Name: Fare Submandibular bezi Retroductal nanopartikül enjeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-03T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Öğrenin fare submandibular bezine polimerik nanopartiküllerle lokal ilaç teslimatı yöntemini. Sistemik dolaşımı atlayarak doğrudan enjeksiyon sağlar ve tükürük bezi disfonksiyonu tedavisinde uygulama sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu yayında bildirilen araştırma diş Ulusal Enstitüsü ve Fasiyal araştırma (NIDCR) ve ulusal sağlık Enstitüleri Ödülü numarası R56 DE025098, UG3 DE027695 ve F30 CA206296 altında Ulusal Kanser Enstitüsü (ncı) tarafından desteklenmiştir. İçeriği yalnızca yazarlar sorumludur ve mutlaka Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmiyor. Bu eser de NSF DMR 1206219 ve IADR yenilik Oral bakım Ödülü (2016) tarafından desteklenmiştir.
IVIS deneyler yapmakta yardımını Jayne Gavrity teşekkür etmek istiyorum. Karen Bentley onun giriş ve EM yerine yardım için teşekkür etmek istiyorum. Pei-Lun Weng IHC ile yaptığı yardım için teşekkür etmek istiyorum. Matthew Ingalls şekil hazırlık yaptığı yardım için teşekkür etmek istiyorum. Dr. Elaine Smolock ve Emily Wu bu el yazması eleştirel okuma için teşekkür etmek istiyorum.

Aşağıda verilen tüm vivo içinde yordamlar hayvan kaynakları, Rochester Üniversitesi, Rochester, NY Üniversitesi Komitesi tarafından kabul edildi.
1. hazırlık
<ol><li>32 G kafa içi kateter boru ile tel iç metin kullanılarak, eğimli bir sokak, yaklaşık 45 ° uzun eksen oluşturmak üzere hortumunun 3 cm kesme. Tel en az 1 cm boru daha uzun olduğunu doğrulayın.</li>
	<li>PSMA nanopartikül çözüm (şekil 1) 50 µL veya diğer enjeksiyon malzemesi Hamilton şırınga yükleyin. Enjeksiyon sırasında barotrauma olasılığını azaltmak için çıkarmak belgili tanımlık tenkıye stylet ile kateter boru takın ve ölü cilt sınırdışı.</li>
	<li>Enjeksiyon çözüm nanopartikül tam yönetim takip duktal tıkanıklığı önlemek için solvated olduğundan emin olmak için kontrol edin.</li>
	<li>Atropin çözüm 0.1 mg/mL, hazır olun. Not: atropin ışığa duyarlı ve zaman içinde alçaltır çünkü bu çözüm olmalı enjeksiyon günümdü ve yönetilen kadar ışıktan korunan.</li>
</ol>2. erişim ve duktal giriş noktası görüntülenmesi
<ol><li>C57/BL6 fareler bir analitik denge kullanarak tartın.</li>
	<li>0.5 mL 29G x ½" iğne ile kullanarak, fareler 100 mg/kg ketamin ve 10 mg/kg xylazine intraperitoneally enjekte bir steril serum fizyolojik solüsyonu ile anestezi. Fareyi artık genellikle 5-10 dk içinde enjeksiyon takip oluşur uyaranlara karşı yanıt verdiğinde aşağıdaki adıma geçin. Not: Bu yordam isoflurane altında da yapılabilir ama ağız boşluğu erişmesine izin veren özel bir burun konisi gerektirecektir.</li>
	<li>Kuruluk işlem sırasında önlemek için yağ gözler için uygulamak ve fare yüzükoyun sígara özel bir sahne alanı üzerine yerleştirin. Not: içi sözlü yordamı için uygun koşullar korumak için Araçlar dezenfekte olabileceği gibi her kullanımdan önce sterilize.</li>
	<li>Oral kavite üzerinde metal bir kiriş üst kesici dişler güvenli hale getirme açın ve aşağıya doğru gerilim Altçene ön dişler (şekil 2A) arkasında uygulamak için bir elastik bant kullanın.</li>
	<li>Öyle ki çene Bankası görselleştirildiği diseksiyon mikroskop altında fare hizalayın.</li>
	<li>Ağız genişletmek için özel, kavisli çelik Retraktörü gerginlik bilateral mukozasinin için uygulamak için kullanın.</li>
	<li>Submandibular papilla görselleştirmek için kavramak ve yavaşça dil künt forseps kullanarak ağız yerden kaldırın. Not: Papilla iki soluk çıkıntılar dil (şekil 2B) altında görünür.</li>
	<li>Oral kavite içinde görselleştirme ve düzenleme daha da kolaylaştırmak için dil ve yanak mukozasında arasında pamuk yerleştirin.</li>
</ol>3. duktal Cannulation ve satır yerleştirme
<ol><li>İyi kullanarak, kıvrımlı pensler, kateter boru tel ilave ile kavramak. Cannulation sırasında optimum manuel kontrol için boru forseps (şekil 3A) eğimi ile hizalayın.</li>
	<li>Diseksiyon mikroskop kullanarak, forseps ve tel görüş alanı taşıyın. Not: Tel üzerinden boru çıkıntılı.</li>
	<li>Yavaşça kateter hortumunun (0,25 mm çap) daha sonra girişi kolaylaştıracak bir küçük, yüzeysel, Mukozal ponksiyon (0,076 mm çap) üretmek için iç metin tel kullanarak bir çene papilla üsse doğru basınç uygulayın. Direnç ile karşılaşılırsa, boru ve tel ilave taze eğimli ipuçları keskin diseksiyon makasla kesme.</li>
	<li>Giriş, ardından stylet geri çekilin ve diseksiyon mikroskop kullanarak, tükürük ponksiyon sitesinde varlığını doğrulamak. Güçlü veya ani hareketi (para çekme veya ekleme) kanamaya neden veya duktal bütünlüğü tehlikeye stylet kaçının.</li>
	<li>Stylet boru (şekil 3B) içinde geri çek.</li>
	<li>Enjeksiyon boru açma Wharton'ın kanal uyacak emin olmak için daha önce yapılan delik (Şekil 2 C) içine sert bir rehber olarak stylet içeren tüp takın. Not: hızlı bir şekilde gerçekleştirilen değil ise, yerel şişlik ekleyen engel olabilir.</li>
	<li>Uzun süreli duktal tıkanıklığı arka baskısı önlemek için tüp çekilme. Bir açılış, mikroskobu altında görünür submandibular papilla görülebilir doğrulamak için kontrol edin. Görünür kanama meydana gelirse, stylet kaldırmak ve adım 3.2 karşıt submandibular papilla üzerinde deneyin.</li>
	<li>Fareyi hareket olmadan, mayi enjeksiyon işlemi sırasında salya azaltmak için 1 mg/kg atropin çözüm yönetmek. 5-10 dk bekle.</li>
	<li>Şırınga boru sonuna kavramak ve diseksiyon mikroskop (şekil 3 c) kullanarak ağız yerleştirin. Direnç ile karşılaşılırsa, taze bir eğimli sonunda boru ve yeniden kesti.</li>
	<li>Yavaş yavaş tüp içinde çene papilla yaptıktan sonra 3-5 mm kanal ilerlemek. Boru forseps üzerinden yayın.</li>
	<li>Submandibular papilla arasındaki tüp mühür artırmak için 1 dk. için gazlı bezle hafifçe Blot tarafından arayüzü kuru.</li>
	<li>Tüp konumunu kurutma sırasında kaymıştır değil olduğunu onaylamak için kontrol edin.</li>
</ol>4. enjeksiyon
<ol><li>10 µL/dk. fare uyuşturulan kalır ve sıkıntı (şekil 2B) belirtileri gösteriyor değil onaylamak için kontrol oranında malzeme enjekte. Not: 15-50 µL enjeksiyonlari iyi tolere edilir. Daha büyük birimleri enjeksiyon içinde barotrauma neden olabilir.</li>
	<li>Enjeksiyonu, şırınga basınç malzeme Wharton'ın kanal ve SMG (şekil 4) içinde tutma geliştirmek 5 min için korumak. Submandibular papilla düzenli olarak boru duktal delikten çıkmak değil emin olmak için kontrol edin.</li>
	<li>İyi forseps kullanarak, kavramak ve yavaşça--dan çene papilla tüp çekilme. Not: Bazı sıvı çıkış papilla üzerinden gözlemlemek için normaldir.</li>
	<li>Retraktörü ve pamuk önce dokunaklı belgili tanımlık fare Sahne Alanı'ndan ağız boşluğu kaldırın. Not: sternal recumbency korumak için yeterli kendine geldi kadar hayvan katılımsız bırakılmamalıdır. Ayrıca, fare ile diğer fareler kadar tamamen iyileşti bulunmaktadır değil emin olun.</li>
</ol>5. doğrulama ve analiz
Not: Bir vivo içinde görüntüleme sistemi (IVIS) enjeksiyon (olarak gösterilen 1 h ve sonra enjeksiyon şekil 5' te 24 h) takip fluorescently etiketli nano tanecikleri tutma değerlendirmek için kullanılabilir.
<ol><li>Deri yoluyla SMG floresan sinyal daha iyi görmek için tıraş ya da kimyasal bir depilatory kullanarak SMGs örten ventral kürk kaldırın. Not: Ötenazi, SMG doku aynı zamanda hasat edilebilir, (gece içinde %4 paraformaldehyde) sabit ve kalıcı bir enjeksiyon (şekil 6) aşağıdaki gün fluorescently etiketli NP onaylamak için immünhistokimya kullanarak lekeli.</li>
</ol>

<ol><li>Miranda-Rius, J., Brunet-Llobet, L., Lahor-Soler, E., Farre, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+Secretory+Disorders%2C+Inducing+Drugs%2C+and+Clinical+Management%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Salivary Secretory Disorders, Inducing Drugs, and Clinical Management.</a> International Journal Of Medical Sciences. 12 (10), 811-824 (2015).</li>
<li>Acauan, M. D., Figueiredo, M. A. Z., Cherubini, K., Gomes, A. P. N., Salum, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy-induced+salivary+dysfunction%3A+Structural+changes%2C+pathogenetic+mechanisms+and+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy-induced salivary dysfunction: Structural changes, pathogenetic mechanisms and therapies.</a> Archives of Oral Biology. 60 (12), 1802-1810 (2015).</li>
<li>Dirix, P., Nuyts, S., Vander Poorten, V., Delaere, P., Van den Bogaert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+xerostomia+after+radiotherapy+on+quality+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Supportive+Care+in+Cancer%22%5BJournal%5D)">The influence of xerostomia after radiotherapy on quality of life.</a> Supportive Care in Cancer. 16 (2), 171-179 (2008).</li>
<li>Vissink, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+management+of+salivary+gland+hypofunction+and+xerostomia+in+head-and-neck+cancer+patients%3A+successes+and+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology+Biology+Physics%22%5BJournal%5D)">Clinical management of salivary gland hypofunction and xerostomia in head-and-neck cancer patients: successes and barriers.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 78 (4), 983-991 (2010).</li>
<li>Delporte, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+fluid+secretion+after+adenoviral-mediated+transfer+of+the+aquaporin-1+cDNA+to+irradiated+rat+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Increased fluid secretion after adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA to irradiated rat salivary glands.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (7), 3268-3273 (1997).</li>
<li>Samuni, Y., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+in+salivary+glands%3A+from+the+bench+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Gene delivery in salivary glands: from the bench to the clinic.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1812 (11), 1515-1521 (2011).</li>
<li>Beahm, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+approaches+to+the+submandibular+gland%3A+A+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical approaches to the submandibular gland: A review of literature.</a> International Journal of Surgery. 7 (6), 503-509 (2009).</li>
<li>Zheng, C., Shinomiya, T., Goldsmith, C. M., Di Pasquale, G., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convenient+and+reproducible+in+vivo+gene+transfer+to+mouse+parotid+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+diseases%22%5BJournal%5D)">Convenient and reproducible in vivo gene transfer to mouse parotid glands.</a> Oral diseases. 17 (1), 77-82 (2011).</li>
<li>Zheng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+Radiation-Induced+Salivary+Hypofunction+Following+hKGF+Gene+Delivery+to+Murine+Submandibular+Glands%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Prevention of Radiation-Induced Salivary Hypofunction Following hKGF Gene Delivery to Murine Submandibular Glands.</a> Clinical Cancer Research. 17 (9), 2842-2851 (2011).</li>
<li>Okazaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+rat+salivary+gland+tissue+repair+by+basic+fibroblast+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Acceleration of rat salivary gland tissue repair by basic fibroblast growth factor.</a> Archives of Oral Biology. 45 (10), 911-919 (2000).</li>
<li>Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle-mediated+gene+silencing+confers+radioprotection+to+salivary+glands+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo.</a> Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).</li>
<li>Cotrim, A. P., Sowers, A., Mitchell, J. B., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+irradiation-induced+salivary+hypofunction+by+microvessel+protection+in+mouse+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Prevention of irradiation-induced salivary hypofunction by microvessel protection in mouse salivary glands.</a> Molecular Therapy. 15 (12), 2101-2106 (2007).</li>
<li>Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersed+donor+salivary+gland+cells+are+widely+distributed+in+the+recipient+gland+when+infused+up+the+ductal+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnic+%26+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree.</a> Biotechnic & Histochemistry. 84 (6), 253-260 (2009).</li>
<li>Grundmann, O., Fillinger, J. L., Victory, K. R., Burd, R., Limesand, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+radiation+therapy-induced+salivary+gland+dysfunction+in+mice+by+post+therapy+IGF-1+administration%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Restoration of radiation therapy-induced salivary gland dysfunction in mice by post therapy IGF-1 administration.</a> BMC Cancer. 10, 417-417 (2010).</li>
<li>Limesand, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-Like+Growth+Factor-1+Preserves+Salivary+Gland+Function+After+Fractionated+Radiation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology+Biology+Physics%22%5BJournal%5D)">Insulin-Like Growth Factor-1 Preserves Salivary Gland Function After Fractionated Radiation.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 78 (2), 579-586 (2010).</li>
<li>Marmary, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26759233">Radiation-induced loss of salivary gland function is driven by cellular senescence and prevented by IL-6 modulation.</a> Cancer Research. , (2016).</li>
<li>Baum, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+responses+to+adenoviral-mediated+transfer+of+the+aquaporin-1+cDNA+for+radiation-induced+salivary+hypofunction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Early responses to adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA for radiation-induced salivary hypofunction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (47), 19403-19407 (2012).</li>
<li>Arany, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pro-apoptotic+gene+knockdown+mediated+by+nanocomplexed+siRNA+reduces+radiation+damage+in+primary+salivary+gland+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Pro-apoptotic gene knockdown mediated by nanocomplexed siRNA reduces radiation damage in primary salivary gland cultures.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 113 (6), 1955-1965 (2012).</li>
<li>Benoit, D. S. W., Henry, S. M., Shubin, A. D., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pH-responsive+polymeric+siRNA+carriers+sensitize+multidrug+resistant+ovarian+cancer+cells+to+doxorubicin+via+knockdown+of+polo-like+kinase+1%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">pH-responsive polymeric siRNA carriers sensitize multidrug resistant ovarian cancer cells to doxorubicin via knockdown of polo-like kinase 1.</a> Molecular pharmaceutics. 7 (2), 442-455 (2010).</li>
<li>Malcolm, D. W., Varghese, J. J., Sorrells, J. E., Ovitt, C. E., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effects+of+Biological+Fluids+on+Colloidal+Stability+and+siRNA+Delivery+of+a+pH-Responsive+Micellar+Nanoparticle+Delivery+System%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">The Effects of Biological Fluids on Colloidal Stability and siRNA Delivery of a pH-Responsive Micellar Nanoparticle Delivery System.</a> ACS Nano. , (2017).</li>
<li>Baranello, M. P., Bauer, L., Benoit, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28styrene-alt-maleic+anhydride%29-based+diblock+copolymer+micelles+exhibit+versatile+hydrophobic+drug+loading%2C+drug-dependent+release%2C+and+internalization+by+multidrug+resistant+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Poly(styrene-alt-maleic anhydride)-based diblock copolymer micelles exhibit versatile hydrophobic drug loading, drug-dependent release, and internalization by multidrug resistant ovarian cancer cells.</a> Biomacromolecules. 15 (7), 2629-2641 (2014).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fracture-Targeted+Delivery+of+%CE%B2-Catenin+Agonists+via+Peptide-Functionalized+Nanoparticles+Augments+Fracture+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Fracture-Targeted Delivery of β-Catenin Agonists via Peptide-Functionalized Nanoparticles Augments Fracture Healing.</a> ACS Nano. 11 (9), 9445-9458 (2017).</li>
<li>Baranello, M. P., Bauer, L., Jordan, C. T., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s12195-015-0391-x">Micelle Delivery of Parthenolide to Acute Myeloid Leukemia Cells.</a> Cellular and Molecular Bioengineering. 8 (3), 455-470 (2015).</li>
<li>Kuriki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cannulation+of+the+Mouse+Submandibular+Salivary+Gland+via+the+Wharton%27s+Duct%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), e3074(2011).</li>
<li>Nair, R. P., Zheng, C., Sunavala-Dossabhoy, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retroductal+Submandibular+Gland+Instillation+and+Localized+Fractionated+Irradiation+in+a+Rat+Model+of+Salivary+Hypofunction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Retroductal Submandibular Gland Instillation and Localized Fractionated Irradiation in a Rat Model of Salivary Hypofunction.</a> Journal of Visualized Experiments. (110), (2016).</li>
<li>Wang, Y., Malcolm, D. W., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+and+sustained+delivery+of+siRNA%2FNPs+from+hydrogels+expedites+bone+fracture+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Controlled and sustained delivery of siRNA/NPs from hydrogels expedites bone fracture healing.</a> Biomaterials. 139 (Supplement C), 127-138 (2017).</li>
<li>Hoffman, M. D., Van Hove, A. H., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradable+hydrogels+for+spatiotemporal+control+of+mesenchymal+stem+cells+localized+at+decellularized+bone+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Degradable hydrogels for spatiotemporal control of mesenchymal stem cells localized at decellularized bone allografts.</a> Acta Biomaterialia. 10 (8), 3431-3441 (2014).</li>
<li>Nguyen, C. Q., Yin, H., Lee, B. H., Chiorini, J. A., Peck, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL17%3A+potential+therapeutic+target+in+Sjogren%27s+syndrome+using+adenovirus-mediated+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%22%5BJournal%5D)">IL17: potential therapeutic target in Sjogren's syndrome using adenovirus-mediated gene transfer.</a> Laboratory Investigation. 91 (1), 54-62 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Retroductal enjeksiyon Tükürük bezi için yerelleştirilmiş ilaç dağıtım için önemlidir. Bu teknik Sjogren sendromu ve RIH9,10,28dahil olmak üzere koşullar terapötik ajanlar eleme içinde uygulama alanı vardır. Retroductal enjeksiyon yoluyla SMG içine doğrudan ilaç dağıtım bağışıklık harekete geçirmek11de dahil olmak üzere kapalı-hedef etkileri azaltmak için potansiyel sistemik yönetiminde önemli bir avantaj...

Tükürük bezi disfonksiyon Sjoegren Sendromu, fonksiyonel salgı dokusu ve indüklenen radyasyon hyposalivation (RIH), baş ve boyun kanser radyoterapi1ortak bir sequella bir otoimmün aracılı kaybı da dahil olmak üzere pek çok etiologies vardır. Her iki koşul nedeniyle tükürük fonksiyon kaybı bireylerin oral ve sistemik enfeksiyon, diş çürüğü, sindirim ve yutma bozukluğu, konuşma bozukluğu ve Majör depresyon1,2,3açmaları. Sonuç olarak, yaşam kalitesini önemli ölçüde, için tedavi4yerine belirtiler palliation sınırlı müdahaleler ile uğrar. Roman terapiler vivo içindearaştırmak için doğrudan Tükürük bezi biyoaktif bileşikler yönetmek ilgi olduğunu.
Retroductal enjeksiyon doğrudan tükürük bezleri biyoaktif bileşikler teslim ve hastalık, yaralanma, veya normal doku homeostazı altında etkinliğini test etmek için değerli bir yöntemdir. Parotid (PG), çene (SMG) ve hapı (SLG), üç büyük tükürük bezleri vardır tüm boşaltım kanalı aracılığıyla oral kavite içine hangi boş. Antikorundan anatomisi SMG cannulation ağız dili5altında katında bulunan Wharton'ın kanalının aracılığıyla doğrudan erişime izin verir. Takip cannulation, solvated uyuşturucu doğrudan SMG için yönetilebilir. Retroductal teslimat ekstra glandüler Difüzyon yapıları6çevreleyen ile malzeme alışverişini düzenleyen çevreleyen doku kapsülü tarafından kısıtlanır. SMG ve onun kanal insanlarda benzer şekilde yapılandırılmıştır ve rutin SMG cerrahi ve sialoendoscopy7sırasında erişilir. İnsan ve fare PG aynı şekilde mukozasinin8' Stensen'ın kanal üzerinden erişilemez.
RIH fare modellerinde, SMG retroductal enjeksiyon büyüme faktörleri, Primer hücre, adenoviral Vektörler, sitokinler ve yaralanma için hücresel yanıt modüle ve sonucu olan azaltmak için antioksidan bileşikler de dahil olmak üzere tedavi sunmak için kullanılmıştır doku hasarı5,9,10,11,12,13,14,15,16. Retroductal enjeksiyon en önemli klinik başarısı bir su kanalı (Aquaporin 1; ifade yönlendirmek için adenoviral vektör bir ilçedir AQP1) hastalarda baş ve boyun kanser17için radyasyon ardından.
Daha önce biz geliştirdik ve tükürük bezi işlevi RIH11,18,19,20korumak için enjekte retroductally polimer nanopartikül-siRNA sistem etkinliğini gösterilen. Geçmiş çalışmalarımızın bir uzantısı olarak, burada, biz göstermek bizim protokolü kullanarak bir fluorescently etiketli nanopartikül (NP) yükleme ve aksi takdirde kötü çözünür teslim kabil retroductal SMG enjeksiyon için21,22, ilaçlar 23.
Poli (Stiren-alt-maleic anhydride)-b-poly(styrene) (PSMA) yoluyla tersine çevrilebilir ek zinciri parçalanma (Sal) polimerizasyonu,21daha önce açıklandığı gibi. oluşan bir diblock kopolimer üzerinden NP sentezlenmiş Solvent exchange üzerinden Bu polimerler kendiliğinden micelle NP yapılar bir hidrofobik ve hidrofilik iç dış21ile kendini topla. NPs hayvan ödün vermeden NP teslim bezlerin içine doğrulanmasına izin vermek için Texas-kırmızı fluorophore ile etiketlenir. Canlı hayvan görüntüleme ve SMG immünhistokimya 1 h ve 1 gün enjeksiyon takip gösterilir.
Bu güncellenir ve tekrarlanabilir cannulation Protokolü diğerleri retroductal enjeksiyon elde etmek etkinleştirmeniz gerekir. Biz bu rafine teknik in vivo çalışmalar ve terapötik geliştirme24,25için kritik olacak bekliyoruz.

<table><tbody><tr><td>Pilokarpin hidroklorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6503</td><td>Pilokarpin</td></tr><tr><td>Öğrenci Vannas Bahar Makası</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>91500-9</td><td>Trakeostomi için Bahar Makası</td></tr><tr><td>Steril Salin Solüsyonu</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>Saline</td></tr><tr><td>Dumont #7 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11274-20</td><td>Kavisli Forseps</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-10</td><td>Düz Forseps</td></tr><tr><td>Standart Desen Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11000-12</td><td>Künt Forseps</td></tr><tr><td>İnce Makas - Tungsten Karbür</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14568-09</td><td>Diseksiyon Makası</td></tr><tr><td>Mikrohematokrit Heparinize Kılcal Tüpler</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Kılcal tüpler</td></tr><tr><td>Kayganlaştırıcı Göz Merhemi</td><td>Yenileme</td><td>N/A</td><td>Yenileme Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Keçi poliklonal anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 Antikor</td></tr><tr><td>DAPI (4 ',6-Diamidino-2-Fenilindol, Dihidroklorür)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prizma</td><td>GraphPad</td><td>ver6.0</td><td>İstatistiksel Yazılım</td></tr><tr><td>Pamuk uçlu aplikatör</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>Göz merhemi için aplikatör</td></tr><tr><td>0.5cc İnsülin Şırıngası, 29G x 1/2 "</td><td>BD</td><td>7629</td><td>İntraperitoneal enjeksiyon için Şırınga</td></tr></tbody></table>

fare submandibular bezi retroductal nanopartikül enjeksiyon

Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland

Tükürük bezi therapeutics iki ortak hedefleri vardır önleme ve tedavi de takip doku disfonksiyon otoimmün veya radyasyon yaralanma. Yerel olarak biyoaktif bileşikler tükürük bezleri sunarak, daha fazla doku konsantrasyonları güvenli bir şekilde karşı sistemik yönetim elde edilebilir. Ayrıca, hedef doku malzeme ekstra salgı birikimi etkileri önemli ölçüde azaltılabilir. Bu bağlamda, retroductal enjeksiyon Tükürük bezi Biyoloji ve patofizyolojisi soruşturma için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Büyüme faktörleri, Primer hücre, adenoviral Vektörler ve küçük molekül uyuşturucu Retroductal İdaresi yaralanma ayarında bezi işlevi desteklemek için gösterilmiştir. Biz daha önce bezi işlevi ışınlama takip korumak için bir retroductally enjekte nanopartikül-siRNA strateji etkinliğini göstermiştir. Burada, Nanomalzemeler fare submandibular bezi Wharton'ın kanal aracılığıyla yönetmek için son derece etkili ve tekrarlanabilir bir yöntem ayrıntılı (şekil 1). Biz ağız boşluğu erişim açıklar ve daha fazla olarak kullanılan prosedür boyunca kalite kontrolleri gözlemleri ile cannulate Wharton'ın kanal için gereken adımları özetlemektedir.

Retroductal enjeksiyon NPs fare SMG (şekil 1) yönetmek için kullanılabilir. Burada, biz 50 µg PSMA NPs Texas kırmızı fluorophore ile etiketli teslim.
Fare uygun yerleştirme facile erişim ve görselleştirme (şekil 2A-B) ağız tabanının sağlar. Submandibular papilla iki etli çıkıntılar dil altında tanımlanır. Cannulation (şekil 2C</stro...

Anlayış Tükürük bezi Biyoloji ve roman therapeutics gelişimi için yerel ilaç dağıtım submandibular bezleri için ilgilendirir. Biz teslim doğruluk ve deneysel tekrarlanabilirlik artırmak için tasarlanmış bir güncel ve ayrıntılı retroductal enjeksiyon Protokolü mevcut. Burada sunulan polimer nano tanecikleri teslimini uygulamasıdır.

Fare Submandibular bezi Retroductal nanopartikül enjeksiyon

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally ...

Bu prosedürün genel amacı, nanomalzemeleri doğrudan murin submandibular bezine uygulamaktır. Bu tekniğin temel avantajı, sistemik dolaşımı atlarken bileşiklerin submandibular beze doğrudan verilmesini sağlamasıdır. Bu tekniğin etkileri, baş ve boyun malignitesi için radyasyon tedavisini takiben tükürük bezi fonksiyon bozukluğunun tedavisine kadar uzanır.Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan bireyler, hayvan sakinleştirilirken submandibular kanalın yerleştirilmesi ve kanüle edilmesiyle zorlanabilir. Bu prosedüre başlamak için, uzun eksene yaklaşık 45 derece eğimli bir uç oluşturmak için tel iç kısımlı 32 gauge intrakraniyal kateter borusunun üç santimetresini kesin. Telin borudan en az bir santimetre daha uzun olduğunu onaylayın.Boruya eğimli bir kenar oluşturmak, duktal kanülasyonu kolaylaştıracaktır. İşlem sırasında boru bükülürse, yeni bir eğimli kenar kesilmelidir. Ardından, bir Hamilton şırıngasına 50 mikrolitre PSMA nanopartikül çözeltisi veya başka bir enjeksiyon malzemesi yükleyin.Enjeksiyon sırasında yuva travması olasılığını azaltmak için, kateter hortumunu şırıngaya takın ve ölü hacmi dışarı atın. Kanal tıkanıklığını önlemek için nanopartikülün tamamen çözüldüğünden emin olmak için enjeksiyon solüsyonunu inceleyin. Daha sonra mililitre başına 0.1 miligramda atropin çözeltisi hazırlayın.Kanal giriş noktasını görselleştirmek için, anestezi uygulanmış bir fareyi özel bir sahneye yüzüstü pozisyonda yerleştirin. Daha sonra işlem sırasında kuruluğu önlemek için gözlere merhem sürün. Daha sonra, maksiller kesici dişleri metal bir kiriş üzerine sabitleyin ve mandibular kesici dişlerin arkasına aşağı doğru gerilim uygulamak için elastik bir bant kullanın.Çenenin tabanını görselleştirmek için fareyi diseksiyon mikroskobunun altına hizalayın. Ağzı genişletmek için, bukkal mukozaya iki taraflı olarak gerilim uygulamak için özel bir kavisli çelik ekartör kullanın. Submandibular papillayı görselleştirmek için, künt forseps kullanarak dili ağız tabanından kavrayın ve nazikçe kaldırın.Ağız boşluğu içinde daha fazla manipülasyon sağlamak için dil ile bukkal mukoza arasına bir parça pamuk yerleştirin. Duktal kanülasyon ve hat yerleştirme yapmak için kateter borusunu bir tel iç kısım ile kavrayın. Kanülasyon sırasında optimum manuel kontrol için, boruyu forsepsin eğriliği ile hizalayın.Diseksiyon mikroskobunu kullanarak forsepsleri ve teli görüş alanına hareket ettirin. Tel iç kısmını kullanarak, kateter tüpünün daha sonra girişini kolaylaştıracak küçük bir yüzeysel mukozal ponksiyon oluşturmak için bir submandibular papillanın tabanına hafifçe basınç uygulayın. Dirençle karşılaşılırsa, keskin diseksiyon makasıyla hem boru hem de tel iç kısımda yeni eğimli uçlar kesin.Girişin ardından, stileyi geri çekin, ardından diseksiyon mikroskobunu kullanarak delinme bölgesinde tükürük varlığını onaylayın. Ardından, stileyi borunun içinde daha fazla geri çekin. Kanamaya neden olabilecek veya kanal bütünlüğünü tehlikeye atabilecek stilenin kuvvetli veya ani hareketinden kaçının.Enjeksiyon borusunun Wharton'un kanal açıklığına sığmasını sağlamak için, stileyi içeren boruyu daha önce yapılmış deliğe sert bir kılavuz olarak yerleştirin. Geri basıncın uzun süreli olarak duktal tıkanıklığa maruz kalmasını önlemek için hortumu geri çekin. Mikroskop altında, submandibular papillada bir açıklık görülebildiğinden emin olun.Görünür kanama meydana gelirse, stileyi çıkarın ve karşı submandibular papilla üzerindeki prosedürleri tekrar deneyin. Daha sonra, fareyi hareket ettirmeden, işlem sırasında yükselmeyi azaltmak için intraperitoneal olarak kilogram başına bir miligram atropin çözeltisi uygulayın. Ardından, beş ila 10 dakika bekleyin.Diseksiyon mikroskobu altında, şırınga borusunu deliğe yerleştirin. Dirençle karşılaşılırsa, boru üzerinde yeni eğimli bir uç kesin ve yeniden deneyin. Boru submandibular papilla içine yerleştirildikten sonra, kanala yavaşça üç ila beş milimetre ilerleyin.Ardından, hortumu forsepsten çıkarın. Boru ve submandibular papilla arasındaki sızdırmazlığı iyileştirmek için, bir dakika boyunca gazlı bezle hafifçe kurulayarak arayüzü kurulayın. Kurutma sırasında borunun konumunun değişmediğini doğrulamak için kontrol edin.Bu prosedürde, malzemeyi dakikada 10 mikrolitre oranında enjekte edin. Farenin sakinleştirici kaldığından ve sıkıntı belirtileri göstermediğinden emin olun. Enjeksiyonu takiben, Wharton kanalı ve submandibular bez içindeki materyalin tutulmasını iyileştirmek için şırınga basıncını beş dakika boyunca koruyun.Borunun duktal delikten çıkmadığından emin olmak için submandibular papillayı periyodik olarak inceleyin. Enjeksiyon basıncının korunması, retroductal teslimatın etkinliğini artıracaktır. İnce forseps kullanarak, hortumu submandibular papilladan kavrayın ve nazikçe çekin.Fareyi sahneden uzaklaştırmadan önce ekartörü ve pamuğu ağız boşluğundan çıkarın. Nanopartikül iletimini doğrulamak için, in vivo görüntüleme sistemi, enjeksiyondan bir saat sonra farenin tedavi edilen tarafına kırmızı floresan sinyalinin lateralizasyonunu gösterir. Ve bu görüntü, nanopartikül sinyalinin enjeksiyondan 24 saat sonra önemli ölçüde azaldığını gösteriyor.Enjeksiyondan 24 saat sonra submandibular bezlerde nanopartikül kalıcılığını doğrulamak için, kesitlere ayrıldı ve floresan görüntüleme ile görüntülendi. Burada, sırasıyla salgı asini ve duktal hücreleri işaretleyen aquaporin 5 ve keritin beş için boyanmış, enjekte edilmemiş kontrol submandibular bezleri gösterilmiştir. Retroductal nanopartikül enjekte edilen submandibuler bezlerde, aquaporin beş ve keritin beş lekeleri normal bez morfolojisi gösterir ve nanopartiküller hem asini hem de kanallarda alınır.Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde yapılırsa 20 dakika içinde yapılabilir. Bu prosedürü denerken, kanülü yerinden çıkarabilecek veya boru ile submandibular papilla arasında yapılan contayı bozabilecek herhangi bir yabancı hareketten kaçınmayı unutmamak önemlidir. İşlemi takiben, submandibular bezde gen ekspresyonunu veya nanomalzeme lokalizasyonunu değerlendirmek için immün boyama, RNA ekstraksiyonu veya akış sitometrisi gibi diğer yöntemler uygulanabilir.Geliştirilmesinden sonra, bu teknik tükürük bezi araştırmacılarının kserostomi önleme için bileşikleri taraması ve test etmesinin yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, Wharton kanalının kanülasyonu yoluyla nanomalzemelerin doğrudan murin submandibular bezine nasıl uygulanacağını iyi anlamış olmalısınız.

retroductal-nanoparticle-injection-to-the-murine-submandibular-gland

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Wharton kanalı üzerinden fare submandibular tükürük bezi kanülasyonu için bir protokol açıklanmıştır. Bu deneme için, tripan mavi çözümü, bu tekniği etkin bir şekilde hedeflenen bezine infüzyonları dağıtımını nasıl göstermek için, bu yeni yaklaşımın güvenilirliğini ve tükürük bezlerinin rejenerasyonu için potansiyel bir klinik ilaç / hücre tedavisi olarak önermek için bir boyacı olarak kullanılır.

Wharton Kanalı üzerinden Fare Submandibular Tükürük Bezi kanülasyonu

Bu videoda, fare meme bezlerinin kanallarına enjeksiyon karışımı verdiğimiz bir intraduktal enjeksiyon tekniği açıklanmaktadır.

İntraduktal Enjeksiyon: Fare Meme Bezinin Kanallarına Enjeksiyon Karışımının Verilmesi

Video, bir insan hastanın tükürük bezlerine terapötik ilaçlar uygulamak için ultrason kılavuzluğunda bir enjeksiyon tekniğini göstermektedir.

Terapötik İlaçların İnsan Tükürük Bezlerine Ultrason Eşliğinde Enjeksiyonu

Fare meme bezi sulu reaktiflerin non-invazif intraduktal teslimat için bir protokol tarif edilmektedir. Bu yöntem, özellikle meme kanalları hedef meme bezlerinin meme lokalize enjeksiyon yararlanır. Bu teknik, siRNA, kemoterapötik maddeler ve küçük moleküller de dahil olmak üzere çeşitli bileşikler için uyarlanabilir.

Fare meme bezi Lokalize İlaç Teslim Intradüktal Enjeksiyon

Lenf düğümleri immün yanıtı düzenleyen immünolojik dokulardır ve aşılar için kritik bir hedeftir. Lenf düğümlerini daha iyi hedeflemek ve antijenlerin veya yardımcıların doğumlarını kontrol etmek için biyomalzemeler bunların uzaması haline getirildi. Bu makalede, lenf düğümlerine biyouyumlu polimer parçacıkları enjekte etmek için bu fikirleri birleştiren bir teknik açıklanmaktadır.

Biyobozunur Polimer Parçacıklarının Lenf İçi Düğüm Enjeksiyonu

Tükürük bezi hipofonksiyonu, baş ve boyun radyoterapisinin önemli bir yan etkisi hastanın yaşam kalitesini düşürür. Hayvan modellerinde yeni tedavilerin etkinliğinin gösterilmesi, klinik geçişten önce bir ön koşuldur. Bu protokol, sıçan submandibular bezlerinin retroduktal uygulamasını ve lokal ışınlamasını tanımlar.

Tükürük hipofonksiyonunun bir Sıçan Modelinde Retroductal Submandibuler Bezi damlatma ve yerelleştirilmiş fraksiyonlara Işınlama

Biz cerrahi olarak ortaya çıkarmak ve fare submandibular Tükürük bezi dik intravital mikroskobu kullanılarak intravital görüntüleme için stabilize etmek için bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı diğer ekzokrin bezleri için baş ve boyun bölgesinin fareler ve diğer küçük kemirgen kolayca uyarlanabilir.

Dik Intravital mikroskopi için fare Submandibular Tükürük bezi hazırlanması

Tükürük bezleri, özellikle gen transferi ile aşılama alanında gen tedavisi için doku hedef bölgesi olarak önerilmiştir. Retrograd parotis infüzyonu kullanarak insan olmayan bir primat modelinde gen iletimi gösteriyoruz.

Vektörlü Gen Teslimatı için İnsan Olmayan Bir Primatta Stensen Kanalı aracılığıyla Retrograd Parotid Bezi İnfüzyonu

Bu protokolde, submandibuler bezin (SMG) endotel bariyer fonksiyonu, iki fotonlu lazer taramalı mikroskop altında test hayvanı modellerinin açısal damarlarına in vivo olarak farklı moleküler ağırlıklı floresan izleyiciler enjekte edilerek değerlendirilmiştir.

İn Vivo Fare Submandibuler Bezinde Vasküler Geçirgenlik Tespiti

İmmünofloresan görüntüleme, karmaşık, zamana bağlı biyolojik süreçleri zaman içinde tek bir anlık görüntüde gözlemleme yeteneği ile sınırlıdır. Bu çalışma, hassas kesilmiş fare submandibular bez dilimleri üzerinde yürütülen canlı görüntüleme yaklaşımını özetlemektedir. Bu yaklaşım, homeostaz ve rejenerasyon ve onarım süreçleri sırasında hücre-hücre etkileşimlerinin gerçek zamanlı olarak gözlemlenmesine izin verir.

Tükürük bezindeki hücre-hücre etkileşimlerinin ex vivo canlı hücre görüntüleme ile sorgulanması

Burada, onkojenik nükleik asitlerin terapötik susturulması için klinik olarak uygulanabilir bir yaklaşım sağlayarak, RNA oligomerlerini taşıyan manyetik demir oksit nanopartiküllerinin hayvan modellerinde metastatik meme kanserine in vivo olarak verilmesi için protokolü açıklıyoruz.

Murin Meme Kanseri Metastazlarında Nanoilaç Birikiminin İzlenmesi

Öğrenin fare submandibular bezine polimerik nanopartiküllerle lokal ilaç teslimatı yöntemini. Sistemik dolaşımı atlayarak doğrudan enjeksiyon sağlar ve tükürük bezi disfonksiyonu tedavisinde uygulama sunar.

Fare Submandibular bezi Retroductal nanopartikül enjeksiyon

Daha fazla video keşfet