Investigation of Protein Recruitment to DNA Lesions Using 405 Nm Laser Micro-irradiation

Antoine Gaudreau-Lapierre; Daniel Garneau; Billel Djerir; Fr&#233;d&#233;ric Coulombe; Th&#233;o Morin; Alexandre Marechal

doi:10.3791/57410

Soruşturma 405 Nm lazer mikro-ile kullanarak DNA lezyonlar için Protein alımı

JoVE Journal
Genetics

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Genetics

Investigation of Protein Recruitment to DNA Lesions Using 405 Nm Laser Micro-irradiation

Soruşturma 405 Nm lazer mikro-ile kullanarak DNA lezyonlar için Protein alımı

Full Text

9,965 Views

12:29 min

March 20, 2018

DOI: 10.3791/57410-v

Antoine Gaudreau-Lapierre*¹, Daniel Garneau*¹, Billel Djerir*¹, Frédéric Coulombe¹, Théo Morin¹, Alexandre Marechal¹

¹Department of Biology,Université de Sherbrooke

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

DNA hasar onarım Kinetik eğitim lezyonlar tanımlanmış alt nükleer bölgeler itibariyle ikna etmek için bir sistem gerektirir. Biz bir yöntem bir 405 nm lazer ile donatılmış lazer tarama confocal mikroskop kullanarak yerelleştirilmiş çift iplikçikli kesmeleri oluşturmak ve tamir faktörler bu lezyonlar, dinamikleri ölçmek için otomatik yordamlar sağlar açıklar.

Bu prosedürün genel amacı, geniş çapta bulunan bir 405 nanometre lazer taramalı konfokal mikroskop kullanarak lokalize DNA çift sarmallı kırılmalar oluşturmak ve bu lezyonlardaki DNA onarım faktörlerinin dinamiklerini ölçmek için otomatik prosedürler sağlamaktır. Bu yöntem, belirli bir proteinin çift sarmallı DNA kırılmalarına alınıp alınmadığını belirlemek ve DNA lezyonlarında birikimini düzenleyen sinyal yollarını tanımlamak için kullanılabilir. Teknik, DNA hasarını lokal olarak indüklemek için yaygın olarak bulunan bir konfokal mikroskop sistemi kullanır.

Bu, hemen hemen her laboratuvarın DNA hasar tepkisinin kinetiğini incelemesine izin verir. Floresan etiketli bir proteinin canlı alımını izliyorsanız, bir floresan muhabire kaynaştırılmış, ilgilenilen proteini ifade eden geçici transfeksiyon veya kararlı hücre hatlarının seçimini gerçekleştirin. Mikro ışınlama deneyinden 24 saat önce, 170 mikron kalınlığında lamel benzeri cam polimer tabanlı, sekiz oyuklu kültür slaytlarında,% 10 FBS içeren DMEM 1X'te oyuk başına 40.000 U2OS hücresi tohumlayın.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos