Drosophila toksisite laboratuvarda test etmek için bir omurgasız Model sistemi olarak kullanmak için deneysel protokol

Bu protokol, toksik maddelerin farklı gelişim aşamalarında zindelik üzerindeki etkisini anlamak ve nesiller boyunca kirleticilere maruz kalmanın etkisini incelemek için kullanılabilir. Prosedürü göstermek, Colorado Eyalet Üniversitesi Pueblo, Hugh Long ve Tyler Harvey'de aktif STEM katılımı oluşturmak için toplulukların bir parçası olan araştırma laboratuvarımdaki iki lisans öğrencisi olacak. İlgilenilen çevresel bir kirletici ile çalışmaya başlamak için, önce Drosophilia bileşiğinin% 50 öldürücü dozunu belirleyin.

Bir doz yanıt eğrisi oluşturmak için yerleşik yöntemleri kullanın. Daha sonra, büyüme ortamını istenen konsantrasyonda bileşik ile hazırlayın. Örneğin, anlık ortam yaparken bileşiği su alikotuna ekleyin.

Paralel olarak, eklenen bileşik olmadan kontrol ortamı yapın. Deney hayvanlarının toplanacağı kültürü oluşturmak için, üreme yetişkinlerini standart yöntemler kullanarak büyüme ortamına aktarın. Flakon başına sinek sayısını standartlaştırın ve yetişkinleri aşırı kalabalıklaştırmaktan kaçının.

Daha sonra, sinekleri standart koşullar altında bir ila dört gün kuluçkaya yatırın. Kuluçkadan sonra, yetişkinleri atın ve test için olgunlaşmak üzere döllenmiş yumurtaları geride bırakın. Ardından, şişeleri inkübatöre geri koyun.

Pozlama herhangi bir gelişim aşamasında ayarlanabilir. Ek olarak, deney konuları, deney hedeflerine bağlı olarak herhangi bir gelişim aşamasında toplanabilir. Gelişmekte olan hayvanları günlük olarak kontrol edin ve dolaşan üçüncü instar larvaları gibi ilgilenilen aşamanın ilk işaretini belirleyin.

Maruz kalmanın dolaşan üçüncü instar larva aşaması üzerindeki etkilerini test etmek için, larvaları gıda substratından çıkmaya başladıklarında, ışıklar açıldıktan sonraki bir saat içinde toplayın. Daha sonra, suyu dökün ve fazla suyu nazikçe çıkarmak için larvaları bir laboratuvar dokusuna taşıyın. Kuruduktan sonra larvaları toplanmak üzere uygun tüplere aktarın.

Maruz kalmanın yetişkinler üzerindeki etkilerini test etmek için, yeni kapatılan yetişkinleri toplayın; Karbondioksit anestezisi tamamdır. Sinekleri üreme açısından olgunlaşmadan ve çiftleşmeye başlamadan önce topladığınızdan emin olun. Sinekleri cinsiyete özgü gruplara ayırın ve önceden var olan maruziyeti eşleştirmek için kontrol veya deneysel kontamine ortamla yüklenmiş şişelere aktarın.

Daha sonra, yetişkin sineklerdeki kirleticileri ölçmeden 24 saat önce, yetişkinlerin vücutlarındaki fazla ortamı temizlemelerine izin vermek için hem kontrol hem de kontamine ortamdaki yetişkinleri kontrol ortamı ile dolu bir şişeye aktarın. 24 saatlik tımarlamadan sonra, sinekler uygun yöntem kullanılarak test edilebilir. Örneğin, davranış değişiklikleri bir eşleşme seçimi testi kullanılarak test edilebilir.

Bu yöntemleri kullanarak, kirletici maruziyetinin nesiller arası etkilerinin incelenmesi çok kolaydır. Kontrol ortamında maruz kalan yetişkinler arasında çaprazlamalar oluşturun ve Fnot maruziyetinin dölleri üzerindeki etkilerini inceleyin. Bu protokol, aynı nesil yavrular içinde kurşun birikimini, eliminasyonunu ve sekestrasyonunu değerlendirmek için kullanıldı.

Drosophila, farklı dozlarda, gelişim aşamalarında ve evrimsel ölçeklerde kolayca kurşun biriktirdi. Çok kuşaklı bir maruziyet kullanılarak, ebeveyn maruziyetinin ilk nesil yetişkin yavrulara aktarılmadığı bulunmuştur. Bu nedenle, bu protokolü kullanarak, farklı evrimsel ölçeklerde uyarlanabilir tepkileri ve ayrıca nesiller arası etkileri test etmek mümkündür.

Daha sonra, sinekler yumurta aşamasından yetişkinliğe kadar kontrol veya kurşunlu besiyerinde yetiştirildi ve 24 saatlik safsızlıktan sonra test edildi, eş tercihi test edildi. Dişiler kurşunlu ortamda yetiştirilir, tercihen kurşuna maruz kalan erkeklerle kontrole maruz kalan erkeklere göre çiftleştirilir. Öte yandan, erkekler aynı önyargıyı göstermedi.

Bu videoyu izledikten sonra, çeşitli soruları ve toksikolojiyi yanıtlamak için Drosophila'yı nasıl yetiştireceğinizi ve toplayacağınızı iyi anlamış olmalısınız. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu protokol düzgün bir şekilde gerçekleştirilirse bir ila iki ay içinde yapılabilir. Bu prosedürü denerken, gereksiz strese neden olmamak için sinekleri nazikçe tutmayı unutmamak önemlidir.

Bu prosedürü takiben davranışsal, genetik ve nörolojik sorular gibi diğer sorular test edilebilir. Kirletici maddelerle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken kişisel koruyucu ekipman giymek ve kirleticileri bir başlık içinde hazırlamak gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.