Name: Fare tükürük işlevsel değerlendirme Pilokarpin stimülasyon aşağıdaki yolu ile radyasyon şeker (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: Öğrenin fare tükürük fonksiyonunu pilokarpin stimülasyonu ile değerlendirme yöntemini. Trakeostomi, tükürük toplama ve bez diseksiyonu tekniklerini içeren bu protokol, ağız kuruluğu ve tükürük bezleri disfonksiyonu çalışmaları için klinik araştırmalarda uygulanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu yayında bildirilen araştırma diş Ulusal Enstitüsü ve Fasiyal araştırma (NIDCR) ve ulusal sağlık Enstitüleri Ödülü numarası R56 DE025098, UG3 DE027695 ve F30 CA206296 altında Ulusal Kanser Enstitüsü (ncı) tarafından desteklenmiştir. İçeriği yalnızca yazarlar sorumludur ve mutlaka Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmiyor. Bu eser de NSF DMR 1206219 ve IADR yenilik Oral bakım Ödülü (2016) tarafından desteklenmiştir.
Dr. Eri Maruyama ve Andrew Hollomon tükürük koleksiyonu ile yardım için teşekkür etmek istiyorum. Pei-Lun Weng bezi diseksiyon ile yaptığı yardım için teşekkür etmek istiyorum. Matthew Ingalls şekil hazırlık yaptığı yardım için teşekkür etmek istiyorum. Dr. Elaine Smolock ve Emily Wu bu el yazması eleştirel okuma için teşekkür etmek istiyorum.

Aşağıda verilen tüm vivo içinde yordamlar hayvan kaynakları, Rochester Üniversitesi, Rochester Üniversitesi Komitesi tarafından kabul edildi. NY.
1. hazırlık
<ol><li>Bir analitik denge kullanarak, 20 mg Pilokarpin tartın. 2 ml steril serum microcentrifuge tüp içinde çözülür. Not: Pilokarpin ışığa duyarlı olduğunu ve zaman içinde etkinliğini kaybeder çünkü bu çözüm enjeksiyon gününün hazırlıklı olup yönetilen kadar ışıktan korunan.</li>
	<li>Bir analitik denge kullanarak, tartmak ve tüm koleksiyon tüpler ve cam kılcal tanımlayın. Koleksiyon tüpler ve cam kılcal fareler sayısı eşleşmelidir.</li>
</ol>2. trakeostomi
<ol><li>C57/BL6 fareler bir analitik denge kullanarak tartın.</li>
	<li>0.5 mL 29G x ½" iğne ile kullanarak, fareler 100 mg/kg ketamin ve 10 mg/kg xylazine intraperitoneally enjekte bir steril serum fizyolojik solüsyonu ile anestezi. Fareyi artık genellikle 5-10 dk içinde enjeksiyon takip oluşur (Yani yokluğu pedal çekilme refleks), uyaranlara yanıt verdiğinde aşağıdaki adıma geçin.</li>
	<li>Pamuk uçlu aplikatör üzerinde yağ dağıtımı sonra yavaşça gözlerini uygulamak ve fare sırtüstü pozisyonda Sahne Alanı'nda yer. İmzalat hayvan sıcak yüzey üzerinde tutulmalıdır. Not: Oda sıcaklığında tüm adımlar gerçekleştirilir.</li>
	<li>Burun, bacaklarda ve kuyruk cerrahi bant kullanarak sahne için güvenli.</li>
	<li>Temiz ve boyun bir alkol bezle ıslak. Not: Bu kürk sonraki insizyon girmesini önlemeye yardımcı olur.</li>
	<li>Ventral orta hat boyun deri Forseps ile yükselterek, diseksiyon makası kullanarak bir küçük, yüzeysel kesim yapmak. Makas içine açılış kılavuz ve subkutan doku uçaklar ayırmak için bıçaklar yavaş açılıyor.</li>
	<li>Kaldırdı cilt tutulması, dikkatle ağız aşağıda 1 cm kesin.</li>
	<li>İki yanal insizyon ilk kesim düşük kaliteli ve üstün yönleri olun. Forseps kullanarak, yavaşça uzakta baş ve boyun yapılarına erişim sağlamak için cilt yansıtmak.</li>
	<li>8 X büyütme oranında diseksiyon mikroskop kullanarak görselleştirmek submandibular bezleri (orta hat: şekil 1).</li>
	<li>İyi forseps kullanarak, bezleri Trakea örten dört infrahyoid (Askı) kasları ortaya çıkarmak için yavaşça kaldır. Yırtılma veya çevre damarlara veya boşaltım kanallarını engellemeden kaçının.</li>
	<li>Birden fazla fare tükürük toplama, adımları 2.1-2,10 her fare ile devam etmeden önce işlemini yineleyin. Not: Bu yordam güvenli bir şekilde en fazla 5 fareler aynı anda gerçekleştirilebilir.</li>
	<li>Küçük parçalara makasla kayış kasları medial kısmı kalırken orta hat gibi mümkün olduğunca yakın kaldırın. Sadece nefes borusu görselleştirmek ve kayış kasları yoldan işlem sırasında tutmak gerektiği kadar kesti. Önemli kanama için ikincil birim tükenmesi ise Pilokarpin salgı inducing etkili olmayacağı için herhangi bir yakın gemi nicking kaçının.</li>
	<li>Trakea uzak kayış kasları yansıtır.</li>
	<li>Larinks, trakea ve tiroid bezi görselleştirin. Trakea doku örten açık olduğundan emin olun.</li>
	<li>Yatay bir kesi borusunda inferior/arka küçük diseksiyon makası kullanarak tiroid olun. Hava yolu patent ve sıvı açık olduğundan emin olun.</li>
</ol>3. tükürük toplama
<ol><li>Ağız ve açı diseksiyon sahne aşağı yakınındaki bandı çıkarın (45°, cranially) tükürük akışı ile yardımcı olmak için.</li>
	<li>0.5 mL 29G x ½" iğne ile kullanarak, 10 µL/g vücut ağırlığı Pilokarpin mayi enjeksiyon toplam doz 100 mg/kg için gerçekleştirin.</li>
	<li>Bir sayacı başlatmak. Birden çok fareler dozaj hızlı hareket ve aynı anda kalan fareler enjekte bir asistan sahip sağlama süresini azaltın.</li>
	<li>Standart forseps kullanarak, kılcal tüp erişim için ağzını aç.</li>
	<li>Tükürük bir boncuk ağızda görülmektedir kez proksimal sonuna kılcal tüp distal ucu diseksiyon sahne (önceden tartılır her iki tüpler) altında konumlandırılmış bir toplama tüp içine yerleştirilmiş olan sıvı yerleştirin. Not: C57/BL6 dişi farelerde 6-10 hafta-in yaş, brüt salya Pilokarpin enjeksiyon 2 dk içinde oluşur.</li>
	<li>Tükürük ağız bina ancak tüpten akan değil, önceki adımı deneyin. Tüp giriş engel doğrudan bir Mukozal yüzey karşı yerleştirilmez emin olun.</li>
	<li>Tükürük toplam 12 dk Pilokarpin stimülasyon takip toplamak. Ağzının açık kalmasını sağlamak. Not: Bu dönemde artan gelgit hacmi ve salgıları (tükürük, idrar, dışkı) normaldir.</li>
	<li>Fareler tükürük işlevi depresif Eğer (örn., yaralanma veya müdahale nedeniyle), kalan sıvı P200 micropipette kullanarak toplama tüp ağzından aktarmak. Birden çok fareler toplama ipuçları değiştirilir olun.</li>
	<li>Kayıt toplanan tükürük artı borular Pilokarpin enjeksiyon sonra 12 dk ağırlığı.</li>
</ol>4. bezi diseksiyon
<ol><li>Fareler CO2 ötenazi tarafından ötenazi (ötenazi hayvanlar için travma kurallarda açıklandığı gibi: 2013 Edition) baş ve boyun yapıları korumak için dikkat çekici Torakotomi tarafından takip. Bu nedenle, ötenazi servikal çıkık bir yöntem olarak kaçının.</li>
	<li>Fare, Sahne Alanı'nda bir sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Bezleri özgün sitedeki Trakea (şekil 1) yeniden konumlandırın.</li>
	<li>Diseksiyon mikroskop altında 8 X büyütme, kullanarak görselleştirmek büyük bezleri: PG, SMG ve SLG. Bezlerinin diseksiyon sırasında ayırt etmek için SMG ve SLG yanal yalan PG diffüz, tanımlayın. Not: az tanımlanmış ve parçalanmış olması büyük olasılıkla çünkü PG anatomi, önce yapılması gerekir.</li>
	<li>Forseps, temel yapılarını uzak çekerek ile PG kuyruğunun kavramak ve yavaşça gerginlik makas diseksiyon ile PG kafa kesme önce uygulayın.</li>
	<li>İhlali forseps kullanarak SMGs çevreleyen kapsül. Yavaşça sol ve sağ SMG ayırın.</li>
	<li>Forseps kullanarak yapıştırılan nonglandular dokusundan SMG dorsal yönünü ücretsiz.</li>
	<li>SMG boynundan Wharton'ın kanal gergin Forseps ile çizerek ve makas diseksiyon ile kanal kesme kaldırın.</li>
	<li>Yavaşça SLG forseps kullanarak SMG ayırın. Not: SMG superolateral yönü SLG var.</li>
	<li>Analitik bir denge, kayıt SMG ağırlıkları kullanarak.</li>
</ol>

<ol><li>Bradley, P., O'Hara, J. <a target="_blank" href="http://www.surgeryjournal.co.uk/article/S0263-9319(15)00194-5/pdf">Diseases of the salivary glands.</a> Surgery (Oxford). 33 (12), 614-619 (2015).</li>
<li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+enhancement+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Caries+Research%22%5BJournal%5D)">Salivary enhancement therapies.</a> Caries Research. 38 (3), 241-246 (2004).</li>
<li>Konings, A. W. T., Coppes, R. P., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+salivary+gland+radiosensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology+Biology+Physics%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of salivary gland radiosensitivity.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 62 (4), 1187-1194 (2005).</li>
<li>Burlage, F. R., Coppes, R. P., Meertens, H., Stokman, M. A., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parotid+and+submandibular%2Fsublingual+salivary+flow+during+high+dose+radiotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Radiotherapy+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Parotid and submandibular/sublingual salivary flow during high dose radiotherapy.</a> Radiotherapy and Oncology. 61 (3), 271-274 (2001).</li>
<li>Aure, M. H., Konieczny, S. F., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+gland+homeostasis+is+maintained+through+acinar+cell+self-duplication%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Salivary gland homeostasis is maintained through acinar cell self-duplication.</a> Developmental Cell. 33 (2), 231-237 (2015).</li>
<li>Aure, M. H., Arany, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+Glands%3A+Stem+Cells%2C+Self-duplication%2C+or+Both%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Salivary Glands: Stem Cells, Self-duplication, or Both?</a> Journal of Dental Research. 94 (11), 1502-1507 (2015).</li>
<li>Ono, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+effects+of+cevimeline+and+pilocarpine+on+salivary+mechanisms%2C+cardiovascular+response+and+thirst+sensation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Distinct effects of cevimeline and pilocarpine on salivary mechanisms, cardiovascular response and thirst sensation in rats.</a> Archives of Oral Biology. 57 (4), 421-428 (2012).</li>
<li>Proctor, G. B., Carpenter, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+salivary+gland+function+by+autonomic+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Auton+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Regulation of salivary gland function by autonomic nerves.</a> Auton Neuroscience. 133 (1), 3-18 (2007).</li>
<li>Nezu, A., Morita, T., Tojyo, Y., Nagai, T., Tanimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+agonistic+effects+of+pilocarpine+on+Ca%282%2B%29+responses+and+salivary+secretion+in+the+submandibular+glands+of+live+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Physiology%22%5BJournal%5D)">Partial agonistic effects of pilocarpine on Ca(2+) responses and salivary secretion in the submandibular glands of live animals.</a> Experimental Physiology. 100 (6), 640-651 (2015).</li>
<li>Urita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rebamipide+and+mosapride+enhance+pilocarpine-induced+salivation%5BTitle%5D)+AND+%22North+American+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Rebamipide and mosapride enhance pilocarpine-induced salivation.</a> North American Journal of Medical Sciences. 1 (3), 121-124 (2009).</li>
<li>Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle-mediated+gene+silencing+confers+radioprotection+to+salivary+glands+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo.</a> Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).</li>
<li>Kondo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+differences+in+the+acinar+cells+of+the+murine+major+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Functional differences in the acinar cells of the murine major salivary glands.</a> Journal of Dental Research. 94 (5), 715-721 (2015).</li>
<li>Evans, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+impairment+of+salivation+in+Na%2B%2FK%2B%2F2Cl-+cotransporter+%28NKCC1%29-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Severe impairment of salivation in Na+/K+/2Cl- cotransporter (NKCC1)-deficient mice.</a> Journal of Biological Chemistry. 275 (35), 26720-26726 (2000).</li>
<li>Delanian, S., Lefaix, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+radiation-induced+fibroatrophic+process%3A+therapeutic+perspective+via+the+antioxidant+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Radiotherapy+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">The radiation-induced fibroatrophic process: therapeutic perspective via the antioxidant pathway.</a> Radiotherapy and Oncology. 73 (2), 119-131 (2004).</li>
<li>Guchelaar, H. J., Vermes, A., Meerwaldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%3A+pathophysiology%2C+clinical+course+and+supportive+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Support+Care+Cancer%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, clinical course and supportive treatment.</a> Support Care Cancer. 5 (4), 281-288 (1997).</li>
<li>Lin, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+short-term+%CE%B3-irradiation+effects+on+mouse+salivary+gland+function+using+a+new+saliva+collection+device%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Measuring short-term γ-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device.</a> Archives of Oral Biology. 46 (11), 1085-1089 (2001).</li>
<li>Montenegro, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+differences+between+humans+and+rodents+in+the+ability+to+concentrate+salivary+nitrate%3A+Implications+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+biology%22%5BJournal%5D)">Profound differences between humans and rodents in the ability to concentrate salivary nitrate: Implications for translational research.</a> Redox biology. 10, 206-210 (2016).</li>
<li>Choi, J. S., Park, I. S., Kim, S. K., Lim, J. Y., Kim, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+and+Functional+Changes+of+Salivary+Gland+Dysfunction+After+Radioactive+Iodine+Ablation+in+a+Murine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Morphometric and Functional Changes of Salivary Gland Dysfunction After Radioactive Iodine Ablation in a Murine Model.</a> Thyroid. 23 (11), 1445-1451 (2013).</li>
<li>Imamura, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+pilocarpine-induced+saliva+secretion+by+adrenergic+agonists+in+ICR+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Pharmacology+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of pilocarpine-induced saliva secretion by adrenergic agonists in ICR mice.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 39 (12), 1038-1043 (2012).</li>
<li>Ma, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+Secretion+of+Saliva+in+Transgenic+Mice+Lacking+Aquaporin-5+Water+Channels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Defective Secretion of Saliva in Transgenic Mice Lacking Aquaporin-5 Water Channels.</a> Journal of Biological Chemistry. 274 (29), 20071-20074 (1999).</li>
<li>Parkes, M. W., Parks, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supersensitivity+of+salivation+in+response+to+pilocarpine+after+withdrawal+of+chronically+administered+hyoscine+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Supersensitivity of salivation in response to pilocarpine after withdrawal of chronically administered hyoscine in the mouse.</a> British Journal of Pharmacology. 46 (2), 315-323 (1972).</li>
<li>Nishiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Up-Regulated+PAR-2-Mediated+Salivary+Secretion+in+Mice+Deficient+in+Muscarinic+Acetylcholine+Receptor+Subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Up-Regulated PAR-2-Mediated Salivary Secretion in Mice Deficient in Muscarinic Acetylcholine Receptor Subtypes.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 320 (2), 516(2007).</li>
<li>Yang, B., Song, Y., Zhao, D., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotype+analysis+of+aquaporin-8+null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Phenotype analysis of aquaporin-8 null mice.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 288 (5), C1161-C1170 (2005).</li>
<li>Kamiya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-Ray-Induced+Damage+to+the+Submandibular+Salivary+Glands+in+Mice%3A+An+Analysis+of+Strain-Specific+Responses%5BTitle%5D)+AND+%22BioResearch+Open+Access%22%5BJournal%5D)">X-Ray-Induced Damage to the Submandibular Salivary Glands in Mice: An Analysis of Strain-Specific Responses.</a> BioResearch Open Access. 4 (1), 307-318 (2015).</li>
<li>Patel, R. M., Varma, S., Suragimath, G., Zope, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+and+Comparison+of+Salivary+Calcium%2C+Phosphorous%2C+Alkaline+Phosphatase+and+pH+Levels+in+Periodontal+Health+and+Disease%3A+A+Cross-sectional+Biochemical+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+and+Diagnostic+Research%22%5BJournal%5D)">Estimation and Comparison of Salivary Calcium, Phosphorous, Alkaline Phosphatase and pH Levels in Periodontal Health and Disease: A Cross-sectional Biochemical Study.</a> Journal of Clinical and Diagnostic Research. 10 (7), ZC58-ZC61 (2016).</li>
<li>Droebner, K., Sandner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+salivary+secretion+assay+in+F508del+mice--the+murine+equivalent+of+the+human+sweat+test%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Modification of the salivary secretion assay in F508del mice--the murine equivalent of the human sweat test.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 12 (6), 630-637 (2013).</li>
<li>Lamy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+mouse+whole+saliva+soluble+proteome+induced+by+tannin-enriched+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Proteome+Science%22%5BJournal%5D)">Changes in mouse whole saliva soluble proteome induced by tannin-enriched diet.</a> Proteome Science. 8 (1), 65(2010).</li>
<li>Mahomed, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+mucin+immunohistochemistry+in+salivary+gland+tumors+and+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Recent advances in mucin immunohistochemistry in salivary gland tumors and head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 47 (9), 797-803 (2011).</li>
<li>Kohlgraf, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+SPLUNC1+in+saliva+with+an+xMAP+particle-based+antibody+capture+and+detection+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Quantitation of SPLUNC1 in saliva with an xMAP particle-based antibody capture and detection immunoassay.</a> Archives of Oral Biology. 57 (2), 197-204 (2012).</li>
<li>Maimets, M., Bron, R., de Haan, G., van Os, R., Coppes, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+ex+vivo+expansion+and+post-irradiation+regenerative+potential+of+juvenile+and+aged+salivary+gland+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Radiotherapy+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Similar ex vivo expansion and post-irradiation regenerative potential of juvenile and aged salivary gland stem cells.</a> Radiotherapy and Oncology. , (2015).</li>
<li>Lombaert, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+salivary+gland+function+after+stem+cell+transplantation+in+irradiated+glands%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Rescue of salivary gland function after stem cell transplantation in irradiated glands.</a> PLoS One. 3 (4), e2063(2008).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Biz bezi yaralanma ve tedavi uygulanan Tükürük bezi işlevi değerlendirmek için multistep bir yöntem mevcut. Bizim yordamı trakeostomi, tükürük toplama ve bezi diseksiyon, her biri bir tümleşik çalışma Tükürük bezi Biyoloji destekleyen deneysel uygulamaları sahip içerir. Örneğin, fare trakeostomi ağız boşluğu tıkayan işlemler sırasında genel hava yolu yönetimi için kullanılmıştır.
Uygun diseksiyon ve trakeal kesi Pilokarpin için gerekli teşvik tükürük salgısı 100 mg/kg. Alternatif olarak, azalt...

Tükürük bezi bozuklukları sendromlar dysregulated veya Engelli salgı aşırı üretimi (sialorrhea) veya tükürük1eksik (xerostomia ve hyposalivation) içerir. Her iki durumda da, terapötik geliştirme2sonu hedefi doğru Tükürük bezi biyoloji anlayışımız iyileştirilmesi bir ilgi vardır.
Tükrük bezleri son derece radiosensitive organları ve genellikle kalıcı ağız kuruluğu (xerostomia)3,4' e lider baş ve boyun kanser radyoterapi sırasında hasar. Radiosensitive diğer dokular, aksine Ancak, Tükürük bezi Ciro oranı nispeten düşüktür ve salgı kaybı kötü anlaşılan5,6mekanizmadır. Bu benzersiz yaralanma ayarında doku rejenerasyonu ve radioprotection stratejileri tükürük işlevsel değerlendirme gerektirir. Deneysel, fare tükürük toplama radyasyon ve terapötik ajanlar bezi cevaben değerlendirilmesinde özellikle değerli bir araçtır.
Burada, performans ve uyarılmış tükürük salgısı Pilokarpin, güçlü muscarinic agonist7kullanarak miktarının bir yöntem mevcut. Pilokarpin bezi salgısının8,9ikna etmek için otonom sinir sistemini uyarır. Bu test uygun şekilde tamamlamak için bir trakeostomi fareyi bir patent hava yolu yordamı boyunca tutar emin olmak için ve boğulma ve aspirasyon biriken salgıları ağız boşluğu10üzerinden riskleri azaltmak için gereklidir.
Bu üç büyük tükürük bezleri kaldırılmasına sonuçlanan bir terminal, bir uygulamadır: parotid (PG), çene (SMG) ve hapı (SLG). Fonksiyonel çalışmalar, bezi ağırlık kaydedilir ve tükürük ölçüm11,12,13normalleştirmek için sıklıkla kullanılır. Bu veriler, neyin bezi Atrofi beklenen sonucu14,15 yaşında radyasyon çalışmalarda, özellikle önemlidir
Edebiyat nasıl uyarılmış tükürük salgısı açısından değişkenlik gerçekleştirilir ve16bildirdi. Örneğin, edebiyat yayılma alanı en az üç büyüklük17,18,19,20,21,22,23içinde doz Pilokarpin. Burada, bir en iyi duruma getirilmiş yüksek doz Pilokarpin protokolü ile yöntem yürütme hem teknikleri olarak adapte edilebilir (trakeostomi, tükürük toplama ve bezi diseksiyon) modüler bir platform sağlayan geliştirilmiş tekrarlanabilirlik amacıyla mevcut ihtiyacım vardı.
İletişim kuralı gösteri ek olarak 2 hafta fraksiyonlara radyasyon (4 doz 6.85 Gy) SMG bölgesine takip tükürük akışı temsilcisi fonksiyonel verileri içerir.

<table><tbody><tr><td>Pilokarpin hidroklorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6503</td><td>Pilokarpin</td></tr><tr><td>Öğrenci Vannas Bahar Makası</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>91500-9</td><td>Trakeostomi için Bahar Makası</td></tr><tr><td>Steril Salin Solüsyonu</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>Saline</td></tr><tr><td>Dumont #7 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11274-20</td><td>Kavisli Forseps</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-10</td><td>Düz Forseps</td></tr><tr><td>Standart Desen Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11000-12</td><td>Künt Forseps</td></tr><tr><td>İnce Makas - Tungsten Karbür</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14568-09</td><td>Diseksiyon Makası</td></tr><tr><td>Mikrohematokrit Heparinize Kılcal Tüpler</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Kılcal tüpler</td></tr><tr><td>Kayganlaştırıcı Göz Merhemi</td><td>Yenileme</td><td>N/A</td><td>Yenileme Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Keçi poliklonal anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 Antikor</td></tr><tr><td>DAPI (4 ',6-Diamidino-2-Fenilindol, Dihidroklorür)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prizma</td><td>GraphPad</td><td>ver6.0</td><td>İstatistiksel Yazılım</td></tr><tr><td>Pamuk uçlu aplikatör</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>Göz merhemi için aplikatör</td></tr><tr><td>0.5cc İnsülin Şırıngası, 29G x 1/2 "</td><td>BD</td><td>7629</td><td>İntraperitoneal enjeksiyon için Şırınga</td></tr></tbody></table>

fare tükürük işlevsel değerlendirme pilokarpin stimülasyon aşağıdaki yolu ile radyasyon şeker

Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation

Hyposalivation otoimmün reaksiyon Sjoegren Sendromu veya aşağıdaki radyasyon hasarı büyük tükürük bezleri için yaygın olarak görülmektedir. Bu gibi durumlarda, hastalığın patogenezinde ve etkili müdahaleler ile ilgili sorular kalır. Ekzokrin bezi biyoloji, disfonksiyon ve tedavi soruşturma için çok değerli tükürük bezlerinin işlevsel değerlendirme sağlar en iyi duruma getirilmiş bir tekniktir. Burada, Pilokarpin gerçekleştirmek için adım adım bir yaklaşım mevcut uyarılmış tükürük salgısı, trakeostomi ve üç büyük fare tükürük bezlerinin diseksiyon dahil olmak üzere. Biz de bu teknikler sırasında erişilen uygun fare baş ve boyun anatomisine ayrıntı. Ölçeklenebilir, böylece iş akışı verimliliği artırmak aynı anda, işlenmek üzere birden çok fareler için izin veren bir yaklaşımdır. Bu yöntemlerin her biri daha fazla alan içinde uygulamaları olan tekrarlanabilirlik geliştirmek hedefliyoruz. Tükürük toplama ek olarak, biz miktarının ve bu dokuların fonksiyonel kapasite normalleştirme için ölçümler tartışıyorlar. Temsilcisi veri 2 hafta fraksiyonlara radyasyon (4 doz 6.85 Gy) takip depresif Tükürük bezi fonksiyonu ile çene bezlerinden dahil edilir.

Yüksek doz Pilokarpin gerçekleştirme tükürük toplama uyardığında, aspirasyon önlemek için hava yolu korumak önemli veya oral kavite içinde salgıları den boğulma. Trakeostomi şematik (şekil 1) sağlanır. Trakeal kesi, stoma doku ve sıvı açık kalmalıdır.
Kılcal eylem tükürük toplama sırasında geliştirmek için fare başlarını aşağıya doğru 45 ° açıyla yerleştirilmiş olmalıdır. Aşağıdaki adımları üzerinde...

Biz tükürük toplama, fare trakeostomi ve üç büyük tükürük bezleri yalıtımı da dahil olmak üzere performans detaylı bir yaklaşım sunuyoruz.

Fare tükürük işlevsel değerlendirme Pilokarpin stimülasyon aşağıdaki yolu ile radyasyon şeker

Hyposalivation is commonly observed in the autoimmune reaction of Sj&#246;gren's syndrome or following radiation injury to the major salivary glands. In ...

Bu prosedürün genel amacı, pilokarpin stimülasyonu ile murin tükürük fonksiyonunu değerlendirmektir. Bu yöntem hem tükürük bezi disfonksiyonunun doğal seyrini anlamak hem de olası müdahalelerin etkinliğini test etmek için uygulanabilir. Protokolümüz, murin trakeotomi, tükürük toplama ve bez diseksiyonu dahil olmak üzere modüler bir teknik platformu sağlar.Klinik olarak, bu tekniğin ağız kuruluğunu veya aşırı tükürük üretimini değerlendiren çalışmalar için etkileri vardır. Ayrıca hava yolu yönetimi gerektiren diğer ağız içi işlemlere de uygulanabilir. Bu protokolü ilk öğrenenler trakeostomi ve bez diseksiyonunu zor bulabilirler.Bu videonun, uygun bez izolasyon tekniğini ve ilgili anatomiyi öğrenmenize yardımcı olacağını umuyoruz. Analitik bir terazi kullanarak, 20 miligram pilokarpin tartın, ardından 2 mililitre steril tuzlu su içinde çözün. Pilokarpin çözeltileri kullanım günlerinde taze olarak yapılmalıdır.Ardından, prosedür için tüm toplama kaplarını tartın ve doğru şekilde dozlamak için fareyi tartın. C57 siyah 6 türünü kullanın. Fareyi uyuşturduktan ve ayak parmağı tutamıyla anesteziyi onayladıktan sonra, pamuk uçlu bir aplikatör kullanarak oftalmik merhem uygulayın ve fareyi sırtüstü yatırın.Ardından uzuvlarını, burnunu ve kuyruğunu cerrahi bantla sabitleyin. Ardından, alkollü bir mendil kullanarak boynu temizleyin ve ıslatın. Şimdi, ventral orta hat boynunu sıkıştırmak için forseps kullanın ve makasla küçük, yüzeysel bir kesim yapın.Ardından, makası açıklığa yönlendirin ve doku düzlemlerini ayırmak için bıçakları deri altından yavaşça açın. Cildi yukarıda tutarken, ağzın bir santimetre altında dikkatlice başka bir kesi yapın. Ardından, ilk kesimden daha düşük ve daha üstün olmak üzere iki yan kesi yapın.Şimdi, forseps kullanarak, baş ve boyun anatomisine erişmek için cildi nazikçe ayırın. Sekiz kat büyütmede bir diseksiyon mikroskobu kullanarak devam edin. İnce forseps kullanarak, trakeanın üzerindeki dört infrahyoid kasları ortaya çıkarmak için submandibular bezi hafifçe kaldırın.Çevredeki damar sistemini veya boşaltım kanallarını yırtmaktan veya bozmaktan kaçının. Birden fazla fareden tükürük topluyorsanız, devam etmeden önce tüm fareleri bu noktaya hazırlayın. Bir kişi aynı anda en fazla beş fareyi idare edebilir.Şimdi, ameliyata devam etmek için, orta hatta yakın kalırken kayış kaslarının medial kısmını çıkarmak için küçük diseksiyon makası kullanın. Trakeayı görselleştirmek ve kasların işleme müdahale etmesini önlemek için yeterli kasları çıkarın. Kayış kaslarını incelerken, yakındaki damarları çentiklemekten kaçınmak özellikle önemlidir.Bir çentik, kanamaya ikincil hacim tükenmesine yol açabilir ve böylece pilokarpini tükürük sekresyonunun indüksiyonu için etkisiz hale getirebilir. Devam etmek için, gırtlak, trakea ve tiroid bezini görselleştirmek için kayış kaslarını trakeadan uzağa yansıtın. Trakeanın üstteki dokudan arındırıldığından emin olun.Son olarak, neşter değil, küçük diseksiyon makası kullanarak trakeada, tiroidden daha düşük yatay bir kesi yapın. Bu hava yolunun açık olduğundan ve sıvıdan arındırıldığından emin olun. Tükürük toplanması için önce ağzın yakınındaki bandı çıkarın ve ardından tükürük akışını kraniyal olarak yönlendirmek için diseksiyon aşamasını 45 derece eğin.Daha sonra, intraperitoneal pilokarpin enjeksiyonu uygulamak için 29 gauge yarım inçlik bir iğne ile 0,5 mililitrelik bir şırınga kullanın. Ardından, bir zamanlayıcı başlatın. Birden fazla fare enjekte ediliyorsa, bir asistanın yardımıyla hızlı bir şekilde çalışın.Ardından, ağzı açmak ve bir kılcal boruyu yerine getirmek için standart forseps kullanın. Birkaç dakika içinde bir tükürük boncuğu oluşmalıdır. Kılcal borunun bir ucunu tükürüğe yerleştirin ve diğer ucunu diseksiyon aşamasının altına yerleştirilmiş bir toplama tüpüne koyun.Gerektiğinde, tükürüğü çekmek için tüpü yeniden konumlandırın. Mukozal dokularla temas etmekten kaçının, çünkü mukus girişi tıkayabilir. Enjeksiyon zamanından itibaren 12 dakika boyunca tükürük toplayın.Stoma boyunca açık kalmalıdır. Farenin tükürük fonksiyonu baskılanmışsa, bir P200 mikropipet kullanarak sıvıyı ağzından toplama tüpüne aktarın. Her fare için her zaman farklı bir tüp veya uç kullanın.Tüm koleksiyonları tamamladıktan sonra, toplama kaplarını yeniden tartın. Fareyi karbondioksit asfiksiasyonu ile ötenazi yaptıktan sonra, dikkatli bir torakotomi yapın ve fareyi diseksiyon mikroskobu aşamasına sırtüstü yatırın. Ardından, bezleri orijinal cerrahi bölgeye yeniden yerleştirin.Sekiz kat büyütme altında, ana bezleri, PG, SMG ve SLG'yi görselleştirin. PG dağınıktır ve SMG ve SLG'ye yanal olarak konumlandırılmıştır. Önce PG'yi inceleyin.PG'nin kuyruğunu forseps ile kavrayın ve alttaki yapılardan uzaklaştırın. Hafif bir gerginlik elde edin ve ardından PG'nin başını diseksiyon makasıyla kesin. Ardından, SMG'leri çevreleyen kapsülü forseps ile kırın.Ardından, sol ve sağ SMG'yi nazikçe ayırın. Daha sonra, SMG'nin dorsal yönünü çevredeki glandüler olmayan dokudan serbest bırakın. SMG'yi çıkarmak için, Wharton'un kanalını forseps ile sıkın ve kanalı diseksiyon makasıyla kesin.SLG, SMG'nin üst tarafındadır. İki bezi ayırmak için, her birini ayrı forsepslerle kavrayın ve bezler arasındaki doku düzlemine bir çatal yerleştirin. Ardından, yavaş yavaş gerginlik oluşturun ve iki bez yavaş yavaş ayrılacaktır.Glandüler dokuyu izole ettikten sonra, toplama kaplarını hemen tekrar tartın. Analiz için pozitif bir kontrol olarak, fare SMG'leri ışınlandı ve kontrollerle karşılaştırıldı. 6.85 gride dört radyasyon fraksiyonundan iki hafta sonra, tükürük fonksiyonu önemli ölçüde azaldı.Hem total tükürük sekresyonu hem de bez ıslak ağırlığına normalize olan sekresyon, tükürük fonksiyonel kapasitesinin azaldığını gösterdi ve bu da testin duyarlılığını gösterdi. Daha sonra, SMG'ler diseke edildi. Sabitlenebilir, kesitli ve lekeli olabilirler.Hematoksilen ve eozin boyama, pilokarpin stimülasyonu olan veya olmayan brüt mimariyi karşılaştırmak için kullanıldı. Ek olarak, dokular bir membran sodyum-potasyum klorür taşıyıcısı olan NKCC1 için immün boyandı. Her iki lekede de dokular, pilokarpin stimülasyonundan bağımsız olarak benzer hücre morfolojisi gösterdi.Bu videoyu izledikten sonra, pilokarpin stimülasyonu ile murin tükürük fonksiyonunun nasıl değerlendirileceğini iyi anlamış olmalısınız. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu tam teknik bir saatten kısa sürede yapılabilir. Bu yöntem, tükürük araştırmacılarının bez fonksiyonunu ölçmek için tüm tükürüğü toplamasına ve üç ana tükürük bezini temiz ve tekrarlanabilir bir şekilde izole etmesine olanak tanır.Bu prosedürü denerken, özellikle birden fazla fare ile, hızlı hareket etmek ve tükürük toplamayı doğru zaman noktasında sonlandırmak önemlidir. Bu prosedürü takiben, tüm tükürükten bileşim ve enzim aktivitesi belirlenebilirken, glandüler dokular histoloji veya immün boyama için işlenebilir.

murine-salivary-functional-assessment-via-pilocarpine-stimulation

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Wharton kanalı üzerinden fare submandibular tükürük bezi kanülasyonu için bir protokol açıklanmıştır. Bu deneme için, tripan mavi çözümü, bu tekniği etkin bir şekilde hedeflenen bezine infüzyonları dağıtımını nasıl göstermek için, bu yeni yaklaşımın güvenilirliğini ve tükürük bezlerinin rejenerasyonu için potansiyel bir klinik ilaç / hücre tedavisi olarak önermek için bir boyacı olarak kullanılır.

Wharton Kanalı üzerinden Fare Submandibular Tükürük Bezi kanülasyonu

Yetişkin doğumlu memeli nöronların işlevi, soruşturma aktif bir alan kalır. İyonize radyasyon yeni nöron doğum engeller. Bilgisayar tomografi rehberliğinde fokal ışınlaması (CFIR) kullanılarak özel nöral progenitör popülasyonlarının üç boyutlu anatomik hedefleme şimdi yetişkin nöron işlevsel rolünü değerlendirmek için kullanılabilir.

Odak Radyolojik Geciktiricisinin Erişkin Hipotalamus nöron Fonksiyonel Sorgulama

Tükürük bezi hipofonksiyonu, baş ve boyun radyoterapisinin önemli bir yan etkisi hastanın yaşam kalitesini düşürür. Hayvan modellerinde yeni tedavilerin etkinliğinin gösterilmesi, klinik geçişten önce bir ön koşuldur. Bu protokol, sıçan submandibular bezlerinin retroduktal uygulamasını ve lokal ışınlamasını tanımlar.

Tükürük hipofonksiyonunun bir Sıçan Modelinde Retroductal Submandibuler Bezi damlatma ve yerelleştirilmiş fraksiyonlara Işınlama

Biz farelerde yorgunluk benzeri bir davranış ikna etmek için hedeflenen çevre radyasyon kullanarak bir yöntem açıklanmaktadır. Seçilen öldürücü olmayan ışınlama dozu gönüllü tekerlek çalışan aktivitesinde bir hafta süren azalmaya yol açar.

Periferik Radyasyonla Bağlı Yorgunluk A Fare Modeli

Tükürük bezi hypofunction otoimmün hastalığı ve radyasyon terapisi sık bir sonucudur. Bu hastalıkların fare modellerinde Tükürük bezi ile tekrarlanabilir değerlendirilmesi teknik bir sorundur. Burada, tükürük üretim farelerde doğru ve tekrarlanabilir ölçüm için basit bir yöntem açıklanmıştır.

Tükürük bezi işlevi farelerde ölçülmesi için bir yöntem

Anlayış Tükürük bezi Biyoloji ve roman therapeutics gelişimi için yerel ilaç dağıtım submandibular bezleri için ilgilendirir. Biz teslim doğruluk ve deneysel tekrarlanabilirlik artırmak için tasarlanmış bir güncel ve ayrıntılı retroductal enjeksiyon Protokolü mevcut. Burada sunulan polimer nano tanecikleri teslimini uygulamasıdır.

Fare Submandibular bezi Retroductal nanopartikül enjeksiyon

Morfoloji ve tükürük bezlerinin fonksiyonel belirteçleri görselleştirmek için üç boyutlu organotypic kültürler kullanarak radyasyon aşağıdaki doku hasarı mekanizmaları yeni anlayış sağlayabilir. Burada açıklanan bölüm, kültür, ışınlama, leke ve görüntü 50 – 90 μm kalınlığında tükürük bezi bölümleri önce ve iyonlaştırıcı radyasyon maruz aşağıdaki bir protokoldür.

Submandibular ve parotis tükürük bezlerinden Organotipik kültürlerin radyasyon tedavisi anahtar In vivo özellikleri

İmmünofloresan görüntüleme, karmaşık, zamana bağlı biyolojik süreçleri zaman içinde tek bir anlık görüntüde gözlemleme yeteneği ile sınırlıdır. Bu çalışma, hassas kesilmiş fare submandibular bez dilimleri üzerinde yürütülen canlı görüntüleme yaklaşımını özetlemektedir. Bu yaklaşım, homeostaz ve rejenerasyon ve onarım süreçleri sırasında hücre-hücre etkileşimlerinin gerçek zamanlı olarak gözlemlenmesine izin verir.

Tükürük bezindeki hücre-hücre etkileşimlerinin ex vivo canlı hücre görüntüleme ile sorgulanması

Burada, felç sonrası tracheotomize edilmiş hastalarda sialorrhea tedavisi için ultrason rehberliğinde glandular veya kas katmanlarına ateş iğneleme uygulanmasını sağlayan bir protokol sunuyoruz.

Tracheotomize Edilmiş Hastalarda Sialorrhea Tedavisi İçin Ultrason Rehberli İğne Akupunktur

Ön kompartman kasları nöromüsküler elektriksel stimülasyon bir fare modeli (NMES), güvenli ve ucuz bir klinik yöntem, anlatılmıştır. Bu modelde, farelerde ve spesifik hedef kas kontraksiyonlarının ortaya çıkarmak amacıyla, kolayca bulunabilen bir klinik cihazı değiştirerek bir avantaja sahiptir.

Nöromüsküler Elektriksel Stimülasyon tarafından Kas Eğitimi A Mürin Modeli

Öğrenin fare tükürük fonksiyonunu pilokarpin stimülasyonu ile değerlendirme yöntemini. Trakeostomi, tükürük toplama ve bez diseksiyonu tekniklerini içeren bu protokol, ağız kuruluğu ve tükürük bezleri disfonksiyonu çalışmaları için klinik araştırmalarda uygulanır.

Fare tükürük işlevsel değerlendirme Pilokarpin stimülasyon aşağıdaki yolu ile radyasyon şeker

Daha fazla video keşfet