Name: Görüntü güdümlü rezeksiyon Glioblastoma ve kafa içi tedavi kök hücre numaralı seribaşı iskele implantasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: Öğrenin farelerde görüntü güdümlü beyin tümörü rezeksiyonu ve mezenkimal kök hücre iletili iskele implantasyonu yöntemini. Bu teknik, glioblastoma tedavisinde cerrahi ve hücre terapisinin etkileşimini incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Dr Kathryn Pietrosimone Editör katkıları kabul etmiş oluyorsunuz. PLA iskele Kuzey Carolina Eyalet Üniversitesi'nde Dr. Elizabeth Loboa'nın laboratuvar tarafından üretildi. Bu eser UNC Lineberger kapsamlı kanser Merkezi'nin Üniversitesi kanser araştırma fonu ve UNC translasyonel ve Klinik Bilimler Enstitüsü (KL2TR001109, UL1TR001111) tarafından desteklenmiştir.

Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC), University of North Carolina Chapel Hill tarafından onaylanmıştır.
Not: Bu yordamı ile açık bir kranyotomi fareler üzerinde gerçekleştirilen iletişim kuralı neyin ameliyatla kemik dokusu atılır Mostany ve Portera-Cailliau19 tarafından değiştirilmiş bir sürümü beyin kuruluş için erişilebilir bırakarak ve nihai rezeksiyon GBM tümör. Kranyotomi, tümör stereotaksik implantasyon Ozawa ve James20içinde açıklandığı gibi kurulur. 1 x 105 U87 mCh-Fl hücreleri aşağıdaki stereotaksik koordinatları (bregma mm), implant: (2.5, 0, -0,5).
1. hücre kültürü ve İskele yapısı-hazırlık
Not: Farelerde implantasyon öncesinde 48 h iskele hazırlanmalıdır. Aşağıdaki birimler bir iskele başına olarak temin edilmektedir. Miktarları ek iskele için gerektiği gibi çarpın.
<ol><li>PLA iskele rezeksiyon (yaklaşık 2 x 2 mm) boşluğuna ölçekli parçalar halinde kesin. İskele makas veya tekrarlanabilirlik için bir delik yumruk kullanarak elle kesebiliriz.</li>
	<li>15 dakika içinde PBS çeker tarafından takip % 70 etanol içinde çeker tarafından sterilize. İskele Dulbecco'nın değiştirilmiş kartal Orta (DMEM) % 10 fetal Sığır serum (FBS) ve % 1 penisilin-streptomisin içeren hücreleri tohum için hazırlarken yerleştirin.</li>
	<li>Kültürlü MSCs % 0.05 tripsin (bir T75 şişesi için 3-5 mL) kullanarak kaldırın. 5 dk. hücreleri kaldırdı sağlamak için 37 ° C'de kuluçkaya sonra 7-10 mL DMEM tripsin devre dışı bırakabilirsiniz için balonun ekleyin.</li>
	<li>Şişesi içeriği 15 mL santrifüj tüpü aktarın. Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak. 5 x 105 MSCs için her iskele üzerinden Santrifüjü 100 x g 5 min için de cips.</li>
	<li>Süpernatant Aspire edin ve MSCs 5 x 105 hücre başına 5 µL DMEM içinde resuspend.</li>
	<li>İskele kuru onları okşamaya tarafından tohumlama için hazırlayın.<ol>
<li>Bir iskele DMEM daldırma forseps ile çıkarın ve geçici olarak 6-şey plaka kapağını yerleştirin. İskele aşırı DMEM bir damlacık bırakarak kapağı kapalı kaldırın.</li>
		<li>İskele geri tekrar bir konumda yeni, Kuru kapağı yerleştirin. 3 - 5 kez yineleyin ve sonra kısmen kurutulmuş iskele tohum için yeni bir 6-şey tabak yerleştirin. Her iskele için yineleyin. Not: Optimum hücre sonuçları tohum kısmen kurutulmuş bir iskele sağlar. İskele çok ıslak ise, hücre iskele slayt ve iyi plakasına aşağıdaki uygun. İskele çok kuru ise, damlacık zavallı ilk hücre dağıtım kaynaklanan tüm iskele üzerinde yayılır değil.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bir pipet kullanarak, kök hücre bazı hücreler altına kapatılmış olarak süspansiyon homojenize şişe karışımı yavaşça.</li>
	<li>Yavaş yavaş 2.5 µL taze MSC süspansiyon üzerinde doğrudan iskele iskele üst üzerinde küçük damlacık oluşturma, karışık pipet.</li>
	<li>300 µL DMEM için her şey kenarlar ekleyin. Bu hücre damlacık hızlı buharlaşma önlemek. 30 dk, hücreleri için iskele takmak izin için 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
	<li>Forseps ile hafifçe iskele iyi tabağına ters çevirin. Tohum 2.5 taze karışık µL MSC süspansiyon (5 x 105 hücre iskele seribaşı Toplam Sonuç). 30 dk, hücreleri için iskele takmak izin için 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
	<li>İskele DMEM içinde 2 mL 6-şey plaka her şey için ekleyerek kapsar. Medya altında akışı için izin vermek için iskele yavaşça kaldır. İmplantasyon ameliyat öncesi 48 saat için bu eyalette 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
	<li>Aşırı buharlaşma veya pH dengesizlik nedeniyle renksiz medya gözlem yapılırsa iskele 24 h ve Ekle/Değiştir medya sonra kontrol edin.</li>
</ol>2. floresans güdümlü rezeksiyon ve iskele implantasyon
Not: cerrahi başlatma öncesinde tüm araçları Sterilize. Profilaktik analjezi, kurumsal IACUC protokolünde özetlenen yönetmek.
<ol><li>Stereotaksik çerçeve stereomicroscope anatomi bir floresan sahnesinde yerini.</li>
	<li>Fareyi bir indüksiyon odasında inhale isoflurane altında anestezi. Anestezi geldiğinde, fareyi bir isoflurane burun konisi adaptör ile sürekli inhale anestezi kaynağıyla stereotaksik çerçevesinde güvenli. Bir ısıtma yastığı ve/veya sonda ile vücut ısısını korumak. Not: 4-%5 isoflurane indüksiyon için uygundur ve 2-%3 bakım için uygundur, ancak bu adapte olmalı ve her fare için izlenir.</li>
	<li>Oftalmik merhem kornea kurutma önlemek için gözler için geçerlidir. Kafa derisi kesi site bir dizi üç alkol ve üç betadin mendil ile sterilize.</li>
	<li>Ayak çimdik refleks testi her bacak üzerinde gerçekleştirmek ve uygun anesthetization emin olmak için olumsuz yanıt onaylayın. Yaklaşık 55-65 nefes/dk solunum sabit hızda olun.</li>
	<li>Forseps kullanarak, çimdik ve kafa derisi yavaşça kaldırın. Bir doğrusal kaudal rostral ensizyon cerrahi makas ile olun. PBS kesi sitesiyle sulamak ve dairesel bir fırçalama hareketle bir pamuk uç aplikatör ile deri altı yağ çıkarmak. Öyle ki daha önce kurulmuş kafatası tamamen görünür penceresidir cilt düzenlemek.</li>
	<li>Yavaşça sadece bir 18-G iğne kullanarak kafatası pencere kenarlıklarının iç dura delik. Belgili tanımlık kesme tam pencere iç izleri kadar yineleyin.</li>
	<li>Beyin zarı uzak temel parankimi ve tümör ortaya iyi forseps kullanarak peeling tarafından kaldırın.</li>
	<li>Oda ışıkları kapatarak ve stereomicroscope floresan modu kapatarak U87 mCh-Fl tümörü bulun. Rezeksiyon için bir vakum pompası hortumu ucunu 1-200 µL pipet ucu yükleyerek hazırlayın.</li>
	<li>Vakum Pompası açmak. Tümör kadar hiçbir sinyal kalır yavaşça floresan doku alıyorum tarafından çıkarabileceğim. Vakum Pompası devre dışı bırakmak ve Pipet Ucu atın. Floresans kapalı ve odanın ışıkları geri dön. Not: kanamayı kontrol için soğuk PBS ile sulamak ve pamuk uç aplikatör ile sabit basınç uygulayın. Kanamayı ardından başka bir PBS sulama durduktan sonra kaldırılır sürece daha ciddi vakalarda, rezeksiyon boşluğu da geçici olarak bir kan durdurucu sargı aracıyla paketlenebilir.</li>
	<li>Hemen implantasyon öncesinde, yavaş yavaş istenmeyen ortam ve ilişkili bileşenleri kaldırmak için PBS bir MSC numaralı seribaşı PLA iskele daldırma. İskele rezeksiyon boşluğuna implant. Gerekirse, 1 µL fibrinojen (67-106 mg/mL) 1 µL Trombin (400-625 U / iskele güvenliğini sağlamak için mL) tarafından takip yere ekleyin.</li>
	<li>Kaldırıldı dura ve kalp kapakcıgını zaten atılan kafatası penceresinden, yara deri kapanış ve cerrahi yapıştırıcı uygulayarak kapatın. Hayvan inhale anestezik kaldırmak ve ısıtmalı bir yüzeye kurtarmak için izin.</li>
	<li>Bir kez Ambulatuvar, dönüş fare kafesi. Analjezik IACUC onaylı zamanlamaya göre yönetmek. Her fare için yordamı yineleyin.</li>
</ol>3. görüntüleme sonrası ameliyat
<ol><li>28-G insülin Ģırınga kullanarak, fare ile D-biyoluminesans (150 mg/kg mayi) enjekte et.</li>
	<li>10 dakika bekleyin. Bu vücutta dolaşan ve beyinde en yüksek ifadesi elde etmek için luciferase ifade kanser hücreleri ile reaksiyona biyoluminesans izin verir.</li>
	<li>(Olarak daha önce bahsedilen) İsoflurane anestezi altında fareler bir bioluminescence görüntüleme (BLI) sistemi tümörleri görselleştirmek için görüntü. Pozlama süreleri gerekli (saniye dakika) tümör boyutuna bağlı olarak değişir.</li>
	<li>Görüntüleme yordamı tümör büyüme kinetik belirlemek için gerektiği kadar yineleyin. Hayvan sağlığı izlemeye devam edin. Not: Terapötik MSCs yapısal kanser hücrelerini öldürme ve genel tümör büyüme baskılayarak izi, ifade edecek. 2-5 günde Imaging yeterli frekans bu amaç için sağlar.</li>
	<li>IACUC protokolünde özetlenen önceden belirlenmiş bitiş noktaları araya geldi, fareler transcardial perfüzyon tarafından kurban ve doku analizi için toplamak.</li>
</ol>

<ol><li>Adamson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+multiforme%3A+a+review+of+where+we+have+been+and+where+we+are+going%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+opinion+on+investigational+drugs%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma multiforme: a review of where we have been and where we are going.</a> Expert opinion on investigational drugs. 18 (8), 1061-1083 (2009).</li>
<li>Asthagiri, A. R., Pouratian, N., Sherman, J., Ahmed, G., Shaffrey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+Brain+Tumor+Surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Neurologic+Clinics%22%5BJournal%5D)">Advances in Brain Tumor Surgery.</a> Neurologic Clinics. 25 (4), 975-1003 (2007).</li>
<li>Affronti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overall+survival+of+newly+diagnosed+glioblastoma+patients+receiving+carmustine+wafers+followed+by+radiation+and+concurrent+temozolomide+plus+rotational+multiagent+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Overall survival of newly diagnosed glioblastoma patients receiving carmustine wafers followed by radiation and concurrent temozolomide plus rotational multiagent chemotherapy.</a> Cancer. 115 (15), 3501-3511 (2009).</li>
<li>Erpolat, O., Akmansu, M., Goksel, F., Bora, H., Yaman, E., Büyükberber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+of+newly+diagnosed+glioblastoma+patients+treated+by+radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide%3A+a+long-term+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Tumori%22%5BJournal%5D)">Outcome of newly diagnosed glioblastoma patients treated by radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide: a long-term analysis.</a> Tumori. 95 (2), 191-197 (2009).</li>
<li>Minniti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma+in+elderly+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma in elderly patients.</a> Journal of Neuro-Oncology. 88 (1), 97-103 (2008).</li>
<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li>
<li>Delgado-López, P., Corrales-García, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+in+glioblastoma%3A+a+review+on+the+impact+of+treatment+modalities%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Translational+Oncology%22%5BJournal%5D)">Survival in glioblastoma: a review on the impact of treatment modalities.</a> Clinical and Translational Oncology. 18 (11), 1062-1071 (2016).</li>
<li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tracking+of+superparamagnetic+iron+oxide+nanoparticle-labeled+mesenchymal+stem+cell+tropism+to+malignant+gliomas+using+magnetic+resonance+imaging.+Laboratory+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">In vivo tracking of superparamagnetic iron oxide nanoparticle-labeled mesenchymal stem cell tropism to malignant gliomas using magnetic resonance imaging. Laboratory investigation.</a> Journal of Neurosurgery. 108 (2), 320-329 (2008).</li>
<li>Nakamizo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+the+treatment+of+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Human bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the treatment of gliomas.</a> Cancer Research. 65 (8), 3307-3318 (2005).</li>
<li>Xu, F., Shi, J., Yu, B., Ni, W., Wu, X., Gu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+mediate+mesenchymal+stem+cell+migration+toward+gliomas+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Reports%22%5BJournal%5D)">Chemokines mediate mesenchymal stem cell migration toward gliomas in vitro.</a> Oncology Reports. 23 (6), 1561-1567 (2010).</li>
<li>Park, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCR4-transfected+human+umbilical+cord+blood-derived+mesenchymal+stem+cells+exhibit+enhanced+migratory+capacity+toward+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">CXCR4-transfected human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells exhibit enhanced migratory capacity toward gliomas.</a> International Journal of Oncology. 38 (1), 97-103 (2011).</li>
<li>Ho, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+Metalloproteinase+1+Is+Necessary+for+the+Migration+of+Human+Bone+Marrow-Derived+Mesenchymal+Stem+Cells+Toward+Human+Glioma%5BTitle%5D)+AND+%22STEM+CELLS%22%5BJournal%5D)">Matrix Metalloproteinase 1 Is Necessary for the Migration of Human Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Toward Human Glioma.</a> STEM CELLS. 27 (6), 1366-1375 (2009).</li>
<li>Bexell, D., Svensson, A., Bengzon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-based+therapy+for+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+Reviews%22%5BJournal%5D)">Stem cell-based therapy for malignant glioma.</a> Cancer Treatment Reviews. 39 (4), (2012).</li>
<li>Nouri, F., Wang, X., Hatefi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+theranostic+mesenchymal+stem+cells+for+the+evaluation+of+the+anticancer+efficacy+of+enzyme%2Fprodrug+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered theranostic mesenchymal stem cells for the evaluation of the anticancer efficacy of enzyme/prodrug systems.</a> Journal of Controlled Release. 200, 179-187 (2015).</li>
<li>Kauer, T., Figueiredo, J. -L., Hingtgen, S., Shah, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulated+therapeutic+stem+cells+implanted+in+the+tumor+resection+cavity+induce+cell+death+in+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Encapsulated therapeutic stem cells implanted in the tumor resection cavity induce cell death in gliomas.</a> Nature Neuroscience. 15 (2), 197-204 (2011).</li>
<li>Bagó, J., Pegna, G., Okolie, O., Hingtgen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+matrices+enhance+the+transplant+and+efficacy+of+cytotoxic+stem+cell+therapy+for+post-surgical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Fibrin matrices enhance the transplant and efficacy of cytotoxic stem cell therapy for post-surgical cancer.</a> Biomaterials. 84, 42-53 (2016).</li>
<li>Bagó, J., Pegna, G., Okolie, O., Mohiti-Asli, M., Loboa, E., Hingtgen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospun+nanofibrous+scaffolds+increase+the+efficacy+of+stem+cell-mediated+therapy+of+surgically+resected+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Electrospun nanofibrous scaffolds increase the efficacy of stem cell-mediated therapy of surgically resected glioblastoma.</a> Biomaterials. 90, 116-125 (2016).</li>
<li>Loebinger, M., Eddaoudi, A., Davies, D., Janes, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+Stem+Cell+Delivery+of+TRAIL+Can+Eliminate+Metastatic+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal Stem Cell Delivery of TRAIL Can Eliminate Metastatic Cancer.</a> Cancer Research. 69 (10), 4134-4142 (2009).</li>
<li>Mostany, R., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Craniotomy+Surgery+Procedure+for+Chronic+Brain+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging.</a> J. Vis. Exp. (12), e680(2008).</li>
<li>Ozawa, T., James, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+Intracranial+Brain+Tumor+Xenografts+With+Subsequent+Analysis+of+Tumor+Growth+and+Response+to+Therapy+using+Bioluminescence+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging.</a> J. Vis. Exp. (41), e1986(2010).</li>
</ol>

DRS. çarşaf, Bagó ve Hingtgen şahin Therapeutics kök hücre ve iskele teknoloji UNC Chapel Hill gelen yönlerini lisanslı sermayen yok.

Aşağıdaki noktaları hassas maksimize etmek ve zaman alan tuzaklardan kaçınmak dikkate alınır verilen bu ameliyatı genellikle fare, başına 30 dakika içinde tamamlanabilir. Öncelikle, fare yordamına başlamadan önce stereotaksik alet şekilde alacak biçimde yerleştirildiğinden emin olun. İstenmeyen baş hareketleri kranyotomi cerrahi doğruluğunu, tümör rezeksiyonu derecesini ve tümör implantasyon yerlerini sınırlar. Rezeksiyon önce tam olarak tümör kapsayan dura bölümünü kaldırın. Aspirasyon sırasında kurut gibi sert, fibröz ...

Glioblastoma (GBM) kasvetli bir medyan sağkalım sadece 12-15 ay1,2,3,4,5ile erişkinlerde en sık görülen birincil beyin kanseri var. Ardından verebildiği ve adjuvan temozolomide kemoterapi ve radyasyon maksimal cerrahi rezeksiyon geçerli klinik standartları ne zamandı 20056,7kabul beri hayatta kalma önemli ölçüde geliştirilmiş değil. Geçici bir rahatlama belirtileri olan hastalarda bu tedavi sağlar gibi invaziv kanser foci rezeksiyon kaçmasına ve sistemik tedaviler kan - beyin bariyerini (BBB) tarafından korunmaktadır standart bakım tedavi kaçınılmaz yineleme içinde sonuçları. BBB engellemeyi invaziv tümör foci hedefleyen Stratejileri çekiş bu agresif ve zayıflatıcı hastalığa karşı kazanmak için acilen ihtiyaç vardır.
İnsan mezenkimal kök hücre (MSCs) teslimat araçlar GBM için kendi yerel tümör tropism8,9nedeniyle ilaç olarak umut verici. MSCs reseptörleri için sahip ve tümör salgılar, stromal hücre kaynaklı faktör 1α çözünür faktörler doğru göç (SDF-1α), matriks metalloproteinaz-1 (MMP-1) ve monosit chemoattractant protein-1 (MCP-1) diğerleri arasında10, 11 , 12 , 13. ifade etmek ve sitotoksik ilaçlar salgılar mühendislik MSCs tümör-posta ilaç teslim aracı olarak harnessed olabilir etmelerini sağlar. Mühendislik MSCs invaziv tümör foci doğru hareket ve tedavi amaçlı proteinleri teslim. Bu yaklaşım preklinik GBM modelleri9,14çeşitli fizibilite göstermiştir. Ancak, bu modellerin büyük çoğunluğu bu bileşenin klinik önemi rağmen cerrahi rezeksiyon eklemeyin. Rezeksiyon yeni modeller kullanılarak çalışmalar ortaya çıkan cerrahi tümör kaldırma kök hücrelerin cerrahi kavite15doğrudan enjekte sebat azalttığı saptandı. Canlılığı, azaltılmış etkinlik neden, dozu ve süresi uyuşturucu düşüşler nedeniyle olası invaziv tümör foci için teslim.
Kök hücre canlılığı ve ilaç dağıtım artırmak için MSCs implantasyon öncesinde iskele üzerine seribaşı. Bu protokol için biyouyumlu ve yeniden emilebilir electrospun nanofibrous poly(lactic acid) (PLA) için MSCs. PLA şişiriyor ve rezeksiyon boşluğuna implant, hangi tedavi kapsama alanı en üst düzeye çıkarır ve en aza indirir üzerine şeklinde uygundur ve iskele olarak kullanılır mesafe MSCs tümör hücreleri ulaşmak için seyahat gerekir. MSCs implantasyonu-iskele üzerinde kalır ve sonra tümör hücrelerinin doğru iskele kapalı implantasyon16,17sonra geçirin. MSCs ve sonra taşıdıkları sitotoksik ilaçlar tümör foci birikir. Sitotoksik ilaç teslim tümöre MSC canlılığı ve sebat, ikisi de iskele Uygulanılmasından tarafından destekli gerektirir.
Bu yordam, lentiviral vektörler Floresan (izlemevitro ) ve (kollarındakivivo içinde izleme) istikrarlı ifade ikna etmek için kullanılan işaretleri kanser ve kök hücre hatlarında. İnsan GBM satır U87 mCherry ve ateş böceği luciferase (U87 mCh-Fl) ve tedavi edici olmayan MSCs GFP ve renilla luciferase (MSC GFP-Rluc) ile bulaşmış. MSCs tedavi türevi TNFα ilgili apoptosis ligand (MSC-TRAIL) inducing hızlı. İZ, bir yapısal salgılanan protein bağlar için yakın ölüm reseptörleri kanser hücreleri ve başlatır apoptosis caspase-aracılı18.
Burada, biz preklinik görüntü güdümlü GBM cerrahi rezeksiyon ve MSC numaralı seribaşı iskele implantasyonu için bir protokol sağlar. Kısacası, Çıplak fareler üç gün sonra U87 mCh-Fl birincil tümör kurmak için stereotaktik orthotopic enjeksiyonu ile takip bir kranyotomi verilir. Engrafted tümör yaklaşık bir hafta süreyle büyür. PLA iskele MSCs 48 h rezeksiyonu ameliyat öncesi numaralı seribaşı. Tümör sonra floresan rehberliği altında rezeke ve MSC yüklü iskele rezeksiyon boşluğuna yerleştirilir. Tümör yükü ve fare hayatta kalma sonra izlenir post-operatively bioluminescence (BLI) görüntüleme. Bu yordamlardan birini bir zaman çizelgesi (Şekil 1) sağlanır.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57452/57452fig1.jpg"> Şekil 1: yordamlar kronolojisi. Fareler başlangıçta kafatası pencere (0 gün) alırsınız. Üç gün sonra bir iyileşme döneminde, tümör vardır (3. gün) implante ve yaklaşık bir hafta için büyür. İskele MSCs (günü 8) ile tümör rezeksiyonu ve implantasyon yordamı (gün 10) öncesinde iki gün numaralı seribaşı. Bundan sonra görüntüleme sonrası ameliyat (gün 10 +) tümör ilerleme ve tedavi edici etkinliği değerlendirilir. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57452/57452fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

<table><tbody><tr><td>Sadece fare stereotaksik alet için</td><td>Stoelting</td><td>51730</td><td>Ameliyat sırasında sabit kafa pozisyonunu korur</td></tr><tr><td>Floresan diseksiyon stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>M165 FC&nbsp;</td><td>Rezeksiyon sırasında tümörün gerçek zamanlı görüntülenmesine izin verir</td></tr><tr><td>Motorlu entegre stereotaksik enjektör (ISI) sistemi</td><td>Stoelting</td><td>53315</td><td>Hassas tümör hücresi enjeksiyon hacmine ve hızına izin verir</td></tr><tr><td>Vetbond doku yapıştırıcısı</td><td>3M</td><td>1469</td><td>Cilt yarasını kapatmak için sujik yapıştırıcı</td></tr><tr><td>Yapay gözyaşları</td><td>Akorn</td><td>664268</td><td>Ameliyat sırasında gözlerin kurumasını önler</td></tr><tr><td>Webcol alkol</td><td>Covidien</td><td>6818'i</td> hazırlar <td>Kesi bölgesini sterilize</td> edin</tr><tr><td>Betadine cerrahi önlük</td><td>Purdue Fredick Company</td><td>6761815117</td><td>Kesi bölgesini sterilize</td></tr> edin <tr><td>Pamuk uçlu aplikatörler</td><td>Fisherbrand</td><td>23-400-115</td><td>Cerrahi alet</td></tr><tr><td>E-vac aspirasyon sistemi</td><td>Argos</td><td>EV310</td> Alınan TISSEEL Baxter'dan <td></td></tr><tr><td>ekstrakte edilen tümör Fibrinojen ve trombini</td><td></td> rezeke etmek için kullanılan vakum pompası İskeleyi geçici olarak sabitlemek için <td></td><td> rezeksiyon boşluğunda</td></tr><tr><td>IVIS Kinetik in vivo optik görüntüleme sistemi</td><td>Kaliper Yaşam Bilimleri</td><td></td><td>Biyolüminesan Görüntüleyici</td></tr><tr><td>D-Luciferin potasyum tuzu</td><td>PerkinElmer</td><td>122799</td><td>İn vivo görüntüleme ajanı</td></tr></tbody></table>

görüntü güdümlü rezeksiyon glioblastoma ve kafa içi tedavi kök hücre numaralı seribaşı iskele implantasyonu

Image-Guided Resection of Glioblastoma and Intracranial Implantation of Therapeutic Stem Cell-seeded Scaffolds

Glioblastoma (GBM), en sık görülen ve agresif birincil beyin kanseri, 12-15 ay yaşam beklentisi taşıyor. Kısa yaşam beklentisi invaziv tümör foci ortadan kaldırmak için kısmen yetersizlik cerrahi rezeksiyon radyasyon ve kemoterapi, ardından oluşan güncel tedavi için kaynaklanmaktadır. Bu resimde tedavisinde tumoricidal insan mezenkimal kök hücre ile (MSCs) geliştirilmiş. MSCs güçlü tümör tropism sergi ve tümör hücrelerini öldürmek ifade terapötik proteinler için tasarlanmış. Preklinik modelleri gelişmeler bu cerrahi rezeksiyon erken MSC kaybına neden olmaktadır ve terapötik etkinlik azaltır gösterir. MSC tedavi etkinliğinin bir biyolojik poly(lactic acid) (PLA) iskele tarafından sağlanan MSCs geliştirilebilir. MSC teslim bir PLA iskele cerrahi rezeksiyon den içine hücre saklama, sebat ve tümör öldürme geri yükler. GBM Uygulanılmasından MSC numaralı seribaşı PLA etkilerini incelemek için doğru bir preklinik modeli gereklidir. Burada bir preklinik cerrahi protokol GBM görüntü güdümlü Tümör rezeksiyonu bağışıklık eksikliği farelerde MSC numaralı seribaşı iskele implantasyon tarafından takip için sağlar. MSCs lentiviral yapıların yapısal hızlı ve floresan izleme izin vermek için yeşil flüoresan protein (GFP) yanı sıra tedavi TNFα ilgili apoptosis indükleyici ligand (iz) salgılar tasarlanmıştır. Benzer şekilde, U87 tümör hücreleri hızlı mCherry ve ateş böceği luciferase, Çift floresan/izleme Işıksaçan sağlamak için tasarlanmıştır. Therapeutics teslimini kök hücre aracılı soruşturma için kullanılmakta iken, bu iletişim kuralı diğer GBM müdahaleler üzerinde cerrahi rezeksiyon etkisini araştırmak için değiştirilmiş olabilir.

U87 tümör hücreleri hızlı mCherry ve ateş böceği luciferase (U87 mCh-Fl) enjeksiyon öncesinde ve görüntü güdümlü rezeksiyon ve bioluminescence (Şekil 2A-C) izleme için izin vermek için tasarlanmış. Kök hücre benzer şekilde tanı GFP-Rluc (MSC-GFP) veya tedavi GFP-deneme (MSC-TRAIL) ile tasarlanmış ve eki ve nükleer silahların yayılmasına karşı (Şekil 2B-F) onaylamak için PLA iskele tohumlari.
...

Tümör arayan tedavi mezenkimal kök hücre (MSCs) invaziv glioblastoma için bir tedavi olarak umut verici. En uygun nakli MSCs teslimini iskele Tümör rezeksiyonu den içine içerir. Burada, glioblastoma tedavisinde MSC çalışmaya preklinik teknikleri de dahil olmak üzere sağlanan: görüntü güdümlü Tümör rezeksiyonu; MSC numaralı seribaşı iskele implantasyonu; ve ameliyat sonrası terapi izleme.

Görüntü güdümlü rezeksiyon Glioblastoma ve kafa içi tedavi kök hücre numaralı seribaşı iskele implantasyonu

Glioblastoma (GBM), the most common and aggressive primary brain cancer, carries a life expectancy of 12-15 months. The short life expectancy is due in ...

Bu prosedürün genel amacı, farelerde beyin kanserini cerrahi olarak rezeke etmek ve postoperatif rezeksiyon boşluğuna tümör güdümlü terapötik kök hücrelerle tohumlanmış bir iskele implante etmektir. Bu yöntem, cerrahi rezeksiyonun cerrahi boşluğa hücre implantasyonunu nasıl etkilediği, yeni terapötik ajanların cerrahi sonrası beyin kanseri üzerinde ne kadar etkili olduğu ve iskele tabanlı uygulama sistemlerinin terapötik sonuçları nasıl etkilediği gibi hücre tedavisi ve nöro-onkoloji alanlarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, beyin kanseri müdahalelerinin, insan hastalarda klinik bakım standardını yakından taklit edecek şekilde farelerde incelenebilmesidir.Bu yöntem, iskele üzerinde verilen kök hücre tedavisi hakkında bilgi sağlayabilse de, nanopartiküller, küçük moleküller, onkolitik virüsler veya diğer ortaya çıkan tedaviler gibi diğer müdahalelere de uygulanabilir. Farelerde implantasyondan 48 saat önce, önce PLA iskelelerini yaklaşık iki x iki milimetrelik rezeksiyon boşluğu büyüklüğünde parçalar halinde keserek iskeleleri hazırlayın. İskeleleri 15 dakika boyunca %70 etanole batırarak sterilize edin.15 dakika sonra iskeleleri PBS

image-guided-resection-glioblastoma-intracranial-implantation

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

İntrakraniyal GL261 hücrelerin içine C57BL / 6 farelerin implantasyon birçok insan glioblastoma multiforme işaretlerinden özetlemek malign gliomlar üretir. Biz bizi kullanmasına izin stably lusiferaz ifade GL261 hücreleri...

Müteakip 3D ile İntrakranial İmplantasyonu In Vivo Murin Gliomlar Bioluminescent Görüntüleme

Biz çıplak farelerin ve sonraki seri beyinlerine insan glioblastoma multiforme hücrelerinin hassas, stereotaktik implantasyon için tümleşik bir yöntem...

Stereotaktik intrakranial implantasyon ve<em&gt; In vivo</emGlioblastoma Multiforme bir Mouse Model Sistemde Tümör Xenografts arasında&gt; Bioluminescent Görüntüleme

Cilalı ve takviyeli ince kafatası (portlar) kraniyal pencere ve glioblastoma (GBM) hücre enjeksiyonu birleştirerek, glioma inisiyasyon ve uzunlamasına bir canlı fare beynindeki enjekte GBM hücreleri büyüme gözlemleyebilirsiniz.

Görüntüleme Glioma Başlatma<em&gt; In Vivo</em&gt; Bir Parlak ve Takviyeli İnce kafatası Kranial Pencere arkası

Bu videoda, mezenkimal kök hücrelerin (MSC'ler) biyolojik olarak parçalanabilen bir poli(laktik asit) (PLA) iskelesine ekilmesi tekniği açıklanmaktadır. Hazırlanan iskeleler, beynin cerrahi rezeksiyon boşluğuna implante edilebilir ve buradan tümör odaklarına doğru göç edebilirler. Ayrıca, bu hücreler, kanser hücrelerinde apoptozu uyarmak için terapötik proteinleri eksprese edecek şekilde tasarlanabilir.

MSC Tohumlu İskele Hazırlığı: Mezenkimal Kök Hücrelerle Tohumlanmış İskeleyi Murin Modeline Cerrahi İmplantasyon İçin Hazırlama Tekniği

Bu video, tümör nekroz faktörü ile ilişkili apoptoza neden olan ligand veya TRAIL'i eksprese eden genetik olarak tasarlanmış mezenkimal kök hücreler veya MSC'ler ile tohumlanmış bir biyo-iskelenin görüntü kılavuzluğunda tümör rezeksiyonu ve implantasyonu için cerrahi prosedürü sunar. Bu terapötik MSC'ler beyin tümörlerinin tedavisinde potansiyele sahiptir.

Murin Modelinde Floresan Eşliğinde Tümör Rezeksiyonu ve MSC Tohumlu İskele İmplantasyonu: Fare Modelinde Terapötik Mezenkimal Kök Hücrelerin Beyin Tümörü Rezeksiyon Boşluğuna Verilmesi İçin Cerrahi Bir İşlem

Biz, tümörün büyüme sırasında oynayan normal biyo-fiziksel kısıtlamalar tekrarıdır intravital iki foton mikroskopi için farelerde kortikal glioblastoma ortotopik bir model oluşturduk. Tümörün yukarıdaki kafatasını yerine bir kronik cam pencere, iki-foton mikroskobu ile zamanla tümörün ilerlemesinin takibini sağlar.

Ortotopik Glioblastoma Fare Modeli Beyin parankim fiziksel kısıtlamaları bakımı ve Intravital İki foton Mikroskopi için uygundur

Kök hücreler tümör tropizminden ötürü beyin tümörlerini tedavi etmek için terapötik taşıyıcıları umut vericidir. Non-invaziv intranazal kök hücre iletimi kan beyin bariyerini atlar ve klinik çeviri için güçlü bir potansiyel gösterir. Bu makale, glioma fare modelinde intranazal kök hücre sunumunun temel ilkelerini özetlemektedir.

Bir Fare Modelinde Tedavi Edici Kök Hücrelerin Glioblastomaya İntranazal Dağıtımı

Burada, orthotopic insan birincil beyin tümörü taşıyan immünyetmezligi farelerde hazırlık ve allojenik insan lenfosit stereotaksik yönetim için bir iletişim kuralı mevcut. Bu çalışmada bir kanıtı-of-concept fizibilite ve hücresel immunotherapies intrabrain teslim antitümör etkinliği için sağlar.

Orthotopic insan Glioblastoma Multiforme Xenografts fare modelleri sitotoksik bağışıklık hücrelerinin stereotaksik evlat edinen Transfer

Bu çalışma, 3D beyin tümörü modellerinde, yani in vitro kültürde, in ovo modelinde ve in vivo murin modelinde uygulama için esnek interdigitated elektrotların geliştirilmesini açıklamaktadır. Önerilen yöntem, darbeli elektrik alanlarının farklı karmaşıklık seviyelerindeki tümörler üzerindeki etkilerini değerlendirmek için kullanılabilir.

Glioblastoma'nın Darbeli Elektrik Alan Terapisi için Esnek Organik Elektronik Cihazlar

In vivo, glioblastoma (GBM) gibi birçok merkezi sinir sistemi hastalığının temelini oluşturan hücreler arası iletişim, ölçülmesi ve karakterize edilmesi ile ünlüdür. Burada, GBM'nin uzunlamasına hayvan modelinde interstisyel sıvı bileşenlerini örneklemek için kullanılabilecek serebral açık akış mikroperfüzyon (cOFM) prosedürlerini açıklıyoruz.

Glioblastoma hayvan modelinde interstisyel sıvının boylamasına koleksiyonu için beyin açık akışlı mikroperfüzyonun kullanımı

Bu protokolün amacı, araştırmacılara intrakraniyal implantasyonlar için son derece tekrarlanabilir bir teknik sunmaktır.

Farelerde glioblastoma hasta kaynaklı ksenograft hücre hatlarının stereotaktik intrakranial implantasyonu

Öğrenin farelerde görüntü güdümlü beyin tümörü rezeksiyonu ve mezenkimal kök hücre iletili iskele implantasyonu yöntemini. Bu teknik, glioblastoma tedavisinde cerrahi ve hücre terapisinin etkileşimini incelemek için kullanılır.

Görüntü güdümlü rezeksiyon Glioblastoma ve kafa içi tedavi kök hücre numaralı seribaşı iskele implantasyonu

Daha fazla video keşfet