Name: Levator Auris Longus Gerilim kelepçe koşullar altında memeli nöromuskuler iletim Sınavı Hazırlık (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 45 s
Description: Öğrenin, fare levator auris longus kasını izole ederek nöromusküler kavşakta sinaptik akımları kaydetme yöntemini. Bu teknik, sinir-kas iletişimini ve sinaptik fizyolojiyi detaylıca incelemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Dr Mark M. zengin ve Daniel Miranda Editöryel Yorum için Ahmad Khedraki mali destek (A.A.V. için başlangıç Fonu) için bu tekniği ve Wright Devlet Üniversitesi kurmak yardım ettiğin için teşekkür ederim.

Tüm hayvan yordamları hayvan bakım ve kullanım Komitesi Wright Devlet Üniversitesi uygun olarak yapıldı.
1. fare ötenazi
<ol><li>Bir duman başlık, hava geçirmez bir cam odası anesthetizing fareyi getirin.</li>
	<li>Fareyi isoflurane (doyurarak veya ~ % 25) ölümcül bir doz için inhalasyon yoluyla ortaya çıkarmak. Nefes gözlenen kadar odasında fareyi bırakın.</li>
	<li>Fare odasından kaldırın ve ötenazi, ikincil yöntem olarak yerindençıkmasına servikal gerçekleştirmek.</li>
</ol>2. kaldırma saç baş, boyun ve sırt Dorsal yüzeyinden
<ol><li>Bir Elektrikli tıraş makinesi saç baş, boyun ve fare arkasında dorsal yüzeyi çoğunluğu kaldırmak için kullanın. Ayrıca, çevresinde ve sol kulak saç kaldırmak. Not: dikkat çekmek ne zaman tıraş kulak çevresindeki deri, deri tıraş bıçakları yakayı ele ve temel kas dokusuna zarar verebilir.</li>
	<li>Saç dökücü krem bir pamuk bez ile kalan saç kaldırmak için traş bölgeye uygulanır. Yaklaşık 1 dakika bekleyin ve krem saç kaldırma sıkmak yıkama şişe kullanarak su ile durulayın sonra uzak kalan herhangi bir krem veya pamuklu çubukla kullanarak saç fırça ve cilt kuru pat.</li>
</ol>3. deri Levator Auris Longus kas ortaya çıkarmak için kaldırmak
<ol><li>Stereo diseksiyon mikroskop altında fare scapulae düzeyde arkasında küçük bir insizyon attım (Cilt için sadece derin yeterli) olun. Şekil 1A-Bgösterilen yolunu izleyerek mikro diseksiyon makası kullanarak deriyi kesme.</li>
	<li>(No 5 gibi) iyi forseps kullanarak, scapulae yakın kesme boyunca cilt kaldırın. Bahar makas kullanılarak, bağ dokusu deri kulak yaklaşırken temel kas dokusundan ayırmak için kesme. Önemlisi, bağ dokusu maruz kalan kas dokusunun yanlışlıkla kesme önlemek için deri içine sivri Bıçaklar ile kesti.</li>
	<li>Düzenli olarak maruz kalan kas (mM) oluşur aşağıdaki Na+ dış arabellek gibi bir fizyolojik serum fizyolojik solüsyonu ile sıvı: 144 NaCl, 4 KCl, 1.2 CaCl2, 0.6 MgCl2, 5 glikoz, 1 NaH2PO4, pH 7.4 NaOH ile ve bir osmolalite 300 ± 5 mmol/kg vardır. Bir kez cilt tamamen fare kaldırmak ve onu atmak için kulak çevresindeki deri kesilmiş sol kulak için bağ dokusu kesilmiş oldu. Not: LAL kulak tabanına verdiği ve cilt kaldırılırken kolayca zarar görebilir. Yaklaşık 1 mm LAL kesme önlemek için kulak tabanı etrafında deri bırakmak iyidir.</li>
</ol>4. kaldırma Levator Auris Longus kas ve çevresindeki doku
<ol><li>Hangi omurga arasında scapulae bağlanmak için LAL, aşağı kesim kasları tarafından bahar makas kullanarak başlatın. Sadece orta hat, sağına doğru kürek başlangıç ve orta hat sağ tarafında kalan süre rostral fareyi, sonuna doğru kesti. Devam sonuna kadar kas dokusu sonuna kadar kafatası üzerinde kesme. Not: LAL kulak ve orta hat, medial tarafına bağlı en yüzeysel kas Şekil 2' de gösterildiği gibidir. Diğer resimleri, AK Greene17 tarafından bir kitap LAL mükemmel, çizilmiş görüntüleri gösterir.</li>
	<li>Forseps orta hat, hemen sağındaki kesme doku kapmak sonra yavaşça kaldırın ve doku sol kulak doğru sol LAL aşağı olan birkaç kat kas kaldırmak için kafatası karşı baskı makas bıçaklı kesme başlamak için kullanın. Tüm geçici olarak yanlışlıkla LAL kaldırma sırasında kesme önlemek için bağlı katmanların bırakın.</li>
	<li>Bıçaklar ile paralel olarak kesmek ve belgili tanımlık kulak kanal kaydırılır ve kas kulak medial tarafında girer LAL innervates sinir kesme önlemek için kafatası karşı baskı. Kadar mümkün olduğunca bağlı sinir tutmak belgili tanımlık kulak kanal içinden devam. Not: LAL sağlayan sinir uzakta-in yüz sinir dalları ve daha sonra yordamda kullanılacaktır olarak muhafaza edilmelidir.</li>
	<li>Şekil 1B adımında kulak ventrolateral kısmı üzerinde gösterilen aynı yol boyunca kulak kanalına geçince mi yağlı doku kes. Ayrıca, sol kürek kemiği kas tamamen fare kaldırmak için sağ tarafta olduğu gibi kesti.</li>
</ol>5. Levator Auris Longus kas yalıtım
<ol><li>LAL ve çevresindeki doku, bir konteyner içine yerleştirin. Bir konteyner içinde disseke doku gibi bir petri silikon elastomer alt ile altına tutturulmuş kullanın. Banyo ve doku bir fizyolojik serum çözümde sık sık yıkayın.</li>
	<li>Boyunca Bankası için LAL bağlı kulak kıkırdak parçası bırakarak kulak, kulak pinna kesti. Böylece aşağı yüzün (LAL çanak alt) yukarı dönük kas çevir.</li>
	<li>Hazırlık tutmak için belgili tanımlık kulak kanal aracılığıyla bir böcek pin gibi bir iğne yerleştirin. O zaman daha küçük iğne, PIN LAL midline karşı tarafta kalan doku kullanarak. Forseps kullanarak, yavaşça deri yan kısmındaki kas germek dışarı ve bir iğne deri yoluyla yerleştirmek için kulak çekin. Şekil 3' te gösterildiği gibi iyi yemek için güvenli dokudur kadar bu adımı yineleyin. Not: Küçük diseksiyon pimleri akupunktur iğneleri ipuçları için istenilen uzunluğa kesim tarafından yapılabilir. Bu küçük pin doku hasarı en aza indirmek ve su-daldırma mikroskop objektif uzun çalışma uzaklıkları ile birlikte kullanılabilir.</li>
	<li>Begin, kasları (gösterildiği şekil 4) kaldırma bu LAL (auricularis üstün, kaçıran auris longus ve interscutularis) kapsayan ve bu LAL için bağ dokusu ile bağlı ve özellikle dar yakınındaki orta çizgi, No 5 forseps ve bahar makas kullanarak.</li>
	<li>Yukarı çekmeye forseps kullanarak örten kas katmandaki bağ dokusu ile varlık makara kas katmanı doğru odaklı bıçaklar ve kesme veya LAL nicking önlemek için dikkat ediniz. Orta çizgi doğru kesme ve orta hat giderken yaklaşık dörtte üçü kesmeyi bırak. Sonra her kas katmanı kaldırmak için orta hat için paralel kesti. Kadar sadece LAL kalır kas tabakaları kaldırma devam et.</li>
	<li>Elektrotlar kazığa oturtma içinde AIDS LAL kapsayan kalan bağ dokusu bazılarını kaldırın. Yavaşça No 5 forseps bağ dokusu LAL uzak çekmek ve uzak bahar makas kullanarak kesmek için kullanın. Sadece o kadar kolay sürecinde LAL zarar riski olmadan yapılabilir doku kaldırın. Nöromüsküler kavşak görselleştirme engel LAL alt yüzeyinde kalan aşağı kas tabakaları innervate herhangi bir büyük sinirler kaldırın.</li>
</ol>6. sinir yalıtım
<ol><li>Sinir Stimülatörü kullanarak LAL innervates sinir belirle (örneğin, iki Platin teller bağlı bir darbe üreteci); kulak kanalına kaslar için çalışan birkaç sinirler bulunur. Sinirleri bazı akım sağlayan sinir Stimülatörü ile touch (geçerli V 5 civarında değişir). Ne zaman kas sözleşmeleri, doğru sinir olduğu belirlendi.</li>
	<li>Dikkatle doku sinir yakınındaki kapmak ve bahar makas sinir kulak çevreleyen dokusundan ayırmak için kullanın. Hasarı en aza indirmek için daha sonra kayıt çanak sinir güvenliğini sağlamak için kullanılan bazı çevreleyen doku gömülü sinir çoğunu tutun. Not: LAL innervates motor sinir medial ve açılış belgili tanımlık kulak kanal tarafında bulunur.</li>
	<li>İki kutuplu bir uyarıcı elektrot kullanarak, sinir, kas distal bölgenin etrafında sadece çevreleyen doku kaldırın. Emme bir elektrot kullanarak, sinir kesme sonundaki çevreleyen doku kaldırın. Not: Bu iyi durdurma noktadır. Bu bir iyi durdurma noktadır. Eğer bir ara disseke LAL hazırlık bir fizyolojik çözüm ya da bir kaç saat zararlı metabolitleri değil birikir sağlamak için sürekli perfüzyon sürdürülebilir. Çözüm ya da sabit perfüzyon büyük miktarda zararlı metabolitleri değil birikir emin olmak için kullanın.</li>
	<li>Ardından, çözme ve perfüzyon odasına dik bir bileşik mikroskop altında Elektrofizyoloji deneyler için kas transferi. Not: Kullanım ile yumuşak bir alt doku güvenli bir şekilde olabilen bir perfüzyon Odası (şekil 5A) tutturulmuş.</li>
	<li>İğne ucunda (kulak ve orta hat) ve kas kenarı boyunca kas. Sinir kas lifleri dikey konumlandırma ve sinir sonunda sağlam kaldı bazı aşırı doku ile çanak dibine pin. Her zaman bir fizyolojik serum çözümde banyo doku tutun. Not: Yükseltilmiş malzeme doğrudan altında LAL kas lifleri yuvarlak yararlıdır. Bu ekstra destek elektrot kazığa oturtma AIDS ve yan tarafında yalan bir 50 mL konik tüp döküm silikon elastomer küçük bir bölümünden yapılabilir. Elastomer yuvarlak bölümünü taze silikon az miktarda kullanarak perfüzyon odası altına güvenli. Perfüzyon odası bir diyagram şekil 5B-Cile gösterilir. Kas lifleri (ki çok hidrofobik) yeni oyuncular silikon elastomer için çok sıkı uygun ve daha da zarar görebilir. Ceket için yararlıdır veya blok yeni protein, bir immunoblot engelleme adımına benzer silikon döküm. Bunu engellemek için biz yeni oyuncular silikon sığır serum albümin konsantre bir çözümde gecede inkübe.</li>
</ol>7. Elektrofizyoloji ekipman kurulumu
<ol><li>Hazırlamak veya aliquots gibi ışığa duyarlı ve ışıktan uzak muhafaza edilmelidir mitokondrial boya 4-(4-diethylaminostyryl)-1-methylpyridinium18, nöromüsküler kavşak görselleştirme yardım etmek için bir boya, buzlarını. Ayrıca, elektrot çözümleri çözme. Girdap tüm solutes çözüm olduğundan emin olmak için tüm aliquots. 1 µM içeren bir fizyolojik serum çözüm hazırlamak µ-Conotoxin GIIIB (μ-CTX) ve 80 µM BTS (isteğe bağlı).</li>
	<li>Perfüzyon odası mikroskop sahneye LAL ile güvenli. 3 M agar Köprüsü üzerinden kayıt odası'na bağlı KCl Place referans elektrot bir bardağa dolu. Referans elektrot amfi üreticinin yönergelerini başına bağlayın.</li>
	<li>Bu noktada, sinir uyarıcı elektrot sinir üzerinde konumlandırın. De sinir stimülasyonu için çalışırken bir emme elektrot veya küçük bir iki kutuplu elektrot kullanın.<ol>
<li>Uyarıcı elektrot gibi kas uyarımı yapı kayıtları sayısını en aza indirmek için mümkün olduğunca uzak getirin. Not: Uyarıcı elektrot gerilimi genlik gerektiği gibi kontrol edebilirsiniz bir uyarıcı yalıtım birimi ile kontrol edilmelidir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yavaş yavaş kasılmalar gözlenen kadar uyarıcı yalıtım birimi üzerinde gerilim düğmeyi çevirerek gerilim yükseltmek. Hangi ilk daralma gözlenmiştir eşik noktasıdır. Bir kez tanımlanan eşik, gerilim uyarıcı yalıtım birimi üzerinde 1,5 ayarla * eşik (veya deneme tarafından tanımlandığı gibi). Not: Şekil 6 dik bir mikroskop ve Bugi manipülatör kullanarak sinir yerleştirilmiş küçük iki kutuplu elektrot altında kurmak kas hazırlık göstermektedir. Hala yeterince eşiğin olurken mümkün uyarılması için en düşük fiyat voltajı için olumlu. Daha düşük bir uyarıcı gerilim kayıtları sırasında stimülasyon yapı sayısını azaltır. Ayrıca, uzak Kas uyarıcı elektrot yerleştirme stimülasyon obje boyutunu azaltır. Bazen sinir Stimülatörü nereye yerleştirileceğini ile deneme gerekli olabilir bu yüzden sinir sonu diseksiyon zarar görür.</li>
	<li>Banyo tuzlu çözüm kaldırın ve 5 µM 4-Di-2-Asp ile değiştirin. LAL Hazırlık'a 4-Di-2-Asp nöromüsküler kavşak görüntüleme (Şekil 7) için yeterli Floresans elde etmek 10 min için maruz.</li>
	<li>İki elektrot çözümleri, 3 M KCl ve K+ iç çözüm (mM) oluşan 75 aspartat, 5 MgCl2, 15 Ca(OH)2, 5 ATP disodyum, 5 phosphocreatine disodyum, 5 glutatyon, 20 BEZLERİ, 30 EGTA, pH 7.2 KOH ile hazır olun. Not: Çözümleri önceden hazırlanmalı; K+ iç çözüm aliquots-20 ° C'de depolanan</li>
	<li>Dolgu çekti cam ile 3 M KCl. gerilim algılamalı elektrot için kılcal K+ iç çözüm (hazırlanan adım 7,6) akım geçen elektrot için kullanın; 1 mL şırınga bağlı bir Ametal dar iğne (~ 34 ölçer) kolayca cam kılcal doldurmak için kullanın. Yavaşça hava kabarcıkları kaldırmak için kılcal dokunun; Dolgulu elektroda direnci 10-15 MΩ olduğundan emin olun. Not: Kontrol ve veri toplama yazılımı kullanarak her iki elektrot direnç not edin.</li>
	<li>10 dakika sonra normal Ca2 + çözüm 4-Di-Asp Çözümle değişimi.</li>
</ol>8. nöromüsküler kavşak Floresans kullanarak tanımlaması
<ol><li>Standart parlak alan ve floresan aydınlatma ile dik bir mikroskop kullanarak, floresan yeşil nöromüsküler kavşak dikey şekil 7Aiçinde gösterildiği gibi hazırlık boyunca kas lifleri için çalışan bir parlak bant arayın. Nöromüsküler kavşak tanımlamak için bir düşük büyütme su-daldırma hedefi (~ 10 X) kullanın Not: Mikroskop FITC küp ile donatılmış olmalıdır (Ex: 480/40, Dichroic: 505LP, Em: 535/50) ve bir LED, lazer, halojen lamba veya civa lamba floresan için. Fotoğrafı beyazlatma, alan parlak ve floresan aydınlatma arasında geçiş yapar en aza indirmek için. Not: Bu genellikle daha proksimal orta hat kulağa tabanına grubudur. Grup nöromüsküler kavşak en yoğun olduğu bölgedir.</li>
	<li>Daha yüksek bir büyütme su-daldırma amaç (~ 40 X) geçin ve Elektrofizyoloji (şekil 7B) ile incelemek için bir nöromüsküler kavşak kas üst tabakası üzerinde tanımlamak.</li>
	<li>Başına üretici yönergelerine uygun headstages pipet tutucular içine doldurulmuş Pipetler güvenli. Yukarıda tanımlanan nöromüsküler kavşak (şekil 7C) 100 µm içinde kas membran elektrotlar yerleştirmek için micromanipulators kullanın. Öncelikle alan parlak mikroskobu kullanılarak elektrotlar yerleştirmek; Floresans elektrotlar nöromüsküler kavşak göreli konumunu doğrulamak için kullanın.</li>
	<li>Öncelikle, bir düşük büyütme (~ 10 X) hedefi elektrotlar bulun ve sonra son elektrotlar konumlandırma için daha yüksek bir büyütme (~ 40 X) amaç için geçiş yapmak için kullanın. Elektrotlar kasına bu noktada kazığa oturtmak değil, ilk elektrotlar radyo istasyonu ayarlayın.</li>
</ol>9. Aksesuar ve elektrotlar Impaling
<ol><li>Elektrotlar istenen fiber konumlandırılmış bir kez sıfır ve köprü Dengeleme (ya da benzer bir yaklaşım) gerilim algılamalı elektrot ayarlamak ve üretici yönergelerine başına elektrot kapasitans nötralize. Ayrıca, akım geçen elektrot sıfır.</li>
	<li>Her iki elektrot lif yüzeyinin aşağı getir. Yavaş yavaş böylece elektrotlar nöromüsküler kavşak ile ilgili olarak odaklı kalır lif aşağı yolda elektrotlar konumunu 8.3 ve 8,4 adımlarda açıklandığı gibi ayarlayın.</li>
	<li>Sonra her iki elektrot kas lif yüzeyine temas etmiş, künt akım geçen elektrot ilk kazığa oturtmak. Elektrot kazığa oturtma kolaylaştırmak için buzz (aşırı kapasite tazminat kısa bakliyat), kısa geçerli bakliyat veya hafifçe dokunarak tablo gibi teknikleri kullanın.<ol>
<li>Elektrot Impaled gösterir negatif membran potansiyeli tespit kadar bir osiloskop veya osiloskop protokolü veri toplama yazılımı kullanarak olan sinyali, izlemek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Daha net voltaj algılamalı elektrot Impaled akım geçen elektrot seviyesine kas üzerine bunalıma girmek. Her iki elektrot doğrultusunda bir başka bir kez, akım geçen elektrot ile uygulanan aynı teknikleri kullanarak gerilim algılamalı elektrot kazığa oturtmak.</li>
	<li>Başarılı kazığa oturtma, denetleyicinin amplifikatör için kullanarak üzerine sürekli negatif elektrot kazığa oturtma nedeniyle Membran zarar telafi etmek için geçerli geçen elektrot ile güncel tutan bir uygulanır. Hücre-80 doğru yavaş yavaş şarj etmek Başlarken mV, holding olarak geçerli gerekli istenen istirahat için potansiyel cep getirmek için artış (Yani,-80 -85 için mV). Not: kayıt gerektiren bir holding liflerinden önlemek geçerli mutlak değerde sağlıksız liflerinden kayıt olasılığını en aza indirmek için-25 nA vahşi tipi kas daha büyük.</li>
	<li>Fiber için birkaç dakika istenen dinlenme potansiyel, stabil sonra kas zarı özellikleri veya nöromuskuler iletim kayıt için devam etmek.</li>
</ol>10. kayıt postsinaptik membran özellikleri ve sinaptik iletimi
<ol><li>Geçerli-kelepçe kayıtları ile eşit sayıda motor endplate Riçinde ve τmbelirlemek için kullanılan karşılık gelen membran gerilim yanıtları ölçmek için pozitif ve negatif geçerli adımları uygulayarak başlar. Pasif özellikleri sağlamak için kararlı bir duruma ulaşmak ve bir doğrusal gerilim-akım ilişki16,19,20küçük gerilim yanıt kullanın. Kayıt ile bozuk veya sağlıksız Sinir liflerinden önlemek, mEPP frekans böyle lifleri var > 3 Hz.</li>
	<li>Sonra iki elektrot gerilimi-kelepçe üretici yönergelerine başına girin. Gerilim Tipi Kelepçe lifler -85 membran potansiyelini, mV. Gerilim Tipi Kelepçe ayarlar mEPCs olarak algılanmasını sağlayan sinyal noise oranları elde etmek. Not: Bakımı yeterli gerilim kontrolü bir sorun olabilir. Bu sorunları en aza indirmek için iki yöntem kullanabilirsiniz. İlk olarak, lifler motor endplate 100 µm içinde daha önce açıklandığı gibi bu lifler21uzunluğu sabit içinde olduğu Impaled. İkinci olarak, biz amplifikatör DC geri yükleme özelliğini kullanın. Bu özelliği bir çok yüksek voltaj-kelepçe kazanç ayarlar. Önceki çalışmalarımız bu yöntem ayrıntılı olarak açıklanan ve gerilim klempe endplate16değerlendirmek için bir yöntem sıraladı.</li>
	<li>Bir kez kayıt gerilim-kelepçe, sinaptik akımları (mEPCs ve eEPCs) çeşitli sinir stimülasyonu protokolleri kullanarak deneme gereksinimlerini temel alarak.<ol>
<li>Kayıt kendiliğinden mEPCs ve bir kayda EPCs sinaptik Modülasyon (kolaylaştırma veya modülasyon) quantal içerik değerlendirmek için olmadan sağlayan bir düşük frekanslı sinir stimülasyonu Protokolü (≤0.5 Hz) kullanarak EPCs. Sinaptik kolaylaştırma veya depresyon değerlendirmek için bir yüksek frekans sinir stimülasyonu Protokolü (50 Hz değerinde 10 bakliyat) kullanın.</li>
		<li>Veri toplama yazılımı ile kontrol edilir bir darbe Oluşturucu'yu kullanmamanızı tetiklenebilir bir uyarıcı yalıtım birimi üzerinden istenilen frekansta sinir uyarmak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bir kez gerilim tipi kelepçe kayıtları yapılır, amplifikatör bir akım tipi kelepçe ayara dönmek, Bütün akımlar off ve elektrotlar elyaf çıkarın. Elektrotlar değil tıkalı haline onay veya kayıt sırasında temel gerilim içinde drift. Not: lif kazığa oturtma önce ayarlanmış olarak drift ile ilgili elektrot gerilimi ekstraselüler çözümünde, 0 volt olmalıdır. Örneğin, kaydedilmiş Gerilim Gerilim deneme sırasında sürüklendi Eğer belirsiz olur.</li>
</ol>

<ol><li>Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+levator+auris+longus+muscle+of+the+mouse%3A+a+convenient+preparation+for+studies+of+short-+and+long-term+presynaptic+effects+of+drugs+or+toxins%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins.</a> Neurosci Lett. 82 (1), 83-88 (1987).</li>
<li>Erzen, I., Cvetko, E., Obreza, S., Angaut-Petit, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber+types+in+the+mouse+levator+auris+longus+muscle%3A+a+convenient+preparation+to+study+muscle+and+nerve+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Fiber types in the mouse levator auris longus muscle: a convenient preparation to study muscle and nerve plasticity.</a> J Neurosci Res. 59 (5), 692-697 (2000).</li>
<li>Bertone, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbonic+anhydrase+inhibitor+acetazolamide+shifts+synaptic+vesicle+recycling+to+a+fast+mode+at+the+mouse+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Carbonic anhydrase inhibitor acetazolamide shifts synaptic vesicle recycling to a fast mode at the mouse neuromuscular junction.</a> Synapse. , (2017).</li>
<li>Garcia-Chacon, L. E., Nguyen, K. T., David, G., Barrett, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrusion+of+Ca2%2B+from+mouse+motor+terminal+mitochondria+via+a+Na%2B-Ca2%2B+exchanger+increases+post-tetanic+evoked+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Extrusion of Ca2+ from mouse motor terminal mitochondria via a Na+-Ca2+ exchanger increases post-tetanic evoked release.</a> J Physiol. 574 (Pt 3), 663-675 (2006).</li>
<li>Murray, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+vulnerability+of+motor+neurons+and+dissociation+of+pre-+and+post-synaptic+pathology+at+the+neuromuscular+junction+in+mouse+models+of+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Selective vulnerability of motor neurons and dissociation of pre- and post-synaptic pathology at the neuromuscular junction in mouse models of spinal muscular atrophy.</a> Hum Mol Genet. 17 (7), 949-962 (2008).</li>
<li>Nadal, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+muscarinic+acetylcholine+autoreceptors+%28M1%2C+M2+and+M4+subtypes%29%2C+adenosine+receptors+%28A1+and+A2A%29+and+tropomyosin-related+kinase+B+receptor+%28TrkB%29+modulate+the+developmental+synapse+elimination+process+at+the+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Brain%22%5BJournal%5D)">Presynaptic muscarinic acetylcholine autoreceptors (M1, M2 and M4 subtypes), adenosine receptors (A1 and A2A) and tropomyosin-related kinase B receptor (TrkB) modulate the developmental synapse elimination process at the neuromuscular junction.</a> Mol Brain. 9 (1), 67(2016).</li>
<li>Rousse, I., St-Amour, A., Darabid, H., Robitaille, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synapse-glia+interactions+are+governed+by+synaptic+and+intrinsic+glial+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Synapse-glia interactions are governed by synaptic and intrinsic glial properties.</a> Neuroscience. 167 (3), 621-632 (2010).</li>
<li>Rozas, J. L., Gomez-Sanchez, L., Tomas-Zapico, C., Lucas, J. J., Fernandez-Chacon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+neurotransmitter+release+at+the+neuromuscular+junction+in+a+mouse+model+of+polyglutamine+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Increased neurotransmitter release at the neuromuscular junction in a mouse model of polyglutamine disease.</a> J Neurosci. 31 (3), 1106-1113 (2011).</li>
<li>Takeuchi, A., Takeuchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+analysis+of+relationship+between+end-plate+potential+and+end-plate+current%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Further analysis of relationship between end-plate potential and end-plate current.</a> J Neurophysiol. 23, 397-402 (1960).</li>
<li>McLachlan, E. M., Martin, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non+linear+summation+of+end+plate+potentials+in+the+frog+and+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Non linear summation of end plate potentials in the frog and mouse.</a> The Journal of Physiology. 311 (1), 307-324 (1981).</li>
<li>Obis, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+novel+protein+kinase+C+epsilon+isoform+modulates+acetylcholine+release+in+the+rat+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Brain%22%5BJournal%5D)">The novel protein kinase C epsilon isoform modulates acetylcholine release in the rat neuromuscular junction.</a> Mol Brain. 8 (1), 80(2015).</li>
<li>Silveira, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ryanodine+and+inositol+triphosphate+receptors+modulate+facilitation+and+tetanic+depression+at+the+frog+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Ryanodine and inositol triphosphate receptors modulate facilitation and tetanic depression at the frog neuromuscular junction.</a> Muscle Nerve. 52 (4), 623-630 (2015).</li>
<li>Wood, S. J., Slater, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+factor+at+the+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Safety factor at the neuromuscular junction.</a> Prog Neurobiol. 64 (4), 393-429 (2001).</li>
<li>Miranda, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+Cl-+channel+defects+reveal+disrupted+skeletal+muscle+maturation+in+R6%2F2+Huntington%27s+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Physiol%22%5BJournal%5D)">Progressive Cl- channel defects reveal disrupted skeletal muscle maturation in R6/2 Huntington's mice.</a> J Gen Physiol. 149 (1), 55-74 (2017).</li>
<li>Waters, C. W., Varuzhanyan, G., Talmadge, R. J., Voss, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Huntington+disease+skeletal+muscle+is+hyperexcitable+owing+to+chloride+and+potassium+channel+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Huntington disease skeletal muscle is hyperexcitable owing to chloride and potassium channel dysfunction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (22), 9160-9165 (2013).</li>
<li>Khedraki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depressed+Synaptic+Transmission+and+Reduced+Vesicle+Release+Sites+in+Huntington%27s+Disease+Neuromuscular+Junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Depressed Synaptic Transmission and Reduced Vesicle Release Sites in Huntington's Disease Neuromuscular Junctions.</a> Journal of Neuroscience. 37 (34), 8077-8091 (2017).</li>
<li>Greene, E. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGreene%2C+EC+%22The+anatomy+of+the+rat%22">The anatomy of the rat</a>. , Hafner Pub. (1955).</li>
<li>Magrassi, L., Purves, D., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+probes+that+stain+living+nerve+terminals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fluorescent probes that stain living nerve terminals.</a> J Neurosci. 7 (4), 1207-1214 (1987).</li>
<li>Jack, J. J. B., Noble, D., Tsien, R. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJack%2C+JJB+%22Electric+current+flow+in+excitable+cells%22">Electric current flow in excitable cells</a>. , Clarendon Press. (1983).</li>
<li>Voss, A. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19805741">Extracellular ATP inhibits chloride channels in mature mammalian skeletal muscle by activating P2Y(1) receptors.</a> Journal of Physiology-London. 587 (23), 5739-5752 (2009).</li>
<li>Albuquerque, E. X., McIsaac, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+and+slow+mammalian+muscles+after+denervation%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Fast and slow mammalian muscles after denervation.</a> Experimental Neurology. 26 (1), 183-202 (1970).</li>
<li>Santafe, M. M., Urbano, F. J., Lanuza, M. A., Uchitel, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+types+of+calcium+channels+mediate+transmitter+release+during+functional+recovery+of+botulinum+toxin+type+A-poisoned+mouse+motor+nerve+terminals%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Multiple types of calcium channels mediate transmitter release during functional recovery of botulinum toxin type A-poisoned mouse motor nerve terminals.</a> Neuroscience. 95 (1), 227-234 (2000).</li>
<li>Gaffield, M. A., Betz, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+vesicle+mobility+in+mouse+motor+nerve+terminals+with+and+without+synapsin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic vesicle mobility in mouse motor nerve terminals with and without synapsin.</a> J Neurosci. 27 (50), 13691-13700 (2007).</li>
<li>Zhang, Z. S., Nguyen, K. T., Barrett, E. F., David, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicular+ATPase+Inserted+into+the+Plasma+Membrane+of+Motor+Terminals+by+Exocytosis+Alkalinizes+Cytosolic+pH+and+Facilitates+Endocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Vesicular ATPase Inserted into the Plasma Membrane of Motor Terminals by Exocytosis Alkalinizes Cytosolic pH and Facilitates Endocytosis.</a> Neuron. 68 (6), 1097-1108 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada açıklanan hazırlık ve akım veya gerilim kelepçe koşullar altında nöromuskuler iletim ölçümü için fareyi LAL kas kullanımı olduğunu. LAL dissekan için göz önünde bulundurulacak birkaç önemli nokta vardır. Aşırı bağ dokusu kas AIDS olarak elektrot elektrot kazığa oturtma'dan temizlik bağ dokusu onları kazığa oturtma için yerleştirirken pürüzle. Ancak, sadece elinden alınan bağ dokusu kaldırmak kolayca kas zarar verme olasılığını sınırlandırmak için. Çünkü çok hassas sinir yalıtım özenle yapılmalıdır. Sinir hasarı ön...

Nöromusküler kavşakta sinaptik iletimi okuyan gergin ve iskelet kas sistemleri arasındaki dinamik ilişki içine anlayışlar sağlar ve sinaptik Fizyoloji incelenmesi için mükemmel bir model. Levator auris longus (LAL) kolayca görüntülenmeyecektir nöromüsküler kavşak için izin veren bir ince kas var. Önceki raporlar sinaptik uyuşturucu ve toksinler incelemek ve iskelet kas fiber türü özellikleri LAL1,2nitelendirmiştir LAL kullanma kolaylığı anlatmıştık. Çok sayıda çalışma LAL nöromüsküler fizyolojisi3,4,5,6,7,8incelemek için kullandık. Elektrofizyoloji için yetenek kolayca LAL nöromüsküler kavşak gözlemlemek için microelectrodes motor endplate, doğru yerleşimini sağlar ve sinaptik iletimi kayıt alanı kelepçe sorunları büyük ölçüde azaltır. Membran zaman sabiti (τm) ve (Riçinde) giriş direnci gibi kas membran özelliklerini geçerli-kelepçe kayıtları kolayca elde edilir. Ayrıca, bu özellikleri kas zarı özellikleri sinaptik işleve doğrudan karşılaştırması için izin nöromuskuler iletim kaydetmek için kullanılan aynı kas liflerinden ölçülebilir. Bu veri analizi birçok nöromüsküler hastalıklar ve Birleşik değişmiş faaliyet fiziksel mekanizmalarının içine anahtar anlayışlar verebilir.
Burada açıklanan tekniği önemli bir yönü olmayan linearities akım-kelepçe içinde karşılaşılan tabi değildir ve kas membran özelliklerini bağımsız sinaptik kayıtları için gerilim tipi kelepçe kullanımıdır. Nöromuskuler iletim incelemek için gerilim-kelepçe akım tipi kelepçe karşı kullanmanın yararları 1950'lerde9çabalarında öncü tarafından kuruldu. Geçerli-kelepçe altında 10-15 mV genlik içinde aşan EPPs mEPP genlik9doğrusal bir ürün değildir. Örneğin, ortalama mEPP 1 mV, bir EPP 5 mV 5 mEPPs 5 (QC); ürün olarak kabul Oysa, bir EPP 40 mV 40'tan fazla mEPPs ürün olacak. Membran potansiyeli ve asetilkolin reseptörü denge potansiyeli arasındaki farktır EPP için sürüş zorlamak için daha büyük EPPs, bu non-lineer oluşur (~ -10 mV), büyük EPPs sırasında önemli ölçüde azaltır. Çünkü kas membran potansiyeli gerilim tipi kelepçe deneyler sırasında değişmiyor bu sorun gerilim tipi kelepçe deneylerde önlenmiş olur. Bir dezavantajı gerilim tipi kelepçe deneyler daha geçerli-kelepçe kayıt tamamlamak teknik olarak daha zor olmasıdır. Bunu aklýnýzda tutarak, Sigara linearities akım tipi kelepçe kayıtları EPPs10hesapları basit bir matematiksel düzeltme McLachlan ve Martin geliştirdi. Düzeltmeleri de11,12,13iş ama önemlisi, kas zarı özellikleri değil kesintiye varsayıyorum.
Kas zarı özellikleri koşulları ya da kas bozabilir hastalık durumlarında eğitim düşünün özellikle önemlidir. Örneğin, Huntington hastalığı R6/2 transgenik modelinden kas iskelet dinlenme klorür ve potasyum akımları14,15hyperexcitable bir progresif azalma nedeniyle olur. Sonuç olarak mEPPs ve EPPs R6/2 iskelet kas güçlendirilmiş. Kesinlikle, Ek etkenler mEPPs ve EPPs değiştirebilir. SNARE-proteinler8' e ilgili gibi görünüyordu EPPs değişiklikleri bulunan farklı bir model Huntington hastalığı fare (R6/1) ile çalışma. Neden değiştirilmiş nöromuskuler iletim mekanizmaları değerlendirmek için gerilim tipi kelepçe kullanarak değiştirilmiş kas zarı özellikleri etkilerini ortadan kaldırmak faydalı olacaktır. Bir son çalışmada, R6/2 nöromuskuler iletim burada açıklanan tekniği kullanarak her iki akım ve gerilim kelepçe koşullar altında incelenmiştir. Motor endplates tamamını gerilim-% 1 hata klempe ile daha az iki microelectrodes endplate16uzunluğu sabit içinde yerleştirerek. Bu gerilim tipi kelepçe gösterildi ve R6/2 kas nöromuskuler iletim zıt ölçümleri vermiştir akım tipi kelepçe kayıtları düzeltti. Bu kas zarı özellikleri üzerinde değişiklik yapılmış Eğer EPPs sigara linearities düzeltmek zor olabileceğini vurgular ve kas membran özelliklerini bağımsız voltaj-kelepçe kayıtlarını edinme yararları göstermektedir. Burada sunulan Protokolü koşulları veya sinaptik iletimi ve postsinaptik membran özelliklerini etkileyen hastalık durumlarında incelenmesi için idealdir.

<table><tbody><tr><td>Olympus Bileşik Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td><td></td></tr><tr><td>10x Objektif</td><td>Olympus</td><td>UMPLFLN10XW</td><td></td></tr><tr><td>40x Objektif</td><td>Olympus</td><td>LUMPLFLN40XW</td><td></td></tr><tr><td>Borosilikat Cam</td><td>Sutter Aletleri</td><td>BF150-86-7.5</td><td></td></tr><tr><td>CCD Kamera</td><td>Santa Barbara Enstrümanlar Grubu</td><td>ST-7XMEI</td><td></td></tr><tr><td>Mater-9 Darbe Jeneratör</td><td>AMPI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Iso-flex Uyaran İzolatörü</td><td>AMPI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pCLAMP 10 Veri Toplama ve Analiz Yazılımı</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td>1-2500-0180</td><td></td></tr><tr><td>Konsantrik Bipolar Elektrot</td><td>FHC</td><td>CBDSH75</td><td></td></tr><tr><td>Bilyalı mafsal Manipülatörü</td><td>Narishige&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metalik Olmayan Şırıngalar 34 Ayar Dünya</td><td>Hassas Aletler</td><td>MF34G-5</td><td></td></tr><tr><td>Nikon Stereomikroskop</td><td>Nikon</td><td>SMZ800N</td><td></td></tr><tr><td>No. 5 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bahar</td><td>Makası Güzel Bilim Araçları</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>No. 2 Forseps</td><td>Roboz</td><td>RS-5Q41</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiseksiyon Makas</td><td>Roboz</td><td>RS-5912SC</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silikon Elastomer Kiti</td><td>Dow Corning</td><td>2404019862</td><td></td></tr><tr><td>Epilasyon Kremi</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Grass SD9 Stimülatör</td><td>Çim Tıbbi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Model P-1000 Mikropipet Çektirme</td><td>Sutter Aletleri</td><td>P-1000</td><td></td></tr><tr><td>Axon Digidata 1550 Düşük Gürültülü Veri Şifreleme Sistemi</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Düşük Geçişli Bessell Filtre</td><td>Warner Instrument Corp.</td><td>LPF-8</td><td></td></tr><tr><td>Solak Mikromanipülatör</td><td>Siskiyou Corp.</td><td>MX1641/45DL</td><td></td></tr><tr><td>Sağ El Mikromanipülatör</td><td>Siskiyou Corp.</td><td>MX1641/45DR</td><td></td></tr><tr><td>Tek Hareket Kontrol Cihazı</td><td>Siskiyou Corp.</td><td>MC100e</td><td></td></tr><tr><td>Çapraz Silindirli Mikromanipülatör</td><td>Siskiyou Corp.</td><td>MX1641R</td><td>Bu, z ekseninin motorize edilmesine izin vermek için Sol ve Sağ elini kullanan mikro manipülatörlerin Z eksenine eklendi. Bu özel kurulum, 4 eksenli motorlu bir mikro manipülatör satın almaktan daha ucuz ve daha az hacimlidir. Ayrıca her iki mikromanipülatörü de tek bir kontrolörle kontrol etmemizi sağlar</td></tr> <tr><td>BTS</td><td>Toronto Araştırma Kimyasalları</td><td>B315190</td><td></td></tr><tr><td>CTX</td><td>Alomone Labs</td><td>C-270</td><td></td></tr> 4-Di-2-Asp Moleküler Problar Moleküler problar <tr><td>dışında tüm kimyasallar Fisher'dan</td><td></td><td></td><td></td> alınmıştır</tr><tr><td></td><td></td>.<td></td><td> Şimdi Fisher aracılığıyla sipariş edildi</td></tr></tbody></table>

levator auris longus gerilim kelepçe koşullar altında memeli nöromuskuler iletim sınavı hazırlık

Levator Auris Longus Preparation for Examination of Mammalian Neuromuscular Transmission Under Voltage Clamp Conditions

Bu iletişim kuralı geçerli-kelepçe ve gerilim-kelepçe koşullar altında nöromüsküler kavşak üzerinden kayıt sinaptik iletimi için bir teknik anlatılmaktadır. Çünkü bu motor endplate, elektrot kazığa oturtma için nöromüsküler kavşak kolay görselleştirme sağlar bir ince kas levator auris longus (LAL) ex vivo hazırlanması kullanılır. Bu yöntem için kayıt spontan minyatür endplate potansiyelleri ve akımlar (mEPPs ve mEPCs), endplate sinir uyarılmış potansiyeller ve akımlar (EPPs ve EPCs), aynı zamanda motor endplate membran özelliklerini tanır. Bu yöntem elde edilen sonuçları quantal (QC), vezikül yayın siteleri (n) sayısı, vezikül yayın (prel), sinaptik kolaylaştırma ve depresyon yanı sıra kas zarı zaman sabiti (τ olasılığı içerik m) ve giriş direnci. Bu tekniğin uygulamaya fare modelleri insan hastalık hastalığı Birleşik Devletleri anahtar patolojiler vurgulayın ve roman tedavi stratejileri belirlemek. Tam voltaj-tek bir synapse sıkma tarafından bu yöntem bir sinaptik iletimi şu anda mevcut en ayrıntılı analizlerini sağlar.

Şekil 8 geçerli bakliyat (şekil 8A) ve bir LAL fiber akım tipi kelepçe altında gerilim yanıtlarının (şekil 8B) bir 12-hafta-yaşlı vahşi türden R6/2 fare gösterilmektedir. Bu kayıtlar motor endplate alınmıştır mEPPs varlığını gösterir. Kayıtları normal fizyolojik serum çözümde elde edilmiştir. Bu akım tipi kelepçe kayıtları Riçinde ve τm bu lif16,</su...

Bu raporda açıklanan protokol nöromüsküler kavşak spontan kaydetmek için fare levator auris longus (LAL) kas ve postsinaptik potansiyeller (akım tipi kelepçe) sinir uyarılmış ve akımlar (gerilim tipi kelepçe) kullanır. Bu tekniğin kullanımı hastalık ve normal koşullar altında sinaptik aktarım mekanizmaları içine anahtar anlayışlar verebilir.

Levator Auris Longus Gerilim kelepçe koşullar altında memeli nöromuskuler iletim Sınavı Hazırlık

This protocol describes a technique to record synaptic transmission from the neuromuscular junction under current-clamp and voltage-clamp conditions. An ...

Bu prosedürün genel amacı, nöral kas kavşağındaki sinaptik akımları kaydetmek için levator auris longus kasını ve sinirini izole etmektir. Bu yöntem, uç plaka akım boyutu, kuantal içerik, salınım olasılığı ve nörotransmisyon ile kas uyarılabilirliği arasındaki ilişkiler gibi sinaptik fizyolojideki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, tek bir sinapstan elde edilen ayrıntılı elektrofizyolojik kayıtların, canlı hücre optik deneyleri ile kolayca birleştirilebilmesidir.Bu yöntem, sinir ve kas arasındaki sinaptik fonksiyon ve geri bildirim iletişimi hakkında fikir verebilse de, drosophila'dan memelilere kadar diğer sistemlere de uygulanabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan bireyler, memeli sinir kası hazırlığı, özellikle de sinir kırılgan olduğu için mücadele edecektir. Sonraki voltaj kelepçesi verilerini dikkatli bir şekilde elde etmek ve yorumlamak da zor olabilir.Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde yapılırsa bir saat içinde yapılabilir. Prosedürü göstermek laboratuvarımdan Steve Burke olacak. Bu işleme başlamak için, stereo-diseksiyon mikroskobu altında, farenin arkasındaki deride kürek kemiği seviyesinde küçük bir kesi yapın.Bir çift mikrodiseksiyon makası kullanın. Cildi başın ve sırtın üzerinden kesin. Daha sonra, kürek kemiğinin yakınındaki kesi boyunca cildi yukarı çekin.Sağ kürek kemiğinden başlayarak LAL'den daha düşük olan kasları kesin. Ardından, kesilen dokuyu yavaşça orta hattın hemen sağına kaldırın. Sol LAL'den daha düşük olan birkaç kas katmanını çıkarmak için makasın bıçakları kafatasına bastırılarak sol kulağa doğru bir kesim yapın.Kulak kanalının etrafını saran ve kulağın medial tarafındaki kaslara giren LAL'i innerve eden siniri kesmekten kaçının. Sinirin mümkün olduğunca çoğunu bağlı tutarak kulak kanalını kesmeye devam edin. Ardından, kulak kanalının arkasındaki yağ dokusunu kulağın ventrolateral kısmı boyunca kesin.Kası fareden tamamen çıkarmak için sağ tarafta yapılan işlemlere benzer şekilde sol kürek kemiği boyunca kesin. Daha sonra, kulağın kulak kepçesini taban boyunca kesin ve kulağın kıkırdaklı kısmını LAL'e bağlı bırakın. Kası, alt taraf yukarı bakacak şekilde çevirin.LAL kasını izole etmek için, LAL'i ve çevresindeki dokuyu silikon elastomer tabanlı bir Petri kabına yerleştirin ve diseke edilen dokuyu tabana sabitleyin. Dokuyu sık sık fizyolojik bir tuzlu su çözeltisinde yıkayın. Ardından, hazırlığı yerinde tutmak için kulak kanalına bir böcek iğnesi yerleştirin.Daha küçük pimler kullanarak, kalan dokuyu LAL'in orta hattının karşı tarafına sabitleyin. Bir çift forseps kullanın. Kası germek için cildi kulağın yan kısmında nazikçe yukarı çekin ve cilde küçük bir iğne yerleştirin.Mendil tabağa iyice sabitlenene kadar bu adımı tekrarlayın. LAL'i kaplayan ve bağ dokusu yoluyla LAL'e bağlı olan ve özellikle orta hatta yakın olan kasları çıkarın. Daha sonra, üstteki kas tabakasını yukarı çekin ve bıçaklar çekilmekte olan kas tabakasına doğru yönlendirilmiş olarak bağ dokusunu kesin.Orta hatta giden yolun yaklaşık 3/4'üne kadar orta hatta doğru kesin ve sadece LAL kalana kadar kas katmanlarını çıkarmaya devam edin. Temizleme işlemi sırasında sinirlerin zarar görmediğinden emin olun. Bunu takiben, elektrotların kazınmasına yardımcı olmak için LAL'i kaplayan kalan bağ dokusunun bir kısmını çıkarın.Sadece işlem sırasında LAL'e zarar verme riski olmadan kolayca yapılabilen dokuyu çıkarın. LAL'i innerve eden siniri tanımlamak için, bir sinir stimülatörü kullanarak, sinir stimülatörü ile sinirlere dokunun. Kas kasıldığında, doğru sinir tanımlanmıştır.Ardından, sinirin yakınındaki dokuyu dikkatlice tutun ve siniri kulağı çevreleyen dokudan ayırmak için yaylı makas kullanın. Hasarı en aza indirmek için, sinirin çoğunu, daha sonra siniri kayıt kabına sabitlemek için kullanılacak olan bazı çevre dokulara gömülü tutun. Bu noktada, araştırmacı, LAL 20 mililitre veya daha fazla fizyolojik tuzlu su çözeltisi ile yıkandığı sürece bir saat ara verebilir.Daha sonra, kasın pimini çıkarın ve elektrofizyoloji deneyleri için diseksiyon mikroskobu altında bir sahne ekine aktarın. Kası uçlarından ve kenarı boyunca sabitleyin. Siniri kas liflerine dik olarak konumlandırın ve sinirin ucunda sağlam kalan fazla dokudan bir miktar fazla doku yoluyla tabağın dibine sabitleyin.Dokuyu her zaman fizyolojik bir tuzlu su çözeltisinde yıkayın. Elektrofizyoloji deneyi için, perfüzyon odasını LAL ile mikroskop aşamasına sabitleyin. Referans elektrodu, bir agar köprüsü ile kayıt odasına bağlanan üç molar potasyum klorür ile doldurulmuş bir kaba yerleştirin.Bu noktada, sinir uyarıcı elektrodu sinirin üzerine yerleştirin. Nöromüsküler kavşak görselleştirmesi için yeterli floresan elde etmek için LAL preparatını 10 dakika boyunca 4-Di-2-Asp'ye maruz bırakın. 10 dakika sonra, 4-Di-2-Asp çözeltisini normal kalsiyum çözeltisi ile değiştirin.Bu arada, cam kılcal damarları voltaj algılayan ve akım geçiren elektrotlar için uygun solüsyonlarla doldurun. Hava kabarcıklarını gidermek için kılcal damara hafifçe vurun ve doldurulmuş kılcal damarı başlıktaki elektrot tutucusuna sabitleyin.tage. Standart parlak alan ve floresan aydınlatmalı dik bir mikroskop kullanarak, düşük büyütmeli bir su çıkarma hedefi ile hazırlık boyunca kas liflerine dik uzanan parlak bir floresan yeşil nöromüsküler kavşak bandı arayın.Ardından, elektrofizyoloji ile incelemek için kasın üst tabakasında bir nöromüsküler kavşağı tanımlamak için daha yüksek büyütmeli bir su çıkarma hedefine geçin. Öncelikle parlak alan kullanarak, elektrodu belirlenen nöromüsküler kavşağın 100 mikronu içinde kas zarının üzerine yerleştirin. Bu şekil, 12 haftalık vahşi tip bir R62 fareden alınan akım kelepçesi altında bir LAL fiberden gelen akım darbelerinin ve voltaj tepkilerinin bir örneğini göstermektedir.Kayıtlar normal fizyolojik tuzlu su çözeltisinde elde edildi ve mEPP'lerin varlığı bu kayıtların motor uç plakasından alındığını gösteriyor. Burada, voltaj kelepçesi koşulu altında elde edilen bir EPC ve iki mEPC'nin temsili bir kaydı bulunmaktadır. Bu şekil, temsili bir fiberden üst üste binen EPC'leri ve mEPC'leri göstermektedir.Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde yapılırsa bir saat içinde yapılabilir. Bu prosedürü takiben, vezikül salınımı alımı veya morfolojik değişiklikler ile ilgili soruları yanıtlamak için FM143 veya histoloji gibi membran boyaları ile canlı hücre görüntüleme gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Geliştirildikten sonra bu teknik, fizyoloji alanındaki araştırmacıların drosophila'dan memelilere kadar çeşitli organizmalarda sinaptik iletim ve sinir hücresi iletişimini keşfetmelerinin yolunu açtı.Bu videoyu izledikten sonra, nöromüsküler kavşaktaki sinaptik akımları kaydetmek için innerve levator auris longus kasını nasıl izole edeceğinizi iyi anlamalısınız. Bu prosedürü denerken, LAL'e bitişik kas dokusunun çıkarılmasına ve sinirin izole edilmesine büyük özen göstermeyi unutmamak önemlidir.

levator-auris-longus-preparation-for-examination-mammalian

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Burada Drosophila larva nöromüsküler kavşakta sinaptik iletim ölçmek için elektrofizyolojik yöntemler açıklanmaktadır. Uyarılmış serbest motor nöron aksonları uyararak yapay olarak başlatılan ve iletim yoluyla NMJ kas uyarılmış postsinaptik tepki ölçülebilir.

Drosophila Larva NMJ Synaptic Potansiyeller kayıt için Elektrofizyolojik Yöntemler

Erişilebilir sinaps elektrofizyoloji Uygulama sinaptik mutantlar analiz yararlı sinaptik aktivite ölçülebilir bir ölçü, sağlar. Bu makale, nöromüsküler kavşaklar (NMJ) ortaya çıkarmak için kullanılan bir diseksiyon yöntemi...

C. Elegans Nöromüsküler Kavşağı Diseksiyon ve kayıt

Elektrofizyolojik Kayıt Drosophila Embriyo

Kerevit bacak açıcı kas kas fenotip, sinaptik fizyolojisi ve plastisite tarihsel önemi ve deneysel çok yönlülük için sunulmuştur.

Kerevit Açıcı Kas NMJ Tarihsel ve Fizyolojisi gösteri

Levator auris longus (LAL) genç erişkin farelerin kas muskarinik sinyalizasyon inhibitörleri tekrarlanan yönetim ve wholemounts nöromüsküler kavşak sonraki immün (NMJs) için prosedürleri açıklar. LAL kas ifşa ettiği için benzersiz avantajları vardır.

Subkutan Muskarinik Antagonistleri Yönetim ve Farelerde levator Auris longus&#39;un Triple-immün

Bu yeni yöntem, tek bir yetişkin fare motonöron ve kas lifleri tarafından üretilen kuvvet ölçümü aynı anda hücre içi kaydını verir. Normal ve genetik olarak değiştirilmiş hayvanların motor birimlerin elektrik ve mekanik özelliklerinin kombine soruşturma nöromüsküler sistemin çalışması için bir atılımdır.

Erişkin Fare yılında Motor Ünite tarafından üretilen bir Lomber Motonöron ve Kuvvet Eşzamanlı intrasellüler Kaydı<em&gt; In vivo</em

Nöromüsküler kavşak (NMJ) işlevsel bir değerlendirilmesi sinir ve kas arasındaki iletişimi ilgili gerekli bilgileri sağlar. Burada biz kapsamlı bir şekilde kullanarak iki farklı kas-sinir hazırlıklar, yani soleus siyatik ve diyafram frenik NMJ ve kas işlevselliğini değerlendirmek için bir protokol tanımlamak.

Nöromüsküler kavşak işlevleri ölçme

Aksonal uyarılabilirlik teknikleri patofizyolojisi ve geri dönüşü olmayan dejeneratif olayları öncesinde biyofiziksel değişiklikleri incelemek için güçlü bir araç sağlar. Bu el yazması imzalat sıçan ulnar sinir üzerinde bu tekniklerin kullanımı gösterilmiştir.

Vivo Aksonal uyarılabilirlik test ile sıçan Ulnar sinirin Elektrofizyolojik ölçüm

Protokol, kesilmiş sinirden fare motor sinir terminallerine floresan kalsiyum boyası yükleme yöntemini açıklar. Ek olarak, konfokal mikroskopi kullanarak periferik sinir uçlarındaki hızlı kalsiyum geçicilerini kaydetmek için benzersiz bir yöntem sunulmuştur.

Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Fare Nöromüsküler Kavşağında Yüksek Zamansal Çözünürlükte Kalsiyum Geçici Maddelerinin Kaydı

Burada, kraniyal levator auris longus (LAL) kasının in vivo elektroporasyonu ve denervasyonunu birleştiren bir protokol sunuyoruz. Bu prosedür, kas kaynaklı proteinlerin nöromüsküler sinapsın rejenerasyonundaki potansiyel rolünün incelenmesini sağlar.

Kranial Levator Auris Longus İskelet Kasının Kombine İn Vivo Elektroporasyonu ve Kısa Süreli Reinnervasyonu

Dinamik kelepçe elektrofizyolojisi, nöronal ateşleme eksiklikleri ile iyon kanalı disfonksiyonu arasında nedensel bağlantılar kurabilir. Fare serebellar Purkinje nöronlarında dinamik kelepçe yöntemlerini ve protokollerini açıklıyoruz, faydalı kaynaklara ve teknik hususlara dikkat çekiyoruz. Temsili bir çalışmada, tekrarlayan ateşlemeyi kurtarmak için Tsc1-/- Purkinje nöronlarına modellenmiş sodyum iletkenliği ekliyoruz.

Otizmle İlişkili Bozulmuş Nöronal Uyarılabilirliği Araştırmak için Dinamik Kelepçe Yöntemleri

Öğrenin, fare levator auris longus kasını izole ederek nöromusküler kavşakta sinaptik akımları kaydetme yöntemini. Bu teknik, sinir-kas iletişimini ve sinaptik fizyolojiyi detaylıca incelemenizi sağlar.

Levator Auris Longus Gerilim kelepçe koşullar altında memeli nöromuskuler iletim Sınavı Hazırlık

Daha fazla video keşfet