Name: Embriyonik tavuk doku gelişimi çalışmaya Organotypic kültür yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Öğrenin embriyonik tavuk gözlerinin organotipik kültür yöntemiyle gelişimini in vitro ortamda nasıl çalışılır. Bu teknik, karmaşık gelişim yolaklarını ve doku etkileşimlerini araştırmak için etkili bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar protokol gelişiminde ön çalışmaları için Gregory Haller (Mount Saint Vincent Üniversitesi) teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar ayrıca onun teknik uzmanlık ve filme ve üretim el yazması ses/görüntü bölümü ile ilgili yardım için Nicholas Jones (Mount Saint Vincent Üniversitesi) teşekkür etmek istiyorum. Daniel Andrews MSVU ve Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi, Kanada (NSERC) yolu ile bir lisans öğrenci Araştırma Ödülü fon tarafından desteklenmiştir. Tamara A. Franz-Odendaal bir NSERC bulma Grant tarafından desteklenir.

Not: embriyo aşamaları için tablo hazırlama Hamburger ve Hamilton12 (HH) kullanmaktadır.
1. embriyo kuluçka
<ol><li>Steril, ısı kontrollü kuluçka 37 ° C ± 1 ° C ve ~ %40 Nem, döllenmiş tavuk yumurtası kuluçkaya.</li>
	<li>Yumurta 1 çevirmek her gün ve HH34 için kuluçkaya kurmalarına izin (8 gün sonrası döllenme).</li>
</ol>2. hazırlık ve sterilizasyon malzemeleri
<ol><li>12 embriyolar, distile su, % 0,85 piliç salin, 12 Cam pipetler, 1 kutu kağıt mendil, yarı gözenekli filtre kağıdı karelerinin 24 2.5 cm x 2,5 cm ve 24 2.5 cm x 2,5 cm kare çelik tel 1 L, 2 L mesh aşağıya doğru kavisli kenarlar ile basınçlı kap için. Malzemeler, sterilize etmek otoklav 121 ° c en az 15 dakika onları. Not: Malzemelerin ısıyla önceden yapılabilir.</li>
	<li>Kuluçka makinesi ile % 70 etanol yan, raflar ve kapı silerek sterilize. Place 2 plastik kaplar autoclaved içeren distile su içinde nem korumak için kuluçka makinesi. 37 ° C ± 1 ° C ve ~ %40 nem için kültür kuluçka prewarm. Kuluçka makinesi tamamen karanlık olduğundan emin olun; Kapıyı şeffaf ise, folyo ile kapak.</li>
	<li>100 mL besin orta ve 1 mL penisilin kültür kuluçka makinesine koyarak prewarm.</li>
	<li>Bir kağıt havlu ile çalışma alanı kapsayacak ve % 70 etanol ile püskürtülerek tezgah sterilize. Forseps, diseksiyon makası, jilet ve % 70 etanol plastik bir kaşıkla 2 çift benzer bir şekilde sterilize.</li>
	<li>Yer 12 steril 100 mm Petri yemekler ve 24 35 mm Steril Petri yemekler kullanmak için bankta. Bulaşıkları bir steril torba kadar kullanmak kalır emin olun.</li>
</ol>3. embriyo hazırlık
Not: Bu noktadan itibaren kültürler kirletici önlemek için koruyucu toz yüzünü maske takmak. Bir bakteri veya mantar enfeksiyonu kültür berbat olacak ve bunu hızlı bir şekilde kuluçka makinesi bütün kültürlerde yayılan bir risk olduğunu.
<ol><li>Çatlamak yumurta açın ve embriyo %0.85 piliç serum fizyolojik içeren bir 100 mm Petri kabına aktarın. Anatomik özellikleri göre embriyo Hamburger ve yönergeleri12 basamak Hamilton'da açıklanan ve embriyo onaylamak HH34 aşamasıdır.</li>
	<li>Boyun kesme ve steril bir jilet kullanarak orta hat, embriyo Başkanı bisect. Steril forseps kullanarak, beyin kaldırın. Gaga olduğu gibi bırakma.</li>
</ol>4. kültür Kur
<ol><li>35 mm Petri yemekler bir 100 mm Petri kabına içinde yer 2.</li>
	<li>Çelik tel örgü içinde her 35 mm Petri kabına yerleştirin.</li>
	<li>Forseps kullanarak, 1 bisected başkanları 2.5 cm x 2,5 cm yarı gözenekli filtre kağıt parçası için yukarı dönük olacak şekilde göz aktarabilirsiniz. Doku güvenli ve kapalı hafifçe eğerek kayma değil emin olun.</li>
	<li>Forseps kullanarak, dikkatlice göz doku ve filtre kağıdı 1 35 mm Petri yemekler, üst göz dokusuyla yükseltilmiş bir sahne oluşturma çelik tel örgü üstüne koyun.</li>
	<li>4.3 ve diğer yarısı kafa ile 4.4 numaralı adımları yineleyin.</li>
	<li>Filtre kağıdı düzeyine ulaşıncaya kadar steril cam pipet kullanarak dikkatle her 35 mm Petri kabına doğrudan besin orta ekleyin. Besin orta yarım baş daldırın değil.</li>
	<li>10.000 U/mL penisilin-streptomisin 50 µL her Petri kabına besin ortamda ekleyin.</li>
	<li>Doku kağıt küçük bir kare kat ve 100 mm içinde Petri kabına yerleştirin. Autoclaved distile suyla nemlendirin.</li>
	<li>Kültür çanak 4 gün için 37 ° C ± 1 ° C ve ~ %40 Nem, steril, karanlık kuluçka yerleştirin.</li>
	<li>Her embriyo için 3 ve 4 numaralı adımları yineleyin. Not: Embriyo sayısı belirli denemeyi bağlı olacaktır; burada, biz 12 embriyolar için protokol tanımlamak.</li>
</ol>5. kültür bakım
<ol><li>Bir kez günlük, taze, autoclaved distile su ile kuluçka plastik kaplar kontör.</li>
	<li>Günlük tüm kültürler için bakteriyel veya mantar enfeksiyonları kontrol. Bu parçalanmış veya orta rengi değişti kültürler bulaşmış. Bulaşmış bütün kültürler atmak.</li>
</ol>6. fiksasyon
<ol><li>Kültür, aşağıdaki tüm yemekler kuluçka makinesi kaldırabilirsiniz.</li>
	<li>Forseps bir çift kullanarak, doku gözyaşı için dikkat çekici filtre kağıdı--dan göz yavaşça çıkarın.</li>
	<li>Göz doku %4 paraformaldehyde 1 fosfat tamponlu tuz gecede 4 ° C'de x veya % 10 formalin gecede, oda sıcaklığında tarafsız tamponlanmış düzeltin.</li>
	<li>Doku 4 ° C'de 1 fosfat tamponlu tuz x saklayın.</li>
</ol>

<ol><li>Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18855894">Towards understanding the development of scleral ossicles in the chicken, Gallus gallus.</a> Developmental Dynamics. 237 (11), 3240-3251 (2008).</li>
<li>Scholey, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functions+of+motor+proteins+in+echinoderm+embryos%3A+an+argument+in+support+of+antibody+inhibition+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motility+and+the+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Functions of motor proteins in echinoderm embryos: an argument in support of antibody inhibition experiments.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 39 (4), 257-260 (1998).</li>
<li>Horakova, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+FGFR+inhibitors+on+chicken+limb+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Effect of FGFR inhibitors on chicken limb development.</a> Development, Growth & Differentiation. 56 (8), 555-572 (2014).</li>
<li>Gerlach, G. F., Morales, E. E., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbead+Implantation+in+the+Zebrafish+Embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo.</a> Journal of Visualized Experiments. (101), e52943(2015).</li>
<li>Luz-Madrigal, A., Grajales-Esquivel, E., Del Rio-Tsonis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+of+Embryonic+Chick+Eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Electroporation of Embryonic Chick Eyes.</a> Bio-protocol. 5 (12), e1498(2015).</li>
<li>Roach, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+organ+culture+of+embryonic+chick+femora%3A+a+system+for+investigating+bone+and+cartilage+formation+at+an+intermediate+level+of+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Long-term organ culture of embryonic chick femora: a system for investigating bone and cartilage formation at an intermediate level of organization.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 5 (1), 85-100 (1990).</li>
<li>Jung, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+inhibitory+action+of+BMPs+and+their+relationships+with+activators+in+feather+formation%3A+implications+for+periodic+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Local inhibitory action of BMPs and their relationships with activators in feather formation: implications for periodic patterning.</a> Developmental Biology. 196 (1), 11-23 (1998).</li>
<li>McKinnell, I. W., Turmaine, M., Patel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+Hedgehog+functions+by+localizing+the+region+of+proliferation+in+early+developing+feather+buds%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Sonic Hedgehog functions by localizing the region of proliferation in early developing feather buds.</a> Developmental Biology. 272 (1), 76-88 (2004).</li>
<li>Smith, E. L., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+take+on+an+old+story%3A+chick+limb+organ+culture+for+skeletal+niche+development+and+regenerative+medicine+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Cells+%26+Materials%22%5BJournal%5D)">A new take on an old story: chick limb organ culture for skeletal niche development and regenerative medicine evaluation.</a> European Cells & Materials. 26, 91-106 (2013).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Spermatogenesis+in+Explanted+Adult+Mouse+Testis+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In Vitro Spermatogenesis in Explanted Adult Mouse Testis Tissues.</a> PLoS One. 10 (6), e0130171(2015).</li>
<li>Ochoa-Villarreal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+cell+culture+strategies+for+the+production+of+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22BMB+Reports%22%5BJournal%5D)">Plant cell culture strategies for the production of natural products.</a> BMB Reports. 49 (3), 149-158 (2016).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li>
<li>Yu, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4380223/">The developmental biology of feather follicles.</a> The International Journal of Developmental Biology. 48 (0), 181-191 (2004).</li>
<li>Jabalee, J., Hillier, S., Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+investigation+of+cellular+dynamics+during+the+development+of+intramembranous+bones%3A+the+scleral+ossicles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">An investigation of cellular dynamics during the development of intramembranous bones: the scleral ossicles.</a> Journal of Anatomy. 223 (4), 311-320 (2013).</li>
<li>Trowell, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+culture+of+mature+organs+in+a+synthetic+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">The culture of mature organs in a synthetic medium.</a> Experimental Cell Research. 16 (1), 118-147 (1959).</li>
<li>Pinto, C. B., Hall, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+an+understanding+of+the+epithelial+requirement+for+osteogenesis+in+scleral+mesenchyme+of+the+embryonic+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Zoology%22%5BJournal%5D)">Toward an understanding of the epithelial requirement for osteogenesis in scleral mesenchyme of the embryonic chick.</a> Journal of Experimental Zoology. 259 (1), 92-108 (1991).</li>
<li>Mbiene, J. P., MacCallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> Journal of Comparative Neurology. 377 (3), 324-340 (1997).</li>
<li>Cloney, K., Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+ex-ovo+culturing+of+chick+embryos+to+advanced+stages+of+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Optimized ex-ovo culturing of chick embryos to advanced stages of development.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), e52129(2015).</li>
<li>Korn, M. J., Cramer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Windowing+chicken+eggs+for+developmental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Windowing chicken eggs for developmental studies.</a> Journal of Visualized Experiments. (8), e306(2007).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu iletişim kuralı bir tavuk gözünden embriyonik gün 8 (HH34) büyüme elde etmek için kurulan doku kültürü teknikleri kullanır vitro 4 gün için. Bu kılavuz kültür Yöntem aslında Trowell15tarafından tanımlanmıştır. Biz en iyi duruma getirilmiş bir protokol kullanan embriyonik tavuk göz15ayrı doku katmanları arasında endüktif sinyalleri çalışma için kılavuz ile yarı geçirgen bir zar olan Pinto ve Hall'ın 1991 çalışma16 . Bu yöntemi kullanarak, ...

Embriyonik tavuk (Gallus gallus) biyoloji alanında yaygın olarak kullanılan bir mükemmel model organizmadır. Kuluçka süresinin yaklaşık 21 gün olduğunu ve birçok yumurta aynı anda, hızlı ve verimli deneme yapma inkübe. Belki de en önemlisi, embriyo da kolaylıkla, yoğun çalışma temel gelişimsel süreçleri ve genler ve proteinler bu işlemler sürücü etkinleştirme yönetilebilir.
Embriyonik tavuk göz üzerinden farklı dokuların birçok diğer vücut sistemleri için benzer bir dizi etkileşim gelişir karmaşık bir organdır. Bu yöntem, gelişmiş gelişim aşamasında özellikle bu dokuların gelişimi çalışma sağlar. Örneğin, çok katmanlı retina sinir sisteminin gelişimi eğitim görenler için özel ilgi olabilir. Kornea, vitreal vücut, objektif, sklera ve göz kapakları gibi diğer göz dokuların çalışma alternatif yöntemleri araştırmacılar yararı vardır. Tavuk embriyonik göz de düz kemikleri, Intramembranous kemik indüksiyon ve ossifikasyon omurgalılar1çalışma için bir model olarak kullanılan scleral kemikçiklerdeki bir dizi içerir.
Şu anda, embriyonik geliştirme eğitim için kullanılan bir yöntem vardır. İnhibitör antikorlar veya diğer inhibitör molekülleri2,3, microinjections cerrahi olarak inhibitörü4' te batırılmış lastikteki implante ve adım5 tümleyici genler için kullanılabilir tüm yöntem vardır ya da bir embriyo ilgi proteinler. Benzer yöntemleri upregulate proteinler için kullanılır. Bu yöntemleri sınırlamaları değildir. Örneğin, kimyasallar embriyonik gelişim alter için kullanıldığında, embriyo üzerinde ölümcül etkileri değerlendirilecek gerekir ve bu uygulamanın, Beka sağlamak için düşük dozda yerelleştirilmiş sitelere yukarıda belirtilen yöntemlerden kısıtlar embriyo.
Vitro doku kültürü organizmalar geniş bir geliştirme eğitim için kullanılan ve bazı yukarıda belirtilen sınırlamaları bypass için kullanılabilir. Örneğin, femora6, tüy tomurcukları7,8ve bacaklarda9 tavuk tüm doku kültürü yöntemleri, fare10 ve kökleri testis ve köklerini bitkiler11olarak kullanarak incelenmiştir. Bu yöntemler bilim adamları yüksek derecede sıcaklık dalgalanma ve besin durumu değiştirme yeteneği gibi doku geliştirme üzerinde kontrol vermek. Bütün embriyo dokudan yalıtım da böylece düzenleme çalışmaları daha yüksek konsantrasyonlarda küresel ölçekte etkinleştirme kimyasalların ölümcül etkileri çok daha az duyarlı kolaylaştırır. Vitro kültürü bir diğer önemli avantajı doku'nın hücresel ortamı korunması olduğunu; dokuların düzenleme farklı doku türlerine9arasındaki etkileşimler çalışma edinerek nispeten değişmeden kalır. Böylece, deneysel açılır kapılar için ek kültür vitro değil vivo içinde veya ovo içinde modelleri mevcuttur yaklaşıyor.
Şu anda, kimyasallar kullanarak embriyonik tavuk göz gelişimi eğitimi özellikle meydan okuyor. Bir dizi extraembryonic membranlar lastikteki veya kimyasal uygulamak üzere embriyo, kapak; o zaten zor bir yöntem daha da zorlaştıran, büyüdükçe embriyo Ayrıca yumurta içinde çok aktif. Bu iletişim kuralı göz ve aynı zamanda göz içinde gelişim süreçlerini incelemek için yeni fırsatlar sağlarken bu engelleri ortadan kaldırarak onun çevre dokular kolay erişim sağlar. Bu iletişim kuralı embriyonik göz içinde scleral kemikçiklerdeki indüksiyon çalışmaya kurulmuştur.

<table><tbody><tr><td>35 mm hücre kültürü petri kapları</td><td>Corning</td><td>353001</td><td>kolay kavranan doku kültürü kabı, polistiren, pirojenik olmayan</td></tr><tr><td>100 mm hücre kültürü petri kapları</td><td>Corning</td><td>353003</td><td>doku kültürü kabı, polistiren, pirojenik olmayan</td></tr><tr><td>kağıt mendil</td><td>Kimtech</td><td>34155</td><td>Kimtech Science Marka Görev Silecekleri, karton başına 280</td></tr><tr><td>tel örgü</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>paslanmaz çelik tel örgü (ızgara boyutu 0,7 mm)</td></tr> <tr><td>tek kullanımlık cam pipetler</td><td>VWR</td><td>14673-010</td><td>Borosilikat cam tek kullanımlık 5 3/4 "</td></tr><tr><td>besin ortamı</td><td>Gibco</td><td>12591-038</td><td>Fitton-Jackson Modifikasyonu, [+] fenol kırmızısı (BGJB) ile L-glutamin</td></tr> <tr><td>penisilin-streptomisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4458</td><td>10000 birim / mL penisilin streptomisin çözeltisi stabilize</td></tr><tr><td>filtre kağıt</td><td>Whatman</td><td>1454 090</td><td>yarı gözenekli filtre kağıdı 90mm</td></tr><tr><td>döllenmiş tavuk yumurtası</td><td>Dalhousie Üniversitesi Ziraat Koleji</td><td>n/a</td><td>yerel çiftliklerden elde edilebilir</td></tr><tr><td>sodyum klorür (NaCl)</td><td>EMD</td><td>SX0420-3</td><td>sodyum klorür kristalleri, reaktif sınıfı</td></tr><tr><td>1 L cam şişe</td><td>VWR</td><td>89000-240</td><td>1 L pyrex otoklavlanabilir cam şişe</td></tr><tr><td>etanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP82011</td><td>%70 moleküler biyoloji sınıfı</td></tr><tr><td>tupperware kapları</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>mağazadan satın alındı ve EtOH tek kullanımlık tıraş bıçakları ile sterilize edildi</td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>55411-050</td><td>tek kenarlı endüstriyel tıraş bıçakları (cerrahi karbon çeliği)</td></tr><tr><td>plastik kaşıklar</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>mağazadan satın alındı ve EtOH</td></tr><tr><td>toz maskesi</td><td>3M</td><td>n/a ile sterilize edildi</td><td>3M 8500 Konfor Maskesi</td></tr><tr><td>paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>paraformaldehit, reaktif sınıfı, kristalin</td></tr><tr><td>nötr tamponlu formalin</td><td>Fisher Scientific</td><td>72210</td><td>%10 nötr tamponlu formalin</td></tr><tr><td>fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>10X fosfat tamponlu tuzlu su pH 7.4 (137mM NaCl, 2.5mM KCl, 4.3mM Na2HPO4, 1.4mM KH2PO 4)</td></tr><tr><td>15 ml şahin tüpleri</td><td>VWR</td><td>21008-216</td><td>önceden sterilize edilmiş santrifüj tüpleri</td></tr><tr><td>forseps</td><td>FST</td><td>n/a</td><td>ince forseps</td></tr><tr><td>civciv salin&nbsp;</td><td>n/a</td><td>n/a&nbsp;</td><td>% 0.85 NaCl</td></tr><tr><td>Teneke folyo</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>mağazadan satın alınan</td></tr><tr><td>kağıt havlu</td><td>n/a</td><td>n/a mağazadan</td><td>satın alındı</td></tr></tbody></table>

embriyonik tavuk doku gelişimi çalışmaya organotypic kültür yöntemi

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Embriyonik tavuk genellikle omurgalı geliştirme için bir güvenilir model organizma kullanılır. Onun erişilebilirlik ve kısa kuluçka dönemi yapar deneme için ideal. Şu anda, tavuk embriyo gelişimsel bu yollar çalışmanın inhibitörleri ve uyuşturucu yerelleştirilmiş sitelerde ve çeşitli yöntemler kullanarak düşük konsantrasyonlarda uygulayarak yapılır. Vitro doku kültürü, konak organizmanın aynı anda birçok fiziksel sınırlamalar mevcut embriyolar için duyarlılık gibi bütün embriyo ile çalışırken atlayarak sırasında ayrılmış dokuların çalışma sağlayan bir tekniktir ölümcül kimyasal yüksek dozda. Burada, kültür gelişimsel süreçleri ötesinde şu anda kurulan yöntemleri incelenmesi için yeni fırsatlar sunan embriyonik tavuk yarım baş vitro, kültür için protokol bir organotypic mevcut.

Bu yöntemi kullanarak, embriyonik tavuk gözün gelişimi (HH34) 8 günün vitro 4 gündür kültürlü. Dört gün içinde ovo gelişimi için HH38 karşılık gelir.
Bu kodlamayla Yöntem geliştirme tüy tomurcukları göz çevreleyen ve göz kapakları (Şekil 1B) destekler. Bu tüy tüy bud geliştirme kodlamayla döneminde başlatılan ovo içinde13 (Şekil...

Burada, embriyonik tavuk organları büyümeye Protokolü kültür bir organotypic mevcut tüp bebek. Bu yöntemi kullanarak, embriyonik tavuk doku gelişimi, kültür ortamı üzerinde kontrol yüksek derecede korunarak okudu.

Embriyonik tavuk doku gelişimi çalışmaya Organotypic kültür yöntemi

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Bu protokolün genel amacı, embriyodaki karmaşık gelişimsel yolların derinlemesine incelenmesini sağlamak için in vitro ortamda embriyonik tavuk gözlerine erişim sağlamaktır. Embriyonik tavukta, göz kapağı gelişimi, embriyo hareketi ve ekstra embriyonik dokuların büyümesi nedeniyle gözü incelemek genellikle zordur. İlaçlar ve inhibitörler gibi bileşikler de embriyo üzerinde öldürücü etkilere sahip olabilir ve bu bileşiklerin gen yollarını modüle etmek için kullanılmasını zorlaştırır.İn vitro doku kültüründeki gelişmeler, bilim adamlarının bu dokuları izole etmesine ve yukarıda belirtilen engellerin çoğunu ortadan kaldırmasına izin vermiştir. Protokolümüz, nöral retina ve retina pigmentli epitel gibi gelişim sırasında etkileşime girme potansiyeline sahip tüm dokular dahil olmak üzere gözü bir bütün olarak incelememize izin vermesi açısından avantajlıdır. İşlemden önce tüm solüsyonların ve ekipmanın steril olduğundan emin olmak için malzemeleri otoklavlayarak başlayın.Bunu yapmak için, iki litre damıtılmış su ve bir litre civciv salini, bir kutu mendil, yarı gözenekli filtre kağıdı, tel örgü, su kapları ve tek kullanımlık cam pipetlerle birlikte otoklavlayın. Kuluçka makinesi raflarını ve kapısını %70 etanol kullanarak iyice sterilize edin, ardından kapları otoklavlanmış, damıtılmış suyla doldurun ve kuluçka makinesini 37 santigrat dereceye ısıtın. Kuluçka makinesinde bir antibiyotik penisilin streptomisin tüpü ile birlikte besin ortamını önceden ısıtın.Çalışma alanına bir kağıt havlu serin ve %70 etanol ile sterilize edin. Tüm forseps ve makasları sterilize edin. Tavuk kafası otoklavlanmış civciv tuzlu su içindeyken, civciv kafasını orta hatta ikiye bölün ve her bir gözün etrafında bir miktar doku bırakın.Ekstra doku, gözün kültürde bir miktar gerginliği korumasına yardımcı olmanın yanı sıra, göz boyunca besin alımına yardımcı olacak ve gözün filtre kağıdından kaymasını önleyecektir. Bu dokular aynı zamanda daha sonraki analizlerde gözü yönlendirirken yer işaretleri olarak da işlev görür. Kültürü hazırlarken disseke edilmiş dokuyu oda sıcaklığındaki civciv tuzlu su içinde bırakın.Kültür kabını hazırlayın. İki adet 35 milimetrelik Petri kabını bir adet 100 milimetrelik Petri kabının içine yerleştirin. Her küçük tabağa bir tel örgü aşaması yerleştirin.Gözün kağıttan kaymamasını sağlamak için hafifçe eğerek, yarım kafayı gözle birlikte bir parça filtre kağıdına yerleştirin. Kağıt mendil ve filtre kağıdını tel örgü aşamasının üstündeki küçük Petri kabına aktarın. Aynı embriyonun diğer yarım başı ile tekrarlayın.İki küçük Petri kabının her birine kültür ortamı ekleyin. Ortamı kağıt mendil seviyesine getirin. Dokuyu ortama batırmayın.Bakteriyel enfeksiyonu önlemek için her tabaktaki besin ortamına 50 mikrolitre antibiyotik penisilin streptomisin stok çözeltisi ekleyin. Daha büyük Petri kabının iç kenarına katlanmış bir ince doku parçası yerleştirin ve damıtılmış suyla nemlendirin. Kültürü karanlık inkübatörde 37 santigrat derecede dört güne kadar inkübe edin.Kültürlemeyi takiben, dokuyu filtre kağıdından çıkarın ve% 4 paraformaldehit ile sabitleyin. İlk sütun, kültürün başlangıcındaki embriyonik civciv gözünü temsil eden bir HH34 gözünü göstermektedir. İkinci sütun, HH34'ten başlayarak dört gün boyunca kültürlenen embriyonik bir civciv gözünü göstermektedir.Üçüncü sütun, HH34'ün ötesinde dört günlük in-ovo gelişime karşılık gelen bir HH38 gözünü gösterir. A'dan F'ye kadar olan paneller boyanmazken, G'den I'ye kadar olan paneller alkalin fosfataz enzimi için boyanır. En üst sıra, A'dan C'ye kadar olan paneller, tüy tomurcuklarının ortaya çıkması ve her panelde oklarla gösterilen göz kapaklarının büyümesi ile kanıtlanan gözün kültür boyunca gelişmeye devam ettiğini gösterir.Orta sıra, D'den F'ye kadar olan paneller, konjonktival papillaların kültürde dejenere olmaya başladığını gösterir. Alt sıra, G'den I'e kadar olan paneller, skleral kemikçik indüksiyonunun uzay-zamansal modelinin kültürde korunduğunu ve bu yöntem kullanılarak incelenebilecek gelişimsel bir yolun bir örneği olarak hizmet ettiğini göstermektedir. Bu protokol, dokuların kültürün tamamı boyunca gelişimin temel uzamsal ve zamansal yönlerini korumasına izin verir.Bu protokol, tüm duyu organlarının kültürlenmesinde önemli bir ilerlemeyi temsil eder ve ilgili karmaşık gelişimsel yolları incelemek için alternatif bir metodoloji sağlar.

organotypic-culture-method-to-study-development-embryonic-chicken

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu video Yeni kültür, civciv embriyolarının 24 saat kadar yumurta dışında kültür olan bir yöntem gösteriyor. Bu yöntem, erken gelişme (14 som ilkel bir çizgi.) Fare E7-9 karşılık gelen bir süre çalışma sağlar. In situ hibridizasyon ve immünohistokimya, bu tekniğin Uygulamaları elektroporasyon içerir.

Erken Civciv Embriyolar ex vivo (Kültür) Kültür Yöntemi

Bu makalede, biz uzun vadeli sağlamak için basit bir yöntem...

Bir Eski-ovo</emGörüntüleme ve Mikrocerrahi Uygulamaları için uygundur> Tavuk Embriyo Kültürü Sistemi

Erken Civciv Embriyo morfogenetik Doku deformasyonlar Takibi

Dilim kültürleri gen ve farmakolojik tedirginliklerin tarafından embriyo gelişiminin manipülasyonu kolaylaştırır. Ancak, kültür koşullarının normal gelişim dilim azalır ortamında devam edebilirsiniz emin olmalısınız. Biz en az 24 saat süreyle devam etmek omurilikteki normalde gelişimi kolaylaştıran bir protokol göstermektedir.

Tavuk embriyo Omurilik Dilim Kültür Protokolü

Hücre kültürü modelleri çevre koşulları üzerinde ayrıntılı kontrol sağlar ve böylece nöronal hücre biyolojisi sayısız yönlerini aydınlatmak için güçlü bir platform sağlar. Biz civciv embriyolardan duyusal nöronlar, izole ayırmak ve kültür bir, hızlı, ucuz ve güvenilir bir yöntem açıklanmaktadır. Katmanlarından hazırlanması ve immunositokimya detayları da sağlanmıştır.

Civciv Embriyolar itibaren İzolasyon ve Disosiye Duyu Nöronlar Kültür

Gelişim sırasında tavuk embriyosunu görüntülemek ve ona erişmek zor olabilir. Basit, uygun maliyetli ve bir sınıfta veya araştırma ortamında kolayca kullanılabilecek bir ex ovo yöntemi geliştirdik. Bu yöntem, embriyonik gelişimin geç aşamalarına kadar embriyoya erişim sağlar (HH 40).

Optimize Ex-ovo Kalkınma Gelişmiş Aşamaları Chick Embriyolar ekimi

Bu makalede klasik bıldırcın-tavuk chimera sistemin roman vitro ve ovo içinde deneysel prosedürler birleştirerek organ oluşumu, çalışma Güncellenme Zamanı bir yaklaşım sağlar.

İlk - ve geç-aşamalarında Organ oluşumu kuş modelindeki keşfetmek için iki adımlı yaklaşım: timus ve paratiroid bezleri Organogenesis paradigma

Bu makalede embriyonik dokulardan saf formu ex vivo chimeric organları için bir araya getirilebilen bıldırcın ve tavuk embriyolar izole etmek için bir yöntem sağlar.

Yalıtım embriyonik doku ve timus örnek kullanarak bıldırcın-tavuk Chimeric organ oluşumu

Rekombinant uzuvlar, hücre farklılaşma sürecini ve embriyonik sinyallerin etkisi altında kalıpların üretilmesini incelemeye izin veren güçlü bir deneysel modeldir. Bu protokol, farklı organizmalardan elde edilen diğer hücre tiplerine uyarlanabilen, tavuk ekstremite-mezodermal hücrelere sahip rekombinant uzuvlar üretmek için ayrıntılı bir yöntem sunar.

Morfogenez, Desenleme ve Hücre Farklılaşmasında Erken Adımları Anlamak için Tavuk Rekombinant Uzuvları Testi

Burada, tavuk embriyolarının selomik boşluğunda böbrek organoidlerinin transplantasyonu için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, 8 gün içinde organoidlerin vaskülarizasyonunu ve gelişmiş olgunlaşmasını indükler ve bu süreçleri verimli bir şekilde incelemek için kullanılabilir.

Tavuk Embriyolarında İntralomik Transplantasyon Yoluyla Böbrek Organoidlerinin Etkin Vaskülarizasyonu

Burada, doku etkileşimlerini, 4D görüntüleme timelapse filmini (3D artı zaman), moleküler fonksiyonun küresel veya yerel bozulmasını ve sistem biyolojisi karakterizasyonunu incelemek için kullanılabilecek üç tip kuş embriyonik deri eksplant kültürü için protokolleri açıklıyoruz.

Doku Desenini ve Organogenezi İncelemek için Kuş Derisi Eksplantlarının Kullanılması

Öğrenin embriyonik tavuk gözlerinin organotipik kültür yöntemiyle gelişimini in vitro ortamda nasıl çalışılır. Bu teknik, karmaşık gelişim yolaklarını ve doku etkileşimlerini araştırmak için etkili bir platform sunar.

Embriyonik tavuk doku gelişimi çalışmaya Organotypic kültür yöntemi

Daha fazla video keşfet