Name: Mezenkimal endotel geçiş büyüme faktörü β sinyal dönüşüm tarafından indüklenen moleküler Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-03T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Öğrenin TGF-β2 ile MS-1 endotel hücrelerinde EndMT indüksiyonu yöntemini. Bu protokol damar biyolojisinde mezenkimal geçiş mekanizmalarını ve mikroRNA fonksiyonlarını incelemek için güçlü bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Zea Borok ve Kohei Miyazono el yazması hazırlanmasında öneriler için teşekkür ederiz. H.I.S. ve M.H. Uehara Memorial Vakfı Araştırma Bursu tarafından desteklenir ve HIS Osamu Hayaishi Memorial bursu tarafından yurtdışında eğitim için desteklenir. Bu eser bir hibe Takeda Bilim Vakfı (A.S.) tarafından desteklenmiştir.

1. indüksiyon EndMT
<ol><li>MS-1 Standart kültür koşulları hücrelerde korumak ve confluency kaçının. MS-1 hücre bir kaynak Tablo reçetesiaçıklanmıştır. MS-1 hücreler için en az gerekli orta-α (MEM-α) % 10 fetal buzağı serum (FCS), 50 U/mL penisilin ve 50 μg/mL streptomisin ile kullanın.</li>
	<li>10 cm hücrelerdeyse yıkama MS-1 1 fosfat tamponlu tuz (PBS) x ile bulaşık ve tripsin 1.0 mL plaka ekleyin. 37 ° C'de 5 min için kuluçkaya</li>
	<li>Kültür ortamının 9 mL kullanarak hücre bağlantısını kesin. Hücre süspansiyon 15 mL tüp içinde toplamak.</li>
	<li>300-400 x g oda sıcaklığında 5 min için de hücre süspansiyon santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Dikkatle süpernatant kaldırmak ve hücre Pelet önceden ısıtılmış kültür medyada askıya alma.</li>
	<li>Trypan mavi çözüm ve standart bir hemasitometre veya bir otomatik hücre sayaç kullanarak canlı hücreleri hesaplama.</li>
	<li>0,5 cm2 uzun vadeli kültür için başına 103 hücre x, kaplamasız standart kültür plakalar üzerine plaka MS-1 hücreleri. Örneğin, bir 6 bir kuyu başına plaka 5.0 x 103 hücreleri de plaka kültür. FCS aynı konsantrasyonu da dahil olmak üzere aynı kültür ortamı kullanın. MS-1 hücrelerde, TGF-β EndMT FCS kullanımı ile uzun vadeli Kültür (en az 48-72 h) neden olmaktadır.</li>
	<li>TGF-B2 (bir son konsantrasyonu 1 ng/ml) ile endotel hücreleri 24 h sonra teşvik.</li>
	<li>Kültür hücreleri oksijen kuluçka (%5 CO2, 37 ° C). Hücreleri her gün morfolojik değişiklikler üzerinde netleme yaparken izlemek.</li>
	<li>Taze önceden ısıtılmış kültür TGF-β ile tedavisinde uzun süreli kültür 48 saat sonra TGF-B2 içeren medya ile ortamı değiştirin.</li>
	<li>Aşağı akım analizleri için devam edin. Genellikle, aktin reorganizasyon sonra 24 saat tedavi görülmektedir ve downregülasyon endotel işaretleri ve upregulation mezenkimal işaretlerinin gözlenen TGF-β ile tedavi 48-72 saat sonra.</li>
</ol>2. Immunocytochemical Analizi
<ol><li>MS-1 Standart kültür koşulları hücrelerde korumak.</li>
	<li>Plaka MS-1 hücreleri üzerine 4 kültür odası slaytlar 1.0 x 103 hücre başına iyi (1,7 cm2)'de de hücre. Slaytlar önceden jelatin ile kaplı bulunmaktadır. Kültür ortamı Yani başına kullanım 0.5-1.0 mL.</li>
	<li>TGF-B2 (bir son konsantrasyonu 1 ng/ml) ile endotel hücreleri 24 h sonra teşvik. EndMT ROCK katılımı analiz ederken, bir ROCK inhibitörü Y-27632 (10 mikron) 1 h önceden TGF-β tedavi için ekleyin. TGF-β sinyal inhibisyon etkisini değerlendirirken, TGF-β reseptör kinaz inhibitörleri kullanılabilir.</li>
	<li>Kültür hücreleri oksijen kuluçka (%5 CO2, 37 ° C). Aktin reorganizasyon MS-1 hücreler TGF-β ile tedavinin 24 saat sonra görülmektedir. Diğer değişiklikler tedavi 48-72 saat sonra belli olur. 72 h kültür için tedavi TGF-β ile 48 saat sonra TGF-β içeren taze medya ile ortamı değiştirin.</li>
	<li>
F-aktin boyama
	<ol>
<li>24 h TGF-β tedavi sonra medyayı çıkarın, 1 x PBS için oda sıcaklığında 20 dakika içinde %4 paraformaldehyde ile hücreleri tamir ve 1 x PBS hücrelerle durulayın.</li>
		<li>%0,2 ile Triton X-100 oda sıcaklığında 5 min için kuluçkaya.</li>
		<li>Hücreleri üç kez 1 x PBS ile yıkayın.</li>
		<li>Phalloidin-tetramethylrhodamine B isothiocyanate 150-fold seyreltilmiş Amanita phalloides dan ile kuluçkaya oda sıcaklığında 1 h için engelleme arabellek ile.</li>
		<li>Hücreleri üç kez 1 x PBS ile yıkayın.</li>
		<li>Oda sıcaklığında 5 min için siyanür nükleik asit bağlama boyar maddeler ile çekirdeği leke.</li>
		<li>Durulama slaytlar ve mount coverslips ortam takma slayt kullanarak bir slaytta Yüzükoyun yat.</li>
		<li>Confocal mikroskop gözlemlemek. 543 nm lazer ve bir emisyon filtresi 560-615 nm phalloidin floresan algılaması için kullanabilir. 633 nm lazer ve 650 uzun bir emisyon filtresi kullanmak nm nükleer boyama için. TGF-β ile tedavi kalın stres lifleri oluşumu gözlenen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
VE-cadherin ve α-SMA boyama
	<ol>
<li>72 h TGF-β tedavi sonra medyayı çıkarın, soğuk % 50 metanol ve % 50 aseton ile hücreleri tamir (0.5-1.0 mL iyi başına) 5 min için.</li>
		<li>Hücreleri üç kez 1 x PBS ile yıkayın (0.5-1.0 mL iyi başına).</li>
		<li>Gecede 4 ° C'de üreticinin tavsiye edilen konsantrasyon göre karanlıkta engelleme arabellekte birincil antikorlar ile kuluçkaya. Kullanım VE-cadherin monoklonal antikor (BV13, 1: 100 seyreltme) ve Cy3-Birleşik α-SMA monoklonal antikor (1A4, 1: 200 seyreltme)20.</li>
		<li>Hücreleri üç kez 1 x PBS ile yıkayın.</li>
		<li>Bir yeşil boya Birleşik ikincil antikor VE-cadherin antikor üreticinin tavsiye edilen konsantrasyon göre karanlık oda sıcaklığında 1 h için engelleme arabelleği için hücrelerle kuluçkaya.</li>
		<li>Hücreleri üç kez 1 x PBS ile yıkayın.</li>
		<li>Oda sıcaklığında 5 min için siyanür nükleik asit bağlama boyar maddeler ile çekirdeği leke.</li>
		<li>Durulama slaytlar ve mount coverslips ortam takma slayt kullanarak bir slaytta Yüzükoyun yat.</li>
		<li>Confocal mikroskop gözlemlemek. 543 nm lazer ve bir emisyon filtresi 560-615 nm α-SMA (Cy3) algılaması için kullanabilir. 488 nm lazer ve bir emisyon filtresi 505-550 nm VE-cadherin algılaması için kullanabilir. Genellikle, TGF-β tedavi ile tedavi VE-cadherin sinyalleri azaltmak ve α-SMA sinyalleri artış gözlendi.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. üç boyutlu kollajen jel daralma tahlil
<ol><li>Kültür MS-1 hücre olan/olmayan TGF-β kollajen jel daralma tahlil önce 72 h için gerçekleştirin.</li>
	<li>Türü hazırlamak ben kollajen jel buz üzerinde. Mix soğuk kollajen çözüm, 10 x konsantre MEM orta ve kollajen seyreltme arabellek içeren 0,05 N NaOH, %2,2 NaHCO3ve 200 mM HEPES pH 7.4 bir 8:1:1 oranı.</li>
	<li>Denetim veya endotel hücre TGF-β-tedavi süspansiyonlar (1.0 x 106 hücreler/200 μL) 200 mL ve kollajen jel çözüm 800 μl karıştırın. TGF-β için tedavi örnekleri, TGF-B2 ekleyin (1 ng/mL) hücre süspansiyon için.</li>
	<li>12-şey kültür plakaları her şey için 1.0 mL karışımı ekleyin ve 37 ° C'de kuluçka için 30-60 dk kuvvetlendirmek için.</li>
	<li>Gelatinization sonra MEM-%10 FCS, 50 U/mL penisilin ve 50 μg/mL streptomisin içeren jel float için α 1.0 mL yerleşimi. TGF-β için tedavi örnekleri, TGF-B2 ekleyin (1 ng/mL) medya. Not: TGF-β tedavi örnekleri için TGF-β jel ve Kültür medya için ekleyin.</li>
	<li>48 h 37 ° C'de kayan jelleri kuluçkaya.</li>
	<li>Jelleri alt plakaların bir tarayıcı kullanarak resimleri tarayın. Alternatif olarak, jeller üzerinde sabit bir mesafede bir dijital kamera ile jelleri görüntülerini kaydedin.</li>
	<li>ImageJ kullanarak piksel sayısı temelinde jel yüzey alanı ölçmek. Serbest bir seçim veya ilgili seçim araçlarını kullanarak jel veya jel kullanarak seçin "görüntü | Ayarlamak | Renk eşiği"aracı ve jel kullanarak alan belirlemek" Analyze | Ölçü birimi"komutu.</li>
</ol>4. miRNA faaliyetleri kilitli nükleik asit tabanlı miRNA inhibitörleri tarafından inhibisyonu
<ol><li>MS-1 Standart kültür koşulları hücrelerde korumak.</li>
	<li>Kilitli nükleik asit (LNA) miRNA inhibitörleri, sentetik miRNA Dubleks veya üreticinin yönerge göre lipofection reaktifler kullanarak çift (20-50 nM) transfect. Ayrıntılar ve LNA miRNA inhibitörleri, sentetik miRNA dubleks ve çift kaynakları bizim önceki raporlar26,27tarif edildi. MS-1 hücrelerde de LNA miRNA inhibitörleri, sentetik miRNA Dubleks veya çift giriş için üreticinin eğitimi temel standart transfection yordamlar çalışır.</li>
	<li>Sonra 16-48 h, TGF-B2 (bir son konsantrasyonu 1 ng/ml) ile endotel hücreleri uyarmak.</li>
	<li>RNA ifade analizi (kantitatif RT-PCR ve RNA-sıralama (RNA-seq) analizleri), immunocytochemical analiz ve muhabir tahlil de dahil olmak üzere çeşitli aşağı akım analizleri için devam edin. Aşağı akım analizleri bizim önceki raporlar20,26,27tarif edilmistir.</li>
</ol>

<ol><li>Sanchez-Duffhues, G., Garcia de Vinuesa, A., Ten Dijke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial-to-mesenchymal+transition+in+cardiovascular+diseases%3A+Developmental+signaling+pathways+gone+awry%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Endothelial-to-mesenchymal transition in cardiovascular diseases: Developmental signaling pathways gone awry.</a> Developmental Dynamics. , (2017).</li>
<li>Markwald, R. R., Fitzharris, T. P., Smith, W. N. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0012160675903218">Structural analysis of endocardial cytodifferentiation.</a> Developmental Biology. 42 (1), 160-180 (1975).</li>
<li>Eisenberg, L. M., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+atrioventricular+valvuloseptal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of atrioventricular valvuloseptal morphogenesis.</a> Circulation Research. 77 (1), 1-6 (1995).</li>
<li>Chen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+are+progenitors+of+cardiac+pericytes+and+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells are progenitors of cardiac pericytes and vascular smooth muscle cells.</a> Nature Communications. 7, 12422(2016).</li>
<li>DeRuiter, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+endothelial+cells+transdifferentiate+into+mesenchymal+cells+expressing+smooth+muscle+actins+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Embryonic endothelial cells transdifferentiate into mesenchymal cells expressing smooth muscle actins in vivo and in vitro.</a> Circulation Research. 80 (4), 444-451 (1997).</li>
<li>Arciniegas, E., Neves, C. Y., Carrillo, L. M., Zambrano, E. A., Ramirez, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial-mesenchymal+transition+occurs+during+embryonic+pulmonary+artery+development%5BTitle%5D)+AND+%22Endothelium%22%5BJournal%5D)">Endothelial-mesenchymal transition occurs during embryonic pulmonary artery development.</a> Endothelium. 12 (4), 193-200 (2005).</li>
<li>Welch-Reardon, K. M., Wu, N., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+partial+endothelial-mesenchymal+transitions+in+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">A role for partial endothelial-mesenchymal transitions in angiogenesis.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 35 (2), 303-308 (2015).</li>
<li>Zeisberg, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial-to-mesenchymal+transition+contributes+to+cardiac+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endothelial-to-mesenchymal transition contributes to cardiac fibrosis.</a> Nature Medicine. 13 (8), 952-961 (2007).</li>
<li>Chen, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial-to-mesenchymal+transition+drives+atherosclerosis+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Endothelial-to-mesenchymal transition drives atherosclerosis progression.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (12), 4514-4528 (2015).</li>
<li>Bostrom, K. I., Yao, J., Guihard, P. J., Blazquez-Medela, A. M., Yao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial-mesenchymal+transition+in+atherosclerotic+lesion+calcification%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Endothelial-mesenchymal transition in atherosclerotic lesion calcification.</a> Atherosclerosis. , 124-127 (2016).</li>
<li>Qiao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+fate+mapping+in+mice+with+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial fate mapping in mice with pulmonary hypertension.</a> Circulation. 129 (6), 692-703 (2014).</li>
<li>Ranchoux, B., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25593290">Endothelial-to-mesenchymal transition in pulmonary hypertension.</a> Circulation. 131 (11), 1006-1018 (2015).</li>
<li>Maddaluno, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EndMT+contributes+to+the+onset+and+progression+of+cerebral+cavernous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">EndMT contributes to the onset and progression of cerebral cavernous malformations.</a> Nature. 498 (7455), 492-496 (2013).</li>
<li>Krenning, G., Zeisberg, E. M., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+of+fibroblasts+and+mechanism+of+cardiac+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">The origin of fibroblasts and mechanism of cardiac fibrosis.</a> Journal of Cell Physiology. 225 (3), 631-637 (2010).</li>
<li>Cooley, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta+signaling+mediates+endothelial-to-mesenchymal+transition+%28EndMT%29+during+vein+graft+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">TGF-beta signaling mediates endothelial-to-mesenchymal transition (EndMT) during vein graft remodeling.</a> Science Translational Medicine. 6 (227), 227ra234(2014).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transforming+Growth+Factor-beta1+Induces+Endothelial-to-Mesenchymal+Transition+via+Akt+Signaling+Pathway+in+Renal+Transplant+Recipients+with+Chronic+Allograft+Dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Transforming Growth Factor-beta1 Induces Endothelial-to-Mesenchymal Transition via Akt Signaling Pathway in Renal Transplant Recipients with Chronic Allograft Dysfunction.</a> Annals of Transplantation. 21, 775-783 (2016).</li>
<li>Xu-Dubois, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+of+Endothelial-to-Mesenchymal+Transition%3A+Evidence+for+Antibody-Endothelium+Interaction+during+Antibody-Mediated+Rejection+in+Kidney+Recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Markers of Endothelial-to-Mesenchymal Transition: Evidence for Antibody-Endothelium Interaction during Antibody-Mediated Rejection in Kidney Recipients.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 27 (1), 324-332 (2016).</li>
<li>Zeisberg, E. M., Potenta, S., Xie, L., Zeisberg, M., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+of+endothelial+to+mesenchymal+transition+as+a+source+for+carcinoma-associated+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Discovery of endothelial to mesenchymal transition as a source for carcinoma-associated fibroblasts.</a> Cancer Research. 67 (21), 10123-10128 (2007).</li>
<li>Pardali, E., Sanchez-Duffhues, G., Gomez-Puerto, M. C., Ten Dijke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta-Induced+Endothelial-Mesenchymal+Transition+in+Fibrotic+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">TGF-beta-Induced Endothelial-Mesenchymal Transition in Fibrotic Diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (10), (2017).</li>
<li>Mihira, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta-induced+mesenchymal+transition+of+MS-1+endothelial+cells+requires+Smad-dependent+cooperative+activation+of+Rho+signals+and+MRTF-A%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">TGF-beta-induced mesenchymal transition of MS-1 endothelial cells requires Smad-dependent cooperative activation of Rho signals and MRTF-A.</a> Journal of Biochemistry. 151 (2), 145-156 (2012).</li>
<li>Hashimoto, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial-mesenchymal+transition+in+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Endothelial-mesenchymal transition in bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 43 (2), 161-172 (2010).</li>
<li>Suzuki, H. I., Miyazono, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+microRNA+biogenesis%3A+crosstalk+between+p53+network+and+microRNA+processing+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Medicine+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Dynamics of microRNA biogenesis: crosstalk between p53 network and microRNA processing pathway.</a> Journal of Molecular Medicine (Berl). 88 (11), 1085-1094 (2010).</li>
<li>Suzuki, H. I., Miyazono, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+complexity+of+microRNA+generation+cascades%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Emerging complexity of microRNA generation cascades.</a> Journal of Biochemistry. 149 (1), 15-25 (2011).</li>
<li>Nicoloso, M. S., Spizzo, R., Shimizu, M., Rossi, S., Calin, G. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19262572">MicroRNAs--the micro steering wheel of tumour metastases.</a> Nature Reviews Cancer. 9 (4), 293-302 (2009).</li>
<li>Lagendijk, A. K., Goumans, M. J., Burkhard, S. B., Bakkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-23+restricts+cardiac+valve+formation+by+inhibiting+Has2+and+extracellular+hyaluronic+acid+production%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-23 restricts cardiac valve formation by inhibiting Has2 and extracellular hyaluronic acid production.</a> Circulation Research. 109 (6), 649-657 (2011).</li>
<li>Katsura, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-31+is+a+positive+modulator+of+endothelial-mesenchymal+transition+and+associated+secretory+phenotype+induced+by+TGF-beta%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cells%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-31 is a positive modulator of endothelial-mesenchymal transition and associated secretory phenotype induced by TGF-beta.</a> Genes Cells. 21 (1), 99-116 (2016).</li>
<li>Suzuki, H. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+TGF-beta-mediated+endothelial-mesenchymal+transition+by+microRNA-27%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Regulation of TGF-beta-mediated endothelial-mesenchymal transition by microRNA-27.</a> Journal of Biochemistry. 161 (5), 417-420 (2017).</li>
<li>Camenisch, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+and+distinct+TGFbeta+ligand+requirements+during+mouse+and+avian+endocardial+cushion+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Temporal and distinct TGFbeta ligand requirements during mouse and avian endocardial cushion morphogenesis.</a> Developmental Biology. 248 (1), 170-181 (2002).</li>
<li>Krenning, G., Moonen, J. R., van Luyn, M. J., Harmsen, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+cells+for+use+in+vascular+tissue+engineering+obtained+by+endothelial-to-mesenchymal+transdifferentiation+%28EnMT%29+on+collagen+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle cells for use in vascular tissue engineering obtained by endothelial-to-mesenchymal transdifferentiation (EnMT) on collagen matrices.</a> Biomaterials. 29 (27), 3703-3711 (2008).</li>
<li>Medici, D., Potenta, S., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transforming+growth+factor-beta2+promotes+Snail-mediated+endothelial-mesenchymal+transition+through+convergence+of+Smad-dependent+and+Smad-independent+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">Transforming growth factor-beta2 promotes Snail-mediated endothelial-mesenchymal transition through convergence of Smad-dependent and Smad-independent signalling.</a> Biochemical Journal. 437 (3), 515-520 (2011).</li>
<li>Krizbai, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial-mesenchymal+transition+of+brain+endothelial+cells%3A+possible+role+during+metastatic+extravasation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Endothelial-mesenchymal transition of brain endothelial cells: possible role during metastatic extravasation.</a> PLoS One. 10 (3), e0119655(2015).</li>
<li>Arciniegas, E., Sutton, A. B., Allen, T. D., Schor, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transforming+growth+factor+beta+1+promotes+the+differentiation+of+endothelial+cells+into+smooth+muscle-like+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Transforming growth factor beta 1 promotes the differentiation of endothelial cells into smooth muscle-like cells in vitro.</a> Journal of Cell Science. 103 (Pt 2), 521-529 (1992).</li>
<li>Deissler, H., Deissler, H., Lang, G. K., Lang, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGFbeta+induces+transdifferentiation+of+iBREC+to+alphaSMA-expressing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">TGFbeta induces transdifferentiation of iBREC to alphaSMA-expressing cells.</a> International Journal of Molecular Medicine. 18 (4), 577-582 (2006).</li>
<li>Paranya, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aortic+valve+endothelial+cells+undergo+transforming+growth+factor-beta-mediated+and+non-transforming+growth+factor-beta-mediated+transdifferentiation+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Aortic valve endothelial cells undergo transforming growth factor-beta-mediated and non-transforming growth factor-beta-mediated transdifferentiation in vitro.</a> American Journal of Pathology. 159 (4), 1335-1343 (2001).</li>
<li>Maleszewska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1beta+and+TGFbeta2+synergistically+induce+endothelial+to+mesenchymal+transition+in+an+NFkappaB-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">IL-1beta and TGFbeta2 synergistically induce endothelial to mesenchymal transition in an NFkappaB-dependent manner.</a> Immunobiology. 218 (4), 443-454 (2013).</li>
<li>Ubil, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal-endothelial+transition+contributes+to+cardiac+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal-endothelial transition contributes to cardiac neovascularization.</a> Nature. 514 (7524), 585-590 (2014).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+balance+of+aberrant+Rasal1+promoter+methylation+and+hydroxymethylation+regulates+cardiac+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Research%22%5BJournal%5D)">Epigenetic balance of aberrant Rasal1 promoter methylation and hydroxymethylation regulates cardiac fibrosis.</a> Cardiovasc Research. 105 (3), 279-291 (2015).</li>
<li>Xiao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Endothelial+Cells+with+Distinct+Patterns+of+TGFbeta-Driven+Endothelial-to-Mesenchymal+Transition%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Tumor Endothelial Cells with Distinct Patterns of TGFbeta-Driven Endothelial-to-Mesenchymal Transition.</a> Cancer Research. 75 (7), 1244-1254 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

TGF-β yalnız EndMT bu kısa dönem21' ikna etmek başarısız iken 24 h için etkin Ras ve TGF-β tedavi EndMT MS-1 hücrelerdeki indüklenen bildirilmiştir. Sürekli olarak, TGF-β önemli ölçüde EndMT sonra uzun tedavi (48-72 h) MS-1 hücreleri20dakika sonra indüklenen görülmektedir. Sonra uzun süreli tedavi ile TGF-β (2-6 gün) insan göbek gibi çeşitli endotel hücrelerinde damar endotel hücreleri (HUVEC), insan kutanöz mikrovasküler endotel hücreleri (HCMEC), insan koroner endotel hüc...

Mezenkimal endotel geçiş (EndMT) tarafından fibroblast benzeri mezenkimal hücre1' kaynaklanan moleküler değişiklikler çeşitli farklı endotel hücre uğrar işlemidir. EndMT başlangıçta bir endotel hücre dönüştürme sırasında kalp2,3gelişimi olarak nitelendirildi. Erken kalp geliştirme, bir iç endokard ve bir dış Miyokardiyum kalbini tüp oluşur. Bu iki kat hücre dışı matriks kardiyak jöle adı verilen bir tabaka tarafından ayrılır. Endotel hücre işaretleri elde, embriyonik endocardial hücreleri mezenkimal hücrelerin içine transit, altta yatan kalp jöle istila ve kardiyak minderler, atriyoventriküler kapaklar ve septum için temel sağlayan oluşumu teşvik ve Semilunar kapaklar. Ayrıca, EndMT kaynaklar perisitlerden ve vasküler düz kas hücreleri embriyonik diğer damar sistemleri Koroner damarları, abdominal aort ve pulmoner arter4,5,6dahil olarak öne sürülmüştür. Buna ek olarak, EndMT fizyolojik anjiogenik7çimlenme karıştığı.
Kanıt biriken EndMT birden fazla kalp-damar hastalıkları ve diğer hastalıklar1,8' de ilgilenmektedir önerdi. EndMT ilişkili koşullar vasküler kalsifikasyon, ateroskleroz, pulmoner arteriyel hipertansiyon, derin malformasyon, organ fibrozis, ven greft remodeling, homogreft disfonksiyon böbrek nakli ve kanser8'yer, 9,10,11,12,13,14,15,16,17, 18. son raporunda açıklanan birkaç moleküler EndMT işaretleri böbrek nakli17böbrek nakli işlev bozukluğu tanısı ve prognoz tahmini için bir araç olabilir. Kardiyak fibrozis de dahil olmak üzere birçok hastalığı koşulları iyileştirmek için modülasyon EndMT ilgili hücresel sinyal yollar gösterilmiştir ve damar grefti hayvan remodeling modelleri8,15. Bu nedenle, mekanizmaları anlama temel EndMT EndMT hedefleme tanı ve tedavi stratejileri geliştirmek önemlidir.
EndMT hücre-hücre kavşaklar, göçmen potansiyel artış, VE-cadherin gibi özel endotel genlerin downregülasyon ve α-düz kas aktin (α-SMA) dahil olmak üzere mezenkimal genlerin upregulation kaybı ile karakterizedir. Ayrıca, EndMT ve mezenkimal epitel geçiş (EMT), epitel hücreleri dönüştürür mezenkimal hücreler için benzer bir süreç gelişmesine katkıda bulunabilir çeşitli hücre dışı matriks bileşenlerinin değişmiş üretim ile ilişkili olan doku fibrozu8,19.
Son zamanlarda, EndMT birkaç vitro çalışmalar EndMT15,20moleküler mekanizmaları ayrıntılarını aydınlatılmamıştır. EndMT dönüştürme büyüme faktörü (TGF) de dahil olmak üzere çeşitli sinyal yolları tarafından indüklenen-β, Wnt ve çentik1. Bunlar arasında TGF-β EMT ve EndMT indüksiyon çok önemli rol oynar. Kısa maruz kalma yetersiz21gibi görünüyor iken EndMT içinde EndMT çeşitli endotel hücrelerinde sonuçlarında TGF-β maruz uzun. Biz burada EndMT indüksiyon, hangi mil SVEN 1 (MS-1) fare pankreas mikrovasküler endotel hücreleri TGF-β20uzun süreli maruz kaldıktan sonra EndMT vitro geçmesi için basit bir protokol nitelendirdi. Bu modelde, EndMT morfolojik değişiklikler, downregülasyon endotel işaretleri, upregulation mezenkimal işaretleri ve inflamatuar genler, hücre iskeleti de dahil olmak üzere, hallmark özelliklerini araştırmak için birden çok aşağı akım analizleri yapılabilir düzenlemeler ve kollajen jel kasılma.
MikroRNA (miRNAs) ~ 22 olan nt çeşitli mRNA hedefleri22,23posttranscriptional baskı doğrudan küçük düzenlemesinde. Tohum Serisi-aracılı hedef tanıma, miRNAs hedef genlerin yüzlerce bastırmak ve hücre farklılaşması, yayılması ve motilite gibi çeşitli hücresel fonksiyonları modüle. Bu da EMT ve EndMT düzenlemesine yönelik olgusu ve birkaç miRNAs EMT ve EndMT24,25düzenleyiciler bildirilmiştir. Bu derlemede sunulan EndMT modeli kolayca miRNAs rolleri EndMT içinde test etmek için miRNA modülasyon yordamlar ile kombine edilebilir. Mevcut İnceleme TGF-β-indüklenen EndMT MS-1 hücrelerdeki araştırmak için deneysel prosedürlerimiz özetler ve karşılaştırma EndMT indüksiyon TGF-β tarafından koşullarının diğer endotel hücrelerinde de içerir.

<table><tbody><tr><td>MS-1 hücreleri</td><td>Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu</td><td>CRL-2279</td><td></td></tr><tr><td>MEM-alfa</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>32571036</td><td></td></tr><tr><td>TGF-beta2</td><td>R& D</td><td>302-B2-002</td><td></td></tr><tr><td>4 kuyulu Lab-Tek II Hazneli Kaydırak</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>154526</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Y0503</td><td></td></tr><tr><td>Bir</td><td>nacalai tesque</td><td>03953-95</td><td></td></tr><tr><td>phalloidin-tetrametilrodamin B izotiyosiyanat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1951</td><td></td></tr><tr><td>TOTO-3 iyodür</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T3604</td><td></td></tr><tr><td>VE kaderin monoklonal antikoru (BV13)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14-1441-82</td><td></td></tr><tr><td>alfa-SMA Cy3 monoklonal antikor (1A4)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>C6198</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 keçi anti-fare IgG (H + L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001</td><td></td></tr><tr><td>Kapak kayma</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>174934</td><td></td></tr><tr><td>Kollajen çözeltisi</td><td>Nitta jelatin Inc.</td><td>Cellmatrix I-P</td><td></td></tr><tr><td>Kollajen seyreltme tamponu</td><td>Nitta jelatin, Inc.</td><td>Cellmatrix I-P</td><td></td></tr><tr><td>LNA miRNA inhibitörü</td><td>EXIQON&nbsp;</td><td>miRCURY LNAmicroRNA Güç İnhibitörü (Negatif Kontrol B ve hedef miRNA)</td><td></td></tr><tr><td>sentetik miRNA dubleks</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>miScript miRNA Taklit</td><td></td></tr><tr><td>Lipofektamin RNAiMAX</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13778030</td><td></td></tr><tr><td>Lipofektamin 2000</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>11668027</td><td></td></tr></tbody></table>

mezenkimal endotel geçiş büyüme faktörü β sinyal dönüşüm tarafından indüklenen moleküler analizi

Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-&#946; Signaling

Endotel hücrelerinin fenotipik plastisite kardiyovasküler sistem geliştirme, kalp-damar hastalıkları ve organ fibrozis ile ilişkili çeşitli koşullar altında yatan. Bu koşullar içinde farklılaştırılmış endotel hücreleri gibi mezenkimal fenotipleri elde etmek. Bu işlem mezenkimal endotel geçiş (EndMT) adı verilir ve downregülasyon endotel işaretleri, upregulation mezenkimal işaretleri ve morfolojik değişiklikler ile karakterizedir. EndMT dönüştürme büyüme faktörü (TGF) de dahil olmak üzere birkaç sinyal yolları tarafından indüklenen-β, Wnt ve çentik ve gastrulasyon, doku fibrozu, epitelyal ve mezenkimal geçiş (EMT) önemli benzer moleküler mekanizmaları tarafından düzenlenir ve kanser metastaz. EndMT mekanizmaları anlama EndMT hedefleme tanı ve tedavi edici yaklaşımlar geliştirmek önemlidir. EndMT vitro sağlam indüksiyon ortak gen ifade imzalar karakterize druggable moleküler mekanizmaları tanımlayıp EndMT modülatörler için ekran yararlıdır. Burada, EndMT indüksiyon için bir vitro yöntemi açıklanmaktadır. MS-1 fare pankreas mikrovasküler endotel hücreler TGF-β uzun süre maruz kaldıktan sonra EndMT geçmesi ve upregulation mezenkimal işaretleri ve morfolojik değişiklikler yanı sıra birden fazla inflamatuar kemokinler ve sitokinler indüksiyon gösterir. MikroRNA (miRNA) modülasyon analizi için yöntemler de yer almaktadır. Bu yöntemleri EndMT ve miRNAs EndMT için katkısını temel mekanizmaları araştırmak için bir platform sağlar.

TGF-β çeşitli endotel hücrelerinde EndMT güçlü bir uyarıcı olduğunu. TGF-β MS-1 hücrelerdeki ile 24 h tedaviden sonra F-aktin için boyama aktin stres lifleri (Şekil 1A)20düzenlenmesi gösterir. Önarıtma ROCK inhibitörü Y-27632 ile aktin yeniden yapılanma20indüksiyon engeller. MS-1 endotel hücreleri mezenkimal seklinde morfoloji TGF-β tedavi (Şekil 1B) üzerine klasik bir Arnavut kaldı...

Hücresel sinyal yolları içinde EndMT ilgili soruşturma için yararlı olan endotel mezenkimal geçiş (EndMT), vitro indüksiyon için bir protokol açıklanmıştır. Bu deneysel modelinde, TGF-β MS-1 endotel hücreleri ile tedavi tarafından EndMT indüklenen.

Mezenkimal endotel geçiş büyüme faktörü β sinyal dönüşüm tarafından indüklenen moleküler Analizi

Phenotypic plasticity of endothelial cells underlies cardiovascular system development, cardiovascular diseases, and various conditions associated with ...

Bu yöntem, kanser de dahil olmak üzere çeşitli patolojik durumlarda endotel plastisite mekanizmaları gibi vasküler ve kanser biyolojisi alanlarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, in vitro EndMT'nin sağlam indüksiyonunun, TGF-in MS-1 endotel hücreleri ile tedavi edilerek gerçekleştirilmesidir. İlk olarak, MS-1 hücrelerini standart kültür koşullarında büyütün ve kültürün birleşmesini önleyin.Daha sonra, 10 cm'lik bir tabakta, MS-1 hücrelerini 1x fosfat tamponlu tuzlu su ile yıkayın. Daha sonra plakaya 1 mL tripsin ekleyin ve plakayı 37 santigrat derecede beş dakika inkübe edin. Daha sonra, ayrılma için tripsinli hücrelere 9 mL kültür ortamı ekleyin.Daha sonra tripsinizli hücre süspansiyonunu 15 mL'lik bir tüpte toplayın. Hücre süspansiyonunu oda sıcaklığında beş dakika boyunca 300 ila 400 x G'de santrifüjleyin. Ardından, canlı hücrelerin sayısını saymak için otomatik bir hücre sayacı kullanın.Daha sonra MS-1 hücrelerini uzun süreli kültür için kaplanmamış standart kültür plakaları üzerine yerleştirin. 24 saat sonra, endotel hücrelerini mililitre TGF-2 başına 1 ng'lik bir nihai konsantrasyonla uyarın. Daha sonra kültür plakasını 37 santig

molecular-analysis-endothelial-mesenchymal-transition-induced

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Doğrudan bir yöntem, hücre tiplerinde çeşitli mezenkimal geçiş (EMT) epitel indüklenmesi için tarif edilmektedir. Immünositokimya EMT eyalette hücrelerin analiz yöntemleri dahildir.

Mezenkimal Geçiş indüksiyon ve Epitel Analizi

Alternatif ekleme düzenlemesinin, çeşitli fizyolojik ve patolojik süreçlerde önemli bir hücresel program olan epitelyal-mezenkimal geçişe (EMT) katkıda bulunduğu gösterilmiştir. Burada, EMT sırasında alternatif eklemenin tespiti için indüklenebilir bir EMT modeli kullanan bir yöntemi açıklıyoruz.

Epitel-Mezenkimal Geçiş sırasında alternatif birleştirme Algılama

Burada, epitelyal-mezenkimal geçiş geçiren mezenkimal hücrelerde kasılma fonksiyonunu değerlendirmek için bir jel kasılma testinin geliştirilmesini ve uygulanmasını açıklıyoruz.

Bir Gelişimi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Deney Mezenkimal Hücreleri Uyguladığımız Epitel-Mezenkimal Geçiş kasılma Fonksiyonu değerlendirin

Bu el yazması, kontrollü bir ortamda endotel hücre tüpü oluşumunu kullanarak belirli bir bileşiğin veya durumun anjiyogenez üzerindeki etkilerini ölçmek için bir tüp oluşturma testini açıklar.

Stratejik Endotel Hücre Tüp Oluşumu Testi: Azaltılmış Ekstrasellüler Matrix Ekstrasellüler Matrix ve Büyüme Faktörü Karşılaştırılması

Biz burada mikroRNA-200 aile üyeleri ve grainyhead benzeri 2 (GRHL2) kombine ektopik ifadesine dayalı sarkom hücrelerinde mezenkimal-epitel geçişler (MET) uyarılması için bir hücre kültürü yöntemi sunuyoruz. Bu yöntem kanser agresiflik ve tedavileri hakkında fenotipik esneklik biyolojik etkilerini daha iyi anlamak için uygundur.

Sarkoma Hücreler Mezenkimal-Epitel Geçişler endüklenmesi

miRNA tedavi kanser ilerleme düzenlenmesinde önemli potansiyele sahip. Aşağıda gösterildiği analitik yaklaşımlar hücre döngüsü ve anjiogenezi durdurma içinde bir birleşimsel miRNA tedavi faaliyetinin tanımlaması için kullanılır.

Kombinatorik miRNA düzenleyen hücre döngüsü ve anjiogenezi tedavilere analizi

Bu sinyalleme yolunda yer alan protein ve gen ekspresyonlarını inceleyerek TGF-β sinyallerini ve TGF-β kaynaklı EMT'yi araştırmak için sistematik bir iş akışı tanımlıyoruz. Yöntemler arasında Batı şişkinliği, luciferaz muhabiri tahlili, qPCR ve immünoresans lekeleme saydır.

Meme Kanseri ve Normal Hücrelerde TGF-β Sinyalizasyon ve TGF-β kaynaklı Epitel-mezenkimal Geçişin Incelenmesi

Endotel hücrelerinde TGF-β2 kaynaklı EndMT'yi araştırmak için hücre morfolojisi değişikliklerini gözlemleyerek ve immünofluoresans boyama kullanarak EndMT ile ilgili belirteç değişiklikleri ifadesini inceleyerek yöntemleri açıklıyoruz. CRISPR/Cas9 gen düzenlemesi, TGF-β2 kaynaklı EndMT'deki rolünü araştırmak için gen kodlama Salyangozunu tükenmek için tanımlanmış ve kullanılmıştır.

TGF-β aracılı Endotelden Mezenkimal Geçişe (EndMT) ve CRISPR/Cas9 Gen Düzenleme Kullanarak EndMT Efektörlerinin Fonksiyonel Değerlendirmesi

Burada, patolojik ve fizyolojik sıvı kesme stres koşullarına maruz kalan endotel hücrelerinde yakınlık ligasyon testini (PLA) kullanarak birden fazla SMAD kompleksini aynı anda görselleştirmek ve analiz etmek için bir protokol oluşturuyoruz.

Yakınlık-Ligasyon-Tahlil Kullanarak Farklı Sıvı Kesme Stres Koşulları Altında TGFβ/BMP/SMAD Sinyalinin Görselleştirilmesi ve Nicelleştirilmesi

Bu çalışma, kritik aort darlığı veya hipoplastik sol kalp sendromu gibi konjenital kardiyak defektlerde görüldüğü gibi, endotelyal-mezenkimal geçişe bağlı fibrozun bir hayvan modelini sunar, bu da ayrıntılı histolojik doku değerlendirmesine, düzenleyici sinyal yollarının tanımlanmasına ve tedavi seçeneklerinin test edilmesine olanak tanır.

Endotelyal-mezenkimal geçiş çalışması için yenidoğan heterotopik sıçan kalp nakli modeli

Mevcut protokol, trofoblast hücreleri gibi hücrelerin, hücre dışı bazal membran matrisinin bir tabakası üzerinde kılcal benzeri yapılar halinde organize olduğu klasik in vitro anjiyogenez-tüp oluşum testinde oluşan tüp benzeri yapıların geri kazanılmasına izin verir. Geri kazanılan yapılar, çeşitli biyokimyasal analizler için RNA ve protein izolasyonu için kullanılır.

Farklılaşma İşaretleyici İfade Analizi için Anjiyogenez-Tüp Oluşum Testinden Trofoblast Hücre Geri Kazanımı

Öğrenin TGF-β2 ile MS-1 endotel hücrelerinde EndMT indüksiyonu yöntemini. Bu protokol damar biyolojisinde mezenkimal geçiş mekanizmalarını ve mikroRNA fonksiyonlarını incelemek için güçlü bir platform sunar.

Mezenkimal endotel geçiş büyüme faktörü β sinyal dönüşüm tarafından indüklenen moleküler Analizi

Daha fazla video keşfet