Ürünleri ve tüm hücre yama kelepçe kayıt Xenopus laevis Tectal nöronlar için iletişim kuralları

Bu yazıda, Xenopus laevis Kurbağa yavrularını retinotectal devre eğitim için tüm cep telefonu yama kelepçe kaydetmek için kullanılan üç beyin hazırlıkları görüşmek. Kendi belirli avantajları ile her hazırlık Xenopus iribaş deneysel tractability nöral devre işlevi incelemek için bir model olarak katkıda bulunmaktadır.

Bu prosedürün genel amacı, gelişim sırasındaki bağlantı modelleri hakkında bilgi edinmek ve nihayetinde nöral devrelerin nasıl oluştuğunu ve işlev gördüğünü anlamak için kurbağa yavrusu optik tektumunun nöronlarından tüm hücre elektrofizyolojik kayıtlarını elde etmektir. Bu yöntem, nöronların gelişim süreci boyunca nasıl değiştiği ve devrelerin davranışa yol açmak için nasıl işlev gördüğü gibi sinirsel gelişim alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu preparatların temel avantajı, gelişmekte olan nöral devrelerin işlevi hakkında fikir vermek için optik tektum nöronlarının elektrofizyolojik kaydına izin vermeleridir.

Prosedürü göstermek, laboratuvarımda yüksek lisans öğrencisi olan Zhenyu Lui olacak. Bir atık transfer pipeti kullanarak, anestezi uygulanmış kurbağa yavrusunu harici kayıt solüsyonu içeren bir diseksiyon kayıt kabına taşıyın. Anestezi uygulanmış kurbağa yavrusunu, diseksiyon kayıt kabının zeminindeki batık bir silikon bloğa sabitleyin.

Beynin net bir şekilde görülebilmesi için, steril 25 gauge bir iğne kullanarak orta hat boyunca yüzeysel bir kesi yaparak beynin üzerindeki cildi çıkarın. İğneyi nöral tüpe sokarak ve taban plakasını sağlam bırakırken tüpün dorsal kısmı temiz bir şekilde kesilecek şekilde hafifçe yukarı doğru çekerek beyni aynı orta hat ekseni boyunca fileto haline getirin. Beyni izole etmek için önce arka beyni kesmek için 25 gauge bir iğne kullanın.

Ardından, tüm lateral ve ventral bağ dokusunu ve sinir liflerini koparmak için iğneyi beynin altından kaudal-rostral yönde nazikçe geçirin. Daha sonra, koku alma ampullerinden birine bir pim ve arka beyinden başka bir pim yerleştirerek beyni bir silikon elastomer bloğuna sabitleyin. Bu, tektal nöronlardan kayıt için en uygun konfigürasyondur.

Ardından, sabitlenmiş tüm beyin preparatını içeren çanağı diseksiyon dürbününden elektrofizyoloji teçhizatına taşıyın. Kırık bir cam pipet kullanarak ventriküler membranı çıkarın. RGC aksonlarını doğrudan aktive etmek için, dokuda küçük bir çukur oluşacak şekilde bipolar uyarıcı bir elektrotu optik kiazma üzerine nazikçe indirin.

Bipolar uyarıcı elektrot rostral olmalı ve optik kiazmanın bulunduğu büyük orta ventriküle hemen hemen bitişik olmalıdır. Bipolar elektrot, stimülasyon gücünün hassas bir şekilde kontrol edilmesini sağlayan bir nabız stimülatörü tarafından tahrik edilir. Yatay beyin dilimini hazırlamak için, tüm beyin hazırlığı ile başlayın.

Ardından, bir optik tektumun bir tarafının en yanal dörtte birini çıkarmak için bir tıraş bıçağı kullanın. Bu kesim rostral kaudal düzleme paralel olarak yapılır. Daha sonra, beyni, dilimlenmiş tarafı yukarı bakacak şekilde silikon elastomerin yan tarafına yeniden sabitleyin, böylece somata ve nöropil'e kayıt için doğrudan erişilebilir ve beynin ventriküler yüzeyi silikon elastomer bloktan uzağa bakar, böylece bir bipolar elektrot optik kiazma üzerine yerleştirilebilir.

Ardından tüm hücre yama kelepçesini veya yerel alan potansiyeli kaydını gerçekleştirin. İşte yatay bir beyin dilimi hazırlığının konfigürasyonunu gösteren şema. Uyarıcı elektrot optik kiazmada kalmasına rağmen, kayıt pipetinin artık yatay beyin dilimi hazırlığı tarafından açığa çıkan tüm tektal katmanlardaki hücrelere erişecek şekilde konumlandırıldığını unutmayın.

Bu, tektumun yüzeysel tabakasında bulunan bir nörondan RGC ile uyarılmış bir yanıttır. Bu şekilde, nöropil boyunca kaydedilen alan potansiyelleri ve dönüştürülen akım kaynağı yoğunlukları görüntü grafiği ile gösterilmiştir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik 10 dakika içinde yapılabilir ve tipik olarak üç veya dört saate kadar sürer.

Bu videoyu izledikten sonra, tektal nöronların elektriksel özelliklerini ve bağlantılarını ölçmek için tüm hücre kayıtları için tüm beyin ve yatay beyin dilimi hazırlığının nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız.