Name: Drosophila toksisite laboratuvarda test etmek için bir omurgasız Model sistemi olarak kullanmak için deneysel protokol (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min
Description: Keşfedin Drosophila kullanarak çevre toksisitesi protokolünü; gelişim aşamalarında ve nesiller arası kirletici etkilerini inceleyin. Bu yöntem ekolojik risk değerlendirmeleri için araştırmacılara standart bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu yayın bir hibe Department of Education tarafından desteklenmiştir (PR Ödülü #P031C160025-17, proje başlığı: 84.031 C) etkin kök inşa nişan (C-BASE) için Colorado State University-Pueblo (CSU-Pueblo) topluluklarına. Geçerli zooloji teşekkür ederiz ve bize bu protokolü yayımlamak için bir fırsat sağlamak için Jüpiter editörleri yanı sıra önceki kağıtları temsilcisi sonuçları kullanma hakkı sağlamak için Elsevier yayınladı. Ayrıca C-Bankası programı, Dr Brian Vanden Heuvel (C-taban ve Biyoloji bölümü, CSU-Pueblo), CSU-Pueblo biyoloji bölüm, Thomas Graziano, Dr. Bernard Possidente (Biyoloji bölümü, Skidmore üniversite) ve Dr. Claire Varian Ramos teşekkür etmek istiyorum (Biyoloji bölümü, Colorado State University-Pueblo) onların destek ve yardım için.

Bir toksin ağız sindirim uygun olduğunda kirli ortamda Drosophila cins içinde tür arka için kullanılan deneysel bir iletişim kuralı aşağıdaki protokoldür; maruz kalma diğer formları Drosophila modeli11,15,16,26kullanarak mümkündür. Daha önce Hirsch ve ark. tarafından açıklanan bu protokol için açıklanan yöntemleri 19 ve Peterson vd. 23 , 24 , 25.
1. Araştırma Laboratuvarı Drosophila hisse senedi olasılığını ayarla
<ol><li>Çevre kontrollü inkübatör (veya küçük oda) Drosophila ev hisse senedi nüfus için İnkübatörler ayarlayarak sabit sıcaklık, ışık: karanlık döngüsü ve nem, test türler tercihleri bağlı olarak ayarlayın. Not: Tercih edilen çevre koşulları çalışma için seçilen türlerin yerel ekoloji bağlı olarak değişir. Örneğin, D. melanogaster Sahra Afrika27 ile yerel ve 25 ° C, 1212: açık: koyu döngüsü ve yaklaşık % 60 nem16,18,19,20 genellikle korunur , 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 28 , 29 , 30. öte yandan, Kanada ve midwest ABD'de bir soğuk kadar bölge; en boyunca D. montana aralığı genişletir Bu nedenle, D. montana genellikle koşulları sırasında çiftleşme sezonu31benzetimini yapmak için 19-20 ° C ve bazen 24 h ışık rejimi tutulur. Drosophilaçeşitli türlerin coğrafi aralıkları daha ayrıntılı açıklaması için bkz: Drosophila türleşme desenler Web sitesi32.</li>
	<li>
Bir tercih edilen Drosophila türler ve/veya doğuştan çizgi ya da bir hisse senedi Merkezi'nden (bkz. tablo reçetesi) alanından isteği veya toplamak çıldırdı, genetik olarak değişken nüfus üzerine başka bir araştırma laboratuvarı. Not: Aşağıdaki adımlarda araştırma laboratuvarı korumak için Drosophila vahşi, genetik olarak değişken nüfus toplamak için yöntemleri açıklanmaktadır. Bu yöntemler Markow ve O'Grady33 ve Werner ve Jaenike34 geniş çeşitlilik türlerin bir kerede bir yem kaynağı ile hedef belirli türler yerine toplamak için değiştirilmiş.<ol>
<li>Buzlukta yarım düzine olgun muz gecede donma ve yem tuzakları ayarlamadan önce defrost.</li>
		<li>Birden fazla 1-2 L plastik şişe şişe sinekler yem şişe ve kaçış yakalanması izin vermek için önünde u şeklinde bir yarık keserek hazırlayın. Sinekler kapakları kaçamaz Yani plastik şişe onların şişe kapakları ile kap.</li>
		<li>Böylece şişelerin dibinde yaklaşık bir inç muz içerir fetişlerin muz şişeleri altýna ekleyin. Ripe domates bir dilim şişeye koyun. Böylece Maya Bulamaç emmek muz alır bir Maya Bulamaç (artık Maya bira verme süreci üzerinden) şişenin dibinde muz ekleyin.</li>
		<li>Maya bulamaç ve muz uzak üzerinde yürümek için temiz bir substrat sinekler var ve bu yüzden (içinde dikey dik) ahşap sopa için şişe ekleyin. Bu yöntemlerden nihai ürün Şekil 1 gösterir.</li>
		<li>Ağaçlar şişelerde bir gecede ve her 24 h ağız aspiratı şişe dışında uçar kontrol yem asmak ve şişeleri ISO-erkek satırları oluşturmak için orta ile tek tek kadın yer. Not: Eğer sadece her tür dişilerini açıkça belirlenebilir çok kadın satırlar, ancak, oluşturulabilir. Buna ek olarak, sinekler Drosophila cins içinde farklı ekolojik niş işgal ve bu niş (Werner ve Jaenike34); bağlı olarak farklı beslenme ihtiyaçları olacak Werner ve Jaenike34 diyet önerileri ve yemek tarifleri için bkz.</li>
		<li>Toplanan Drosophila türler tanımlamak için belgili tanımlık yetişkin F1 çoluk çocuk diseksiyon mikroskop altında incelemek (Markow ve O'Grady33 ve Werner ve Jaenike34 çeşitli türler belirleme konusunda yardım için bkz: ).</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57450/57450fig1.jpg"> Resim 1 : Tuzaklar ve yem Drosophila alanında vahşi nüfus toplamak için kullanılan resimsel gösterimi. (A) sinek küme Colorado'da bir yerel alan sitede yakalar. (B) daha yakın görünümünü anında küme bu alan sitede yakalar. <a href="/files/ftp_upload/57450/57450fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<ol start="3"><li>ISO-erkek ya da bir çevre kontrollü inkübatöre veya oda sabit sıcaklık, ışık: karanlık döngüsü ve nem ile çok kadın satırlarında sürdürür. Bunu yapmak için ev şişeleri uçan veya şişelerde orta tercih ve ortamda yumurtlamak gravid kadın izin. Şişeleri larva ve pupa varlığı için izleyin. Not: Sinekler Drosophila cins içinde farklı ekolojik niş işgal ve farklı diyet gereksinimleri ve bu nişler33,34bağlı olarak çevre abiyotik Tercihler olacaktır. Çevresel tercihleri ve diyet önerileri (ve daha fazla sinek yetiştirme eğitimi)-ebilmek bulunmak Elgin ve Miller28, Shaffer ve ark. 29, stocker ve Gallant30, Markow ve O'Grady33ve Werner ve Jaenike34. Belgili tanımlık tür-ebilmek var olmak identified kadar yerel çevre koşulları vahşi yakalanan türleri kullanıyorsanız, İnkübatörler benzetimi yapılabilir.</li>
	<li>Hisse senetleri, sık sık taze orta aktarımı, sağlıklı satırları korumak için eski şişeleri, atma ve akarları enfeksiyondan kaçının. Not: Aktarım sıklığını türlerin yaşam döngüsü bağlı olacaktır. Örneğin, Drosophila melanogaster 2 haftada taze ortamına aktarın. Daha fazla bilgi üzerinde laboratuvarda, satırları korumak için Rand ve arkgörmek. 16, Elgin ve Miller28, Shaffer ve ark. Veritabanı36 29, stocker ve Gallant30, Greenspan35ve Fen eğitimi.</li>
</ol>2. arka Drosophila kirlenmiş orta
Not: İlk kez veya yeni bir contaminant(s) ile laboratuvar olarak Drosophila sınama olumlu sonuçlanırsa, öldürücü doz tanımlamak (bkz: Castaneda vd. 37 ve Massie vd. 38 yöntemleri için) ve LD50 (Castaneda ve arkbkz. 37 ve Akins ve ark. 39 yöntemleri için) ilk. Daha sonra istediğiniz fenotipik çıktı için biyolojik ilgili konsantrasyonları tanımlamak için bir doz-yanıt eğrisi çalıştırın; Hirsch ve arkgörmek. 19 ve Zhou ve ark. 40 yöntemleri için.
<ol><li>Kirlenmiş orta kirletici Kimya bağlı olarak istenen concentration(s), hisse senedi çözümleri hazırlayın. Not: Örneğin PbAc hisse senedi çözümler hazırlamak için: geçen madde su ulaşır istenen konsantrasyon ile yapılan orta kadar distile su (dH20) geçen madde ekleyerek Kurşun asetat (PbAc) orta hisse senedi çözümleri hazırlayın. Örneğin, 1000 µM hisse senedi bir çözüm PbAc, hazır 1000 µM ulaşıncaya kadar dH2için 0 PbAc ekleyerek PbAc. Ayrıca, stok çözüm (Örneğin 1000 µM PbAc çözüm) için istenen konsantrasyon seyreltik (500 µM gibi PbAc) ve bu çözümler de hisse senedi korumak.</li>
	<li>Orta, denetim aracı olarak hizmet vermek amacıyla aşağıdaki üreticisinin yönergeleri hazırlamak. Ek orta, aşağıdaki üreticisinin yönergeleri hazırlamak; Ancak, hazırlanan kirletici çözüm dH20 için ek. Not: Örneğin, bir anda Drosophila orta kullanıyorsanız, yaklaşık bir çay kaşığı anlık orta için plastik bir şişe ekleyin. Yaklaşık 5-5,5 mL dH20 orta olarak ekleyin. Bir kaç canlı baker kontrol ortamı hazırlamak için mayası taneleri serpin. Deneysel orta hazırlamak için hisse senedi çözüm ek (500 µM gibi PbAc) dH20.</li>
	<li>
Çoğalma uygun Olgun kadın ve erkek hisse senedi örneğin alınma olasılığını denetimi ve deneysel orta aktarın. Not: Saat sonrası eclosion üreme vade arasında Drosophila türler41farklıdır.<ol>
<li>Nazikçe hisse senedi sinekler şişe aşağı dominant el ile dokunun. Sinekler otomatik olarak şişe altına taşımak emin olun. Diğer el ile şişe dokunarak süre şişe kapağını çıkarın ve denetim veya kontamine orta taze bir şişe şişeyi sinekler ile üstüne yerleştirin. Şişeleri bir arada tutmak ve sinekler otomatik olarak denetim veya kontamine orta taze şişe aktarılır böylece onları hafifçe dokunarak, ters çevirin. Hala şişeyi sinekler ile dokunarak süre, şişeyi kap.</li>
		<li>Her şişe sinekli sayısı standartlaştırmak emin olmak daha fazla şişeleri ile yineleyin. Not: Yetişkinlerin tek transfer yoluyla aktarılan toplam ya da anestezi aşırı kalabalık önlemek için kullanılan şişeleri boyutuna bağlıdır.</li>
		<li>Yetişkin bir standart çevre koşulu (yani bir kuluçka)'nda kuluçkaya ve yetişkinler dostum ve orta 24-96 h için yumurtalarını bırakmak için izin verir.</li>
		<li>24-96 h sonra yetişkin bir morg (mineral yağ ile dolu ve dar huni ile şapkalı bir şişesi) atmak geride bırakarak test etmek için olgun için (daha sonra deneysel konular olacak) yumurta döllenmiş. Tüpleri yumurta geliştirmek izin vermek için kuluçka makinesine koyun.</li>
		<li>Göçebe-biçim larva için şişeleri ortamından çıkan larvalar bakarak izlemek.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. toplamak deneysel konularda çeşitli gelişim aşamalarında
Not: Deneysel konularda kör kodlanmış 15 mL konik tüpler içinde yerleştirilir ve birikimi için test herhangi bir aşamada gelişimsel toplanan olabilir. Kirletici madde birikimi sınama yöntemleri okudu kirletici bağlı olacaktır. Örneğin, PbAc birikimi Inductively-Coupled plazma kütle spektrometresi (ICP-MS)42kullanarak test edilebilir. Buna ek olarak, gelişimsel herhangi bir aşamada fenotipik kirletici etkileri çeşitli için test edilecek deneysel konularda toplanan olabilir. Şekil 2 Drosophila yaşam döngüsü43göstermektedir. Şekil 3 pozlama için deneysel protokol ve koleksiyon için farklı gelişim aşamalarında gösterilmektedir.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57450/57450fig2.jpg"> Resim 2 : D. melanogaster (en sık kullanılan Drosophila modeli sistemi) yaşam döngüsünün kavramsal genel bakış. Drosophila yaşam döngüsünün aşamaları vardır: 1) yumurta, 2) ilk biçim larva, 3) ikinci biçim larva, 4) üçüncü INSTAR larva, 5) üçüncü-biçim larva, göçebe 6) white-eye pupa, 7) kırmızı göz pupa, 8) yeni-eclosed yetişkin ve 9) olgun yetişkin. <a href="/files/ftp_upload/57450/57450fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57450/57450fig3.jpg"> Şekil 3 : Sözlü olarak kontamine orta ebeveyn (F0) ve sonraki nesillere Drosophila teşhir için yöntemler kavramsal genel bakış (F1 ve aynı zamanda). (A) yöntemleri maruz üretimi geliştirme sırasında sözlü maruz kalma. (B) yöntemleri kirletici maddeleri transfer çoluk çocuk (F-1 istenen üretimi) için test etmek için. Bu rakam Peterson ve ark. değiştirildi 24 <a href="/files/ftp_upload/57450/57450fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<ol><li>
Göçebe-üçüncü INSTAR larva toplamak
	<ol>
<li>Larva ortamından ortaya ve kuluçka makinesine ışıkları açın sonra şişenin içinde bir h tarafında yukarı taşımak gibi ışıklar da kuluçka makinesine açtığınızda şişeleri izleme başlatın. İçinde bu h, göçebe-üçüncü INSTAR larva dikkatle bir tahta sopa veya cımbız kullanarak şişe taraftan kaldırmak. Not: "2.3.4" koydu yumurta sayısı larva koleksiyonu için kullanılabilir sayısını bağlıdır.</li>
		<li>Aşırı orta larvaları kaldırmak için dH2O. Pour dH2O kabı dışında küçük bir ölçek larvalar yerleştirin ve larvalar hassas görev silecek yerleştirin. Hassas görev silecek kullanarak, larvaları aşırı dH2O yavaşça çıkarın.</li>
		<li>Çevre kontrollü bir kuluçka deneysel nüfusu korumak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Yeni eclosed yetişkin toplamak
	<ol>
<li>Şişeleri için eclosion şişeleri kenarlarında pupa coloration gözlemleyerek izlemek. Not: Pupa geliştirme sırasında koyulaştırır. Gelişimsel zaman, özellikle ön eclosion, test türler üzerinde bağlıdır.</li>
		<li>İlk yetişkin eclose için başladığınızda, terk ve bu yetişkinlerin madeni yağ içeren bir morg atın.</li>
		<li>Ertesi sabah da kuluçka makinesine ışıkları açmak zaman, terk ve gecede veya morningbefore ışıkları sırasında eclosed sahip olabilir herhangi bir yetişkin bilinmeyen yaş (veya bekaret) atın.</li>
		<li>Yaklaşık 4 saat sonra anestezi CO2 topu şişeleri bulunan yeni eclosed yetişkin olarak ortaya çıkan herhangi bir yetişkin. Yetişkin bir diseksiyon mikroskop altında bir CO2 tabak yerleştirin. Yetişkin erkek ve kadın ovipositors ön ayakları üzerinde seks tarak yaşar seks. Not: D. melanogaster çiftleşme önlemek için eclosion içinde 6 h toplanan gerekir, ancak diğer türler artık gelişimsel kez olabilir (ve bu nedenle, bu zaman dilimi içinde toplanmasına gerek yoktur).</li>
		<li>Tahta bir sopa kullanarak CO2 plaka üzerinde ayrı yetişkin. Yavaşça orta eşleşen önceden varolan geçmiş için tahta bir sopa ile seks özel grupları yetişkinlerde aktarın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Olgun yetişkin sonrası eclosion toplamak
	<ol>
<li>Yetişkin orta eşleşen öncesi eclosion maruz yumurta aşamasından bir çevre kontrollü kuluçka istenilen yaş sonrası eclosion üzerinde kalmasını sağlar.</li>
		<li>Degişmeyen tek yetişkin yetişkin kapalı bedenlerini aşırı kirlenmiş orta damat izin vermek için test önce 24 saat denetim orta aktarın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. arka deneysel konularda Multigenerational etkileri ve Transgenerational pozlama Test etmek.
<ol><li>Ebeveyn üretimi (aka P0 veya F0 nesiller) arka için yetişkin "2.1" anlatılan adımları izleyerek deneysel orta ve denetlemek üzere hisse senedi nüfus "2.3" ve "3.1" "3.3" için transfer.</li>
	<li>Ne zaman yetişkin çoğalma Olgun (Pitnick ve arkbkz. 41), tek başına, denetim ya da deneysel orta taze bir şişe için erkek (2.3.1 belirtildiği gibi) transferi bir şişe. Tek başına bir şişe kadın erkek şimdi içeren taze şişe aktarın. Yetişkin dostum ve lay yumurta ortamda 24-96 h. dökümü için izin ve yetişkin madeni yağ içeren bir morga atın ve şişeleri yavru geliştirmek izin vermek için yeniden kuluçkaya.</li>
	<li>4.1 4.2 nesiller istenen sayısına bağlı olarak aracılığıyla adımları yineleyin.</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Drosophila melanogaster genler ve13,14 D. melanogaster ve insanlar arasında yollar geniş korunması nedeniyle biyolojik süreçlerin bir dizi için güçlü bir model olarak kurulmuştur. Tıp bilimi için güçlü bir model olduğunu aynı nedenlerle Drosophila toksikolojik bitiş noktaları bir dizi antropojenik kirlilik etkisi çalışma için uygun modeli sistem olarak ortaya çıkmıştır. Birkaç laboratuar başarıyla D. melanogaster bir modeli sis...

Her yıl yaklaşık 1000 yeni kimyasallar kimya endüstrisi1,2tarafından tanıtıldı; Ancak, sadece küçük bir yüzdesi bu kimyasalların çevreye etkilerinin dağıtım2,3önce test edilir. Büyük ölçekli felaketler nadir olmakla birlikte, kirleticiler, büyük bir çeşitlilik sublethal ve kronik maruz insanlar ve yaban hayatı4,5yaygın. Ölümcül, tek kimyasal pozlama, akut maruz kalma ve pozlama, fizyolojik etkileri kirleticiler hayatta kalma6, etkisini ölçme aracı olarak test etmek için ecotoxicology ve Çevresel Toksikoloji tarihsel odak oldu 7 , 8 , 9 , 10. hayvan testi için etik ve non-invaziv yaklaşımlar doğru bir kayma olsa da, geçerli yaklaşımlar rolden dolayı bu geliştirme, acil özellikleri ve dış faktörler sınırlama var (nüfus düzeyi gibi ve ekosistem düzeyi etkileşimleri) ekolojik önemli bitiş noktaları8arabuluculuk oynamak. Bu nedenle, yaban hayatı ve/veya laboratuarda omurgalılar ödün vermeden daha bütünsel bir yaklaşım dahil yöntemleri için bir ihtiyaç vardır.
Omurgasız modeli, Drosophila melanogastergibi toksisite test daha bütünsel bir yaklaşım ihtiyacını gidermek için cazip bir alternatif sistemlerdir. D. melanogaster, orijinal bir omurgasız modeli sistemi hakkında bir asır önce genetik araştırma insan ile ilgili olarak gelişmiş11. D. melanogaster şimdi göze çarpacak şekilde kullanılır omurgalı modeli alternatif bir yöntem olarak çeşitli nedenlerle: 1) koruma genler ve yolları arasında D. melanogaster ve insanlar; 2) kısa oluşturma süresi omurgalı modellerle karşılaştırıldığında; 3) ucuz maliyet, bakım; 4) örneklerin boyutu büyük oluşturmak için kolay; ve 5) fenotipik ve ekolojik-ilgili bitiş noktaları11,12,13,14,15,16,17 test etmek için kullanılabilir bolluk .
Birkaç laboratuar11,15,16,17,18,19,20,21,22, 23 , 24 , 25 artık kullanıyor D. melanogaster omurgalı modeli alternatif bir yöntem olarak toksisite testleri için kirliliği insanlar üzerinde etkileri anlamak için. Drosophila yerel yabani türlerin kullanılan, de ve yaban hayatı (insanlar) ekolojik cevap vermek için toksisite model olarak-, davranışsal-ve kuruluşun birden çok biyolojik düzeyde örümceklerle ilgili sorular. Türler Drosophila cins içinde bir model olarak kullanarak, çeşitli ölçülebilir bitiş noktaları vardır olası11,15,16,18,19,20 ,21,22,23,24,25. İn addition, Drosophila modeli kullanarak, toksikolog yapabilirsiniz: 1) etik etkileri kuruluşun; birden çok biyolojik düzeyde bağlantı 2) acil faktörler ve geliştirme rolü dahil; 3) çalışma ekolojik önemli bitiş noktaları (yanı sıra tıbbi olarak önemli bitiş noktası); 4) aynı anda birden fazla stres test; 5) ve test uzun vadeli multigenerational (Örneğin evrimsel ve transgenerational) stresler etkileri. Bu nedenle, Drosophila modeli sistemi olarak kullanmak yaklaşımlar mekanik yaklaşımlar doğuştan D. melanogaster laboratuar suşları ile eğitim için sınırlı değildir, çok sayıda sağlar.
Bu yazıda, biz yetiştirme ve çeşitli toksikolojik soruları cevaplamak için Drosophila toplamak için yöntemler mevcut. Daha ayrıntılı olarak, 1 için metodoloji tarif) ile bir veya daha fazla kirletici; bağcıklı orta Drosophila yetiştirme 2) toplama Drosophila geliştirme (üçüncü-biçim larva, pupa örnekleri, yeni eclosed yetişkin ve olgun yetişkin dolaşıpÖrneğin ); ve 3) test Kuşaklararası ve transgenerational iletim yanı sıra uzun vadeli yaydıkları maruz kalma evrimsel etkileri kirli ortamda Drosophila yetiştirme. Bu iletişim kuralı, önceki yazarlar18,19,20,21,22,23,24kullanarak,25 bildirdin farklı, genetik, fizyolojik ve davranışsal etkileri gelişimsel kurşun (Pb2 +) maruz kalma. Bu protokolü nasıl kirleticiler için insanlar ve yaban hayatı hiç giderek kirli ortamda risk faktörleri vardır anlamak için gerekli daha bütünsel bir toksikolojik yaklaşımı kullanmaya toksikolog sağlar.

<table><tbody><tr><td>Carolina Biological Instant Drosophila Medium Formula 4-24</td><td>Carolina Biological</td><td>173204</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila şişeleri, Dar (PS), Polistiren, Süper Toplu, 1000 şişe/birim</td><td>Genessee Scientific</td><td>32-116SB</td><td>Sinekleri saklamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Flugs Şişeler ve şişeler için kapaklar, Dar plastik şişeler</td><td>Genessee Scientific</td><td>49-102</td><td>Sinekleri saklamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Karton tepsiler, tepsiler sadece, dar</td><td>Genessee Scientific</td><td>32-124</td><td>Sinek popülasyonlarını düzenlemek için kullanılır</td></tr><tr><td>Karton tepsiler, sadece bölücüler, dar</td><td>Genessee Scientific</td><td>32-126</td><td>Sinek popülasyonlarını düzenlemek için kullanılır</td></tr><tr><td>Thermo Scientific&nbsp; Nalgene Kare Kapaklı Geniş Ağızlı HDPE Şişeler</td><td>Fischer Scientific</td><td>03-312D</td><td>Kirleticilerin depolanması için kullanışlıdır</td></tr><tr><td>Thermo Scientific&nbsp; Nalgene Renk Kodlu LDPE Yıkama Şişeleri</td><td>Fischer Scientific</td><td>03-409-17C</td><td>Kirleticilerin depolanması için kullanışlıdır</td></tr><tr><td>Eppendorf&nbsp; Tekrarlayıcı M4 Manuel El Tipi Pipet Dağıtıcı</td><td>Fischer Scientific</td><td>14-287-150</td> Orta Combitips <td>hazırlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Gelişmiş Pipet Uçları - Standart, Eppendorf Kalite İpuçları</td><td>Fischer Scientific</td><td>13-683-708</td><td>Orta Flypad hazırlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>, Standart Boyut (8,1 X 11,6 cm)</td><td>Genessee Scientific</td><td>59-114</td><td>Sinekleri uyuşturmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Flystuff ayak valfi</td><td>Genessee Scientific</td><td>59-121</td><td>Sinekleri uyuşturmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Tüp, yeşil (1 koşullu ayak/birim)</td><td>Genessee Scientific</td><td>59-124G</td><td>Sinekleri uyuşturmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Mineral Yağ, Hafif, Beyaz, Yüksek Saflıkta Sınıf, 500 mL HDPE Şişe</td><td>VWR</td><td>97064-130</td><td>Morg yapmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Cam Erlenmeyer Şişe Seti - 3 Boyut - 50, 150 ve 250ml, Karter Scientific 214U2</td><td>Walmart</td><td>Uygulanamaz</td><td>Morg yapmak için kullanılır</td></tr><tr><td>BGSET5 Cam Beher Seti 5'li</td><td>Walmart</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Drosophila</td><td>Bloomington Drosophila Indiana Üniversitesi'ndeki</td><td></td> Stok Merkezi <td>https://bdsc.indiana.edu</td></tr><tr><td>Drosophila</td><td>UC San Diego'nun vahşi popülasyonları Drosophila Stok Merkezi'nin</td><td></td> <td>vahşi popülasyonlarıhttps://stockcenter.ucsd.edu/info/welcome.php</td></tr></tbody></table>

drosophila toksisite laboratuvarda test etmek için bir omurgasız model sistemi olarak kullanmak için deneysel protokol

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Onlar nadiren toksikolojik çalışmalarda kabul edilir rağmen acil özellikleri ve dış faktörler (nüfus ve ekosistem düzeyi etkileşimleri, özellikle) ekolojik önemli bitiş noktaları, arabuluculuk içinde önemli rol oynarlar. D. melanogaster birkaç isim toxicants, davranış, nörolojik ve genetik etkileri için toksikoloji modeli olarak ortaya çıkıyor. Daha da önemlisi, Drosophila cins içinde tür acil özellikleri dahil ve toksikoloji araştırma ekolojik ilgili soruları cevaplamak bir bütünleştirici çerçeve yaklaşım için bir model sistem olarak yararlı olabilir. Bu kağıt amacı fenotipik çıkışlarını ve ekolojik ilgili sorular bir dizi için bir model sistem olarak kullanılacak kirleticiler için Drosophila cins içinde tür maruz kalmaları için bir protokol sağlamaktır. Daha ayrıntılı olarak, bu protokolü 1 olarak kullanılabilir) organizasyon çok biyolojik düzeyde bağlantı ve toxicants her iki birey ve nüfus düzeyi fitness üzerinde; etkisini anlamak 2) toxicants etkisini gelişimsel pozlama farklı aşamalarında test; 3) test sonuçları kirleticilerin multigenerational ve evrimsel; ve 4) aynı anda birden fazla kirletici ve stres test.

Sözlü olarak Drosophila contaminant(s) boyunca geliştirme için teşhir ederek çeşitli toksikolojik sorular Drosophila biyolojik organizasyonun farklı düzeylerde açarak test edilebilir. Bu bölümde daha önce yayımlanmış belgeleri23,24saat içinde bu iletişim kuralını kullanan elde temsilcisi sonuçları sunar. Özellikle, bu iletişim kuralı daha önce birikimi, ortadan kaldırılması ve kurşun (Pb) maruz kalma ve çoluk çoc...

Bu yazıda, fenotipik olarak çıkışları farklı gelişim aşamalarında bir dizi pozlama etkisini Eğitim amacı ile kirleticiler için Drosophila cins içinde tür teşhir için ve daha fazla bir nesil için detaylı bir protokol sağlar.

Drosophila toksisite laboratuvarda test etmek için bir omurgasız Model sistemi olarak kullanmak için deneysel protokol

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

Bu protokol, toksik maddelerin farklı gelişim aşamalarında zindelik üzerindeki etkisini anlamak ve nesiller boyunca kirleticilere maruz kalmanın etkisini incelemek için kullanılabilir. Prosedürü göstermek, Colorado Eyalet Üniversitesi Pueblo, Hugh Long ve Tyler Harvey'de aktif STEM katılımı oluşturmak için toplulukların bir parçası olan araştırma laboratuvarımdaki iki lisans öğrencisi olacak. İlgilenilen çevresel bir kirletici ile çalışmaya başlamak için, önce Drosophilia bileşiğinin% 50 öldürücü dozunu belirleyin.Bir doz yanıt eğrisi oluşturmak için yerleşik yöntemleri kullanın. Daha sonra, büyüme ortamını istenen konsantrasyonda bileşik ile hazırlayın. Örneğin, anlık ortam yaparken bileşiği su alikotuna ekleyin.Paralel olarak, eklenen bileşik olmadan kontrol ortamı yapın. Deney hayvanlarının toplanacağı kültürü oluşturmak için, üreme yetişkinlerini standart yöntemler kullanarak büyüme ortamına aktarın. Flakon başına sinek sayısını standartlaştırın ve yetişkinleri aşırı kalabalıklaştırmaktan kaçının.Daha sonra, sinekleri standart koşullar altında bir ila dört gün kuluçkaya yatırın. Kuluçkadan sonra, yetişkinleri atın ve test için olgunlaşmak üzere döllenmiş yumurtaları geride bırakın. Ardından, şişeleri inkübatöre geri koyun.Pozlama herhangi bir gelişim aşamasında ayarlanabilir. Ek olarak, deney konuları, deney hedeflerine bağlı olarak herhangi bir gelişim aşamasında toplanabilir. Gelişmekte olan hayvanları günlük olarak kontrol edin ve dolaşan üçüncü instar larvaları gibi ilgilenilen aşamanın ilk işaretini belirleyin.Maruz kalmanın dolaşan üçüncü instar larva aşaması üzerindeki etkilerini test etmek için, larvaları gıda substratından çıkmaya başladıklarında, ışıklar açıldıktan sonraki bir saat içinde toplayın. Daha sonra, suyu dökün ve fazla suyu nazikçe çıkarmak için larvaları bir laboratuvar dokusuna taşıyın. Kuruduktan sonra larvaları toplanmak üzere uygun tüplere aktarın.Maruz kalmanın yetişkinler üzerindeki etkilerini test etmek için, yeni kapatılan yetişkinleri toplayın; Karbondioksit anestezisi tamamdır. Sinekleri üreme açısından olgunlaşmadan ve çiftleşmeye başlamadan önce topladığınızdan emin olun. Sinekleri cinsiyete özgü gruplara ayırın ve önceden var olan maruziyeti eşleştirmek için kontrol veya deneysel kontamine ortamla yüklenmiş şişelere aktarın.Daha sonra, yetişkin sineklerdeki kirleticileri ölçmeden 24 saat önce, yetişkinlerin vücutlarındaki fazla ortamı temizlemelerine izin vermek için hem kontrol hem de kontamine ortamdaki yetişkinleri kontrol ortamı ile dolu bir şişeye aktarın. 24 saatlik tımarlamadan sonra, sinekler uygun yöntem kullanılarak test edilebilir. Örneğin, davranış değişiklikleri bir eşleşme seçimi testi kullanılarak test edilebilir.Bu yöntemleri kullanarak, kirletici maruziyetinin nesiller arası etkilerinin incelenmesi çok kolaydır. Kontrol ortamında maruz kalan yetişkinler arasında çaprazlamalar oluşturun ve Fnot maruziyetinin dölleri üzerindeki etkilerini inceleyin. Bu protokol, aynı nesil yavrular içinde kurşun birikimini, eliminasyonunu ve sekestrasyonunu değerlendirmek için kullanıldı.Drosophila, farklı dozlarda, gelişim aşamalarında ve evrimsel ölçeklerde kolayca kurşun biriktirdi. Çok kuşaklı bir maruziyet kullanılarak, ebeveyn maruziyetinin ilk nesil yetişkin yavrulara aktarılmadığı bulunmuştur. Bu nedenle, bu protokolü kullanarak, farklı evrimsel ölçeklerde uyarlanabilir tepkileri ve ayrıca nesiller arası etkileri test etmek mümkündür.Daha sonra, sinekler yumurta aşamasından yetişkinliğe kadar kontrol veya kurşunlu besiyerinde yetiştirildi ve 24 saatlik safsızlıktan sonra test edildi, eş tercihi test edildi. Dişiler kurşunlu ortamda yetiştirilir, tercihen kurşuna maruz kalan erkeklerle kontrole maruz kalan erkeklere göre çiftleştirilir. Öte yandan, erkekler aynı önyargıyı göstermedi.Bu videoyu izledikten sonra, çeşitli soruları ve toksikolojiyi yanıtlamak için Drosophila'yı nasıl yetiştireceğinizi ve toplayacağınızı iyi anlamış olmalısınız. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu protokol düzgün bir şekilde gerçekleştirilirse bir ila iki ay içinde yapılabilir. Bu prosedürü denerken, gereksiz strese neden olmamak için sinekleri nazikçe tutmayı unutmamak önemlidir.Bu prosedürü takiben davranışsal, genetik ve nörolojik sorular gibi diğer sorular test edilebilir. Kirletici maddelerle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken kişisel koruyucu ekipman giymek ve kirleticileri bir başlık içinde hazırlamak gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

experimental-protocol-for-using-drosophila-as-an-invertebrate-model

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bilim adamları, farklı deneysel koşulların sineklerin ömrünü nasıl etkilediğini ölçmek ve deneysel sonuçları ölçmek için süreçte hayatta kalma eğrileri oluşturmak için Drosophila yaşam süresi protokolünü kullanır. Numune protokolü, değişen konsantrasyonlarda endokrin bozucu kimyasallara veya 17-α-etinilestradiol (EE2) gibi EDC'lere maruz kalmanın uzun ömür üzerindeki etkilerini incelemek için uygulanan testi içerir.

Drosophila melanogaster için Yaşam Süresi Protokolü: Sinek Uzun Ömürlülüğündeki Farklılıkları Belirlemek için Hayatta Kalma Eğrileri Oluşturma

Bu videoda, meyve sinekleri için renkli gıdaların beslenmeyi izlemek için kullanıldığı bir besleme testi ve eklenen bileşiklerin besleme aktivitesi üzerindeki etkisi açıklanmaktadır. Örnek protokol, çeşitli endokrin bozucu kimyasalların (EDC) etkilerini test eder.

Beslenme Testi: Drosophila melanogaster'de Beslenme Tercihlerinin Değerlendirilmesi

Burada, stresli bireylerin kaçınma durumunu ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Bu paradigma güçlü ancak kullanıcı dostudur ve Drosophila melanogaster'de genlerin ve çevrenin bir tür sosyal etkileşim üzerindeki etkisini değerlendirmek için kullanılabilir.

Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi Drosophila melanogaster

Burada, duyusal nöron - vivo içinde birleştirir dendritik arborization (da) nöron yaralanma modeli, canlı görüntüleme Drosophila , İki fotonlu lazer axotomy/dendriotomy ve güçlü sinek genetik araç, olarak bir iletişim kuralı'nı mevcut olası rehberleri ve neuroregeneration inhibitörleri süzmek için bir platform.

Neuroregeneration periferik ve santral sinir sistemi çalışmak için bir Vivo Drosophila yaralanma modeli

Bu iletişim kuralı maliyet-etkin ve uygun farmakolojik ajanları, sinirsel proteinlerin genetik mutasyonlar test etkinleştirmek için Drosophila melanogaster merkezi sinir sistemi azalan elektriksel aktivitesinin kaydetmek için bir yöntem açıklar, ve/veya keşfedilmemiş fizyolojik yolları rolü.

Üçüncü-biçim Drosophila Melanogaster merkezi sinir sisteminin etkinliğinin elektrofizyolojik kayıt

Endokrin parçalayıcı kimyasalları (EDCs), organizmalar ve doğal ortamlar için ciddi bir sorun oluşturmaktadır. Drosophila melanogaster EDC efektleri içinde vivo çalışmak için ideal bir model temsil eder. Burada, Drosophila endokrin bozulması araştırmak için yöntemler mevcut, fitabet üzerinde EDC etkileri ele, fertilite, gelişimsel zamanlama, ve sinek ömrü.

Drosophila melanogaster endokrin bozulma test yöntemleri

Bu protokol, kimyasal toksik maddelerin yetişkin Drosophila melanogaster'in yaşayabilirliği üzerindeki etkilerini değerlendirmek için sıvı ortam kullanan verimli ve ucuz bir yöntemi tanımlamaktadır.

Erişkin Drosophila Melanogaster'de Kimyasal Toksisitenin Değerlendirilmesi

Protokol, geleneksel memeli modellerine bir alternatif olarak lokomotor disfonksiyonun nicelleştirilmesi yoluyla meyve sineğindeki nörotoksisiteyi değerlendirmek için yüksek verimli, uygun maliyetli bir yöntem sunar. Farmasötik bileşiklerin, çevresel ajanların veya genetik modifikasyonların nörotoksik etkilerini hassas, tekrarlanabilir ve etik açıdan uygun bir model kullanarak değerlendirmeyi amaçlar.

Drosophila melanogaster'de Lokomotor Disfonksiyonun Nörotoksisite için Bir Okuma Olarak Davranışsal Analizi

Bu video test gösterilmiştir nikotin değil saha ve bir tütün bitkileri infests aphids bir iki tür tolerans testleri.

Yapay Diyet Deney kullanarak Yaprak bitleri Nikotin Tolerans Testi

Bu çalışmada, kimyasal maddeler, endüstriyel atık su veya kanalizasyon ve tuzlu kabuklu sıvı çevresel örneklerde tarafından uygulanan uzun vadeli (14 gün) ölümcül toksisite belirlemek için değerli bir metodolojik protokolünün geliştirilmesi ve standardizasyonu ile...

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana</em

Keşfedin Drosophila kullanarak çevre toksisitesi protokolünü; gelişim aşamalarında ve nesiller arası kirletici etkilerini inceleyin. Bu yöntem ekolojik risk değerlendirmeleri için araştırmacılara standart bir araç sunar.

Drosophila toksisite laboratuvarda test etmek için bir omurgasız Model sistemi olarak kullanmak için deneysel protokol

Daha fazla video keşfet