Aortopathy aort anevrizması β-aminopropionitrile-indüklenen ve diseksiyon, fare modeli nicel mikro-CT Analizi

Bu yöntem, vasküler biyoloji alanında, farklı vasküler hastalık hayvan modellerinde damar boyutunun nasıl etkilendiğini belirlemek gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, mikro-BT'nin hem büyük hem de küçük damarların hem in vivo hem de ex vivo olarak hassas bir şekilde ölçülebilen ayrıntılı görüntülerini mümkün kılmasıdır. BT analizinden 24 saat önce, numuneyi postmortem intrakardiyak profüzyona hazırlamak için cerrahi prosedürleri gerçekleştirin.

Anestezi için% 3 izofluran kullanın ve kullanımda kömür temizleyici olduğundan emin olun. Daha sonra, anesteziyi bir yüz maskesinden yüzde iki ila 2.5 izofluran ile koruyun, ayrıca dakikada bir litre oksijen içeren bir çöpçüye de tutturulmuştur. Ameliyata başlamadan önce, pedal refleksi olup olmadığını kontrol etmek için ayak parmağınızı çimdikleyin.

Ardından, aletler vb. ile bir çalışma alanı oluşturun. Ardından, hayvanı sırt yaslığına yerleştirin ve uzuvları sabitleyin. Şimdi, makas kullanarak, kasık simfizi ile sternum arasındaki sternum üzerinden sternum ve yumuşak doku boyunca orta hat kesisi yapın.

Daha sonra, göğüs boşluğuna girmek için ksifoid işleminde diyaframda bir delik oluşturmak için makası kullanın. Ardından, ventral göğüs duvarının diyaframını iki taraflı olarak incelemek için makası kullanmaya devam edin. Sağ sternal sınırda kaburgaları sternumdan ayırmak için kostal kıkırdakları kesin.

Şimdi, ksifoid işleminin yakınındaki sternumun ucuna ince bir hemostatik kelepçe uygulayın ve kanama durdurucuyu farenin başının üzerine yerleştirilecek şekilde kraniyal olarak hareket ettirin. Ardından, kalp ve göğüs duvarı arasındaki herhangi bir eki keskin bir şekilde inceleyin. Hayvan hazırlığı sırasında hasar gören damarların sayısını sınırlayın, çünkü bu, kontrast maddenin kopmuş damarlardan sızmasına neden olacak, bu da tam bir doldurma için gereken hacmi değiştirecek ve son görüntülemeye artefaktlar getirecektir.

Şimdi, 27 gauge IV kateter iğnesini 10 mililitre heparinize PBS ile önceden yüklenmiş bir şırıngaya bağlayın ve tüm hava kabarcıklarını gidererek tüm boruları tamponla doldurun. Çizgilerden tüm baloncukların çıkarılması çok önemlidir. Ardından, heparin solüsyonunu ve kanı boşaltmak için hemen sağ ventrikülü veya inferior vena kava'yı kesin.

Devam etmek için, kelepçe tarafından stabilize edilen sol ventrikülü delmek için kanülü kullanın. Bir şırınga pompası kullanarak bolluğu dakikada iki mililitre sabit bir şekilde gerçekleştirin. Organlarda gözle görülür bir şekilde ağartma olmalıdır.

Birkaç dakika içinde damarın dolaşımı kandan arındırılmış olmalıdır. Ardından pompayı durdurun ve kateter hortumunu şırıngadan ayırın, ancak kateter iğnesini hareket ettirmeyin. Şimdi, kontrast madde çözeltisini beş mililitrelik alikotlara ayırın, kürleme maddesini ekleyin ve iyice karıştırın.

Daha sonra, karışımın beş mililitresini 10 mililitrelik bir şırıngaya yükleyin ve hayvanı dakikada iki mililitre sabit bir şekilde kontrast madde ile doldurun. İnfüzyonun, döküm maddesinin hayvandan çıktığını görme noktasını geçmeye devam etmesini sağlayın. Kontrast madde 20 dakika içinde sertleşir.

Sertleştikten sonra, ilgilenilen organları hasat edin ve% 10 nötr tamponlu formalin içinde sabitleyin. Daha sonra, numuneler mikro-CT taraması için kullanılmaz, tüm karkası düzeltin. Aksi takdirde, karkası metal bir tepsiye yerleştirin ve gece boyunca kürlenmesi için dört santigrat derecede bir buzdolabına koyun.

Ertesi gün, bir mikro-CT tarayıcı kullanarak her farenin x-ışını bilgisayarlı tomografi görüntülerini alın. Tarayıcı parametrelerini aşağıdaki gibi ayarlayın; 55 kilovoltluk bir x-ışını tüpü tepe voltajı, 150 mikroamperlik bir akım, 2.19'luk bir sistem büyütme faktörü ve iki CCD kamera piksel gruplama faktörü. Bu gruplama faktörü, 29 mikronluk etkili bir piksel boyutu verecektir.

Ardından, standart bir yaklaşım kullanarak anevrizmaları tanımlamak için görüntüleri analiz edin. Küçük eksen çapını üç konumun en geniş noktasında ölçün; aort arkı, inen torasik aort ve abdominal aort. İdeal olarak, biri kör olan iki gözlemci her görüntüyü analiz etmelidir.

Ölçümleri kullanarak, anevrizmaları, aort segmentlerinin referans çapın% 50'sinden daha büyük çaplara lokalize veya dağınık genişlemeleri olarak tanımlayın. Karışık geçmişe sahip ve 20 ila 30 haftalık 20 erkek yetişkin fare, BAPN tedavisi ile veya BAPN tedavisi olmadan analiz edildi. Her biri kurşun bazlı bir radyoopak silikon kauçuk ile dolduruldu.

BAPN ile tedavi edilen farelerde çıkan aortun ortalama çapı, tedavi edilmeyen yaş uyumlu kontrollerinkinden önemli ölçüde daha büyüktü. Anevrizma olduğu belirlenen farelerden alınan veri noktaları kırmızı renktedir. Buna karşılık, lizil oksidazın BAPN ile inhibisyonu, ortalama inen torasik üzerinde önemli bir etkiye sahip değildi ve bu tedavi abdominal aort çaplarını etkilemedi.

Anevrizma, tedavi edilmeyen grubun ortalama çapının 1.5 katı olarak tanımlandı. Tedavi bu tanıma göre anevrizmalarda önemli bir artışa yol açmaktadır. BAPN ile tedavi edilen farelerdeki anevrizmalar sadece aortta tanımlandı ve çoğunluğu torasik aortta tanımlandı.

Bu videoyu izledikten sonra, radyografik görüntüleme için damar sistemini nasıl çoğaltacağınızı iyi anlamış olmalısınız. Bir kez ustalaştıktan sonra, uygun şekilde yapılırsa bolluk ve görüntü analizi iki saat içinde yapılabilir. Bu prosedürü denerken, BT görüntüleme protokollerinin, bireysel deneylerin belirli amaçları için görüntü alımını optimize etmek için radyolojik personelin yardımıyla ayarlanabileceğini hatırlamak önemlidir.