Delici cisim kaynaklı Iris neovaskülarizasyon Rubeosis Iridis bir fare modeli olarak
8 Mart 2018
Iris neovaskülarizasyon, iskemik retina hastalığı, ortak bir komplikasyonu görme tehdit neovasküler glokom için neden olabilir. Burada, anjiogenez oransal maddeler noninvaziv değerlendirme için kullanılabilir deneysel Iris neovaskülarizasyon inducing için fare bir protokol açıklayın.
Bu prosedürün genel amacı, anjiyojenik süreçlerin doğrudan in vivo görüntülenmesine izin veren iris vaskülatürünü indüklemektir. Bu yöntem, oftalmoloji alanındaki, özellikle neovasküler hastalıklardaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, kan damarlarının vivo görselleştirmesini yönlendirmeye izin vermek için albino fareleri kullanmasıdır.
Bu yöntem sayesinde oküler neovasküler hastalık hakkında fikir verebilir. Ayrıca, yeni anjiyojenik tedavilerin test edilmesi gibi genel bir anjiyogenez modeli olarak da uygulanabilir. Fare gözünün küçük boyutu nedeniyle iris diseksiyonu zor olduğundan, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik
öneme sahiptir.Bununla birlikte, pratikle, ustalaşılabilir. Bir P12.5 fareyi uyuşturduktan ve prosedür için hazırladıktan sonra, bir stereoskop altında yanal yaslanma pozisyonuna getirin ve maskenin iyi konumlandırıldığını onaylayın. Göz, görüş alanını doldurmalıdır.
Gözün net bir şekilde odaklanması zorunludur. Daha sonra, baskın olmayan elinde küçük bağlama forsepsleri kullanarak, göz kapaklarına, sırta ve ventral göze aşağı doğru basınç uygulayarak gözü dikkatlice çıkıntı yapın. Göz kapağını sıkıca tutmak yardımcı olur.
Devam etmeden önce, damar sistemini 40X'te fotoğraflayın. Ardından, kornea limbusunu bulmak için stereoskopu kullanın. Albino BALB/c farelerin limbusu, korneanın posterior dairesel vasküler pleksus olarak kolayca tanımlanabilir.
Şimdi, baskın elde, 30 gauge eğimli bir iğne tutun ve bunu, siliyer cisim ile ora serrata arasındaki uvea'nın posterior limbal sınırına yakın küçük bir uveal ponksiyon yapmak için kullanın. Delme işlemini sadece iğnenin ucunu kullanarak ve eğimin yarısından fazlasını kullanmayarak yapın. Lensi yırtmaktan kaçının.
Delinme kendi kendine sızdırmaz olmalı, ancak yine de yara yoluyla çalışma maddelerinin göz içi enjeksiyonuna izin vermelidir. Ardından, gözün karşı bölgesinde ikinci bir uveal ponksiyon yapın. Delinmeleri en dorsal ve en ventral pozisyonlarda olacak şekilde optimize edin.
Uveal ponksiyonları P24.5'e kadar her dört günde bir aynı iki pozisyonda tekrarlayın. Ve delinmeyi tekrarlamadan önce, daima travmatik katarakt olup olmadığını kontrol edin. Gözü enüklee ettikten ve metin protokolünde açıklandığı gibi sabitledikten sonra, fiksatif solüsyonu çıkarın ve gözü taze PBS ile üç kez durulayın.
Ardından, gözü ön kamara yukarı bakacak şekilde pürüzsüz, kuru bir yüzeye yerleştirin. Ardından, bir giriş noktası oluşturmak için limbusun arkasına eğimli 30 gauge bir iğne yerleştirin. Ardından, ön segmenti küçük bağlama forsepsleri ile sabitleyin ve gözü döndürürken limbusun etrafını kesmek için Clayman-Vannas düz makasını kullanın.
Kısmi kesimlerin kullanılması işlemi kolaylaştırabilir. Tamamlandığında, gözün arka segmenti serbest kalmalıdır. Ardından, lensi ortaya çıkarmak için ön segmenti aşağı doğru konumlandırın.
Lensi küçük forsepslerle tutup yukarı doğru çekerek dikkatlice çıkarın. Şimdi, ön segmenti kornea aşağı bakacak ve kesik görüş alanına dik olacak şekilde konumlandırın. Ardından, baskın olmayan eldeki küçük bağlama forsepslerini kullanarak siliyer cismin arkasındaki dokuyu nazikçe tutun.
Trabeküler ağı çıkarmak ve irisi izole etmek amacıyla siliyer cismin hemen önünü kesmek için Clayman-Vannas düz makas. İris daha sonra kornea içinde hareket etmelidir. Daha sonra, korneayı kavramak için küçük bağlama forsepsleri kullanın ve ön göz kabını dikkatlice 200 mikrolitre PBS içeren 96 oyuklu bir plakaya aktarın.
Kornea üzerindeki tutuşu koruyun ve dokuyu PBS ile yıkayarak irisi diseksiyona devam edin. Gerekirse, irisin yerini değiştirmeye yardımcı olmak için 30 gauge bir iğne kullanılabilir. Şimdi, küçük bağlama forsepslerini kullanarak korneayı çıkarın.
İzole edilmiş iris daha sonra üzerinde deney yapılana kadar geçici olarak dört santigrat derecede PBS'de saklanabilir. P12.5'teki Albino BALB / c fareleri, tarif edildiği gibi P24.5'e kadar her dört günde bir tekrarlanan uveal ponksiyonlara maruz bırakıldı. Korneanın şeffaflığı ve BALB/c farelerinin melanin eksikliği nedeniyle, iris damar sistemi P16.5 yavrularında kolayca görülebilir ve protokol süresi boyunca yoğunlaşır.
P27.5'te farelere ötenazi yapıldı ve irisleri dikkatlice diseke edildi. Delinmeler, yara iyileşme sistemini tetikleyerek iristen vasküler bir tepkiye neden oldu. PECAM1'e karşı immünohistokimya yapıldı.
Ortaya çıkan leke, kontrollere kıyasla delinmiş gözlerin irislerinde genel vaskülatürde bir artış gösterdi. Bu videoyu izledikten sonra, iris anjiyogenezinin nasıl indükleneceğini ve fare irisini nasıl başarılı bir şekilde izole edeceğinizi iyi anlamalısınız. Bu prosedürü takiben, pro-anjiyojenik veya anti-anjiyojenik maddelerin etkinliğini test etmek gibi ek moleküler ve hücresel soruları yanıtlamak için QBCR gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir.
Geliştirildikten sonra bu teknik, araştırmacıların küçük kemirgenleri model olarak kullanarak in-vivo, non-invaziv yöntemlerle neovasküler hastalıkları keşfetmelerinin yolunu açmıştır.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu makale, iskemik retinal hastalıklar ve neovasküler glokom ile ilişkili bir durum olan iris neovaskülarizasyonunu indüklemek için bir fare protokolü sunmaktadır. Bu yöntem, iris vaskülaritesinin doğrudan in-vivo görselleştirilmesi yoluyla anjiyogenezi modüle eden maddelerin noninvaziv olarak değerlendirilmesine olanak tanır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Oftalmoloji
- Anjiyogenez
- Neovasküler hastalıklar
Arka Plan
- İris neovaskülarizasyonu görmeyi tehdit edebilir.
- Anjiyogenezi anlamak, tedavilerin geliştirilmesi için kritik öneme sahiptir.
- Albino farelerin kullanımı, kan damarlarının görüntülenmesini kolaylaştırır.
- Fare gözünün küçük boyutu nedeniyle iris diseksiyonunda zorluklar mevcuttur.
Çalışmanın Amacı
- In-vivo çalışmalar için iris vaskülarizasyonunu indüklemek.
- Oküler neovasküler hastalıklar hakkında içgörü sağlamak.
- Yeni anjiyojenik terapileri test etmek.
Kullanılan Yöntemler
- Albino farelerde iris neovaskülarizasyonunun indüklenmesi.
- In-vivo görüntüleme teknikleri.
- Anjiyogenez modülasyonu yapan maddelerin deneysel değerlendirmesi.
- İris diseksiyon tekniklerinin gösterimi.
Ana Sonuçlar
- İris neovaskülarizasyonunun başarılı bir şekilde indüklenmesi.
- Anjiyojenik süreçlerin etkili şekilde görselleştirilmesi.
- Neovasküler hastalıkların mekanizmaları hakkında kazanılan bilgiler.
- Yeni tedavilerin test edilmesi için potansiyel uygulamalar.
Sonuçlar
- Bu yöntem, iris neovaskülarizasyonunun incelenmesi için değerli bir araç sunmaktadır.
- Oküler neovasküler hastalıkların anlaşılmasını geliştirmektedir.
- Gelecekteki araştırmalar, terapötik testler için bu modeli kullanabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama Uygunluğu
Bu model, iristeki anjiyojenik süreçlerin noninvaziv ve boylamsal değerlendirmesine olanak tanıyarak, neovasküler tedaviler için erken aşama hedef doğrulamasını destekler. Albino fare gözlerinin şeffaflığından yararlanarak, hastalıkla ilişkili oküler bir bağlamda anjiyojenik modülatörlerin değerlendirilmesi için ölçeklenebilir bir platform sağlar. Bu yaklaşım, son nokta histolojisine olan bağımlılığı azaltır ve preklinik anjiyogenez taramasındaki öngörü güvenini artırır.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: İnflamatuar ve plazminojen aktivasyon sistemlerinin tetiklediği indüklenebilir iris neovaskülarizasyonu yoluyla anjiyojenik yolakların sorgulanmasına olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Ölçülebilir bir vasküler yanıtı tetikleyen, tekrarlanabilir ve kendi kendini kapatan uveal ponksiyonlar aracılığıyla fonksiyonel hedef validasyonunu destekler.
- Öngörücü Değer: Anjiyogenez modülasyonunun zaman içindeki doğrudan in-vivo görselleştirmesine izin vererek mekanistik risk azaltımını kolaylaştırır.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Bilimsel Değer: PECAM1 immünohistokimyası aracılığıyla ölçülebilir bir anjiyojenik çıktı ve şeffaf kornea üzerinden noninvaziv in-vivo görüntüleme sağlar.
- Operasyonel Değer: P12.5'ten P24.5'e kadar her dört günde bir standartlaştırılmış, tekrarlanabilir vasküler indüksiyon sağlayarak deney tekrarlanabilirliğini destekler.
- Ölçeklenebilirlik Değeri: Düşük arka plan gürültüsü ile yüksek çözünürlüklü immünohistokimyasal analiz için yarı şeffaf BALB/c irislerinin flatmount preparasyonu ile uyumludur.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Translasyonel Değer: Diyabetik retinopatinin görme kaybına yol açan bir komplikasyonu olan neovasküler glokom patogenezini modelleyerek hastalıkla olan ilgiyi artırır.
- Preklinik Süreklilik: Pro- veya anti-anjiyojenik maddelerin in vivo test edilmesine olanak tanıyarak keşif aşamasından terapötik değerlendirmeye geçiş sağlar.
- Risk Ayarlı İlerleme: Vasküler yanıtın boylamsal izlenmesine imkan vererek anjiyojenik etkinlik temelinde karar verme süreçlerini destekler.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu yöntem, hedef hipotez testinden modülatör etkinliğinin preklinik doğrulamasına kadar, özellikle oküler neovasküler hastalık programlarındaki anjiyogenez keşif sürecine uygundur.
- Keşif Biyolojisi: İristeki yara iyileşmesi ve inflamatuar tetikleyiciler yoluyla anjiyogenezi indükleyerek yolak aydınlatılmasını destekler.
- Tarama: Canlı doku bağlamında anjiyojenik maddelerin taranması için uygun, tekrarlanabilir ve kantitatif vasküler çıktılar sağlar.
- Analitik: PECAM1 boyaması ve in-vivo görüntüleme yoluyla damar yoğunluğu ve morfoloji analizine imkan tanıyarak karşılaştırmalı durum değerlendirmesini kolaylaştırır.
- Translasyonel Araştırma: İnsan neovasküler glokom mekanizmalarını modeller ve biyobelirteç odaklı preklinik doğrulamayı destekler.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Birçok anjiyogenez odaklı projeye uygulanabilecek, yeniden kullanılabilir bir vasküler indüksiyon platformu oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Korunmuş anjiyojenik yolaklar tarafından tetiklenen insan benzeri iris neovaskülarizasyonunu modelleyerek hedef güvenini artırır.
- Operasyonel Değer: Travmatik katarakt için standartlaştırılmış ponksiyon zamanlaması, bölge seçimi ve postoperatif izleme yoluyla tekrarlanabilirliği geliştirir.
- Stratejik Değer: Geç aşama başarısızlık riskini azaltan erken, noninvaziv etkinlik okumalarına olanak sağlayarak sermaye verimliliğini artırır.
- Portföy Etkisi: İn-vivo iris vasküler yanıtına dayalı olarak anjiyojenik adayların riskle uyarlanmış önceliklendirmesini destekler.
Uygulama Hususları
- Stereoskopik rehberlik altında uveal ponksiyon ve iris izolasyonu dahil olmak üzere mikrocerrahi tekniklerinde uzmanlık gerektirir.
- Hassas doku manipülasyonu için 30-gauge eğimli iğneler, bağlama pensetleri ve Clayman-Vannas makasları gibi enstrümantasyona bağlıdır.
- Model tutarlılığını sağlamak için ponksiyon zamanlamasına (P12.5'ten P24.5'e kadar her 4 günde bir) ve postoperatif izlemeye yönelik standart protokoller gereklidir.
- Adaptasyon hususları arasında, vasküler görselleştirme kalitesini etkileyen fare suşu pigmentasyonu ve kornea şeffaflığındaki varyasyonlar yer alır.
- Pratik sınırlamalar arasında, gözün küçük boyutu nedeniyle iris diseksiyonunun teknik zorluğu bulunur ve bu durum güvenilir doku izolasyonu için eğitim gerektirir.
