Name: İnsan nazal epitel hücre pulcuklarının nesil bireyselleştirilmiş Kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatör çalışma için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-11T14:45:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Keşfedin insan nazal epitel hücrelerinden sferoid kültür oluşturma yöntemini ve CFTR fonksiyon çalışmaları için bu modelin değerini. Bu teknik, kistik fibrozis tedavileri için kişiselleştirilmiş ilaç testlerine olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser Kistik Fibrozis Vakfı Therapeutics tarafından desteklenen, sayı CLANCY14XX0 vermek ve Kistik Fibrozis Vakfı numarası CLANCY15R0 verin. Yazarlar Kristina Ray hasta işe alım ve yasal gözetim ona yardım için teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar ayrıca HNE kültür yetenekleri nesilde destekli Kistik Fibrozis Vakfı tarafından desteklenen HNE çalışma grubu teşekkür etmek istiyorum: Preston Bratcher, Calvin pamuk, Martina Gentzsch, Elizabeth Joseloff, Michael Myerburg, Dave Nichols, Scott Randell, Steve Rowe, G. Marty Solomon ve Katherine Tuggle.

<ol><li>Rowe, S. M., Miller, S., Sorscher, E. J. <a target="_blank" href="http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMra043184">Cystic fibrosis.</a> N Engl J Med. 352 (19), 1992-2001 (2005).</li>
<li>Rommens, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+cystic+fibrosis+gene%3A+chromosome+walking+and+jumping%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of the cystic fibrosis gene: chromosome walking and jumping.</a> Science. 245 (4922), 1059-1065 (1989).</li>
<li>Anderson, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleoside+triphosphates+are+required+to+open+the+CFTR+chloride+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Nucleoside triphosphates are required to open the CFTR chloride channel.</a> Cell. 67 (4), 775-784 (1991).</li>
<li>Boucher, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+airway+ion+transport.+Part+one%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Human airway ion transport. Part one.</a> Am J Respir Crit Care Med. 150 (1), 271-281 (1994).</li>
<li>Ehre, C., Ridley, C., Thornton, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis%3A+an+inherited+disease+affecting+mucin-producing+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis: an inherited disease affecting mucin-producing organs.</a> Int J Biochem Cell Biol. 52, 136-145 (2014).</li>
<li>Accurso, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+VX-770+in+persons+with+cystic+fibrosis+and+the+G551D-CFTR+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Effect of VX-770 in persons with cystic fibrosis and the G551D-CFTR mutation.</a> N Engl J Med. 363 (21), 1991-2003 (2010).</li>
<li>De Boeck, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+ivacaftor+in+patients+with+cystic+fibrosis+and+a+non-G551D+gating+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of ivacaftor in patients with cystic fibrosis and a non-G551D gating mutation.</a> J Cyst Fibros. 13 (6), 674-680 (2014).</li>
<li>Moss, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+ivacaftor+in+patients+with+cystic+fibrosis+who+have+an+Arg117His-CFTR+mutation%3A+a+double-blind%2C+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of ivacaftor in patients with cystic fibrosis who have an Arg117His-CFTR mutation: a double-blind, randomised controlled trial.</a> Lancet Respir Med. 3 (7), 524-533 (2015).</li>
<li>Wainwright, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumacaftor-Ivacaftor+in+Patients+with+Cystic+Fibrosis+Homozygous+for+Phe508del+CFTR%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Lumacaftor-Ivacaftor in Patients with Cystic Fibrosis Homozygous for Phe508del CFTR.</a> N Engl J Med. , (2015).</li>
<li>Brewington, J. J., McPhail, G. L., Clancy, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumacaftor+alone+and+combined+with+ivacaftor%3A+preclinical+and+clinical+trial+experience+of+F508del+CFTR+correction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Lumacaftor alone and combined with ivacaftor: preclinical and clinical trial experience of F508del CFTR correction.</a> Expert Rev Respir Med. 10 (1), 5-17 (2016).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22CFTR2+Database%22">CFTR2 Database</a>. , 
 <a target="_blank" href="www.cftr2.org">www.cftr2.org</a> (2017).</li>
<li>Mou, H., Brazauskas, K., Rajagopal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+medicine+for+cystic+fibrosis%3A+establishing+human+model+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Pulmonol%22%5BJournal%5D)">Personalized medicine for cystic fibrosis: establishing human model systems.</a> Pediatr Pulmonol. 50 Suppl 40, S14-S23 (2015).</li>
<li>Randell, S. H., Fulcher, M. L., O'Neal, W., Olsen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+epithelial+cell+models+for+cystic+fibrosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Primary epithelial cell models for cystic fibrosis research.</a> Methods Mol Biol. 742, 285-310 (2011).</li>
<li>Whitcutt, M. J., Adler, K. B., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biphasic+chamber+system+for+maintaining+polarity+of+differentiation+of+cultured+respiratory+tract+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">A biphasic chamber system for maintaining polarity of differentiation of cultured respiratory tract epithelial cells.</a> In Vitro Cell Dev Biol. 24 (5), 420-428 (1988).</li>
<li>Worthington, E. N., Tarran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+ASL+measurements+and+mucus+transport+rates+in+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods for ASL measurements and mucus transport rates in cell cultures.</a> Methods Mol Biol. 742, 77-92 (2011).</li>
<li>Van Goor, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction+of+the+F508del-CFTR+protein+processing+defect+in+vitro+by+the+investigational+drug+VX-809%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Correction of the F508del-CFTR protein processing defect in vitro by the investigational drug VX-809.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (46), 18843-18848 (2011).</li>
<li>Hug, M. J., Tummler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+current+measurements+to+diagnose+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Intestinal current measurements to diagnose cystic fibrosis.</a> J Cyst Fibros. 3 Suppl 2, 157-158 (2004).</li>
<li>van Barneveld, A., Stanke, F., Ballmann, M., Naim, H. Y., Tummler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+biochemical+analysis+of+CFTR+in+human+rectal+biopsies%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Ex vivo biochemical analysis of CFTR in human rectal biopsies.</a> Biochim Biophys Acta. 1762 (4), 393-397 (2006).</li>
<li>Dekkers, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+CFTR+assay+using+primary+cystic+fibrosis+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A functional CFTR assay using primary cystic fibrosis intestinal organoids.</a> Nat Med. 19 (7), 939-945 (2013).</li>
<li>Dekkers, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+correction+of+distinct+CFTR+folding+mutants+in+rectal+cystic+fibrosis+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Optimal correction of distinct CFTR folding mutants in rectal cystic fibrosis organoids.</a> Eur Respir J. 48 (2), 451-458 (2016).</li>
<li>Dekkers, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bioassay+using+intestinal+organoids+to+measure+CFTR+modulators+in+human+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">A bioassay using intestinal organoids to measure CFTR modulators in human plasma.</a> J Cyst Fibros. 14 (2), 178-181 (2015).</li>
<li>Zomer-van Ommen, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+premature+termination+codon+suppression+by+read-through+agents+in+cystic+fibrosis+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Limited premature termination codon suppression by read-through agents in cystic fibrosis intestinal organoids.</a> J Cyst Fibros. , (2015).</li>
<li>Bridges, M. A., Walker, D. C., Davidson, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis+and+control+nasal+epithelial+cells+harvested+by+a+brushing+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis and control nasal epithelial cells harvested by a brushing procedure.</a> In Vitro Cell Dev Biol. 27a (9), 684-686 (1991).</li>
<li>Di Lullo, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+%26%2334%3Bex+vivo+model%26%2334%3B+contributing+to+the+diagnosis+and+evaluation+of+new+drugs+in+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Otorhinolaryngol+Ital%22%5BJournal%5D)">An &#34;ex vivo model&#34; contributing to the diagnosis and evaluation of new drugs in cystic fibrosis.</a> Acta Otorhinolaryngol Ital. 37 (3), 207-213 (2017).</li>
<li>Pranke, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction+of+CFTR+function+in+nasal+epithelial+cells+from+cystic+fibrosis+patients+predicts+improvement+of+respiratory+function+by+CFTR+modulators%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Correction of CFTR function in nasal epithelial cells from cystic fibrosis patients predicts improvement of respiratory function by CFTR modulators.</a> Sci Rep. 7 (1), 7375(2017).</li>
<li>Devalia, J. L., Davies, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+nasal+and+bronchial+epithelial+cells+in+culture%3A+an+overview+of+their+characteristics+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy+Proc%22%5BJournal%5D)">Human nasal and bronchial epithelial cells in culture: an overview of their characteristics and function.</a> Allergy Proc. 12 (2), 71-79 (1991).</li>
<li>Devalia, J. L., Sapsford, R. J., Wells, C. W., Richman, P., Davies, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+and+comparison+of+human+bronchial+and+nasal+epithelial+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Culture and comparison of human bronchial and nasal epithelial cells in vitro.</a> Respir Med. 84 (4), 303-312 (1990).</li>
<li>Thavagnanam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+epithelial+cells+can+act+as+a+physiological+surrogate+for+paediatric+asthma+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Nasal epithelial cells can act as a physiological surrogate for paediatric asthma studies.</a> PLoS One. 9 (1), e85802(2014).</li>
<li>Jorissen, M., Van der Schueren, B., Van den Berghe, H., Cassiman, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preservation+and+regeneration+of+cilia+on+human+nasal+epithelial+cells+cultured+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Otorhinolaryngol%22%5BJournal%5D)">The preservation and regeneration of cilia on human nasal epithelial cells cultured in vitro.</a> Arch Otorhinolaryngol. 246 (5), 308-314 (1989).</li>
<li>Brewington, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+CFTR+function+and+modulation+in+primary+human+nasal+cell+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Detection of CFTR function and modulation in primary human nasal cell spheroids.</a> J Cyst Fibros. , (2017).</li>
<li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tgf-beta+downregulation+of+distinct+chloride+channels+in+cystic+fibrosis-affected+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Tgf-beta downregulation of distinct chloride channels in cystic fibrosis-affected epithelia.</a> PLoS One. 9 (9), e106842(2014).</li>
<li>Boucher, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+airway+surface+dehydration+as+the+initiating+event+in+CF+airway+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Evidence for airway surface dehydration as the initiating event in CF airway disease.</a> J Intern Med. 261 (1), 5-16 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu iletişim kuralı burun hücre hasta kaynaklı küresel kültürler CFTR işlevi ve bireyselleştirilmiş bir belirli bir modelini üretmek mümkün nesil açıklar. Yakından zorluk önlemek için katıldı süreç içinde birkaç temel adım vardır. Önce bir güzel örnek hastanın burun değil. İyi bir örnek olmalıdır > 50.000 hücreleri, sınırlı mukus/enkaz ve içinde 4 h (başarı da buza nakliye gecede ile kolay ulaşılabilir olmasına rağmen) işlemek için hazır olun. Uygulama örnekleri küret veya fırça ile çalışma personeli tarafından alınıyor g...

Kistik fibroz (CF) 70.000 kişi dünya çapında1etkileyen ölümcül bir otozomal resesif hastalik var. Bu hayat-kısalma genetik hastalığı Kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatör protein (CFTR)2mutasyonların neden olur. CFTR gastrointestinal sistem, ter bezi de dahil olmak üzere birden çok polarize epiteli apikal zarı arasında klorür ve bikarbonat hareketi sağlayan iyon kanalı olarak adenozin trifosfat-bağlayıcı kaset aile ve işlevleri üyesi olan, ve solunum ağaç, diğerleri arasında3,4. Bu nedenle, işlevsiz CFTR çoklu sistem epitel disfonksiyon, solunum hastalıkları1den kaynaklanan çoğu mortalite ile yol açar. CF akciğerde hava yolu CFTR tahrik yüzey sıvı (ASL) yönetmelik ve mukus yayın yol açar kalınlaşmış mukus, hava yolu obstrüksiyonu, kronik enfeksiyon ve ilerici hava yolu remodeling kaybı ve akciğer işlev1,5kaybı.
Hastalığın nedeni olarak CFTR disfonksiyon kimlik rağmen CF tedaviler geleneksel belirtileri (örneğin, pankreas enzim replasman tedavisi, hava yolu geçiş izni terapiler)1azaltma üzerinde duruldu. Bu yaklaşım son zamanlarda roman therapeutics, "doğrudan hedef işlevsiz CFTR CFTR modülatörler," olarak adlandırdığı advent tarafından devrim. Bu yaklaşım belirti yönetimi'nden hastalığı değiştirme için klinik manzara kaymıştır bakım ama birkaç sınırlamalar6,7,8,9,10taşır. Modülatör her CFTR mutasyon eşlik eden protein kusur için özel ve genetik nüfus11seçmek için sınırlı bir faaliyettir. Bu sınırlama protein kusurların türdeş olmayan doğası gereği, aynı zamanda nadir mutasyon gruplar klinik çalışmalar impracticality tarafından tahrik edilmektedir. Buna ek olarak, iyi okudu genotip (örneğin, F508del/F508del CFTR, en yaygın CFTR mutasyon), ile konular arasında işte geniş değişkenlik hastalık yükü ve modülatör yanıt6,7',8 ,9,11.
Her iki bu sorunların üstesinden gelmek için müfettişler preklinik test12kişiselleştirilmiş modelleri kullanılmasını önerdi. Bu kavram vivo içinde konu terapiler kişiselleştirilmiş bir moda öngörmede hastaya özgü doku bileşik sınama, bir bireyselleştirilmiş ex vivo modeli sistemi oluşturmak için kullanır. Bir kez doğrulanmış, böyle bir model sürücü hassas tedavi hastanın altta yatan CFTR genotip ne olursa olsun klinisyenler tarafından kullanılabilir.
İnsan bronş epitel (HBE) hücreleri explant dokudan akciğer nakli zamanda elde edilen böyle bir model için CF13,14olasılığı kurdu. Bir hava-sıvı arayüzü (ALI) yetiştirilen HBEs fonksiyonel CFTR miktar doğrudan electrophysiologic test veya aracılığıyla dolaylı olarak önlemler ASL homeostazı13,15için izin verir. Bu model yapılmış CFTR Biyoloji anlamak için kritik ve CFTR modülatörler16gelişiminde önemli bir sürücüydü. Ne yazık ki, HBE modelleri savunulabilir edinimi (akciğer nakli veya bronşiyal fırçalama) invaziv doğası ve örnekleri eksikliği nedeniyle kişiselleştirilmiş bir model olarak nadir mutasyonlar ya da hafif hastalığı olanlar için değildir. Tersine, bağırsak dokusu, rektal veya duodenal biyopsi örnekleri elde edilen bağırsak geçerli ölçüm (ICM) veya şişme tabanlı organoid tahlil için bireyselleştirilmiş CFTR işlevi17,18, eğitim için kullanılabilir 19. Organoid deneyleri, özellikle, CFTR etkinlik20,21,22çok hassas modelleri vardır. Her iki modelde sınırlı doku kaynak (bağırsak dokusu, çoğu hastalık patoloji solunum olmakla birlikte) ve satın alma yarı invaziv yöntem. Alternatif olarak, çeşitli araştırmacılar insan nazal epitel (HNE) hücreleri modeli CFTR restorasyon23,24,25inceledik. HNEs güvenli bir şekilde fırça veya kürtaj bireylerde her yaştan tarafından hasat edilebilir ve ALI, kültürlü zaman HBEs25,26,27,28birçok özellikleri özetlemek. HNE monolayer kültürlerin geleneksel olarak Skuamöz dönüştürme ve olgunluk29için uzun bir süre ile sınırlı. Ayrıca, rapor kısa devre geçerli ölçüm sonuçları HNEs daha fazla HBEs, terapötik etkinlik25algılamak için küçük bir pencere düşündüren olan daha küçük.
Kişiselleştirilmiş, non-invaziv, solunum doku kültürü manken CFTR işlevinin ihtiyacını göz önüne alındığında, bir şişme tabanlı organoid tahlil duyarlılık HNEs non-invaziv ve solunum doğası ile birleştirmek çalıştı. Burada, HNEs 3 boyutlu "küresel" kültürleri bireyselleştirilmiş CFTR çalışma için tahlil şişme tabanlı30' u üreten bizim yöntemi açıklamak. HNE pulcuklarının güvenilir küre merkezi veya Lümen doğru epitelyal tepe ile kutuplaştırmak. Bu model çok sayıda alt solunum epitel özelliklerini recapitulates ve ALI kültürleri daha çabuk olgunlaşır. Fonksiyonel bir tahlil olarak HNE pulcuklarının güvenilir modülasyon iyi okudu mutasyon gruplar (örneğin, F508del CFTR) yanı sıra bir aralığı CFTR işlevi ölçmek. Bu şişme tabanlı tahlil CFTR su apikal tuz sızma aşağıdaki gibi dolaylı olarak küresel sıvı akını ölçme, iyon/tuz taşıma özellikleri üzerinde büyük harfe dönüştürür. Bu disfonksiyonel CFTR ile daha az şişer veya küçültmek bu şekilde uyarılmış pulcuklarının tamamen işlevsel CFTR ile sağlam, güzel. Bu görüntü analizi öncesi ile sayısal ve 1 h sonrası stimülasyon pulcuklarının, luminal alan ölçme ve yüzde belirleyerek değiştirebilirsiniz. Bu ölçü sonra uyuşturucu bioactivity bir hastaya özgü moda için ekran için deneysel grupları arasında karşılaştırılabilir.

<table><tbody><tr><td>1.5 mL Eppendorf Tüp</td><td>ABD Bilimsel&nbsp;</td><td>4036-3204</td><td></td></tr><tr><td>150 mL Filtre Şişesi</td><td>Midsci&nbsp;</td><td>TP99150</td><td>Medyayı filtrelemek için</td></tr><tr><td>15 mL Konik Tüp</td><td>Midsci&nbsp;</td><td></td><td></td>TP91015</tr><tr><td>1 L Filtre Şişesi</td><td>Midsci&nbsp;</td><td>TP99950</td><td>Ortamı filtrelemek için</td></tr><tr><td>35 mm Cam Tabanlı Çanak</td><td>MatTek Corporation</td><td>P35G-0-20-C</td><td>Opsiyonel</td></tr><tr><td>3-İzobutil-1-Metilksantin (IBMX)</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AC228420010&nbsp;</td><td>1 mL DMSO'da 22.0 mg'lık 100 mM'lik bir stok çözeltisi hazırlayın</td></tr><tr><td>50 mL Konik Tüp</td><td>Midsci&nbsp;</td><td>&nbsp; </td><td></td>TP91050</tr><tr><td>Accutase</td><td>Yenilikçi Hücre Teknolojileri A.Ş.</td><td>AT-104</td><td>Hücre ayırma çözeltisi</td></tr><tr><td>Adenin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2786-25G</td><td>Tablo 1'e</td></tr> bakın <tr><td>Amfoterisin B</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9528-100MG</td><td>Tablo 1'e</td></tr><tr><td>bakın Sığır Beyni Ekstresi (9mg / mL)</td> <td>Lonza&nbsp;</td><td>CC-4098</td><td>Bkz. Tablo 2</td></tr><tr><td>Seftazidim hidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3809-1G</td><td>Bkz</td></tr><tr><td>. Tablo 1 Hücre Sıyırıcılar 20 cm&nbsp;</td><td>Orta bilim&nbsp;</td><td></td><td></td>TP99010</tr><tr><td>CFTR Inh172</td><td>Tocris Bioscience</td><td>3430</td> 1 mL DMSO Kolera Toksin B'de (Vibrio cholerae'den) <td>4.0 mg'lık 10 mM stok çözeltisi hazırlayın</td></tr> <tr><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8052-.5MG</td><td>Tablo 1'e bakın</td><td></td></tr> <tr><td>CYB-1</td><td>Tıbbi Ambalaj Şirketi</td><td>CYB-1</td><td>Sitoloji fırçası</td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D5879-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagle Media (DMEM)/F12 Hepes&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri&nbsp;</td><td>11330-057</td><td>Temel Ortam; Bkz. Tablo 1 ve 2</td></tr><tr><td>Epidermal büyüme faktörü (Rekombinant insan proteini, hayvansal kökenli ücretsiz)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PHG6045</td><td>Tablo 1'e bakınız</td></tr><tr><td>Epinefrin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4250-1G</td><td>Tablo 2'ye bakınız</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>Etanolamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E0135-500ML</td><td>16.6 mM çözeltisi; Tablo 2'ye bakın</td></tr><tr><td>Etilendiamintetraasetik Asit (EDTA)</td> <td>TCI America&nbsp;</td><td>E0084</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (yüksek performanslı FBS)</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>10082147</td><td>Tablo 1'e bakınız</td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6886-50</td> 1 mL DMSO Büyüme Faktörü Azaltılmış Matrigel Corning, Inc. <td>içinde 4.1 mg'lık 10 mM stok çözeltisi hazırlayın</td></tr><tr><td></td><td>.</td><td>356231</td><td>Corning Matrigel Büyüme Faktörü Azaltılmış (GFR) bazal membran matrisi, fenol kırmızısı içermez, LDEV içermez, 10 mL.</td></tr><tr><td>Hemacytometer</td><td>Hausser Scientific</td><td>1483</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Kollajen Solüsyonu, Tip I (VitroCol; 3 mg/mL)</td><td>Advanced BioMatrix</td><td>5007-A</td><td>Kollajen solüsyonu</td></tr><tr><td>HyClone (aka FetalClone II)&nbsp;</td><td>GE Sağlık&nbsp;</td><td>SH30066.03HI</td><td>Bkz. Tablo 2</td></tr><tr><td>Hidrokortizon Kök Hücre</td><td>Teknolojileri</td><td>07904</td><td>Bkz. Tablo 1 ve 2</td></tr><tr><td>İnsülin, insan rekombinant, çinko çözeltisi</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td>12585014</td><td>4 mg / mL çözelti; bakınız Tablo 2</td></tr><tr><td>IVF 4 Kuyulu Çanak, İşlenmemiş</td><td>NUNC (Fisher Scientific aracılığıyla)</td><td>12566350</td><td>Sferoidler için 4 oyuklu plaka; 24 oyuklu bir plakaya benzer kuyu boyutu</td></tr><tr><td>MEF-CF1-IRR</td><td>Globalstem</td><td>GSC-6001G</td><td>Işınlanmış murin embriyonik fibroblastları</td></tr><tr><td>Metamorf 7.7</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td></td><td>Analiz Yazılımı; https://www.moleculardevices.com/systems/metamorph-research-imaging/metamorph-microscopy-automation-and-image-analysis-software alıntı için</td></tr><tr><td>Olympus IX51 Ters Mikroskop</td><td>Olympus Corporation</td><td>Durdurulan</td><td>Görüntüleme Mikroskobu. Değiştirme: Olympus IX53, https://www.olympus-lifescience.com/pt/microscopes/inverted/ix53/&nbsp; Teklif için</td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td>15140122</td><td>Bkz. Tablo 2</td></tr><tr><td>Fsophoryletheanolamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0503-5G</td><td>Bkz. Tablo 2</td></tr><tr><td>Retinoik Asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R2625-50MG</td><td>Bkz. Tablo 2</td></tr><tr><td>Rhinoprobe</td><td>Arlington Scientific, Inc.</td><td>96-0905</td><td>Nazal küret</td></tr><tr><td>Slidebook 5.5</td><td>3i, Akıllı Görüntüleme Yenilikleri Durdurulan</td><td></td><td>Görüntüleme Yazılımı. Değiştirme: Slayt Kitabı 6, bir teklif için https://www.intelligent-imaging.com/slidebook</td></tr><tr><td>Steril Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>20012050</td><td></td></tr><tr><td>Steril Su</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W3500-6X500ML</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kültürü Kabı 100</td><td>Tekno Plastik Ürünler</td><td>93100</td><td>Genişleme için doku kültürü kabı</td></tr><tr><td>Tobramisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4014-100MG</td><td>Tablo 1'e bakınız</td></tr><tr><td>Transferrin (İnsan Transferrin 0.5 mL)</td> <td>Lonza&nbsp;</td><td>CC-4205</td><td>Bkz. Tablo 2</td></tr><tr><td>Triiyodothryonin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6397-1G</td><td>3,3&asal;,5-Triiyodo-L-tironin sodyum tuzu&nbsp; [T3]; Tablo 2'ye bakınız</td></tr>: <tr><td>Domuz Pankreasından Tripsin</td> NC0393024, <td>Sigma-Aldrich</td><td>T4799-10G</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Ultroser-G</td><td>Crescent Chemical (Fisher Scientific aracılığıyla),</td> <td>20 mL lipofilize toz; Bkz. Tablo 2</td></tr><tr><td>Streptomyces orientalis</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V2002-5G'den</td> vankomisin hidroklorür <td>Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>VX770</td><td>Selleck Chemicals</td><td>S1144</td> 1 mL DMSO VX809 Selleck Chemicals S1565 içinde <td>0.4 mg'lık 1 mM stok çözeltisi hazırlayın</td></tr> 1 mL DMSO Y-27632 Dihidroklorür <tr><td></td><td></td><td></td><td>içinde 4.5 mg'lık 10 mM stok çözeltisi satın alın veya hazırlayın</td></tr><tr><td>; KAYA inhibitörü ve nbsp;</td><td>Enzo Yaşam Bilimleri&nbsp;</td><td>ALX-270-333-M025&nbsp;</td><td>Tablo 1'e bakın</td></tr></tbody></table>

İnsan nazal epitel hücre pulcuklarının nesil bireyselleştirilmiş kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatör çalışma için

Generation of Human Nasal Epithelial Cell Spheroids for Individualized Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Study

Kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatörü (CFTR) modülatör ilaçlar getirilmesi bakım Kistik fibrozis (CF) devrim yarattı iken, genotip yönetmen terapi modeli şu anda kullanımda olan bazı sınırlamaları vardır. İlk, nadir veya çöküşünde mutasyon grupları kesin klinik hariç tutulur. Ayrıca, ek modülatör uyuşturucu pazara girerken, modülatör seçimler tek bir özne için optimize etmek zor olacak. Her iki bu sorunların CFTR işlevi ve modülasyon hasta kaynaklı, bireyselleştirilmiş preklinik modeli sistemlerinin kullanımı ile ele alınmaktadır. İnsan nazal epitel hücreleri (HNEs) böyle bir model için solunum doku kolayca erişilebilir bir kaynaktır. Burada, CFTR işlevi ve modülasyon birincil HNEs kullanarak bir üç boyutlu küresel model nesil açıklar. HNEs minimal invaziv bir moda, koşullu programlama koşullarında genişletilmiş ve küresel kültürün içine seribaşı bireylerde etkilenmezsiniz. Tohum 2 hafta içinde küresel kültürler 3' ile 5'-siklik adenozin monofosfattır (kampı) uyarılmış HNE pulcuklarının oluşturmak-agonistler CFTR iþlevini etkinleþtirmek için üretiliyor. Küresel şişlik ardından CFTR etkinliği bir proxy olarak sayılabilir. HNE pulcuklarının hastalık morbidite ve mortalite yansıtan bir epitel ilgili bir erişilebilir, kişiselleştirilmiş modeli oluşturmak için burun hücreleri minimal invaziv, henüz solunum kökeni yararlanmak. Hava-sıvı arayüzey HNE kültürler için karşılaştırıldığında, pulcuklarının hangi genel kirlenme oranı azaltır olgun, nispeten hızlı olan. Bu doku edinme göreli kolaylığı ile dengeleniyor olsa mevcut haliyle modeli düşük işlem hacmi ile sınırlıdır. HNE pulcuklarının güvenilir bir şekilde ölçmek ve CFTR etkinlik bireysel düzeyde karakterize etmek için kullanılabilir. Vivo uyuşturucu yanıt için bu miktar bağlamak için devam eden bir çalışma HNE pulcuklarının CFTR modülasyon hasta yanıt bir gerçek preklinik tahmin olup olmadığını belirler.

HNEs kültür yemek için eklemek ve 72 h tohum içindeki hücreleri küçük adaları oluştururlar; iyi ve kötü ada oluşumu, bir hafta örnekleri şekil 1A ve 1B, sırasıyla gösterilir. Bu adalar 15-30 gün boyunca yemek kapsayacak şekilde genişletmek gerekir. Küçük ya da suboptimal örnekleri daha uzun sürebilir ve genellikle yararlı pulcuklarının vermez. Kirlenme bulaşıcı ajanlar ile derin sarı/bulutlu medya tarafından başarısızlık hücrelerin kültür yem...

Burada insan nazal epitel hücreleri kültürleri üç boyutlu küresel oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Pulcuklarının sonra sürücüye Kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatörü (CFTR) teşvik-bağımlı iyon ve CFTR işlevi için bir proxy gibi küresel luminal boyutunda değişiklik miktarının sıvı salgılanması.

İnsan nazal epitel hücre pulcuklarının nesil bireyselleştirilmiş Kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatör çalışma için

While the introduction of Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) modulator drugs has revolutionized care in Cystic Fibrosis (CF), the ...

Bu prosedürün genel olarak, sonuçta fonksiyonel CFTR çalışmaları için bir test olarak kullanılabilecek insan burun hücresi sferoidleri oluşturmaktır. Bu yöntem, kistik fibroz alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir, örneğin bireysel bir deneğin ex vivo model sisteminde CFTR'yi değiştiren ilaçlara verdiği yanıtı değerlendirmek gibi. Bu tekniğin ana avantajı, küçük bir burun hücresi örneğinden nispeten hızlı bir zaman diliminde çok sayıda sferoidin üretilmesi ve kapsamlı testlere izin vermesidir.Prosedürü gösterenler, laboratuvarımdan teknisyenler olan Lauren Strecker ve Jessica Moncivaiz olacak. İnsan Nazal Epitel veya HNE hücrelerini metin protokolüne göre besleyici fibroblastlar üzerinde işledikten ve genişlettikten sonra, önceden hazırlanmış genleşme ortamını, farklılaşma ortamını,% 0.1 Tripsin EDTA çözeltisini ve steril PBS'yi 30 dakika boyunca oda sıcaklığına getirin. Daha sonra kapları temizlemek için %70 etanol kullanın ve temiz bir biyogüvenlik kabinine aktarın.Biyogüvenlik kabininde, ortamı HNE kültüründen aspire etmek ve atmak için bir vakum hattına bağlı bir Pasteur pipeti kullanın. Daha sonra temiz bir serolojik pipetle, tamponu ekleyerek, döndürerek

generation-human-nasal-epithelial-cell-spheroids-for-individualized

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Insan gönüllülerin yüzeysel sıyrık biyopsi yoluyla elde edilen nazal epitel hücreleri, doku kültürü ekler üzerine genişletilmiş ve aktarılır. Ortak akışkanlığa eriştikten sonra hücreler, kirpikli olmayan silli hücre kültürleri, sonuçta hava sıvı arayüzü yetiştirilir. Farklılaşmış nazal epitel hücre kültürleri solunum mukozasını eğitim için uygun deneysel modeller sunar.

Hava Sıvı Arayüz İnsan Burun Epitel Hücrelerinin ekimi

Bu yayın, çocuklardan nazal epitel mukozasının başarılı bir şekilde örneklenmesi ve kültürlenmesi ve bu hücrelerin indüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelere (iPSC'ler) yeniden programlanması için yöntemleri göstermektedir.

Çocuklar Primary Burun Epitel Hücreleri yetiştirmek ve uyarılmış pluripotent kök hücrelerin içine programlayın

Bu protokol, kistik fibrozisli (KF) deneklerden alınan kültürlenmiş dokuda CFTR fonksiyonunu ve CFTR modülatör yanıtlarını ölçmek için bir testi tanımlar. Biyopsi kaynaklı bağırsak organoidleri, CF organoidlerinde kusurlu (veya güçlü bir şekilde azalmış) bir yanıt olan ve CFTR modülatörlerine maruz bırakılarak geri yüklenebilen bir yanıt olan cAMP güdümlü bir şekilde şişer.

Forskolin kaynaklı bağırsak Organoids şişme: Bir<em&gt; İn Vitro</em&gt; Deney Kistik Fibrozis Hastalarında İlaç Tepki değerlendirilmesi için

Xenopus laevis embriyolarından izole edilmiş derin ektoderm hücrelerinden mukozisel epitel organoidleri geliştirmek için basit bir protokol uyguluyoruz. Çok güçlü atalar epitel goblet hücre öncüllerini yeniler ler ve organoidlerin yüzeyinde hücre geçişlerinin başlatılmasıve ilerlemesinicanlı olarak izlemesağlarlar.

Kenopus Embriyonik Hücrelerden Mukosiyaliyer Epitel Organoidler: Nesil, Kültür ve Yüksek Çözünürlüklü Canlı Görüntüleme

Burada insan burun epitel hücrelerinden in vitro organoid modeli tanımlamak için ayrıntılı bir protokol sunulmuştur. Protokol, standart laboratuvar ekipmanı gerektiren ölçümler için seçeneklere ve özel ekipman ve yazılımlar için ek olanaklara sahiptir.

İnsan Nazal Epitel Organoidlerinin Kültürü ve Görüntülenmesi

Bu protokol, nazal epitel hücresi toplanmasını, genişlemesini ve organotipik hava yolu epitel hücre modellerine farklılaşmasını ve canlı hücre görüntüleme ve özel yapım senaryolar yoluyla kirpik vuruş sıklığının nicelleştirilmesini açıklar.

Primer İnsan Nazal Epitel Hücre Modellerinin Silia Beat Sıklığının Ölçülmesi İçin Toplanması, Genleştirilmesi ve Farklılaştırılması

Burada, hava-sıvı arayüzünde primer insan nazal epitel (HNE) hücrelerinin izolasyonu, amplifikasyonu ve farklılaşması ve güçlendirilmiş HNE'nin başarılı bir şekilde dondurulmasına ve daha sonra çözülmesine izin veren bir biyobankacılık protokolü açıklanmaktadır. Protokol, farklılaşmış HNE hücrelerinin elektrofizyolojik özelliklerini ve farklı modülatör tedavileri üzerine CFTR ile ilişkili klorür sekresyon düzeltmesini analiz eder.

Primer İnsan Burun Epitel Hücreleri: Hassas Tıp Bağlamında Biyobankacılık

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücre farklılaşma protokollerindeki son gelişmeler, organa özgü hücre tiplerinin kademeli olarak türetilmesine izin vermektedir. Burada, iPSC türevi hava yolu bazal hücrelerinin bakımı ve genişlemesi ve hava-sıvı arayüz kültürlerinde mukosiliyer bir epitel halinde farklılaşması için ayrıntılı adımlar sunuyoruz.

İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Hava Yolu Epitel Hücresi Hava-Sıvı Arayüz Kültürlerinin Oluşturulması

Biz nöroendokrin kanser hücre hatlarını kullanarak 3D çok hücreli sferoidler büyümek için basit bir agaroz bindirme platformu sunmak. Bu yöntem, endokrin tümör hücreleri üzerindeki terapötik ilaçların etkisini araştırmak için çok uygun bir yol sağlar. Bu da bize kanser tedavisi için insan nöroendokrin tümör sferoidler kurulmasına yardımcı olabilir.

İnsan Nöroendokrin Tümör Terapi Çalışmaları Üç Boyutlu Model İnsan nöroendokrin tümör hücre hatlarında

Pulmoner rehabilitasyon yaygın solunum yolu hastalıklarının tedavisinde kabul edilmektedir. Başarılı bir Pulmoner rehabilitasyon için bir anahtar bileşeni önerilen egzersiz eğitiminin bağlılık olduğunu. Mevcut protokolün amacı, sürekli veri izleme teknolojisi tam bir reçete aerobik antrenman yoğunluğuna bağlılığı ölçmek için nasıl kullanılabileceğini açıklamaktır.

Pulmoner Rehabilitasyon Egzersiz Bağlılık Eğitim Sürekli Veri İzleme Teknolojisi Kullanımı

Keşfedin insan nazal epitel hücrelerinden sferoid kültür oluşturma yöntemini ve CFTR fonksiyon çalışmaları için bu modelin değerini. Bu teknik, kistik fibrozis tedavileri için kişiselleştirilmiş ilaç testlerine olanak tanır.

İnsan nazal epitel hücre pulcuklarının nesil bireyselleştirilmiş Kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatör çalışma için (Video) | JoVE Journal

İnsan nazal epitel hücre pulcuklarının nesil bireyselleştirilmiş Kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatör çalışma için

Daha fazla video keşfet