Name: İnsan T-hücre hatırlama yanıt Vivo içinde çalışmaya emme Blister iletişim kuralı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Öğrenin emme blister yöntemiyle insan derisinden antijen-spesifik T hücreleri ve sitokinleri toplama tekniğini. Bu yöntem aşı geliştirme ve adaptif bağışıklık çalışmalarında kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Mads Radmer Jensen onun pratik ve akademik danışmanlık için teşekkür etmek istiyorum; Lau Lindqvist ve teknik uzmanlık sağlamak için Kaare Svejstrup; Helene Bæk Juel, Jonathan Filskov, Signe T. Schmidt ve Solveig W. Harpøth kendi teknik yardım için; Gentofte TB polikliniğine PPD yönetim eğitimleri için de personel; ve tüm gönüllü çalışmaya katıldığınız için. Bu proje Avrupa Komisyonu H2020 program [grant numarası TBVAC2020 643381] tarafından finanse edilen ve konsorsiyum ortaklarının verimli tartışmalar için teşekkür etmek istiyorum.

Tüm yöntemler aşağıda açıklanan insan gönüllü, dahil olmak üzere sağlık araştırma etik (H-15002988) ve Danca veri koruma ajansı (jr.nr. 2015-57-0102) Danimarka Komitesi tarafından onaylanmış olması. PPD insan kullanımı için onaylanmış ve üretici tarafından sağlanan doğru dozaj içinde yönetilen sertifikalı bir ürün olması gerekir. Doz veya yönetim olarak herhangi bir sapma ek etik onayları gerektirebilir ve gönüllü onam vermelisin.
1. tüberkülin cilt testi
<ol><li>Yazılı ve sözlü onam gönüllü edinin. Enjeksiyon önce gönüllü anlar ve olası yan etkileri de dahil olmak üzere yordam kabul emin olun. Not: Dahil bu protokole özgü Yaş > 18 yaş ve belgelenmiş bir BCG aşısı ölçütlerdir. Katılım kriterleri araştırma soru bağlı olarak farklı olabilir (Örneğin, bir ek katılım kriteri olumlu TST kanıtı olabilir).</li>
	<li>PPD hazır bir çözüm insan kullanım [20 tüberkülin birimleri (TU) /mL] kullanın. Bir şişe alkol pamuklu çubuk kullanarak kauçuk kapak dezenfekte.</li>
	<li>Enjeksiyon yeri hazırlamak<ol>
<li>Gönüllünün önkol ventral tarafta enjeksiyon yeri bulun.</li>
		<li>Kol palm kadar düz bir yüzeye yerleştirin ve ön kol, dirsek eklem yaklaşık 5-10 cm üst üçte üzerinde bir alanı seçin. Yara izi, damarları veya hasarlı cilt uzak durun.</li>
		<li>Alkollü bir pamuklu çubuk kullanarak alan dezenfekte.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PPD-çözüm hazırlamak<ol>
<li>İğne sabit 1 mL steril enjektör ile 27-30 G/kısa (Örneğin, 12 mm) kullanın.</li>
		<li>Yavaşça karıştırın ve 0.1 mL PPD çözeltisi aspire. Hava kabarcığı yok görünür olduğundan emin olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İntradermal PPD enjeksiyon Not: Bu adım tek PPD ifade gerçekleştirmek açıklar, ancak birden çok ifadeleri PPD aynı kol yeri. Ancak, bu belirli etik onay gerektirebilir.<ol>
<li>Deri streç ve 5-15 ° açıyla iğneyi cilde eğimi yukarı bakacak şekilde gelin.</li>
		<li>İğne ucu cilt dermal tabaka yerleştirin ve ucu ile epidermis neredeyse görünür olduğundan emin olun.</li>
		<li>Yavaş yavaş 0.1 mL PPD çözeltisi enjekte et. Not: Eğer düzgün yönetilen, 6-10 mm soluk bir papül hemen görünür. Papül yaklaşık 10 dakika sonra kaybolur.</li>
		<li>İki veya daha fazla işlemimiz yaparken, dirsek ve bilek alan iyi bir mesafede tutarken bir maksimum ayrılması için (5-10 cm) enjeksiyon sitelerin amacı. Not: Bu cilt testi yanıt potansiyel bir izdiham engeller ve kesintisiz iki emme odaları konumlandırma sağlar.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Cilt reaksiyon - gün 3 değerlendirilmesi
<ol><li>48-72 saat sonra cilt reaksiyon boyutuna dikkat edin. Sertlik (şişme) ölçmek ve değil reaksiyon eritem (kızarıklık).</li>
	<li>Sabit muayene et parmaklarını kullanarak şişme ve tükenmez kalem kullanarak dizilerinin kenarları işaretleyin. Sertlik çapı ölçmek ve mm sonucu Not için bir cetvel kullanın. Not: Sertlik boyutu bir okuma seçtiğiniz delik çapı emme odası için bir yol.</li>
</ol>3. emiş Blister indüksiyon - 7 gün
<ol><li>Emme cihazı birimi bir araya getirin. Not: Vakum pompaları ile ekli salonları emme blister indüksiyon için emme cihazı birimlerdir. Bu gösteride kullanılan cihaz yapılan özel, ama emme cihazı birimleri de ticari olarak kullanılabilir. Pompa-40 kPa -20 aralığında ayarlanabilir ve istikrarlı ve güvenilir bir negatif basınç sağlamak gerekiyor. Bu yöntemi kullanarak deneyler önce bölgesel etik onay alınmalıdır.<ol>
<li>İlk olarak, alt ağız plaka ve pencere plaka odası ve bağlantı hortumu ile birleştirerek emme odası hazırlayın. Odası-bağlama hortum sıkıca vakum pompası iliştirin. Not: Odaları insan Ciltle temas uygun olmalıdır, blister indüksiyon için bir delik olan bir alt plaka ve görsel blister izlemek için izin veren bir pencere ile üst plaka içermelidir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Delik plaka Cilt tepki boyutunda görece en uygun delik çapı belirlemek; delik büyük boyutunu büyük blister.</li>
	<li>Dezenfekte orifis plaka ve gönüllü cilt alkol temizleme bezi kullanarak.</li>
	<li>Emme odası cilde iliştirin.<ol>
<li>Gönüllünün kolu rahat bulunmadığından emin olun.</li>
		<li>Böylece cilt reaksiyon Merkezi görülebilir emme odası alt plaka delik PPD tepki üzerinde yer alır emin olun.</li>
		<li>Gevşek askıları kullanarak odası güvenli: negatif basınç uygulandığında, odası cilde uygun ve konumunu korumak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Emme cihazı açmak ve -20 kPa basınç ayarlayın.</li>
	<li>30 dakika sonra-25 kPa negatif basınç artar.</li>
	<li>60 dk sonra-30 kPa negatif basınç daha da artırmak.</li>
	<li>Bir blister tam olarak kurulan kadar-30 kPa bastır. Bu protokol için sağlanan negatif basınç için özelleştirilmiş bir enstrüman belirli olduğundan emin olun. Basınç biraz diğer ayarları protokolünde uygularken ayarlamak gerekebilir. Not: Blister indüksiyon fazında Blistering kez bir kaşıntılı sansasyon ile ilişkili son 30 dk. içinde meydana gelen gerçek blister oluşumu ile 180 dk (1-3 h) 60 aralıkları. Kabarcıklar tek veya birden çok birleştirme kabarcıklar oluşabilir. Blister yırtılması ya da kanama ortaya çıktıysa, bu yavaş yavaş baskı serbest bırakarak blister indüksiyon sonlandırmak için tavsiye.</li>
	<li>Blister tam olarak kurulmuş sonra basınç ve blister rüptür olmadan emme Oda deriden dikkatli bir şekilde çıkarın.</li>
	<li>Cilt çevredeki yumuşak bir soyunma uygulamak ve blister üzerinde sabit bir kap (Örneğin, 50 mL plastik tüp) yerleştirin.</li>
	<li>Bir yumuşak stretchy bandaj tarafından takip alerjik olmayan cerrahi bant ile kapağı güvenli.</li>
	<li>Sonraki 12-24 h blister alan üzerinde aşırı fiziksel yük önlemek için gönüllü talimat.</li>
</ol>4. hasat Blister sıvısı - günde 8
<ol><li>8inci gününde, yavaşça koruyucu soyunma kaldırmak ve blister cilt dezenfeksiyon sprey ile dezenfekte.</li>
	<li>2 mL steril enjektör 23 G iğne ile blister içeriğin hasat için kullanın. İğne blister çatı üst/lateral yan içine yerleştirin ve yavaş yavaş sıvı Aspire edin. Kavite katında dokunmaktan kaçının ama tüm sıvı hasat emin olun.</li>
	<li>Bir soyunma daraltılmış blister üzerinde uygulayın.</li>
	<li>Blister sıvısı için steril bir tüp aktarın. Birimin unutmayın.</li>
	<li>600 x g masa üstü bir santrifüj 4 min için kullanarak, blister sıvısı aşağı spin.</li>
	<li>Süpernatant aktarmak için başka bir tüp ve hücre Pelet cep orta 500 µL içinde resuspend. Not: Şimdi sayma ve analiz için daha fazla hazır hücrelerdir. Supernatants-20--80 ° C de kullanımı kadar saklanabilir.</li>
</ol>5. analiz emme hücreleri ve sıvıları Blister
Not: hücreleri ve cilt emme kabarcıklar elde edilen sıvı analizi için yönergeler sağlama bu protokol kapsamında değildir. Ancak, bu rapor için temsil edici sonuçlar sağlamak için hücre içi leke akış sitometresi ve multiplex analizleri yapıldı. Metodoloji aşağıda kısaca açıklanmıştır.
<ol><li>Akış Sitometresi<ol>
<li>1 x 105 taze hücre 1 BCG aşısı gönüllü 10 µg/mL PPD ile gelen emme kabarcıklar dan izole süspansiyonlar teşvik etmek ve 37 ° C ve % 5 hücreleri kuluçkaya CO2. Paralel bir kuluçka için unstimulated hücreler içerir.</li>
		<li>1 x 106 PBMCs elde edilen 1 BCG aşısı gönüllü 10 µg/mL PPD ile gelen süspansiyonlar teşvik etmek ve 37 ° C ve %5 karisimin kuluçkaya CO2. Paralel bir kuluçka için unstimulated hücreler içerir.</li>
		<li>2 h sonra Brefaldin A ve monensin içeren tüm hücreleri tedavi etmek ve onları 6 h 37 ° C'de için kuluçkaya</li>
		<li>Bir panel canlı/ölü-leke-BV510, anti-CD4-AF780, anti-CD3-BV421, anti-CD8-PerCP-Cy5.5, anti-CCR7-PE, anti-CD45RA-BV786, anti-IFN-γ-AF700, anti-TNF-α-PE-Cy7 ve anti-IL-2-FITC hücrelerle leke.</li>
		<li>FMO denetimler PBMC Masası'nda bulunur.</li>
		<li>Akış sitometresi ile bir akış sitometrik çözümlemesi gerçekleştir ve ilgili yazılım kullanarak sonuçları çözümleyebilirsiniz.</li>
		<li>Geçit sitokin üreten CD3 + CD4 + CD8-aşağıdaki gating strateji kullanarak alt kümeleri üzerinde: gömlek - > uygun CD3 + - > CD4 + CD8 - - > IFN-γ +, TNF-α + veya IL-2 +.</li>
		<li>Kapı aşağıdaki gating strateji kullanarak efektör bellek hücre popülasyonlarının: gömlek - > uygun CD3 + - > CD4 + CD8 - - > CCR7 - CD45RA-.</li>
		<li>Boole geçişi kullanarak bireysel sitokin profilleri hesaplamak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sitokin yayın gösteriler<ol>
<li>Vivobir sitokin bir gösteri için yayın, IL-2, IFN-γ, TNF-α, Il düzeylerini ölçmek için çok katmanlı bir analiz kullanın-10 ve IL-13'te 4 gönüllü elde çözdürülen emme blister sıvısı.</li>
		<li>Bir gösteri olarak bir sitokin sürümü hücreleri tarafından elde edilen emme ex vivo, kullanım taze emme blister hücreleri kabarcıklar ve PBMCs 1 gönüllü BCG aşı elde.</li>
		<li>PBMC bulaştırmak ve 100 koloni oluşturan birim (CFU) Mtb H37Rv hücrelerle blister emiş ve onları 4 gündür kuluçkaya.</li>
		<li>IL-2, IFN-γ, TNF-α, Il düzeylerini ölçmek için çok katmanlı bir analiz kullanın-10 ve IL-13'te tüm kültür supernatants.</li>
		<li>Yukarıda tahlil hesaplama aralığın üst hesaplama sınırlamak için ölçümleri ayarlayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Kiistala, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suction+blister+device+for+separation+of+viable+epidermis+from+dermis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Suction blister device for separation of viable epidermis from dermis.</a> Journal of Investigative Dermatology. 50 (2), 129-137 (1968).</li>
<li>Akbar, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+the+cutaneous+response+to+recall+antigen+in+humans+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Immunology%22%5BJournal%5D)">Investigation of the cutaneous response to recall antigen in humans in vivo.</a> Clinical & Experimental Immunology. 173 (2), 163-172 (2013).</li>
<li>Hatje, L. K., Richter, C., Blume-Peytavi, U., Kottner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blistering+time+as+a+parameter+for+the+strength+of+dermoepidermal+adhesion%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Blistering time as a parameter for the strength of dermoepidermal adhesion: a systematic review and meta-analysis.</a> British Journal of Dermatology. 172 (2), 323-330 (2015).</li>
<li>Smith, T. J., Wilson, M. A., Young, A. J., Montain, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+suction+blister+model+reliably+assesses+skin+barrier+restoration+and+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">A suction blister model reliably assesses skin barrier restoration and immune response.</a> Journal of Immunological Methods. 417, 124-130 (2015).</li>
<li>Maranda, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+management+of+leukoderma+after+burn%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%3A+Journal+of+the+International+Society+of+Burn+Injuries%22%5BJournal%5D)">Surgical management of leukoderma after burn: A review.</a> Burns: Journal of the International Society of Burn Injuries. 44 (2), 256-262 (2017).</li>
<li>Wilhelm, K. P., Wilhelm, D., Bielfeldt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+wound+healing%3A+an+emphasis+on+clinical+studiea%5BTitle%5D)+AND+%22Skin+Research+and+Technology%3A+Official+Journal+of+the+International+Society+for+Bioengineering+and+the+Skin+%28ISBS%29+and+the+International+Society+for+Digital+Imaging+of+Skin+%28ISDIS%29+and+the+International+Society+for+Skin+Imaging+%28ISSI%29%22%5BJournal%5D)">Models of wound healing: an emphasis on clinical studiea.</a> Skin Research and Technology: Official Journal of the International Society for Bioengineering and the Skin (ISBS) and the International Society for Digital Imaging of Skin (ISDIS) and the International Society for Skin Imaging (ISSI). 23 (1), 3-12 (2017).</li>
<li>Maini, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comparison+of+Human+Neutrophils+Acquired+from+Four+Experimental+Models+of+Inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A Comparison of Human Neutrophils Acquired from Four Experimental Models of Inflammation.</a> PLoS ONE. 11 (10), (2016).</li>
<li>Kenney, R. T., Rangdaeng, S., Scollard, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+blister+immunocytology.+A+new+method+to+quantify+cellular+kinetics+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Skin blister immunocytology. A new method to quantify cellular kinetics in vivo.</a> Journal of Immunological Methods. 97 (1), 101-110 (1987).</li>
<li>Carvalho, J. C. O., Palero, J. A., Jurna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+suction+blistering+in+human+skin+using+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of suction blistering in human skin using optical coherence tomography.</a> Biomedical Optics Express. 6 (12), 4790-4795 (2015).</li>
<li>Belson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+the+clinical+and+activated+T+cell+response+to+repeat+delayed-type+hypersensitivity+skin+challenges+in+human+subjects%2C+with+KLH+and+PPD%2C+as+a+potential+model+to+test+T+cell-targeted+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation+Research%3A+Official+Journal+of+the+European+Histamine+Research+Society+...+%5Bet+al.%5D%22%5BJournal%5D)">Characterisation of the clinical and activated T cell response to repeat delayed-type hypersensitivity skin challenges in human subjects, with KLH and PPD, as a potential model to test T cell-targeted therapies.</a> Inflammation Research: Official Journal of the European Histamine Research Society ... [et al.]. 65 (5), 389-404 (2016).</li>
<li>Vukmanovic-Stejic, M., Reed, J. R., Lacy, K. E., Rustin, M. H. A., Akbar, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mantoux+Test+as+a+model+for+a+secondary+immune+response+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Letters%22%5BJournal%5D)">Mantoux Test as a model for a secondary immune response in humans.</a> Immunology Letters. 107 (2), 93-101 (2006).</li>
<li>Thakur, A., Pedersen, L. E., Jungersen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+markers+and+correlates+of+protection+for+vaccine+induced+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Immune markers and correlates of protection for vaccine induced immune responses.</a> Vaccine. 30 (33), 4907-4920 (2012).</li>
<li>CDC. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22TB+%7C+Fact+Sheets+-+Tuberculin+Skin+Testing+for+TB%22">TB | Fact Sheets - Tuberculin Skin Testing for TB</a>. , 
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/tb/publications/factsheets/testing/skintesting.htm">https://www.cdc.gov/tb/publications/factsheets/testing/skintesting.htm</a> (2018).</li>
<li>Vukmanovic-Stejic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Varicella+Zoster-Specific+CD4%2BFoxp3%2B+T+Cells+Accumulate+after+Cutaneous+Antigen+Challenge+in+Humans%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Varicella Zoster-Specific CD4+Foxp3+ T Cells Accumulate after Cutaneous Antigen Challenge in Humans.</a> The Journal of Immunology. 190 (3), 977-986 (2013).</li>
<li>Reed, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Telomere+erosion+in+memory+T+cells+induced+by+telomerase+inhibition+at+the+site+of+antigenic+challenge+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Telomere erosion in memory T cells induced by telomerase inhibition at the site of antigenic challenge in vivo.</a> The Journal of Experimental Medicine. 199 (10), 1433-1443 (2004).</li>
<li>Tatovic, D., Young, P., Kochba, E., Levin, Y., Wong, F. S., Dayan, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine-Needle+Aspiration+Biopsy+of+the+Lymph+Node%3A+A+Novel+Tool+for+the+Monitoring+of+Immune+Responses+after+Skin+Antigen+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Fine-Needle Aspiration Biopsy of the Lymph Node: A Novel Tool for the Monitoring of Immune Responses after Skin Antigen Delivery.</a> The Journal of Immunology. 195 (1), 386-392 (2015).</li>
<li>Bond, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmacytoid+dendritic+cells+infiltrate+the+skin+in+positive+tuberculin+skin+test+indurations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Plasmacytoid dendritic cells infiltrate the skin in positive tuberculin skin test indurations.</a> Journal of Investigative Dermatology. 132 (1), 114-123 (2012).</li>
<li>Bell, L. C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Molecular+Dissection+of+the+Effects+of+HIV-1+in+Active+Tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">In Vivo Molecular Dissection of the Effects of HIV-1 in Active Tuberculosis.</a> PLoS Pathogens. 12 (3), e1005469(2016).</li>
<li>Tomlinson, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+profiling+of+innate+and+adaptive+human+immune+responses+to+mycobacteria+in+the+tuberculin+skin+test%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Transcriptional profiling of innate and adaptive human immune responses to mycobacteria in the tuberculin skin test.</a> European Journal of Immunology. 41 (11), 3253-3260 (2011).</li>
<li>Nayak, S., Acharjya, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mantoux+test+and+its+interpretation%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Dermatology+Online+Journal%22%5BJournal%5D)">Mantoux test and its interpretation.</a> Indian Dermatology Online Journal. 3 (1), 2-6 (2012).</li>
<li>Vukmanovic-Stejic, M., Reed, J. R., Lacy, K. E., Rustin, M. H. A., Akbar, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mantoux+Test+as+a+model+for+a+secondary+immune+response+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Letters%22%5BJournal%5D)">Mantoux Test as a model for a secondary immune response in humans.</a> Immunology Letters. 107 (2), 93-101 (2006).</li>
<li>Menzies, D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9872812">Interpretation of Repeated Tuberculin Tests.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 159 (1), 15-21 (1999).</li>
<li>Pitzalis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+migration+of+the+human+helper-inducer+memory+T+cell+subset%3A+confirmation+by+in+vivo+cellular+kinetic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Selective migration of the human helper-inducer memory T cell subset: confirmation by in vivo cellular kinetic studies.</a> European Journal of Immunology. 21 (2), 369-376 (1991).</li>
<li>Kool, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suction+blister+fluid+as+potential+body+fluid+for+biomarker+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Suction blister fluid as potential body fluid for biomarker proteins.</a> Proteomics. 7 (20), 3638-3650 (2007).</li>
<li>Flynn, J. L., Chan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+of+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunology of tuberculosis.</a> Annual Review of Immunology. 19, 93-129 (2001).</li>
<li>Kagina, B. M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+T+cell+frequency+and+cytokine+expression+profile+do+not+correlate+with+protection+against+tuberculosis+after+bacillus+Calmette-Gu%C3%A9rin+vaccination+of+newborns%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Specific T cell frequency and cytokine expression profile do not correlate with protection against tuberculosis after bacillus Calmette-Guérin vaccination of newborns.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 182 (8), 1073-1079 (2010).</li>
<li>García-Basteiro, A. L., Ruhwald, M., Lange, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+of+tuberculosis+vaccine+trials+under+financial+constraints%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Vaccines%22%5BJournal%5D)">Design of tuberculosis vaccine trials under financial constraints.</a> Expert Review of Vaccines. 15 (7), 799-801 (2016).</li>
<li>Luabeya, A. K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First-in-human+trial+of+the+post-exposure+tuberculosis+vaccine+H56%3AIC31+in+Mycobacterium+tuberculosis+infected+and+non-infected+healthy+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">First-in-human trial of the post-exposure tuberculosis vaccine H56:IC31 in Mycobacterium tuberculosis infected and non-infected healthy adults.</a> Vaccine. 33 (33), 4130-4140 (2015).</li>
<li>Tameris, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+candidate+TB+vaccine%2C+MVA85A%2C+induces+highly+durable+Th1+responses%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">The candidate TB vaccine, MVA85A, induces highly durable Th1 responses.</a> PloS One. 9 (2), e87340(2014).</li>
<li>Woodworth, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit+vaccine+H56%2FCAF01+induces+a+population+of+circulating+CD4+T+cells+that+traffic+into+the+Mycobacterium+tuberculosis-infected+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Subunit vaccine H56/CAF01 induces a population of circulating CD4 T cells that traffic into the Mycobacterium tuberculosis-infected lung.</a> Mucosal Immunology. 10 (2), 555-564 (2016).</li>
<li>Gideon, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variability+in+tuberculosis+granuloma+T+cell+responses+exists%2C+but+a+balance+of+pro-+and+anti-inflammatory+cytokines+is+associated+with+sterilization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Variability in tuberculosis granuloma T cell responses exists, but a balance of pro- and anti-inflammatory cytokines is associated with sterilization.</a> PLoS Pathogens. 11 (1), e1004603(2015).</li>
<li>Ruhwald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+efficacy+of+the+C-Tb+skin+test+to+diagnose+Mycobacterium+tuberculosis+infection%2C+compared+with+an+interferon+%CE%B3+release+assay+and+the+tuberculin+skin+test%3A+a+phase+3%2C+double-blind%2C+randomised%2C+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Respiratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Safety and efficacy of the C-Tb skin test to diagnose Mycobacterium tuberculosis infection, compared with an interferon γ release assay and the tuberculin skin test: a phase 3, double-blind, randomised, controlled trial.</a> The Lancet Respiratory Medicine. 5 (4), 259-268 (2017).</li>
<li>He, X., de Oliveira, V. L., Keijsers, R., Joosten, I., Koenen, H. J. P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocyte+Isolation+from+Human+Skin+for+Phenotypic+Analysis+and+Ex+Vivo+Cell+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture.</a> Journal of Visualized Experiments. (110), e52564(2016).</li>
<li>Koskela, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blister+fluid+and+serum+cytokine+levels+in+severe+sepsis+in+humans+reflect+skin+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Anaesthesiologica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Blister fluid and serum cytokine levels in severe sepsis in humans reflect skin dysfunction.</a> Acta Anaesthesiologica Scandinavica. 61 (1), 53-61 (2017).</li>
<li>Wada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+skin+blister+fluids+from+children+with+Epstein-Barr+virus-associated+lymphoproliferative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Characterization of skin blister fluids from children with Epstein-Barr virus-associated lymphoproliferative disease.</a> The Journal of Dermatology. 45 (4), 444-449 (2018).</li>
<li>Andersson, C., Rajala, T., Särkkä, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+models+for+epidermal+nerve+fiber+data%5BTitle%5D)+AND+%22Statistics+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hierarchical models for epidermal nerve fiber data.</a> Statistics in Medicine. 37 (3), 357-374 (2018).</li>
<li>Ramshanker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Prednisolone+on+Serum+and+Tissue+Fluid+IGF-I+Receptor+Activation+and+Post-Receptor+Signaling+in+Humans%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Effects of Prednisolone on Serum and Tissue Fluid IGF-I Receptor Activation and Post-Receptor Signaling in Humans.</a> The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 102 (11), 4031-4040 (2017).</li>
<li>Bouma, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCL20+neutralization+by+a+monoclonal+antibody+in+healthy+subjects+selectively+inhibits+recruitment+of+CCR6%2B+cells+in+an+experimental+suction+blister%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">CCL20 neutralization by a monoclonal antibody in healthy subjects selectively inhibits recruitment of CCR6+ cells in an experimental suction blister.</a> British Journal of Clinical Pharmacology. 83 (9), 1976-1990 (2017).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu el yazması insan bağışıklık belleği yanıt vivo içindekutanöz antijen hatırlama ve hücre hasat emme blister indüksiyon tarafından kullanarak, çalışma için pratik bir yordam açıklanır. TST intradermal antijen ifade ve BCG aşısı hatırlama bir örnek olarak kullanılmıştır. Bu kabaca üçte biri SB hücreleri gösteren edildi sağlanan antijen spesifik Polifonksiyonel T-hücreleri efektör bellek fenotip, son olarak, bir akış sitometrik ve multiplex sitokin Analizi tarafından SB numune karakterizasyonu örnekti.
Bu protokol kritik adımlar intradermal enjeksiyon tekniği, emme blister indüksiyon ve blister ponksiyon içerir. Öncelikle, doğru intradermal ifade eğitimli personel gerektirir. Yanlış bir ifade suboptimal sonuçlara yol açabilir. PPD genellikle iyi bilinen ve güvenli kutanöz antijen, ama onun kompozisyon karşılaştırılabilir13,20sınırlama üreticileri arasında değişebilir. Bu rapor 2 TU tek intradermal birikimi ve ek etik onay gerektiren paralel isteğe bağlı olarak iki ifadeleri (2 x 2 TU) için yönergeler sağlar. Ancak, diğer çalışmalar 10 TU, güçlü cilt reaksiyon10,21olasılığını artırmak kullandık. SB indüksiyon adımı sırasında negatif basınç kademeli küçük artışlar kanama ve blister rüptürü riskini azaltacaktır. Kırmızı kan hücreleri veya leucocytes gelen kan ile kirlenme genellikle düşük2dir. Aseptik ponksiyon tekniği mikrobiyal kirlenme önler ve ponksiyon iğnesi ve dermal blister katı arasında temas kaçınarak enkaz veya ikamet cilt hücrelerini kirleri azaltır. Ancak, bazı araştırmacılar için delinmiş blister10haddeleme basınç uygulayarak SB sıvı hasat tercih ederim. Blister içinde septa ponksiyon gerekli olabilir. SB kendisi Minimal İnvasif tekniktir; daraltılmış SBs skarlasma olmaksizin iyilesmektedir ve enfeksiyonlar çok nadirdir. 2 ancak, hipo-pigmentasyon ölçüde ortaya çıkabilir ve SB indüksiyon albüminkolloid skarlasma bir geçmişi olan insanlar muhtemelen kaçınılmalıdır.
Teknik sınırlamaları düşük toplam hücresini verimleri ve uzun süreli depolama için sonuç olarak sınırlı seçenekler içerir. Leucocyte verim, klinik TST yanıt, blister ebadı ve eritrosit kirlenme arasındaki ilişkileri oldu iyice başka bir bölümünde2,10. Burada sunulan BCG-geri çekme deneyleri (Şekil 1), ortalama toplam verim her blister üzerinden 50.000, özellikle SBCs okudu yalnız15iseniz bu hücreler kullanarak küçük ölçekli bir deneysel set-up ima yapıldı. Ancak, bir SB örnek belirli T hücreli nüfus çoğunlukla ne her iki göreceli ve mutlak hücre sayımları PBMC örnekleri bulunur aşıyor. Şekil 2' de sunulan örnekte üç kez pozitif PPD özel T-hücreleri 100.000 SB hücreleri bir örnek daha--dan 2 x numara bulunan 1 x 106 PBMCs aynı donörden (veri gösterilmez) daha büyük idi. TST tepkisi görsel bir Puanlama M. tuberculosis bellek değerlendirilmesi için en sık görülen klinik yöntemidir. Belirtmek gerekirse temel edinilmiş bağışıklık reaksiyonu klinik cilt reaksiyon2,21aynı anda zirve değil. Değil tüm BCG aşısı veya Mtb-maruz kalan bireylerin güçlü TST reaksiyonlar ve sınıflandırma ve sigara TST cevaplama yanı sıra çalışma nüfus, önceden varolan bir Mikobakteriyel Sensitizasyonu örnekleri işlenmesi için stratejiler geliştirecektir Bu yöntemi kullanarak bir geri çağırma deneme işlemini başlatmadan önce dikkate alınması gerekir. Ayrıca, hem SB örnekleme ve görsel Puanlama, küresel nedeniyle indirimli cilt yanıt-e doğru kişilerle teorik bir önyargı için bir potansiyel olduğunu veya deri ile ilgili bağışıklık, örneğin, HIV enfeksiyonu ve belirli yaş gruplarına2görüldüğü gibi Engelli, 13,18,20. Ayrıca, tekrarlanan test ile TST tepki bir bağışıklık artırılması iyi bilinen20,22yaşında. TSTs tekrarlanan10olduğunda ancak, SB hücre fenotipleri oldukça sabit kalır. Bu gözlem, hücresel bağışıklık yanıtı boyuna çalışmalarda SB hatırlama rolü destekler.
T-hücre immunologists için yüksek kesirler antijen spesifik hücre hasat için SB geri çekme sağlar. Ancak, SB zamanlaması için bir örnekleme PPD-ifade üzerinden hücresel kompozisyon ve sitokin microenvironment zaman içinde değiştikçe önemlidir. Bu protokol için kabarcıklar indüklenen 7 günlük sonrası challenge ve izole hücreler öncelikle CD4 + efektör bellek T-hücreleri idi hücreleri yüksek kesirler IFN γ, TNF-α ve IL-2 ortak bir ifade ile de dahil olmak üzere. Nasıl T-hücre harekete geçirmek, yayılması ve farklılaşma PPD astarlanmalıdır cilt2,15,21' oluşur açıklayan önceki çalışmalar doğrultusunda bu gözlemler vardır. Kinetik SB çalışmalar PPD duyarlı bireylerde çok erken cilt yanıt belirsiz olduğunu göstermektedir; Ancak, zaten PPD-meydan sonraki ilk gün içinde yanıt CD4 + T (merkezi her iki bellek ve efektör bellek fenotipleri tarif edilmiştir) hücreleri tarafından hakim olur ve, 3 gün sonra yanıt tarafından yüksek kesirler hakimdir PPD özel sitokin CD4 + T hücreleri2,8,10,15,21üreten. Bu adaptif sitokin yanıtın 2 hafta2,8,10,23' den daha fazla bilgi için algılanabilir kalır. Gün 7 mesaj-TST bellek CD4 + T hücreleri2üreten sitokin topluluğu için en uygun zaman noktası gibi görünüyor. Ancak, diğer zaman puan tabii, antijen ve yanıt ilgi bağlı olarak ilgili olabilir. Notun bir çalışmada, adaptif PPD yanıt biraz daha erken zaten de 5 gün mesaj-TST10pro-inflamatuar sitokin salgısının bir azalma ile zirve bildirilmiştir.
SB sıvı pro-inflamatuar sitokinlerin ve cilt microenvironment15,24temsilcisi olarak gösterilen diğer proteinler yüksek düzeyde içerir. TNF-α IFN γ düzeyleri ve bu SB sıvı pik IL-2 düzeyleri zirve sırasında 3 gün sonra 7 gün2,10' dan sonra muhtemelen bu daha sonraki aşamada adaptif yanıt hakimiyeti yansıtan kinetik çalışmalar göstermiştir. SB hücreleri aktif vivo içindeçünkü, onlar yüksek spontan sitokin yayın hem de restimulation (Şekil 3 ve 4) üzerine belirli bir yayın için potansiyel bir sergi.
Bu rapor CD4 + T hücre bağışıklık üzerinde duruluyor. Olarak gösterdiği Rakam2, izole T-hücreleri çoğunluğu gerçekten CD4 + vardı, oradayken neredeyse hiçbir CD8 + T-hücreleri emme sıvı blister. Düşük oranlarda ve CD8 + T-hücreleri CD4 + T hücreleri2,8,10,23için karşılaştırıldığında daha aşağı bir göçmen kapasite raporlama diğer SB PPD-hatırlama çalışmaları doğrultusunda bu. CD8 + katkı daha fazla karakterizasyonu tercih olurdu; Ancak, bu bu raporu kapsamý dýþýndadýr.
T-hücreleri Mtbbağışıklık denetim için temel olarak kabul edilir; Ancak, güvenilir bir ilişkili kan25,26edinilmiş bağışıklık yanıtındaki yansıyan koruma tanımlamak zor olmuştur. Şu anda olduğu gibi büyük ve çok pahalı etkinlik denemeleri27hiçbir alternatif bu barikatı ciddi yeni TB aşıların geliştirilmesi engel. TB aşı geliştiriciler aşı özel T-hücre popülasyonlarının kan28,29küçük ve geçici değişikliklerinin değerlendirilmesi tarafından aşı immünojenisite belirlemek. Ancak, antijen spesifik T-hücreleri kanda bulunan dolaşan küçük kısmını ilgili olup olmadığı sorgulanabilir (yani, bir enfeksiyon ve T hücre zengin microenvironment kontrol temsilcisinin siteye geçirme yeteneğine sahip Mtb) 27 , 30 , 31 .
Önceki çalışmalarda ve burada sunulan veriler temel alınarak, SB kutanöz geri çekme modeli aşı özel T-hücrelerinin incelenmesi için bir kullanılmayan potansiyeli temsil eder. Sadece model bir aşı üretilen yanıt on yıl önce bir geri çağırma izin vermez, aynı zamanda gerçek bellek değerlendirilmesi bir doku özel bağlam15,18,19,21potansiyel sağlar. Roman, aynı zamanda oluşan antijenleri aday alt birim TB aşıların dahil, belirli Cilt testleri bu model28,32kullanarak aşı değerlendirme için yeni fırsatlar öneririz. Ayrıca, bir hücre - mediated bağışıklık yanıtı PPD meydan ciltte oluşturulan Mtbiçinde bulunan Yanıt benzer olduğunu transcriptomic analizleri öneririz-enfekte akciğer18.
Cilt punch biyopsi de deriden bir hücre hasat için izin ve SB örnekleme ile karşılaştırıldığında mekansal bilgi sağlamak belgili tanımlık yöntem daha invaziv ve tek hücreli süspansiyonlar33hazırlamak için enzimatik veya mekanik işlem gerektirir. Sitokinler ve hücre işaretleri ölçümleri arasında iki yöntem2,10karşılaştırılabilir.
Emme blister yöntemi zaten Dermatoloji, yanı sıra tıbbi araştırma birçok alanda tek başına veya birlikte bir sistemik veya yerel cilt meydan okuma ile uygulanmış. Sepsis, Epstein - Barr virüsü ilişkili lenfoproliferatif hastalığı, diyabetik nöropati, glukokortikoid alımı etkileri ve insan denemeler terapötik antikorlar veya modelleri T hücre hedeflenmiş tedaviler10 için test çalışmaları örnek gösterilebilir ,34,35,36,37,38.
Terapötik bir bakış açısından SB kutanöz geri çekme yöntemi merkezi T-hücre bellek potansiyel çalışmaya benzersiz avantajlar sunuyor ve -her iki biyolojik ve teknik bakış açısı-cilt ilgili örnekleme yuvası2, sağlamak gibi görünüyor 15,18,19,21. Özellikle, PBMCs dolaşan geleneksel, pasif örnekleme kıyaslandığında, SB kutanöz geri çekme yöntemi yanıt-e doğru onların ilgili antijen lenf düğümünde geçirmek ve yerel tamamlamak yeteneği kanıtlanmış T-hücreleri çalışma için sağlar genişleme ve farklılaşma bir doku özgü vivo içinde bağlam15,18,19,21.
Sonuç olarak, model burada insan edinilmiş bağışıklığın ve T hücreli hedefleme aracılarının (yani, bulaşıcı hastalık vaccinology veya kanser araştırma) alanındaki araştırmacılar için ilgili olabilir gösterdi. Bu protokol için uygulanan TST modeli olduğunu, tabii ki, TB vaccinology alanında özel konu ile ilgili. Ancak, bu model temel kavramı diğer araştırma alanlarında son derece geçerlidir.

Cilt SB hücrelerin ve sıvı cilt üzerinden doğrudan hasat için sağlar bir yapay indüklenen blister olduğu. SBs vakum tarafından yetiştirme tekniği Dermatoloji deri İmmünoloji sağlığı ve hastalıkları1,2,3,4,5, incelenmesi için kullanılan alanı içinde iyi bilinen bir araçtır 6 , 7 , 8. bu raporu nasıl kutanöz antijenik hatırlama (SB kutanöz geri çekme yöntemi) ile kombine SB tekniği doğrudan edinilmiş bağışıklık yanıtı içinde vivokazandırabileceğini gösterir.
SB indüksiyon arkasındaki prensip basittir: bir ışık vakum cildin küçük bir alana uygulanır. Negatif basınç sonunda epidermis ile sıvı ve hücreleri1,2,9dolu bir yerel blister oluşturma dermis, ayırmak için zorlar. Blister sıvısı tarafından ince iğne aspirasyon hasat edilebilir ve içerik-ebilmek var olmak kullanılmış için daha fazla vitroçalışma.
Son yıllarda SB yöntemi vivo içinde bağışıklık yanıtı cilt10,11' e kısıtlanmış hastalıkları dışında çalışma için artan bir ilgi olmuştur. İnsanlarda edinilmiş bağışıklığın çalışmanın lenf nodu veya gastrointestinal mukozal doku invaziv bir örnektir ve etik olmayan kabul edilemez olduğu için hücreleri ve sitokinler ilgi periferik kan örnek ki gerçeği ile sınırlıdır. Bir örnek aşı12' den sonra uzun ömürlü insan hafızası T hücreli yanıt çalışmadır. Bu tür çalışmalarda aracılık bağışıklık hücrelerinin ilgili nüfus lenfoid dokusunda bulunduğundan örnekleme ilgili T-hücrelerinin büyük bir meydan okuma olabilir ve sadece çok sınırlı sayıda belirli T-hücrelerinin periferik kan dolaşımını.
SB teknik bellek T-hücrelerinin incelenmesi için eşsiz bir fırsat ve diğer belirli hücre popülasyonlarının sunar. Kutanöz Aşı antijen, T-hücreleri özel antijen için onların lenfoid Dinlenme mekanlari cilt için işe ve kolayca SB tatmak mümkündür. Bu kutanöz geri çekme modeli metodolojisi ve araştırma uygulamaları Akbar ve ark. tarafından tarif edildi 20132' de. Cilt geri çağırmak için yaygın olarak kullanılan bir antijen mikobakteriler bir tüberkülin cilt testi (TST)13, nerede PPD deri deri tabakası enjekte edilir gerçekleştirmek için kullanılan piyasada bulunan saf protein türev (PPD) biridir. PPD [Örneğin, Mycobacterium tüberküloz (Mtb) enfeksiyon veya bir önceki Bacillus Calmette-Guerin (BCG) aşısı olan bireyler] doğru varolan bir immünolojik bellek ile bireylerde, antijen ifade sonuçlanan bir cilt ve in vivo klonal genişlemesi PPD özel CD4 + T hücreleri2,11,14,15geçiş ile yanıt hatırlayın. Sonuç olarak, PPD özel Polifonksiyonel yüksek kesirler SB örnekleme için hazır deride CD4 + T hücreleri birikir. T-hücreleri bu yöntem tarafından toplanan sağlam olduğu kanıtlanmıştır ve yeterince uzun bir dizi ve bir uzun vadeli vitro kültür15tarafından karakterize edilebilir bol miktarda bulunmaktadır. Bu nedenle, kutanöz geri çekme modeli ve SB indüksiyon vivo içinde T-hücre yanıt ex vivo analizleri tarafından eğitim için değerli bir yöntem ispat edebilir ve bu yaklaşımın artan bilgi araştırmacılar hücresel immünoloji çıkarları ile yararlanabilir ve vaccinology.
Bu rapor, insan derisi emme kabarcıklar cilt PPD enjekte ikna etmek ilk kademeli kılavuzu sağlar. Kutanöz antijen geri çekme modeli TST BCG aşısı gönüllü olarak kullanarak gösterilmiştir. Son olarak, ilgili ex vivo hücre ve SB tarafından izole sitokinler analizidir örneği. PPD özel T-hücreleri SB yöntemi ile elde edilen phenotypical ve fonksiyonel özellikleri nelerdir iyice başka bir bölümünde2,10,11,16,17, 18 , 19. bu raporu diğer araştırma grupları tarafından bu tekniğin uygulanması kolaylaştırmak için metodoloji, pratik ve immünolojik yönünü amaçlamaktadır.

<table><tbody><tr><td>Laboratuvar kullanımı için eldivenler</td><td>Imtex, Danimarka</td><td>1013</td><td></td></tr><tr><td>Dezenfeksiyon spreyi&nbsp;</td><td>Apotek, Danimarka</td><td></td><td>İnsan cildi için gliserinli %82 alkol&nbsp;</td></tr><tr><td>Alkol takasları</td><td>Mediq, Danimarka</td><td>1131892</td><td></td></tr><tr><td>PPD RT 23 "SSI" (2 T.U./0.1ml)</td><td>AJ Aşıları</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Sabit iğneli Myjector şırınga&nbsp;</td><td>Terumo</td><td>A236</td><td>1 ml/29G/12mm</td></tr><tr><td>Cetvel&nbsp;</td><td>Alakasız</td><td></td> <td>&nbsp; cilt reaksiyonu değerlendirmesi için</td></tr><tr><td>Tükenmez kalem</td><td>ilgili</td><td></td> değil<td>&nbsp; cilt reaksiyonu değerlendirmesi için</td></tr><tr><td>Portatif Akciğer Aspirasyon Ünitesi</td><td>Laerdal Medikal, Danimarka</td><td>78000011</td><td>NOT.&nbsp; -40kPa'nın altındaki aralıklar için modifiye edilmiştir ve basınç göstergesi ile birlikte verilir&nbsp; (ref. 1031107) Teknik Departman tarafından, Hvidovre Hastanesi</td></tr><tr><td>Negatif Basınç Odası Tertibatı, bağlantı borusu ile ısıtılmamış</td><td>Elektronik Çeşitlilikler, Finksburg, MD, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Orifis Plakası, 47mm, 10mm Delikli</td><td>Elektronik Çeşitlilikler, Finksburg, MD, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Negatif Basınç Aleti Conta Kiti</td><td>Elektronik Çeşitlilikler, Finksburg, MD, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Negatif basınç Odası Kayışı&nbsp;</td><td>Elektronik Çeşitlilikler, Finksburg, MD, ABD</td><td></td><td>12 inç</td></tr><tr><td>Mikro Gözenekli Cerrahi bant</td><td>&nbsp; 3M</td><td>1533-1</td><td>2,5 cm x 9,1 m</td></tr><tr><td>15ml plastik tüpten kapak</td><td>Sarstedt, Almanya</td><td>62,547,254</td><td></td></tr><tr><td>Tubigrip bandaj</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care, İsveç</td><td>1443</td><td></td></tr><tr><td>Cosmopor steril yapışkan pansuman</td><td>Hartmann</td><td>9008337</td><td>7.2 x 5 cm</td></tr><tr><td>2ml Şırınga Konsantrik Luer Slip&nbsp;</td><td>Becton Dickinson&nbsp;</td><td></td><td></td>300185</tr><tr><td>Microlance 23G/30mm iğne</td><td>Becton Dickinson</td><td>300700</td><td></td></tr><tr><td>Safe-Lock mikrosantrifüj tüpleri (otoklavlanmış)</td><td>Eppendorf</td><td>&nbsp; 0030120086</td><td>Otoklavlı</td></tr><tr><td>Minispin plus santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5453000011</td><td></td></tr><tr><td>Gibco AIM V Orta Ömür Teknolojileri</td><td></td><td>12055-091</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan t-hücre hatırlama yanıt vivo içinde çalışmaya emme blister iletişim kuralı

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Kutanöz antijen-geri çekme modelleri insan hafızası yanıt içinde vivoçalışmalar için izin. Cilt emme blister (SB) indüksiyon ile birleştirildiğinde, bu model antijen spesifik T-hücreleri temsilcisi hücresel hafıza yanıt yanı sıra sitokin microenvironment in situnadir nüfus için erişilebilirlik sunmaktadır.
Bu rapor kutanöz bir hatırlama, bir SB indüksiyon ve antijen spesifik T-hücrelerinin bir hasat pratik yordamı açıklar. Yöntem örneklemek için tüberkülin cilt testi kim, bu çalışmada önce bir enfeksiyonla karşı Bacillus Calmette-Guerin aşı uygulanan bireylerde antijenik geri çağırmak için kullanılan Mycobacterium tüberküloz. Son olarak, kandan izole hücreler ile karşılaştırıldığında bu örnekleme yöntemi tarafından antijen spesifik Polifonksiyonel CD4 + T hücreleri mevcut yüksek kesirler gösteren multiplex ve akış sitometrik analizleri SB örneklerin örnekleri sağlanır.
Burada açıklanan yöntemi güvenli ve minimal invaziv, her ikisi de doğuştan gelen ve edinilmiş bağışıklık yanıtı vivo içindeeğitim için eşsiz bir fırsat sağlar ve geniş bir hücre-aracılı bağışıklık ve insan ile çalışan araştırmacılar topluluğu için yararlı olabilir aşı geliştirme bağlamında bellek yanıtları.

Sekiz sağlıklı yetişkin gönüllü (Medyan yaş: 30 yıl, aralığı: 26-43 yıl) belgelenen önceki BCG aşı ile (BCG aşısı ortalama zaman: 5.5 yıl, aralığı: 1-30 yıl) dahil edildi. Katılımcılar intradermally günde 3 TST değerlendirme ardından PPD 2 TU ile meydan. SBs 7 günde indüklenen ve günde 8 hasat ve 10 mm delik çapları ile emme blister Chambers'ı kullanarak tüm kabarcıklar yetiştirildik. Yedi bireyler verildi 2 ayrı PPD aşı aynı anda 2 paralel SB indüksiyon tarafından takip aynı kol (birden çok PPD işlemimiz Protokolü1.4 adımda aşağıda ilgili not başvurun). Periferik kan yoğunluk gradient Santrifüjü tarafından günde 7 plazma ve PBMCs yalıtım için çizilmiştir. Plazma ve sıvı supernatants SBs den-20 ° C'de depolanmış Taze SB hücreleri (SBCs) nigrosine leke ve mikroskobu kullanılarak sayıldı.
Klinik TST yanıt ve SBC verim Şekil 1' de sunulmaktadır. 10,25 mm medyan büyüklüğündeydi TST indurations (aralığı: 0 - 20 mm) ve medyan cep numarası blister başına 50.000 (aralığı: 15.000-210.000 hücreleri, kabarcık sayısı: 15). İki gönüllü klinik yanıt 2 TSTs birini ve 15.000 hücreler/blister bir karşılık gelen düşük toplam hücre verim içinde vardı. Hücre verim TST ortalama klinik Yanıt ile ilişkili (Spearman'ın r 0.643, p = 0.094 =).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57554/57554fig1.jpg"> Resim 1 : Emme blister hücre verim. (bir) Bu panel bir temsilcisi SBs izole nigrosine lekeli hücrelerinin mikroskopisi 7 gün sonrası-TST kaldırdı gösterir. (b) Bu panel 8 BCG aşısı gönüllü olarak ortalama TST sertlik (mm) ve ortalama hücre verim (n/blister) arasındaki ilişkileri gösterir (kabarcık sayısı = 15). Noktalar tek tek ortalama ölçümleri temsil. Unutmayın ki 0 mm TST sertlik ve bir hücre verim 15.000 2 gönüllü olduğu gibi 2 nokta örtüşmez. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57554/57554fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Akış sitometrik SB karakterizasyonu göstermek için SBCs 30 yıl önce BCG aşısı olan bir Yaş 43 gönüllü elde edilmiştir ve Mtb. SBCs bilinen hiçbir maruz vardı bir tek blister (İndüksiyon takip izole Sertlik: 1.4 mm/100.000 SBCs). Şekil 2 hücre içi sitokin SBCs karşı PBMCs boyama temsilcisi araziler gösterir.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57554/57554fig2.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57554/57554fig2large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57554/57554fig3.jpg"> <img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57554/57554fig4.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57554/57554fig4large.jpg" target="_blank"></a>

Burada, bir gösteri emme blister kutanöz geri çekme modeli sağlamak. Model insan vivo içinde edinilmiş bağışıklık yanıtı, örneğin aşı geliştirme bağlamında incelemek basit bir erişim sağlar.

İnsan T-hücre hatırlama yanıt Vivo içinde çalışmaya emme Blister iletişim kuralı

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Bu videonun genel amacı, in vivo olarak adaptif immün yanıtı temsil eden antijene özgü T hücrelerini ve sitokinleri hasat etmemizi sağlayan emme blister kutanöz geri çağırma yöntemini göstermektir. Bu yöntem, insanlarda hücresel tepkileri ve adaptif bağışıklığı incelemek için kullanılabilir. Bu teknolojinin ana avantajı, antijene özgü T hücrelerini nispeten invaziv olmayan ve güvenli bir yöntem kullanarak doğrudan bağışıklık reaksiyonu bölgesinden toplamamıza izin vermesidir.Kutanöz hatırlamanın temel prensibi, antijeni cildin dermal tabakasına bırakmaktır. Antijenin mevcut immünolojik hafızasına sahip bireylerde, T hücreleri reaksiyon bölgesine göç edecek ve spesifik T hücrelerinin klonal olarak genişlediği ve yerinde farklılaştığı lokal bir bağışıklık tepkisini indükleyecektir. Bu reaksiyon üzerine emme kabarcıklarının indüksiyonu, bu spesifik T hücrelerinin yanı sıra in vivo olarak üretilen sitokinleri hasat etmemizi sağlar.Bu video gösteriminde, geri çağırma antijeni olarak PPD kullanıyoruz. PPD, mycobacterium tuberculosis enfeksiyonunun tanısı için yaygın olarak kullanılır. Ancak, bu videoda göreceğiniz gibi, daha önce BCG aşısı ile aşılanmış kişilerde de cilt reaksiyonlarına neden olur.Tüberkülin deri testi için malzemeler arasında alkollü bezler, 27 ila 30 gauge kısa iğneli bir mililitrelik şırınga ve insan kullanımı için onaylanmış bir PPD çözeltisi bulunur. Mililitre başına 20 tüberkülin biriminden oluşan bir PPD çözeltisi kullanın. Şişeyi alkollü bir bez kullanarak dezenfekte edin.Ve lütfen bileşimin üreticiler arasında değişebileceğini unutmayın. Daha sonra gönüllünün ön kolunun ventral tarafındaki enjeksiyon bölgesini bulun ve bölgeyi bir alkollü çubuk kullanarak dezenfekte edin. 29 gauge, 12 milimetre sabit iğne ile bir mililitre steril şırınga kullanın.Yavaşça karıştırın ve 0.1 mililitre PPD çözeltisini aspire edin. Görünür kabarcıklar olmadığından emin olun. Cildi gerin ve iğneyi, eğim yukarı bakacak şekilde beş ila on beş derecelik bir açıyla doğrultun.İğnenin ucunu cildin dermal tabakasına sokun ve ucun epidermisten neredeyse görünür olduğundan emin olun. Yavaşça 0.1 mililitre PPD çözeltisi enjekte edin. Doğru uygulanırsa, hemen altı ila on milimetrelik bir papül görünecektir.Papül yaklaşık on dakika sonra kaybolur. PPD'nin birden fazla birikimi mümkündür, ancak ek etik onay gerektirebilir. İki enjeksiyon uygulanırsa, dirsek ve bilek bölgesinden iyi bir mesafede dururken maksimum ayrılmayı hedefleyin.Klinik cilt reaksiyonu ilk 24 saat içinde ortaya çıkar ve buna kaşıntı hissi eşlik eder. Enjeksiyondan 48 ila 72 saat sonra cilt reaksiyonunun boyutunu ölçün. Yanıtı değerlendirirken, eritemi değil sertleşmeyi ölçmek önemlidir.Parmağınızı kullanarak şapka şişmesini palpe edin. Ardından, bir tükenmez kalem kullanarak sertleşmenin kenarlarını işaretleyin. Son olarak, sertleşme çapını ölçmek için yumuşak bir cetvel kullanın ve sonuçları milimetre cinsinden not edin.Yedi gün sonra, emme kabarcığını indüklemenin zamanı geldi. Deri emme kabarcığının indüksiyonu için, ekli bir emme haznesine sahip bir vakum pompası kullanın. Piyasada bulunan veya özelleştirilmiş bir cihaz kullanın.Daha da önemlisi, pompanın eksi 20 ila eksi 40 kilopaskal aralığında ayarlanabilir olması ve sabit ve güvenilir bir negatif basınç sağlaması gerekir. Emme haznesinin alt kısmı, cilt ile temas halinde olan küçük bir deliğe sahip bir plakadan oluşur. Plaklar tek veya çok delikli olabilir ve cilt reaksiyonuna uyacak şekilde farklı boyutlarda uygulanabilir.Haznenin üst kısmı, kabarcığın görsel olarak izlenmesine izin vermelidir. İndüksiyondan önce cildi ve hazne plakasını dezenfekte edin. Kolun rahat bir şekilde dinlendiğinden emin olun.Ayarlanabilir kayışlar kullanarak hazneyi buraya takın ve sabitleyin. Deri reaksiyonunun merkezi, alt plaka deliğinden görülebilmelidir. Emme cihazını açın ve negatif basıncı eksi 20 kilopaskal olarak ayarlayın.Otuz dakika sonra, basıncı eksi 25 kilopaskal'a yükseltin. 60 dakika sonra, basıncı eksi 30 kilopaskal'a yükseltin. Ve tek bir kabarcık tamamen oluşana kadar basıncı burada tutun.Blister indüksiyon aşaması normalde yaklaşık bir ila üç saat sürer. Burada yüksek hızda gösterildiği gibi, son 30 dakika içinde kademeli olarak meydana gelen gerçek kabarcık oluşumu ile. Kabarcık yırtılması veya kanama belirtileri varsa, basıncı yavaşça boşaltmanız ve indüksiyonu erken durdurmanız önerilir.Kabarcıklar, tek veya çoklu birleştirme kabarcıkları olarak görünebilir. İşlem genellikle kaşıntılı bir his ile ilişkilidir. Kabarcık tamamen oluştuktan sonra, basıncı boşaltın ve emme odasını dikkatlice çıkarın.Doğru şekilde indüklenen kabarcıklarda, epidermal tabaka cildin dermal tabakasından tamamen ayrılır ve sıvı ile dolu bir boşluk bırakır. Çevredeki cilt bölgesine yumuşak bir pansuman uygulayarak ve kabarcığın üzerine 15 mililitrelik plastik bir tüpten sert bir kapak yerleştirerek kabarcığı koruyun. Kapağı alerjik olmayan bir bantla ve ardından yumuşak, esnek bir bandajla sabitleyin.Gönüllüye koruyucu pansumanı gece boyunca tutması talimatını verin. Ertesi gün, pansumanı dikkatlice çıkarın ve kabarcıklı alanı sprey kullanarak dezenfekte edin. Blister içeriğini hasat etmek için 23 gauge iğneli 2 mililitrelik steril bir şırınga kullanın.İğneyi blister tavanın üst yan tarafına sokun ve sıvıyı yavaşça aspire edin. Boşluğun tabanına dokunmaktan kaçının, ancak bu örnekte olduğu gibi kabarcık hacmi düşük olabileceğinden tüm sıvıyı topladığınızdan emin olun. Çöken kabarcık iz bırakmadan iyileşir.Kabarcığın üzerine koruyucu bir pansuman ekleyin. Daha sonra blister sıvıyı steril bir tüpe aktarın. Bir masa üstü santrifüj kullanarak 600 G'de dört dakika aşağı çevirin.Sonra, süpernatanı hasat edin ve hücre peletini 500 mikrolitre hücre ortamında yeniden süspanse edin. Taze hücreler artık sayım ve daha fazla analiz için hazırdır. Emme blister hücreleri, akış sitometrisi gibi in vitro analizler için kullanılabilir.BCG aşılı gönüllülerle yapılan bu deneyde, hücre verimi blister başına 15.000 ila 200.000 hücre arasında değişmektedir. Burada, hücreleri tek bir emme kabarcığından izole ettik ve hücreleri in vitro olarak PPD ile uyardık, ardından boyama ve akış sitometrisi izledik. Karşılaştırma için, aynı PCG aşılı gönüllüden PBMC'ler üzerinde paralel bir analiz yaptık.Panellerde, TNF-alfa, interferon-gama ve IL2'nin hücreler arası üretimi için boyanmış CD4 pozitif T hücrelerinin popülasyonlarını görüyorsunuz. Bu gönüllüde, deriden izole edilen CD4 pozitif T hücrelerinin %30'undan fazlası antijene özgüydü. PBMC'lerde bu fraksiyon %1'den azdıAyrıca, blister hücrelerin bireysel sitokin profilleri, hem merkezi bellek T hücrelerini hem de efektör T hücrelerini temsil ediyordu, bu da bu yöntemin in vivo olarak üretilen uzun ömürlü bellek tepkilerini incelememize nasıl izin verdiğini gösteriyor.Burada, şekil A, emme kabarcıklarından elde edilen sıvının in vivo üretilen sitokinler için analiz edilebileceğini göstermektedir. Şekil B'de, mikobakteri tuberculosis varlığında dört gün boyunca emme kabarcıklarından elde edilen hücreleri kültürledik, bu da emme blister hücrelerinin interferon-gama ve TNF alfa ex vivo üretebildiğini gösterdi. Bu videoyu izledikten sonra, kutanöz antijen birikimini takiben emme kabarcıklarından hücrelerin nasıl indükleneceği ve hasat edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Bu gösteride, tüberküloz araştırmaları alanında özel öneme sahip bir antijen kullandık. Ancak, bu metodolojinin temel ilkeleri, adaptif bağışıklık alanlarında veya T hücresi hedefleme ajanlarını araştıran denemelerde kullanılabilir. Ayrıca, insan gönüllülerle çalışırken etik ve güvenliğin birinci öncelik olduğunu lütfen unutmayın.Ayrıca insan numuneleriyle çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve laboratuvarda her zaman güvenlik önlemlerine uyulması gerektiğini unutmayın.

a-suction-blister-protocol-to-study-human-t-cell-recall-responses

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

İnsan papillomaviri gibi lokalize enfeksiyonlara neden olan patojenlerin T-hücresi epitoplarının karakterizasyonu, dolaşımdaki T hücresi sayısının sınırlı olması nedeniyle zorludur. Nadir T hücrelerinin, çok az sayıdaki hücreden başlanarak izole edildiği ve karakterize edildiği bir yöntem açıklanmıştır.

Human Papillomavirüs Roman T hücre epitopları Karakterizasyonu için interferon-γ Enzim bağlı immünospot Assay Kullanımı

Biz potansiyel greft reddi yüksek riski olmadan nakli sonrası immünsüpresyonun sonlandırmaya karar için kullanılabilecek değerli bir tanı testi açıklar. Tahlil Gecikmeli Tip Aşırı duyarlılık ilkelerini kullanır ve alıcılar tarafından monte hem donör özel efektör ve düzenleyici immün yanıtın doğru bir değerlendirme sağlar.

Antijen Özgül Düzenleme için Trans-vivo Gecikmeli Tip Aşırı Duyarlılık Testi

Bu video, birincil insan T hücreleri ile desteklenen lipid çift katmanları (SLB) arasındaki immün sinaps oluşumunu incelemek için bir in vitro tekniği göstermektedir. T hücresi yüzey proteinleri, bir immün sinaps oluşturmak için SLB üzerinde hareketsiz hale getirilen ilgili ligandlarla etkileşime girer, ardından litik granüllerin sinapsa doğru hareketi izler, bu da floresan mikroskobu kullanılarak görselleştirilir.

Desteklenen Düzlemsel Lipid Çift Katmanları ile T Hücresi Etkileşimini İncelemek İçin Bir İn Vitro Teknik

Video, in vivo adjuvan kaynaklı sitotoksik T lenfosit veya CTL üretimini izlemek için immünolojik bir yöntemi göstermektedir. Bir fareye genetik olarak tasarlanmış, proliferatif boya lekeli donör CD8 + T lenfositleri önceden enjekte edilir. Ovalbüminin adjuvanlarla deri altı enjeksiyonu, hasat sonrası immün boyama ve akış sitometrisi yoluyla tanımlanan sitotoksik CD8 + T lenfositleri oluşturur.

Adjuvan Aracılı Sitotoksik T Lenfosit Oluşumunu İzlemek İçin İmmünolojik Bir Teknik

In vivo ayrıntılı olarak T hücresi tepkilerini izlemek için yeteneği, bağışıklık tepkisinin anlamamıza geliştirilmesi için önemlidir. Burada akış sitometresi ile eş zamanlı olarak&gt; 250 parametrelerini değerlendiren bir in vivo T hücresi tahlilinde floresan hedef diziler (STA) kullanımını tarif eder.

T hücre yanıtlarının Değerlendirme Floresan hedef Dizilerin Kullanımı<em&gt; In vivo</em

Bu iletişim kuralının amacı antijen spesifik bir fare modelinde bir hedef hücrenin öldürmek için hafiye-in vivo sağlamaktır.

Vivo Tahlil antijen spesifik T-hücre Cytolytic işlevi bir aşı modeli kullanılarak tespiti için

Burada bir standart immünolojik tekniği için bir uygulama mevcut (CFSE lekeli OT-Ben nükleer silahların yayılmasına karşı) hızla adjuvan-aracılı sitotoksik T lenfosit (CTL) üretimi izlemek amacıyla içinde vivo. Bu hızlı tahmini bir CTL kapasite hücre içi patojenlere karşı koruyucu aşıları aynı zamanda tedavi kanser aşıları gelişimi için yararlıdır.

Adjuvan'ın sitotoksik T lenfositler nesil yeteneklerini hızlı Vivo içinde değerlendirilmesi için aşı geliştirme

Burada tanıtılan Protokolü içinde vivo inflamatuar koşullar altında birincil insan lenfosit akciğer izleme kapasitesini karakterizasyonu sağlar. Alerjik iltihap bir fare modeli adoptively transfer edilen insan bağışıklık hücrelerinin pulmoner infiltrasyon görüntüsü ve kimyasal olarak temizlenen Akciğer doku ışık sayfalık Floresans mikroskobu tarafından sayılabilir.

Akciğer yolu bulabilen insan lenfosit içinde deneysel bir alerjik iltihap ışık sayfalık mikroskobu üzerinde dayalı, Vivo modeli görüntüleme gelişmiş

Burada, sitotoksisik T lenfosit (CTL) yanıt olarak bir model tümör antijeni için immundominance muayene sağlayan bir akış sitometri tabanlı in vivo öldürme tahlil tarif. Biz bu zarif tahlil mekanik çalışmalar için ve ilaç etkinliği test için istihdam olabilir nasıl örnekler sunuyoruz.

Tümör-spesifik CD8+ T hücre tepkiler Immunodominance çalışması Için In vivo sitotoksisite assays terzilik

Burada Boncuk Destekli Lipid Bilayers kullanılarak sentetik antijen sunan hücrelerin adım adım yeniden uzlaştırılması ve aktif T hücrelerinden sinaptik çıkışı sorgulamak için kullanımları için protokolü sunuyoruz.

T Hücreli İmmün Sinapsların Partikül Çıkışını İncelemek için Boncuk Destekli Lipid Bilayerlerin Hazırlanması

Çalışma, epikütan (EC) bağışıklama yoluyla farelerde bağışıklık tepkilerini modüle etmede cildin rolünü göstermektedir. Bir protein antijeni ile EC bağışıklaması, patojenle ilişkili moleküler paternlerle birleştirildiğinde temas aşırı duyarlılığında veya ters cilt kaynaklı baskılamada bağışıklık tepkilerini baskılayabilir. EC bağışıklaması, immünoterapiye etkili, iğnesiz bir yaklaşım olarak umut vaat etmektedir.

Epikütan İndüklenen İmmünomodülasyonun Murin Modeli

Öğrenin emme blister yöntemiyle insan derisinden antijen-spesifik T hücreleri ve sitokinleri toplama tekniğini. Bu yöntem aşı geliştirme ve adaptif bağışıklık çalışmalarında kullanılır.

İnsan T-hücre hatırlama yanıt Vivo içinde çalışmaya emme Blister iletişim kuralı

Daha fazla video keşfet