive hücre ayırma) yoluyla izole edilebilir, ardından kemik oluşumunu sağlamak için bir osteoendüktif iskelesi ile...

Kemik Rejenerasyon için İnsan perivasküler Kök Hücre kullanın

Bu video, elektropüskürtme ile hücre dışı matristen türetilmiş mikro taşıyıcı üretim prosedürünü göstermektedir. Bu mikro taşıyıcılar, doğal dokuya özgü mikro ortamı simüle eder ve uzun vadeli 3D in vitro hücre kültürü modellerinde stabildir.

Elektropüskürtme ile Biyoiskele İmalatı: Hücreden Arındırılmış Dokunun Hücre Dışı Matrisinden Türetilen Mikro Taşıyıcı İskeleler Oluşturma Tekniği

Karmaşık dokunun son derece organize yapılarının oluşturulması için, birden fazla materyal ve hücre tipini entegre bir kompozitte bir araya getirmek gerekir.  Bu kombinatoryal tasarım, güçlü bir fibröz matris tabanı içeren iki farklı biyolojik olarak türetilmiş materyal ve yeni damar oluşumunu arttırmak için endotel hücreleri ile organa özgü katmanlı hücre tabakalarını içerir.

Doku Mühendisliği: Katmanlı Hücre Sheets teslimi için bir Multisellüler 3D İskele İnşaatı

Bu makale, insan mezenkimal kök hücrelerinin, bilinen tohumlama yoğunluğuna kıyasla başlangıçta bağlanan hücre sayısını en üst düzeye çıkarmak ve ölçmek için standart kültür kuyusu plakalarının tabanını kaplamayan malzemelere, bu durumda elektro eğrilmiş ipliklere tohumlanması için bir dizi kurulumu açıklamaktadır.

Poli (ε-kaprolakton) electrospun İplik İnsan Mezenkimal Kök Hücre Ek Optimize

Burada, biz liflerin Basamaklandırılmış organizasyonu ile electrospun nanolif iskeleleri imal ve hücre morfolojisi / yönünü düzenleyen kendi uygulamalarını keşfetmek için bir protokol mevcut. Nanolif iskelelerinin fiziksel ve kimyasal özellikleri açısından Degrade'ler biyomedikal alanındaki uygulamalar geniş bir yelpazede sunuyoruz.

Fiber Teşkilatı geçişleri ile electrospun Nanolif iskeleleri

Kök hücrelerden kondrogenezis kültür koşulları ince ayar gerektirir. Burada, hücreleri yoğunlaştırmak için bir manyetik yaklaşım sunmak, önemli bir adım kondorjenez başlatmak için. Buna ek olarak, bir biyo-reaktör içinde dinamik olgunlaşma hücresel yapıların mekanik uyarma uygulanır ve kıkırdak hücre dışı matris üretimini artırdığını göstermektedir.

Kıkırdak Yenileme için 3D Manyetik Kök Hücre Toplama ve Biyoreaktör Olgunlaşma

Burada elektrik ve mekanik uyaranlara kardiyak Fizyoloji taklit kullanan bir hücre kesimin eğitim için bir iletişim kuralı mevcut. Bu elektromekanik stimülasyon işlem görmüş hücreleri cardiomyogenic potansiyelini artırır ve daha fazla hücre tedavisi, hastalık modelleme ve uyuşturucu taraması için umut verici bir stratejidir.

Hücrelerin Cardiomyogenic potansiyeli geliştirmek için aynı anda elektrik ve mekanik stimülasyon

Burada çeşitli elektriksel stimülasyon ve Osteojenik farklılaşma geliştirmek için mezenkimal kök hücre tedavisinde kullanımı yapan hücreleri göstermek için tasarlanmış bir hücre kültürü odası yapımı için bir iletişim kuralı mevcut.

İnşaat ve in Vitro mezenkimal kök/Stromal hücrelerdeki Osteojenik farklılaşma güçlendirmeye yönelik bir elektriksel stimülasyon odası kullanımı

Bu metodoloji, substrat sertliği, protein bileşimi ve hücre morfolojisi gibi hücre dışı matris ipuçlarının Schwann hücresi (SC) fenotipini düzenleyen mekanizmalarını göstermeyi amaçlamaktadır.

Schwann Hücre Fenotip Spesifikasyonunu Değerlendirmek Için Hücre Dışı Matriks Mikroortamlarının Hazırlanması

Bu makale, bir elektrik alanına (EF) maruz kalan lifli iletken malzemelerin sonlu eleman modellerini oluşturmak için bir strateji sunmaktadır. Modeller, bu tür malzemelerde tohumlanan hücrelerin aldığı elektrik girişini tahmin etmek ve iskelenin kurucu malzeme özelliklerini, yapısını veya yönünü değiştirmenin etkisini değerlendirmek için kullanılabilir.

Hücresel Elektrik Mikroçevriminin Sonlu Eleman Modellemesi

Bu çalışma, kronik yara iyileşmesi için çekirdek kılıflı 3D-biyo-baskılı iskelelerin imalatı için bir protokol sunmaktadır. Hücre dışı veziküller mezenkimal kök hücrelerden izole edilir ve karboksimetil selüloz ve aljinat liyazdan yapılan kılıf ile çekirdeğe (aljinat) yüklenir. Bu tasarım, kontrollü iskele bozulmasına ve verimli EV'lerin serbest bırakılmasına izin verir.

Kronik yara yönetimi için çekirdek kılıflı 3D biyobaskılı iskele kullanarak hücre dışı vezikül dağıtımını optimize etme

Öğrenin, iletken polimer iskele üzerinde kök hücreleri elektriksel olarak uyarmak ve in vivo implantasyon için optimize etmek amacıyla bu yöntemi. İnme araştırmalarında ve hücre terapisinde yeni uygulamalar sunar.

Modüle ve kök hücre sunmak için elektriksel olarak iletken iskele

Daha fazla video keşfet