Name: Ateş Ex Vivo sıçan beyin dilimleri kullanarak birincil olayları incelemek için alternatif bir yaklaşım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Öğrenin ex vivo beyin dilimleme yöntemiyle nörodejeneratif süreçlerdeki primer moleküler olayları incelemeyi. Bu teknik, aynı anatomik yapıda tedavi edilmiş ve edilmemiş koşulları karşılaştırarak hastalık mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser nöro-Bio Ltd. tarafından finanse edildi Dr. Giovanni Ferrati ve doktor Sergio Rotondo (nöro-BIO) teşekkür etmek onların yorum ve tavsiyeler el yazması için istiyoruz.

Tüm hayvan çalışmaları onaylı protokolleri altında gerçekleştirilmiş.
Not: Bu bölümde ana aşamadan dizisi deneysel işlem sırasında gerçekleştirilen ve önerilen zaman aralığı (şekil 1) sağlanır. Ayrıca, protokol, adım adım açıklamasını kritik eylemler doku homojenizasyon kuluçka dönemi (Şekil 2) sonra beyin kaldırılması arasında gösterilen açıklayıcı bir panel tarafından desteklenmiştir. Yukarıda açıklanan22ile ilgili malzeme ve cihazları ve sonraki aşama WB analiz için oluşturmak için yönergeleri ayrıntılardır.
1. cerrahi aletler, Vibratome ayarları ve tedavi hazırlık
Not: deneysel bir işlem başlatmadan önce aşağıdaki adımları yürütün:
<ol><li>İki farklı yapay serebrospinal sıvı (aCSFs), bir beyin Dilimleme için kullanılan hazırlamak ve diğer kuluçka adım için daha önce29açıklandığı gibi. Kısaca, "Dilimleme" aCSF için iki aCSFs (içinde mmol) çalışma konsantrasyonları şunlardır: 120 NaCl, 5 KCl, 20 NaHCO3, 2.4 CaCl2, 2 MgSO4, 1.2 KH2PO4ve 10 glikoz; 6,7 HEPES tuz ve 3.3 HEPES asit; pH: 7.1. "Kayıt" aCSF süre: 124 NaCl, 3.7 KCl, 26 NaHCO3, 2 CaCl2, 1.3 MgSO4, 1.3 KH2PO4ve 10 glikoz; pH: 7.1.</li>
	<li>Mix iyi çözümleri ve buza koy ve dilimleme aCSF için bu soğuk beyin ve sonraki kesit kaldırma sırasında oksijen. Oda sıcaklığında (RT) ve tedarik oksijen kayıt aCSF tutun.</li>
	<li>Diseksiyon başlık altında aletleri işten çıkarma ve beyin kaldırma, Yani, giyotin, cerrahi disseksiyon seti (makas, pens, bıçaklar) ve spatula için yerleştirin.</li>
	<li>Vibratome parametreleri dilim kalınlığı (Bu hazırlık 300 µm) ve 7 frekans ve 6 hızda seçerek ayarlayın. Vibratome odası uygun, boşluk ve buz ile surround.</li>
	<li>"Dilimleme" (aCSF) beyin kesit sırasında oksijen carbogen (% 95'i O2, % 5 CO2) Vanayı aç. 2 mL/dk civarında en düşük akış hızı seçin.</li>
	<li>Test etmek için koşulları hazırlamak için iki 15 mL tüp al. Ekle bir tüp 10 mL "kayıt" aCSF yalnız (kontrol grubu) ve diğer, "kayıt" aCSF 10 mL 2 µM (tedavi grubu) bir konsantrasyon T30 ile zenginleştirilmiş. Girdap hem tüpler ve kullanımları kurulum hazırlama aşaması (Bölüm 3) kadar buz üzerinde tutun.</li>
</ol>2. anestezi, beyin çıkarma ve dilimleme
Not: Bu çalışmada, 9 vahşi türü P14 erkek Wistar rats kullanılmıştır. Onlar hızlı bir şekilde (10 dk içinde) önlemek veya en az doku dejenerasyonu süreçleri yavaşlatmak için gerçekleştirilmesi gereken bu yana beyin ayıklama ve sonraki Dilimleme protokolün kritik bir parçası oluşturur.
<ol><li>% 100 w/w isoflurane 1,5 mL bir pamuk katmanda indüksiyon odasına ekleyin, hayvan içine yerleştirin ve kapağını kapatın. Hayvan derinden pedal refleks, yokluğunda teyit anestezi kadar bekleyin ve Giyotin kullanarak hayvan başını kesmek.</li>
	<li>Buz gibi baş hayvan içeren bir kap içinde aCSF beyin kaldırma adımı sırasında Dilimleme tutmak (şekil 2A -C).</li>
	<li>Cilt üzerinde kafatası, cerrahi bıçak deşmek sonra kafatasının orta hat posterior bölümünden takip makas kullanarak kesmek ve anteriorly kemik OBs (şekil 2A) yukarıda erişene dek devam edin.</li>
	<li>Beyin (şekil 2B) erişim sağlamak için bir çift forseps kullanarak kafatası yan yana iki tarafına çek. Bir spatula ventrally beyin için eklemek, yavaşça dışarı ve buz gibi "Dilimleme" aCSF için yaklaşık 5 dk (şekil 2C) içinde nemli tutmak Kepçe.</li>
	<li>Beyin filtre kağıdı üzerine atın ve bir bıçak (şekil 2B) kullanarak beyincik kesti. Dikey olarak vibratome disk beyin tutkal ve parça odası ekleyin, buz gibi "Dilimleme" aCSF ile doldurun ve oksijen (şekil 2E) sağlar.</li>
	<li>Kesme aralığını ayarlamak ve beyin (şekil 2F) kesit ile devam edin. Medial septum (MS), Broca (DBB) ve gözlemliyorum innominata (SI), çapraz grup gibi ilgi bölge içeren bölümler yukarıda açıklanan22toplamak. Yukarıdan-aşağıya üç dilim rostral (R), orta (I) ve (Şekil 2 g) BF Kaudal (C) bölümünü içerir.</li>
	<li>Orta çizgi her bölüm küçük makasla bölmek tek tek kontrol ve tedavi durum aynı anatomik uçağı olarak kullanılan iki aynasal hemislices (Resim 2 H), alma.</li>
	<li>Hemisections 5-10 dakika vibratome odasında tutmak, o zaman onlara bir cam pipet ile kayıt aCSF içeren bir kabarcıklanma pota transfer. Yeniden elde etmek için yaklaşık 30 dakika RT devam et.</li>
	<li>Bu arada, üç cam şişeleri ile kayıt aCSF yalnız 3 (Adım 1.6 kontrol grubu için önceden hazırlanmış) mL ve T30 (1.6 adımda önceden hazırlanmış) ile tedavi grubu için zenginleştirilmiş aCSF 3 mL ile üç şişeleri doldurun.</li>
</ol>3. Kurulum hazırlama
<ol><li>Hemisections kontrol grubu (yeşil çerçeve, şekil 2J) (rostral, ara ve Kaudal BF bölge dahil) üç ardışık hemislices için karşılık gelen cam şişe (şekil 2I) aktarmak ve onların tedavi grubu (kırmızı çerçeve, şekil 2J) için meslektaşları eşleştirme.</li>
	<li>Koşullar arasında herhangi bir kontaminasyonu önlemek için iki farklı fırçalar, bir denetim hemislices ve başka için tedavi meslektaşları ile beyin dokusu aktarın.</li>
	<li>Her cam şişe oxygenating iğne (21 G) (şekil 2J) sunma karşılık gelen kapak ile kapatın. Cihazları ana tüp carbogen kaynak (Şekil 2 K) bağlayın. Deneme sırasında beyin dokusu ve mekanik zarar herhangi bir hareketi önlemek için hemislices 2 mL/dak bir minimum akış hızı ile kuluçka süresi boyunca için oksijen sağlamak. 5 h kuluçka başlatın. 5 dakika içinde 3.1-3.3 adımları yürütün. Not: Onay sık (her 15-20 dk) oksijen tüpleri sağlanan ve akışını aşağıdan doku kıpırdamıyor.</li>
</ol>4. örnek homojenizasyon
<ol><li>Kuluçka sonra oksijen akışını durdurmak ve tüpleri tüm kapakları kaldırın. 250 µL üzerine buz (Şekil 2 L) boruları Bakımı lizis tamponunun içeren 1,5 mL tüpler içine uygun fırçalar kullanarak hemislices aktarın. Arabellek, PBS 1 mix lizis yapmak x fosfataz ve proteaz inhibitörleri kokteyller ile hem 1: 100 seyreltilmiş ve doku örnekleri arasında önlemek amacıyla farklı dibekler ile homojenize. 10-15 dk içinde bu eylemleri tamamlayın.</li>
	<li>1000 x g 4 ° C'de 5 min için de lysate beyin santrifüj kapasitesi Süpernatant yeni tüpler içine aktarmak ve örnekleri-80 ° C'de tutmak</li>
</ol>5. okuma Protein konsantrasyonu ve Western Blot analizi
<ol><li>Her örnek protein konsantrasyonu belirlemek ve daha sonra yukarıda açıklanan22olarak Western blot analizi için aliquots hazırlamak.</li>
	<li>Protein ifadesi üzerinde tedavinin etkilerini değerlendirmek için istatistiksel çözümleme gerçekleştirme.</li>
</ol>

<ol><li>Braak, H., Braak, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathological+stageing+of+Alzheimer-related+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes.</a> Acta Neuropathologica. 82 (4), 239-259 (1991).</li>
<li>Schliebs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+forebrain+cholinergic+dysfunction+in+Alzheimer%27s+disease--interrelationship+with+beta-amyloid%2C+inflammation+and+neurotrophin+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemical+Research%22%5BJournal%5D)">Basal forebrain cholinergic dysfunction in Alzheimer's disease--interrelationship with beta-amyloid, inflammation and neurotrophin signaling.</a> Neurochemical Research. 30 (6-7), 895-908 (2005).</li>
<li>Schmitz, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+forebrain+degeneration+precedes+and+predicts+the+cortical+spread+of+Alzheimer%27s+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Basal forebrain degeneration precedes and predicts the cortical spread of Alzheimer's pathology.</a> Nature Communications. 7, 13249(2016).</li>
<li>Fjell, A. M., McEvoy, L., Holland, D., Dale, A. M., Walhovd, K. B. Alzheimer's Disease Neuroimaging Initiative. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+normal+in+normal+aging%3F+Effects+of+aging%2C+amyloid+and+Alzheimer%27s+disease+on+the+cerebral+cortex+and+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+neurobiology%22%5BJournal%5D)">What is normal in normal aging? Effects of aging, amyloid and Alzheimer's disease on the cerebral cortex and the hippocampus.</a> Progress in neurobiology. 117, 20-40 (2014).</li>
<li>Kovács, T., Cairns, N. J., Lantos, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+centres+in+Alzheimer%27s+disease%3A+olfactory+bulb+is+involved+in+early+Braak%27s+stages%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Olfactory centres in Alzheimer's disease: olfactory bulb is involved in early Braak's stages.</a> Neuroreport. 12 (2), 285-288 (2001).</li>
<li>Winblad, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defeating+Alzheimer%27s+disease+and+other+dementias%3A+a+priority+for+European+science+and+society%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Defeating Alzheimer's disease and other dementias: a priority for European science and society.</a> The Lancet Neurology. 15 (5), 455-532 (2016).</li>
<li>Herrup, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+case+for+rejecting+the+amyloid+cascade+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The case for rejecting the amyloid cascade hypothesis.</a> Nat Neurosci. 18 (6), 794-799 (2015).</li>
<li>De Strooper, B., Karran, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Cellular+Phase+of+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Cellular Phase of Alzheimer's Disease.</a> Cell. 164 (4), 603-615 (2016).</li>
<li>Scheltens, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(15)01124-1/abstract">Alzheimer's disease.</a> Lancet. 388 (10043), 505-517 (2016).</li>
<li>Arendt, T., Brückner, M. K., Lange, M., Bigl, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+acetylcholinesterase+and+butyrylcholinesterase+in+Alzheimer%27s+disease+resemble+embryonic+development-A+study+of+molecular+forms%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemistry+International%22%5BJournal%5D)">Changes in acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase in Alzheimer's disease resemble embryonic development-A study of molecular forms.</a> Neurochemistry International. 21 (3), 381-396 (1992).</li>
<li>Auld, D. S., Kornecook, T. J., Bastianetto, S., Quirion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease+and+the+basal+forebrain+cholinergic+system%3A+relations+to+%CE%B2-amyloid+peptides%2C+cognition%2C+and+treatment+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease and the basal forebrain cholinergic system: relations to β-amyloid peptides, cognition, and treatment strategies.</a> Progress in Neurobiology. 68 (3), 209-245 (2002).</li>
<li>Arendt, T., Bruckner, M. K., Morawski, M., Jager, C., Gertz, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+neurone+loss+in+Alzheimer%27s+disease%3A+cortical+or+subcortical%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Early neurone loss in Alzheimer's disease: cortical or subcortical?</a> Acta Neuropathol Commun. 3, 10(2015).</li>
<li>Mesulam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Cholinergic+Lesion+of+Alzheimer%27s+Disease%3A+Pivotal+Factor+or+The+Cholinergic+Lesion+of+Alzheimer%27s+Disease%3A+Pivotal+Factor+or+Side+Show%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">The Cholinergic Lesion of Alzheimer's Disease: Pivotal Factor or The Cholinergic Lesion of Alzheimer's Disease: Pivotal Factor or Side Show?</a> Learn Mem. , 43-49 (2004).</li>
<li>Schliebs, R., Arendt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cholinergic+system+in+aging+and+neuronal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">The cholinergic system in aging and neuronal degeneration.</a> Behavioural Brain Research. 221 (2), 555-563 (2011).</li>
<li>Mesulam, M. M., Mufson, E. J., Wainer, B. H., Levey, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+cholinergic+pathways+in+the+rat%3A+An+overview+based+on+an+alternative+nomenclature+%28Ch1-Ch6%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Central cholinergic pathways in the rat: An overview based on an alternative nomenclature (Ch1-Ch6).</a> Neuroscience. 10 (4), 1185-1201 (1983).</li>
<li>Mesulam, M., Mufson, E. J., Levey, A. I., Wainer, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+innervation+of+cortex+by+the+basal+forebrain%3A+cytochemistry+and+cortical+connections+of+the+septal+area%2C+diagonal+band+nuclei%2C+nucleus+basalis+%28substantia+innominata%29%2C+and+hypothalamus+in+the+rhesus+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cholinergic innervation of cortex by the basal forebrain: cytochemistry and cortical connections of the septal area, diagonal band nuclei, nucleus basalis (substantia innominata), and hypothalamus in the rhesus monkey.</a> J Comp Neurol. 214 (2), 170-197 (1983).</li>
<li>Greenfield, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+and+targeting+the+basic+mechanism+of+neurodegeneration%3A+The+role+of+peptides+from+the+C-terminus+of+acetylcholinesterase%3A+Non-hydrolytic+effects+of+ache%3A+The+actions+of+peptides+derived+from+the+C-terminal+and+their+relevance+to+neurodegenerat%5BTitle%5D)+AND+%22Chemico-Biological+Interactions%22%5BJournal%5D)">Discovering and targeting the basic mechanism of neurodegeneration: The role of peptides from the C-terminus of acetylcholinesterase: Non-hydrolytic effects of ache: The actions of peptides derived from the C-terminal and their relevance to neurodegenerat.</a> Chemico-Biological Interactions. 203 (3), 543-546 (2013).</li>
<li>Garcia-Ratés, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%28I%29+Pharmacological+profiling+of+a+novel+modulator+of+the+%CE%B17+nicotinic+receptor%3A+Blockade+of+a+toxic+acetylcholinesterase-derived+peptide+increased+in+Alzheimer+brains%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">(I) Pharmacological profiling of a novel modulator of the α7 nicotinic receptor: Blockade of a toxic acetylcholinesterase-derived peptide increased in Alzheimer brains.</a> Neuropharmacology. 105, 487-499 (2016).</li>
<li>Eimerl, S., Schramm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+quantity+of+calcium+that+appears+to+induce+neuronal+death%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">The quantity of calcium that appears to induce neuronal death.</a> Journal of neurochemistry. 62 (3), 1223-1226 (1994).</li>
<li>Greenfield, S., Vaux, D. J. <a target="_blank" href="https://pdfs.semanticscholar.org/0d25/c7e053b9eed98e759c2e2879cb53195c084e.pdf">Commentary Parkinson's Disease, Alzheimer's Disease and Motor Neurone Disease: Identifying a Common Mechanism.</a> Science. 113 (3), 485-492 (2002).</li>
<li>Badin, A. S., Morrill, P., Devonshire, I. M., Greenfield, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%28II%29+Physiological+profiling+of+an+endogenous+peptide+in+the+basal+forebrain%3A+Age-related+bioactivity+and+blockade+with+a+novel+modulator%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">(II) Physiological profiling of an endogenous peptide in the basal forebrain: Age-related bioactivity and blockade with a novel modulator.</a> Neuropharmacology. 105, 47-60 (2016).</li>
<li>Brai, E., Stuart, S., Badin, A. -S., Greenfield, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Ex+Vivo+Model+to+Investigate+the+Underlying+Mechanisms+in+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A Novel Ex Vivo Model to Investigate the Underlying Mechanisms in Alzheimer's Disease.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 291(2017).</li>
<li>Cho, S., Wood, A., Bowlby, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+slices+as+models+for+neurodegenerative+disease+and+screening+platforms+to+identify+novel+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Current+neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Brain slices as models for neurodegenerative disease and screening platforms to identify novel therapeutics.</a> Current neuropharmacology. 5 (1), 19-33 (2007).</li>
<li>Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+brain+slice+cultures%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Organotypic brain slice cultures: A review.</a> Neuroscience. 305, 86-98 (2015).</li>
<li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+clamp+techniques+for+studying+ionic+channels+in+excitable+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+physiology%22%5BJournal%5D)">Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes.</a> Annual review of physiology. 46, 455-472 (1984).</li>
<li>Jensen, M. S., Lambert, J. D. C., Johansen, F. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+recordings+from+rat+hippocampus+slices+following+in+vivo+brain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological recordings from rat hippocampus slices following in vivo brain ischemia.</a> Brain Research. 554 (1-2), 166-175 (1991).</li>
<li>Ferrati, G., Martini, F. J., Maravall, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+Adenosine+Receptor-Mediated+Regulation+of+Diverse+Thalamocortical+Short-Term+Plasticity+in+the+Mouse+Whisker+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Presynaptic Adenosine Receptor-Mediated Regulation of Diverse Thalamocortical Short-Term Plasticity in the Mouse Whisker Pathway.</a> Frontiers in Neural Circuits. 10, 1-9 (2016).</li>
<li>Grinvald, A., Hildesheim, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VSDI%3A+a+new+era+in+functional+imaging+of+cortical+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">VSDI: a new era in functional imaging of cortical dynamics.</a> Nature Reviews Neuroscience. 5 (11), 874-885 (2004).</li>
<li>Badin, A. S., John, E., Susan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+spatio-temporal+bioactivity+of+a+novel+peptide+revealed+by+optical+imaging+in+rat+orbitofrontal+cortex+in+vitro%3A+Possible+implications+for+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">High-resolution spatio-temporal bioactivity of a novel peptide revealed by optical imaging in rat orbitofrontal cortex in vitro: Possible implications for neurodegenerative diseases.</a> Neuropharmacology. 73, 10-18 (2013).</li>
<li>Greenfield, S. A., Badin, A. S., Ferrati, G., Devonshire, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging+of+the+rat+brain+suggests+a+previously+missing+link+between+top-down+and+bottom-up+nervous+system+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Optical imaging of the rat brain suggests a previously missing link between top-down and bottom-up nervous system function.</a> Neurophotonics. 4, 31213(2017).</li>
<li>Opitz-Araya, X., Barria, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3197400/">Organotypic hippocampal slice cultures.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. (48), (2011).</li>
<li>Gong, C. -X., Lidsky, T., Wegiel, J., Grundke-Iqbal, I., Iqbal, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolically+active+rat+brain+slices+as+a+model+to+study+the+regulation+of+protein+phosphorylation+in+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Protocols%22%5BJournal%5D)">Metabolically active rat brain slices as a model to study the regulation of protein phosphorylation in mammalian brain.</a> Brain Research Protocols. 6 (3), 134-140 (2001).</li>
</ol>

Yazarlar rakip mali çıkarlarının bildirin. Susan A. Greenfield nöro-Bio Limited, özel sektöre ait bir şirket ve şirket tutar hisseleri kurucusu ve başkanıdır. Emanuele Brai ve Antonella Cogoni nöro-Bio Ltd. çalışanları olan

Bu iletişim kuralı, köklü ex vivo beyin tekniğine dayalı asıl yönünü zaman uyumlu olarak belirli bir uygulama sonra onların yanıt izleme aynı anatomik uçak elde edilen iki aynasal hemislices test etmek için izin verir Koşul (kontrol veya tedavi); Bu nedenle deneysel bir paradigma olarak sıkı mümkün olduğunca kontrol sunuyor. Bir saat, doz ve nöronal bozukluğu için ilgili siteye özgü şekilde farklı fizyolojinin nörodejeneratif olaylar22sırasında görüldüğü gibi değerlendirilmesi olasılığı ö...

Kronik bir patoloji entorhinal korteks (EC), BF, Hipokampus (HC) ve olfaktör ampul gibi farklı beyin bölgeleri etkileyen kademeli nörodejeneratif bozukluğu (OB)1,2,3ile karakterize reklamdır, 4,5. Reklam gelişimin geç yaklaşık % 70'ini tüm durumlarda6muhasebe demans en sık görülen bu hastalık yapma ilerici bir bilişsel gerileme yol. Reklam neden ilk etap anlamak için yoğun girişimlerine rağmen bir şey yok şu anda tanımlanmış bir deneysel gösterge onları elucidating. Reklam pathobiology, ne de etkili7,8 kanıtlamıştır bir ilaç hedef açıklayan tam bir profil sağlamaz beri Ayrıca, en popüler teori - "amiloid hipotezi" - giderek sorgulanmaktadır ,9.
Ateş sırasında meydana gelen ilk mekanizmaları nöronal küme reklam3,10,11 ' öncelikle duyarlı ilişkili artan ilgi alma alternatif bir teori önerir , 12 , 13 , 14. bu türdeş olmayan hücresel Merkez AK, HC ve OB15,16gibi birden çok bölgeye BF, orta ve beyin sapı, projeler içinde kapsıyordu. Nöronal morfoloji ve nörotransmitter sentez çeşitliliği rağmen bu çekirdek hücrelerin enzimatik olmayan işlev17,18de içerebilir ağrısı ifade içinde ortak bir özelliği paylaşır. Molekül trofik veya toksik olayları ile ilgili olarak Ca2 + doz, kullanılabilirlik ve nöronal yaş17,18 geçirmek için nöronlar kalsiyum (Ca2 +) akışına aracılık sinyal bir roman olarak klasik olmayan bu rolü , 19.
Ateş sırasında gözlenen hücresel kaybı bu nedenle ağrısı C-terminus i ciddi bir 30mer peptid (T30) atfedilebilecek olduğu bu enzimatik olmayan işlev17,18,20' ye, ilişkili olabilir 20. hücre kültürü ve optik görüntüleme18,21 hazırlıklar, önceki sonuçları doğrultusunda biz, ex vivo sıçan beyin dilimleri T30 indüklenen BF yapıları içeren dayalı yeni bir yaklaşım ile gösterdi bir reklam gibi profil22. Özellikle, birçok anatomik devre koruma için bir zaman penceresi saat de olsa için arasında değişen bir sağlam doku özelliklerini korur beri bu yeni yöntem daha fizyolojik bir senaryo hücre kültürü daha sunuyor. Biz ateş, erken aşamalarında yer alan olayları keşfetmek için bu iletişim kurallarını T30 başvurusu üzerine akut yanıt izleme uygulanır.
Beyin kullanma edebiyatının büyük beden rağmen moleküler yolları araştırmak için dilimler nöronal hasar örtük veya neurogenesis23,24, bu protokolü ilk kez daha acil sağlar ve okumak duyarlı karşılaştırıldığında organotypic dilimleri yaygın kullanımı için. Beyin bölümleri organotypic için olduğu gibi Ancak, bu akut dilim yordamı da değerlendirilmesi nöroprotektif veya Nörotoksik molekülleri, belirli bir süreç içinde birincil moleküler değişimleri keşfi gibi çeşitli amaçlar için kabul edilebilir, immunohistokimyasal analizleri ve merkezi sinir sistemi için farmakolojik deneyleri patolojiler ilgili.

<table><tbody><tr><td>Sodyum klorür (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich, Almanya</td><td>S7653</td><td>aCSF hazırlığı için reaktif</td></tr><tr><td>Potasyum klorür (KCl)</td><td>Sigma-Aldrich, Almanya</td><td>P9333</td><td>aCSF hazırlığı için reaktif</td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat (NaHCO3)</td><td>Sigma-Aldrich, Almanya</td><td>S5761</td><td>aCSF hazırlığı için reaktif</td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat heptahidrat (MgSO4 (7H2O))</td><td>Sigma-Aldrich, Almanya</td><td>63138</td><td>aCSF hazırlığı için reaktif</td></tr><tr><td>Potasyum fosfat monobazik (KH2PO4)</td><td>Sigma-Aldrich, Almanya</td><td>P5655</td><td>aCSF hazırlığı için reaktif</td></tr><tr><td>Hepes tuzu</td><td>Sigma-Aldrich, Almanya</td><td>H7006</td><td>aCSF hazırlığı için reaktif</td></tr><tr><td>Hepes asidi</td><td>Sigma-Aldrich, Almanya</td><td>H3375</td><td>aCSF hazırlığı için reaktif</td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich, Almanya</td><td>ACSF hazırlığı için</td> <td>G7528</td> Reaktif</tr><tr><td>Kalsiyum klorür dehidrat</td><td>Sigma-Aldrich, Almanya</td><td>223506</td><td>aCSF hazırlığı için reaktif</td></tr><tr><td>T30 peptid</td><td>Genosphere Biotechnologies, Fransa</td><td></td><td>AChE'den türetilmiş peptit test edildi</td></tr><tr><td>Cerrahi diseksiyon kiti</td><td>World Precision Instruments, ABD</td><td>Ürün #: MOUSEKIT</td><td>Beyin çıkarma adımı</td></tr><tr><td>Cerrahi bıçaklar</td><td>Swann-Morton, Birleşik Krallık</td><td>BS 2982</td><td>Beyin çıkarma aşaması</td></tr><tr><td>Filtre kağıdı</td><td>Fisher Scientific, ABD</td><td>11566873</td><td>Dilimleme için beyin hazırlığı</td></tr><tr><td>Tutkal</td><td></td><td></td><td>Dilimleme için beyin hazırlığı</td></tr><tr><td>Vibratom</td><td>Leica, Almanya</td><td>VT1000 S</td><td>Dilimleme Fırçaları</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>Doku işleme</td></tr><tr><td>Oksijen tüpü</td><td></td><td></td><td>Kesit alma ve inkübasyon aşaması</td></tr><tr><td>1x Fosfat tampon salin (PBS)</td><td>Fisher Scientific, ABD</td><td>BP2438-4</td><td>Homojenizasyon aşaması</td></tr><tr><td>Fosfataz inhibitörleri</td><td>Fisher Scientific, ABD</td><td>1284-1650</td><td>Homojenizasyon aşaması</td></tr><tr><td>Proteaz inhibitörleri</td><td>Roche complete PIC, ABD</td><td>4693116001</td><td>Homojenizasyon adımı</td></tr><tr><td>Havaneli</td><td>Starlab, İngiltere</td><td>I1415-5390</td><td>Homojenizasyon aşaması</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pierce 660 nm Protein Testi</td><td>Thermo Scientific, ABD</td><td>22660</td><td>Protein konsantrasyonu</td></tr></tbody></table>

ateş ex vivo sıçan beyin dilimleri kullanarak birincil olayları incelemek için alternatif bir yaklaşım

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

Hangi birincil yansıtan temel ateş işler güvenilir hayvan modelleri geliştirmek için çalışan çok sayıda çalışma rağmen çok az yaygın olarak kabul etmiştir. Burada, biz daha yakın vivo içindesunan iyi bilinen ex vivo beyin dilim tekniği, uyarlanmış yeni bir yordam teklif- vitro hücre dejenerasyonu, uyarının harekete geçirilmesine karşılık olarak erken olayları araştıran için hazırlıklar, daha senaryo gibi Alzheimer hastalığı içinde (Ah) görülmektedir. Bu varyasyon seçili beyin bölgesi ve yerel işlevselliğini fizyolojik ortamında bir anatomik cytoarchitecture korunması etkinleştirme basit ve kolayca tekrarlanabilir adımlar oluşur. Farklı anatomik alanlarda birden fazla deneyler söz konusu tedavileri ile bir site-, doz- ve saat-bağımlı bir şekilde gerçekleştirmek için fırsat sağlayan aynı beyin elde edilebilir. Bu metodoloji ile ilgili sonuçları etkileyebilecek potansiyel sınırlamalar doku, Yani, anatomik bütünlüğünü sırasında dilimleme ve kuluçka adımları ve bölüm kalınlık bakımından korunması için ile ilgili hangi biyokimyasal ve immunohistokimyasal analiz etkileyebilir. Bu yaklaşım moleküler mekanizmaları fizyolojik ve patolojik koşulları, uyuşturucu tarama veya doz-yanıt deneyleri dahil keşfetmek gibi farklı amaçlar için istihdam edilebilir. Son olarak, bu iletişim kuralını da hayvan davranış çalışmalarda istihdam sayısını azaltabilir. Rapor burada uygulama son zamanlarda açıklanan ve ex vivo sıçan beyin dilimler içeren bir reklam öncelikle etkilenen beyin bölgelerinden biri olan Bazal ön (BF), tarihinde ilk kez test. Asetilkolinesteraz (AChE) C-terminus elde edilen zehirli bir peptid yönetim tetikleme, BF, antero-posterior ekseni boyunca farklı bir ifade bir reklam gibi profil sor kanıtlanmıştır özellikle, Reklamda, alpha7 nikotinik reseptör (α7-nAChR), gibi değişmiş proteinlerin Tau (p-Tau) ve amiloid beta (Aβ) fosforile.

Burada sunulan Protokolü toksik bir peptid, T30, yönetim α7-nAChR, p ifadesi bir site bağlı şekilde modüle gösterir-Tau ve Aβ BF içeren bölümler (şekil 3A) içinde. Nikotinik reseptör denetim muadili karşılaştırıldığında rostral tedavi hemislice önemli bir artış gösterir (dilim 1, p = 0.0310) (ara dilim arasında iki koşul (herhangi bir değişiklik ortaya koymuyor ikenşekil 3B), dilim 2, p 0.1195 =) (<strong class=...

Biz daha fazla ateş altında yatan erken etkinlik kazandırabileceğini kurulan eski-vivo beyin tekniğine dayalı bir yöntemini in vivo ve in vitro deneyler avantajlarını birleştiren mevcut. Ayrıca, tedavi ve tedavi edilmezse grubun aynı anatomik düzlemde doğrudan karşılaştırma için eşsiz bir fırsat temsil eder.

Ateş Ex Vivo sıçan beyin dilimleri kullanarak birincil olayları incelemek için alternatif bir yaklaşım

Despite&#160;numerous studies that attempt to develop reliable animal models&#160;which reflecting the primary processes underlying neurodegeneration, ...

Bu işlemin genel amacı, aynı anatomik düzlemden elde edilen iki speküler hemiskıyı eş zamanlı olarak araştırmak ve bir tedaviyi takiben etkilerini tahmin etmektir. Bu yöntem, nörodejeneratif süreçlerde yer alan anahtar molekülleri etkileyen birincil olaylar gibi moleküler sinirbilim alanındaki önemli soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, nörodejeneratif olayların altında yatan moleküler kaskadları sağlayabilmesi ve bu durumun gerçekleştirilebilmesidir.Bu yöntem, nörodejenerasyonda meydana gelen birincil olaylar hakkında fikir verebilse de, farklı bozuklukların veya diğer organ ve doku özelliklerinin hayvan modellerini araştırmak için de uygulanabilir. İki farklı yapay beyin omurilik sıvısı hazırlayarak başlayın. Biri beyin dilimleme için, diğeri ise kuluçka adımı için kullanılır.Dilimleme ACSF'yi hazırladıktan sonra, çözeltiyi karıştırın ve buz üzerinde tutun. Benzer şekilde, ACSF kaydını hazırlayın, ancak oda sıcaklığında tutun. Her iki çözeltiyi de oksijenlendirin.Daha sonra, diseksiyon başlığında dekapitasyon ve beynin çıkarılması için aletleri hazırlayın. Ardından vibratom parametrelerini ayarlayın. Dilim kalınlığını gerektiği gibi ayarlayın.Üç yüz mikron gibi. Frekansı yediye ve hızı altıya ayarlayın. Ardından vibratom odasını yerleştirin ve etrafını buzla sarın.Beyin kesiti için, dilimleme ACSF'yi oksijenlendirmek için karbojen valfini açın. Dakikada yaklaşık iki mililitrelik minimum akış hızını seçin. Şimdi iki adet 15 mililitrelik tüpte, tus koşullarını hazırlayın.Kontrol olarak 10 mililieter kayıt ACSF ile bir tüp yükleyin. Diğerini tedavi ile zenginleştirilmiş 10 mililitre kayıt ACSF ile yükleyin. Bu durumda, T30'un iki mikromoları.Her iki tüpü de vorteksleyin ve ihtiyaç duyulana kadar buz üzerinde tutun. Cerrahi bir bıçakla kafatasının üzerindeki cildi kesin. Daha sonra makas kullanarak, kafatasını orta hat boyunca posteriordan koku ampullerinin üzerindeki kemiğe kadar kesin.Ardından, beyne erişmek için forseps kullanarak kafatasının iki tarafını yanal olarak çekin. Beyne ventral olarak bir spatula yerleştirin. Yavaşça çıkarın ve buz gibi soğuk dilimleme ACSF'de yaklaşık beş dakika nemli tutun.Soğuk ACSF'de dinlendikten sonra beyni bir filtre kağıdına aktarın. Ve beyinciği çıkardıktan sonra, beyni vibratom diskine dikey olarak yapıştırın. Daha sonra buz gibi soğuk dilimleme ACSF ile doldurulmuş kesit odasına aktarın.Şimdi hazne çözeltisine oksijen akışını başlatın. Ardından kesme aralığını ayarlayın ve beyin kesitine devam edin. Standart yöntemleri kullanarak ilgilenilen bölgeyi içeren bölümleri toplayın.Şimdi iki aynasal yarım dilim elde etmek için her bölümü orta çizgi boyunca küçük bir makasla dikkatlice bölün. Kontrol ve tedavi edilen durum için her bir hemislice çiftini kullanın. Bölündükten sonra hemiseksiyonları vibratom odasında beş ila on dakika dinlendirin.Geri kalandan sonra, bir cam pipet kullanarak hemiseksiyonları oda sıcaklığında ACSF kaydı içeren köpüren bir kabın içine nazikçe aktarın. Ardından, devam etmeden önce hemiseksiyonların yaklaşık 30 dakika iyileşmesine izin verin. Kırılma sırasında, kontrol grubu için üç mililitre kayıt ACSF içeren üç cam şişe ve tedavi edilen grup için T30 ile zenginleştirilmiş üç mililitre ACSF içeren üç şişe yükleyin.30 dakikalık dinlenmeden sonra, beş dakika içinde numuneyi banyolara aktarın. Önce ardışık yarım dilimleri bir fırça kullanarak kontrol solüsyonuna yükleyin. Daha sonra, farklı bir fırça kullanarak, kontralateral hemiseksiyonları tedavi çözeltisine aktarın.Daha sonra, karbojenin numuneye verilmesi için şişeleri 21 gauge iğne içeren plastik tıpalarla kapatın. Beyin dokusunun herhangi bir hareketini önlemek için dakikada iki mililitre gibi minimum bir akış hızında oksijen verin ve bu da dokuda olası mekanik hasara neden olur. Bu, kurulumu tamamlar.Şimdi beş saatlik bir kuluçka dönemine başlayın. İnkübasyondan sonra oksijen akışını durdurun ve şişelerin kapağını açın. Daha sonra, uygun fırçayı kullanarak yarım dilimleri buz üzerinde tutulan 250 mikrolitre lizis tamponu içeren 1,5 mililitrelik tüplere nazikçe aktarın.Daha sonra ayrı havaneli kullanarak her dokuyu homojenize edin. Altı numunenin tümü için transfer ve homojenizasyon adımlarını 10 ila 15 dakika içinde tamamlayın. Şimdi homojenize edilmiş numuneleri yerçekiminin 1.000 katında dört santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin.Sıkma işleminden sonra, süpernatanları yeni tüplere aktarın ve numuneleri eksi 80 santigrat derecede saklayın. Toksik bir peptit olan T30'un fesleğen ön beynine hemiseksiyon içeren uygulanmasının doku üzerinde üç bölgeye özgü etkisi olmuştur. Alfa yedi nikotinik reseptörün ekspresyonunu, Tau'nun fosforilasyonunu ve amiloid beta ekspresyonunu modüle etti.Nikotinik reseptör, rostral tedavi edilen hemisekte önemli bir artış gösterirken, ara dilim iki koşul arasında herhangi bir değişiklik göstermedi. Arka bölümde, T30'a maruz kalan kısımda önemli bir azalma mevcuttu. Fosforile Tau seviyeleri anterior bölgede önemli ölçüde artmıştır.Öte yandan, fesleğen ön beynin diğer iki bölümü koşullar arasında önemli bir fark göstermez. Amiloid beta, rostral ve orta hemikesitlerde T30 maruziyetinden sonra önemli ölçüde artmıştır. Bununla birlikte, kodal slaytta, amiloid beta ekspresyonu üzerinde ölçülebilir bir etki yoktu.Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde uygulanırsa yedi saat içinde yapılabilir.

an-alternative-approach-to-study-primary-events-neurodegeneration

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

E18 Rat Brain Organotipik Dilim Kültür

Bu makale, sıçan ve transgenik farelerin hipokampal dilimler sinaptik değişiklikler, beynin yaşlanma ve Alzheimer hastalığı gibi nörodejeneratif hastalıklar, yaşa bağlı ile ilgili çalışma için hazırlamak için prosedürler sıralanıyor.

Yaşlanma ve Amiloid Patoloji sırasında sinaptik değişiklikler Çalışması Sıçanlar ve Transgenik Farelerde akut Hipokampal Dilimleri hazırlanması

Bu rapor gösteriyor bağlı presinaptik BOUTONS istinat bireysel canlı nöronların mekanik izolasyon için kullanılan bir tekniktir. Vibrodissociated nöronlar, hızlı üretim, mükemmel farmakolojik kontrolü ve komşu hücrelerden etkisi olmadan gelişmiş uzay-klemp avantajlara sahip. Bu yöntem, sinaptik elemanları ve yama klemp kayıt görüntüleme için kullanılabilir.

Kemirgen Beyin Dilimleri Nöronlar Vibrodissociation Sinaptik İletim ve Görüntü Presinaptik Terminalleri Eğitim

Bu video, nörodejenerasyonu taklit etmek için sıçan beyin hemisyllerini nörotoksik bir peptit ile hazırlama ve tedavi etme prosedürünü göstermektedir. Protokol, aynı anatomik düzlemde kontrol ve tedavi edilen dilimleri doğrudan karşılaştırarak nörodejeneratif olayların analiz edilmesine izin verir.

Sıçan Koronal Dilimlerinin Nörotoksik Peptit ile Tedavisi

Nöronal membran kaçakçılığı dinamik plazma membran proteini kullanılabilirliği ve önemli ölçüde etkiler sinir iletimini kontrol eder. Bugüne kadar, yetişkin nöronlar nöronal endositik ticaretini ölçmek için zor olmuştur. Burada, akut beyin dilimleri yüzey protein ifade ex vivo hızlı değişiklikleri ölçmek için son derece etkili, nicel bir yöntem açıklanmaktadır.

Beyin Dilim Biyotinilasyonu: An<em&gt; Ex Vivo</emYetişkin Nöronlar Bölge özgü Plazma Membran Protein Ticaretiyle Tedbir&gt; Yaklaşım

Biz eksitotoksisite kaynaklı beyin hasarı dahil moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılabilecek bir beyin kesit modeli geliştirdik. Bu teknik açıdan olgun beyin dokusunu oluşturur ve kısmen sağlam nöronal devreleri, hücresel etkileşimleri ve postsinaptik bölmeleri korurken, deney için gerekli olan hayvan sayısı azalır.

Bir olarak Beyin Microslices arasında excitotoxic uyarılması<em&gt; In vitro</em&gt; İnme Model

Biz sinir terminallerinde sinaptik vezikül dağılımı morfometrik analizi için yüksek çözünürlüklü elektron MİKROGRAFİ elde etmek için yenidoğan sıçan beyin dokusu işleme prosedürleri açıklanmaktadır. Bu yöntemlerle elde edilen mikrografikler, diğer hücresel bileşenlerin bir dizi morfolojisi ve boyutsal yapısal ilişkilerini incelemek için de kullanılabilir.

Sinir terminallerinde sinaptik vezikül dağıtımının Ultrastrik morfometrik analizi için yenidoğan Rat beyin dokusunun hazırlanması

Bu protokol, spontan keskin dalga dalgalanma aktivitesi sergileyen farelerden yatay hipokampal-entorhinal korteks (HEC) dilimlerinin hazırlanmasını açıklar. Dilimler basitleştirilmiş bir arayüz tutma odasında inkübe edilir ve kayıtlar, doku oksijenlenmesini ve ağ düzeyinde aktivitenin kendiliğinden ortaya çıkmasını teşvik etmek için hızlı akan yapay beyin omurilik sıvısı ile su altında koşullar altında gerçekleştirilir.

Spontan Hipokampal Ağ Aktivitesini Araştırmak için Akut Fare Beyin Dilimlemeyi

Farelerin dorsal-ara hipokampusundan akut dilimler hazırlamak için bir protokol sunuyoruz. Bu transversal preparatı, kayıtların kalitesi ve kaydedilen nöronların morfolojik özelliklerinin korunması açısından koronal dilimleme ile karşılaştırıyoruz.

Yetişkin Farelerin Dentat Girusunda Tüm Hücre Kaydı ve Nöronal Rekonstrüksiyon için Dorsal Hipokampustan Akut Dilimlerin Hazırlanması

Bu protokol, in situ akson büyümesi ve büyüme konisi dinamiklerini incelemek için basit ve sağlam bir yöntem göstermektedir. Fizyolojik olarak ilgili akut beyin dilimlerinin ex vivo olarak nasıl hazırlanacağını açıklar ve kullanıcı dostu bir analiz boru hattı sağlar.

Yerinde Akut Ex Vivo Embriyonik Beyin Dilimi Kültürlerinde Akson Büyümesi ve Büyüme Koni Dinamiğinin Görselleştirilmesi

Öğrenin ex vivo beyin dilimleme yöntemiyle nörodejeneratif süreçlerdeki primer moleküler olayları incelemeyi. Bu teknik, aynı anatomik yapıda tedavi edilmiş ve edilmemiş koşulları karşılaştırarak hastalık mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

Ateş Ex Vivo sıçan beyin dilimleri kullanarak birincil olayları incelemek için alternatif bir yaklaşım

Daha fazla video keşfet