Name: Kafa içi Subarachnoidal rota için soruşturma rolleri streptokok suis biyofilmler menenjit bir fare enfeksiyon modeli içinde enfeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Öğrenin farelerde intrakraniyal subaraknoidal enfeksiyon modeli kullanarak Streptococcus suis biyofilmlerinin menenjit patogenezindeki rollerini. Bu yöntem, bağışıklık yanıtlarını ve yeni ilaç etkinliğini doğrudan beyinde araştırmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser ulusal anahtar araştırma ve geliştirme programı Çin [2017YFD0500102]; gelen hibe tarafından desteklenmiştir Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin [31572544]; Devlet anahtar laboratuvar veteriner etiyolojik biyoloji [SKLVEB2016KFKT005]; Shanghai tarım teknoloji geliştirme programı, Çin [G2016060201] uygulanan.

Fare enfeksiyon deneyler laboratuvar hayvan İzleme Komitesi Jiangsu Province, Çin tarafından onaylanmış ve laboratuvar hayvan Merkezi, Nanjing Tarım Üniversitesi'nde gerçekleştirilen (izin numarası: SYXK (Su) 2017-0007).
1. bakteri hazırlanması
Not: S. suis serotip 2 öldürücü soy P1 7/menenjit19hastalıklı bir domuzla yalıtılmış. Zorlanma P1/7 Todd-Hewitt suyu yetiştirilen (THB, formül en düşük THB litre başına: kalp infüzyon, 3.1 g neopeptone, 20.0 g dekstroz, 2.0 g; sodyum klorür, 2.0 g; disodyum fosfat, 0.4 g; sodyum karbonat, 2.5 g) ve Todd-Hewitt agar (THA, litre başına formül üzerinde kaplama THA: Kalp infüzyon, 3.1 g; neopeptone, 20.0 g; dekstroz, 2.0 g; Sodyum klorür, 2.0 g; disodyum fosfat, 0.4 g; sodyum karbonat, 2.5 g; ağar, 15,0 g) 37 ° C ve % 5 CO2.
<ol><li>Topluluğu P1/7 planktonik hücreleri zorlanma<ol>
<li>Planktonik hücre 5 mL orta log fazı kültüründen toplamak (OD600= 0,6), santrifüj kapasitesi 8000 × g de 3 dakika ve sonra 3 kez PBS ile yıkayın.</li>
		<li>5 mL % 25 gliserol içinde en düşük THB, 5 tüpler içine aliquot de bulunduğu hücreleri resuspend ve-80 ° C'de depolayın</li>
	</ol>
</li>
	<li>Topluluğu P1/7 biyofilm devlet hücreleri zorlanma<ol>
<li>Bir gecede kültür 20 mL al ve taze en düşük THB için 180 mL ekleyin; seyreltilmiş kültür 10 yuvarlak kültür kalıplara eşit, bölmek ve sonra % 5 CO2 37 ° C'de bir kuluçka 24 h için plakaları koymak.</li>
		<li>Kuluçka sonra yavaşça plakasına kalmadığımızı bakteri resuspend için plaka sallamak ve o zaman süpernatant aspirasyon tarafından atın. Not: plaka yavaşça sallayın ve tortu resuspending kaçının.</li>
		<li>Biyofilm devlet hücre hasat, tortu tamamen resuspend ve o zaman örnek için yeni bir tüp transferi için PBS 5 mL ekleyin.</li>
		<li>Aşağıdaki parametreler ile son adım biyofilm devlet hücrelerden solüsyon içeren temizleyicide: 60 W, 4 döngüleri, 5 s off üzerinde ve 10 sn.</li>
		<li>8000 × g de 3 dk santrifüj kapasitesi ve süpernatant-80 ° C'de depolayın Not: Süpernatant biyofilm bileşenleri içerebilir ve biyofilm bakteri daha önce hayvan deneyleri (adım 3) açıklandığı gibi enfeksiyon resuspend için kullanılabilir.</li>
		<li>En düşük THB içinde tortu 10 mL % 25 gliserol ile resuspend ve biyofilm devlet hücreleri-80 ° C'de depolayın</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Tarama elektron mikroskobu (SEM) analiz
<ol><li>Toplanan biyofilm devlet hücreleri ve 12-24 h 4 ° C'de % 4 paraformaldehyde kullanarak planktonik hücreleri tamir</li>
	<li>Örnekleri hızlı distile su ile durulama ve etanol (% 25, % 50, % 70, % 90 ve % 100) 30 dk içinde her çözümü için artan bir konsantrasyon sırayla örnekleriyle kurutmak.</li>
	<li>Kurutulmuş örneklerini sahipleri çift taraflı bant ile metal ve sonunda onları bir buharlaştırıcı altın ve Paladyum içinde kat için uygun.</li>
	<li>Taramalı elektron mikroskobu aşağıdaki parametreleri kullanarak tarafından örnekleri gözlemlemek: EHT (ekstra yüksek gerilim) = 10 kV; WD (mesafe çalışma) = 7.0 veya 8.0 mm; Büyütme = 5000 ×; Sinyal A SE1 =.</li>
</ol>3. hayvan deneyleri
<ol><li>SPF 6-hafta-yaşlı kullanın Bu çalışmada kadın BALB/c fareler. Kafa içi subarachnoidal yolu enfeksiyonu olan enjeksiyon izi bulunduğu 3, 5 mm bregma rostral olduğunu tüm fareler bulaştırmak. Enjeksiyon yeri stereotaksik koordinatlarını açıkça Chiavolini ve ark17tarafından tarif edildi.<ol>
<li>Histopatolojik analiz için iki grup (grup başına 5 fareler) farelerin bulaştırmak planktonik hücreleri veya biyofilm kullanarak devlet bir doz 3 × 107 birim (CFU) koloni oluşturan hücreleri ve başka bir 5 fare denetimi olarak PBS ile enjekte edildi.</li>
		<li>TLR2 ve sitokinler beyin, mRNA ifade tespiti bulaştırmak için farelerin (grup başına 6 fareler) iki ek grupları planktonik hücreleri veya biyofilm kullanarak devlet 3 × 107 CFU bir doz hücreleri.</li>
		<li>Üstünde-e doğru bu seri dilutions kaplama tarafından canlı bakteri sayısını belirleyin.</li>
		<li>12 h sonrası enfeksiyon daha fazla araştırma için tüm fareler ötenazi. Not: Stok orta gliserol enfeksiyonu önce kaldırılması gerekir. Planktonik hücreleri ve biyofilm devlet hücreleri-80 ° C'den kurtarılan 3 kez PBS ile yıkanır. Sonra planktonik hücreleri PBS ile resuspended ve enfeksiyon için uygun doza seyreltilmiş; biyofilm devlet hücreleri saklı süpernatant (Kimden adım 1.2.5) ile resuspended ve enfeksiyon için uygun doza seyreltilmiş. Enfeksiyon için birim fazla 50 µL olmamalıdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>TLR2 ve sitokinler mRNA ifadesi beyin dokusunda algılama<ol>
<li>Toplam RNA, RNA ekstraksiyon kiti kullanılarak beyin dokusundan ayıklayın.<ol>
<li>Her fare için tüm beyin dokusu RNA ayıklamak için kullanın. Bütün beyin dokusu 5 tüpler içine bölün. 100 mg beyin dokusu ile alıp kit tarafından sağlanan lysing matris içeren her tüp için 1 mL lizis çözeltisi ekleyin.</li>
			<li>Bir homogenizer 40 tüpte işlemek bir ayar 6.0 ve daha sonra santrifüj tüpü 12000 × g ve 4 ° C 5 min için s.</li>
			<li>Santrifüjü sonra üst aşaması için yeni bir microcentrifuge tüp aktarın.</li>
			<li>Oda sıcaklığında 5 min için transfer edilen örnek kuluçkaya; kloroform, 10 için girdap 300 µL eklemek s ve oda sıcaklığında 5 min için kuluçkaya.</li>
			<li>Tüp 12000 ×, santrifüj kapasitesi g ve 4 ° C'de 5 dakika süreyle aktarmak üst aşaması için yeni bir tüp.</li>
			<li>5 kez ters çevirme önce Tüp, soğuk mutlak etanol 500 µL ekleyin ve örnek için en az 1 h-20 ° C'de depolayın.</li>
			<li>Tüp 12000 ×, santrifüj kapasitesi g ve 4 ° C'de 15 dakika ve süpernatant kaldır. Yıkama 500 µL RNase free H2o soğuk % 75 etanol ile Pelet</li>
			<li>Kaldır etanol, hava kuru oda sıcaklığında ve resuspend RNA içinde 100 µL RNase free H2o 5 min için Pelet</li>
			<li>Oda sıcaklığında 5 min için RNA kuluçkaya ve RNA bioanalyzer kullanarak RNA konsantrasyonu belirlemek.</li>
		</ol>
</li>
		<li>CDNA sentezi, genomik DNA (gDNA), bir thermocycler bir ters Transkripsiyon (RT) reaktif kiti ile kullanarak kaldırılması da dahil olmak üzere gerçekleştirin.<ol>
<li>Birim ulaşır 10 µL. kuluçkaya kadar 42 ° C'de 2 min için bir tüp içeren 2 µL 5 x gDNA eleme arabelleği, gDNA eleme enzim ve RNase free H2O 1 µL RNA'ın 1 µg ekleyin</li>
			<li>10 µL ana karışımı ekleyin (RT enzim 1 µL Mix I, RT astar Mix 1 µL, 4 µL 5 tampon 2 x ve 4 µL RNase free H2O) tepki çözüm son adım ve sonra hafifçe karıştırın. Hemen RT tepki ile devam: 37 ° C 15 dk ve sonra 85 ° C 5 s.</li>
			<li>SYBR RT-qPCR kiti ile gerçek zamanlı PCR makinasıyla nicel gerçek zamanlı PCR (RT-qPCR) çözümlemesi gerçekleştirin. 2 enzim x 10 µL, ileri astar, 0.8 µL ters astar, 0.4 µL 50 x ROX başvuru boya II, cDNA şablonu ve RNase free H2O 2 µL 0.8 µL toplam hacmi 20 µL kadar ekleyin.</li>
			<li>Her örnek nüsha aşağıdaki termal parametrelerini kullanarak çalıştırın: 30 s 94 ° C'de 5 40 döngüsü tarafından takip s 95 ° c ve 34 s son aşaması 15 ile 60 ° C'de s 95 ° c, 1 dk. 60 ° c ve 15 s 95 ° C'de Astar RT-qPCR için Tablo 1' de listelenmiştir. Temizlik genler B2m ve 18s rRNA iç kontrol kullanılmıştır.</li>
		</ol>
</li>
		<li>2-ΔΔCt yöntemine göre göreli kat değişir hesaplayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Histolojik kesitler gözlenmesi
	<ol>
<li>% 10 formalin ile 24 h fiksasyon sonra sabit beyin dokusu içine 2-3 mm doku parçaları uygun ölçüde yeniden.</li>
		<li>Gömme bir kasete doku adet koyun ve dehidratasyon ile otomatik bir vakum kurutucu için yeni bir sabitleştirici çözüm bırakın.</li>
		<li>Sabit doku almak ve etanol (% 70, %80, % 95, % 95 ve % 100) 30 dk içinde her çözüm için konsantrasyonları artan sırayla kurutmak.</li>
		<li>Ksilen 15 dakika ile örnek transparentize, o Sıvı parafin 90 dk 60 ° C'de eğim ve gömme bir makine kullanarak embed.</li>
		<li>Parafin blok gömülü doku 3 µm dilimler halinde kesip, dilim su 45 ° c üzerinde döşeme ve sonra hava kuru.</li>
		<li>60 ° C'de 3 h için bir bölüm kuluçkaya, haematoxylin ve eozin (o) kullanarak yöntemi leke ve tarafsız sakız ile kapatın.</li>
		<li>Histopatolojik değişiklikleri beynin optik mikroskopla gözlemlemek. Bir dört maddelik derecelendirme sistemi histolojik değişiklikler değerlendirmek için kullanıldı. Bir unpaired t testi istatistiksel analizi için kullanın. Tıkanıklık/kanaması: yok, o 0; odak tıkanıklık/kanaması, küçük alanda 1 puan edinildi; geniş alan fokal tıkanıklık/kanaması veya fokal tıkanıklık/kanaması, küçük alanının birden çok site 2 puan edinildi; üç büyük odak tıkanıklık/kanaması siteleri kadar 3 puan edinildi; tıkanıklık/kanaması diffüz, 4 puan. Nekroz: yok, o 0; odak nekroz, 1; puan edinildi 1-10 nekrotik hücre oluşumunu diffüz, o 2 puan; konfluent nekroz, Foci puan edinildi 3; geniş konfluent nekroz, 4 puan edinildi. İltihabi hücre infiltrasyonu: yok, o 0; kaç ve odak infiltrasyonlar, 1 puan edinildi; çok görüşlü infiltrasyon veya toplamları, oluşumu infiltrations 2 puan edinildi; Üç toplamları kadar 3 puan edinildi; ve dörtten fazla toplamları, puan 4.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Gottschalk, M., Xu, J., Calzas, C., Segura, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+suis%3A+a+new+emerging+or+an+old+neglected+zoonotic+pathogen%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Streptococcus suis: a new emerging or an old neglected zoonotic pathogen?</a> Future Microbiology. 5, 371-391 (2010).</li>
<li>Goyette-Desjardins, G., Auger, J. P., Xu, J., Segura, M., Gottschalk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+suis%2C+an+important+pig+pathogen+and+emerging+zoonotic+agent-an+update+on+the+worldwide+distribution+based+on+serotyping+and+sequence+typing%5BTitle%5D)+AND+%22Emerging+Microbes+%26+Infections%22%5BJournal%5D)">Streptococcus suis, an important pig pathogen and emerging zoonotic agent-an update on the worldwide distribution based on serotyping and sequence typing.</a> Emerging Microbes & Infections. 3 (6), e45(2014).</li>
<li>Kerdsin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+Streptococcus+suis+serotype+9+infection+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiology%2C+Immunology+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Emergence of Streptococcus suis serotype 9 infection in humans.</a> Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 50 (4), 545-546 (2017).</li>
<li>Hatrongjit, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+human+case+report+of+sepsis+due+to+infection+with+Streptococcus+suis+serotype+31+in+Thailand%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infect+Diseases%22%5BJournal%5D)">First human case report of sepsis due to infection with Streptococcus suis serotype 31 in Thailand.</a> BMC Infect Diseases. 15, 392(2015).</li>
<li>Fittipaldi, N., Segura, M., Grenier, D., Gottschalk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virulence+factors+involved+in+the+pathogenesis+of+the+infection+caused+by+the+swine+pathogen+and+zoonotic+agent+Streptococcus+suis%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Virulence factors involved in the pathogenesis of the infection caused by the swine pathogen and zoonotic agent Streptococcus suis.</a> Future Microbiology. 7 (2), 259-279 (2012).</li>
<li>Hall-Stoodley, L., Costerton, J. W., Stoodley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+biofilms%3A+from+the+natural+environment+to+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Bacterial biofilms: from the natural environment to infectious diseases.</a> Nature Reviews Microbiology. 2 (2), 95-108 (2004).</li>
<li>Fuxman Bass, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+DNA%3A+a+major+proinflammatory+component+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Extracellular DNA: a major proinflammatory component of Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Journal of Immunology. 184 (11), 6386-6395 (2010).</li>
<li>Isiaku, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilm+is+associated+with+chronic+streptococcal+meningoencephalitis+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Pathogenesis%22%5BJournal%5D)">Biofilm is associated with chronic streptococcal meningoencephalitis in fish.</a> Microbial Pathogenesis. 102, 59-68 (2017).</li>
<li>Oggioni, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Switch+from+planktonic+to+sessile+life%3A+a+major+event+in+pneumococcal+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Switch from planktonic to sessile life: a major event in pneumococcal pathogenesis.</a> Molecular Microbiology. 61 (5), 1196-1210 (2006).</li>
<li>Xiao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+suis+small+RNA+rss04+contributes+to+the+induction+of+meningitis+by+regulating+capsule+synthesis+and+by+inducing+biofilm+formation+in+a+mouse+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Streptococcus suis small RNA rss04 contributes to the induction of meningitis by regulating capsule synthesis and by inducing biofilm formation in a mouse infection model.</a> Veterinary Microbiology. 199, 111-119 (2017).</li>
<li>Dominguez-Punaro, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptococcus+suis+serotype+2%2C+an+important+swine+and+human+pathogen%2C+induces+strong+systemic+and+cerebral+inflammatory+responses+in+a+mouse+model+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Streptococcus suis serotype 2, an important swine and human pathogen, induces strong systemic and cerebral inflammatory responses in a mouse model of infection.</a> Journal of Immunology. 179 (3), 1842-1854 (2007).</li>
<li>Seitz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+intranasal+mouse+model+for+mucosal+colonization+by+Streptococcus+suis+serotype+2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A novel intranasal mouse model for mucosal colonization by Streptococcus suis serotype 2.</a> Journal of Medical Microbiology. 61 (Pt 9), 1311-1318 (2012).</li>
<li>Busque, P., Higgins, R., Caya, F., Quessy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+of+pigs+against+Streptococcus+suis+serotype+2+infection+using+a+live+avirulent+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Immunization of pigs against Streptococcus suis serotype 2 infection using a live avirulent strain.</a> Canadian Journal of Veterinary Research. 61 (4), 275-279 (1997).</li>
<li>Williams, A. E., Blakemore, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+Streptococcal+meningitis+following+intravenous+intracisternal+and+natural+routes+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropathology+and+Applied+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Pathology of Streptococcal meningitis following intravenous intracisternal and natural routes of infection.</a> Neuropathology and Applied Neurobiology. 4 (4), 345-356 (1990).</li>
<li>Dominguez-Punaro, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+cochlear+inflammation+and+vestibular+syndrome+in+an+experimental+model+of+Streptococcus+suis+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Clinical+Microbiology+%26+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Severe cochlear inflammation and vestibular syndrome in an experimental model of Streptococcus suis infection in mice.</a> European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 31 (9), 2391-2400 (2012).</li>
<li>Auger, J. P., Fittipaldi, N., Benoit-Biancamano, M. O., Segura, M., Gottschalk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virulence+Studies+of+Different+Sequence+Types+and+Geographical+Origins+of+Streptococcus+suis+Serotype+2+in+a+Mouse+Model+of+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Virulence Studies of Different Sequence Types and Geographical Origins of Streptococcus suis Serotype 2 in a Mouse Model of Infection.</a> Pathogens. 5 (3), (2016).</li>
<li>Chiavolini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+inducing+experimental+pneumococcal+meningitis+in+outbred+mice%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Method for inducing experimental pneumococcal meningitis in outbred mice.</a> BMC Microbiology. 4, 36(2004).</li>
<li>Madsen, L. W., Svensmark, B., Elvestad, K., Jensen, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Otitis+interna+is+a+frequent+sequela+to+Streptococcus+suis+meningitis+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Otitis interna is a frequent sequela to Streptococcus suis meningitis in pigs.</a> Veterinary Pathology. 38 (2), 190-195 (2001).</li>
<li>Holden, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+evolution+of+virulence+and+drug+resistance+in+the+emerging+zoonotic+pathogen+Streptococcus+suis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Rapid evolution of virulence and drug resistance in the emerging zoonotic pathogen Streptococcus suis.</a> PLoS One. 4 (7), e6072(2009).</li>
<li>Dominguez-Punaro Mde, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+characterization+of+the+microglial+inflammatory+response+to+Streptococcus+suis%2C+an+important+emerging+zoonotic+agent+of+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">In vitro characterization of the microglial inflammatory response to Streptococcus suis, an important emerging zoonotic agent of meningitis.</a> Infection and Immunity. 78 (12), 5074-5085 (2010).</li>
<li>Hassan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+different+detection+methods+of+biofilm+formation+in+the+clinical+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Evaluation of different detection methods of biofilm formation in the clinical isolates.</a> Brazilian Journal of Infectious Diseases. 15 (4), 305-311 (2011).</li>
<li>Vanier, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+putative+virulence+factors+of+Streptococcus+suis+involved+in+invasion+of+porcine+brain+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Pathogenesis%22%5BJournal%5D)">New putative virulence factors of Streptococcus suis involved in invasion of porcine brain microvascular endothelial cells.</a> Microbial Pathogenesis. 46 (1), 13-20 (2009).</li>
<li>Takeuchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+suilysin+to+the+pathogenesis+of+Streptococcus+suis+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">The contribution of suilysin to the pathogenesis of Streptococcus suis meningitis.</a> Journal of Infectious Diseases. 209 (10), 1509-1519 (2014).</li>
<li>Tenenbaum, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polar+bacterial+invasion+and+translocation+of+Streptococcus+suis+across+the+blood-cerebrospinal+fluid+barrier+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Polar bacterial invasion and translocation of Streptococcus suis across the blood-cerebrospinal fluid barrier in vitro.</a> Cellular Microbiology. 11 (2), 323-336 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada açıklanan enfeksiyon intrakranial subarachnoidal rotanın diğer yolları enfeksiyonu üzerinde belirgin avantajları vardır. Ana bilgisayar-bakteri etkileşim ve bakteriyel bileşenleri etkisi ana bilgisayar bağışıklık yanıtı doğrudan beyindeki hangi bakteri giriş merkezi sinir sistemi taklit çalışmaya müfettişler sağlar. Böylece, bu yolu enfeksiyonu diğer bakterilerin neden olduğu menenjit mekanizmalarının araştırılması için genişletilebilir. Üstelik, o da bakteriyel menenjit karşı ilaçların etkinliğini test etmek için...

Streptokok suis (S. suis) büyük bir bakteriyel patojen domuz dünya çapında, menenjit, pnömoni, septisemi, endokardit ve artrit1de dahil olmak üzere ağır hastalığa neden oluyor. Ortaya çıkan olabilmekte ajanı da sağlar. Şimdiye kadar bu dokuz serotipleri enfeksiyon serotipleri 2, 4, 5, 9, 14, 16, 21, 24 ve 312,3,4de dahil olmak üzere insanlarda neden olabilir bildirilmiştir. İnsanlar ve domuzlar, menenjit S. suis enfeksiyonlar önemli klinik belirtileri biridir. Vietnam ve Tayland, S. suis menenjit yetişkin5önemli nedenidir. Mikrobiyal biyofilmler birbirine bağlı ve bir arabirim konsantre olan mikroorganizmalar vardır; Onlar bakteriyel virülans, çeşitli ortamlarda ve antibiyotik direnci5hayatta kalmak için gereklidir. Biyofilmler genellikle genellikle polisakkaritler, proteinler ve DNA6içeren bir hücre dışı matriks tarafından çevrili. İkinci ana bilgisayar inflamatuar yanıt ve sitokin üretim7temin edebilmektedir. Biyofilm oluşumu önceki çalışmalarda streptokok menenjit dahil olmak için rapor edildi. Streptococcus agalactiae menenjit tilapia balık modelindeki biyofilmler katkıda ve biyofilm oluşumu ortaya beyin doku içinde ve çevresinde meninjeal vivo içinde ile intra abdominal aşılama8yüzeyler. Menenjit sırasında bir biyofilm benzeri durumda Streptococcus pneumoniae ve böyle bir biyofilm devlet bakterilerde bir fare enfeksiyon modeli9menenjit inducing daha etkili. Buna ek olarak, bizim önceki çalışma, S. suis fare beyin ile ilişkili biyofilm durumu bakteriyel virülans için hayatta kalma analiz10tarafından katkıda bulunur. Ancak, doğrudan kanıt S. suis menenjit biyofilm katılımı için daha fazla araştırma gerektirir.
Mayi (IP)11, burunici (i.n.)12, şarapla (IV)13ve enfeksiyon14, intracisternal (araç ten) yollarını kullanarak farelerde hayvan modelleri S. suis enfeksiyon geliştirilmiştir 15 , 16. ancak, enfeksiyon ı.p., i.n. ve damar içi enjeksiyona yolları menenjit doğrudan beyindeki S. suis yüzey bileşenlerinde rolleri eğitim için uygun değildir. Bu hücre dışı matriks biyofilmler üzerinden içerir. Her ne kadar araç ten aşılama S. suis enfeksiyonu için kullanılan, hassas enjeksiyon yeri bu gazetelerde tanımlanmıştır değil. Buna ek olarak, intrakranial subarachnoidal aşı enjeksiyon izi stereotaksik koordinatlarını açıkça tarif edilmiş bir önceki çalışma17'. Bu aşı noktası ve daha fazla basit Deneysel protokol kolay tanınmasını sağladı. Buna ek olarak, intrakranial subarachnoidal yolu enfeksiyonu taklit eden bakteri giriş merkezi sinir sistemi sinüsler veya orta kulak17ve orta kulak ve S. suis tarafından neden menenjit ilişkisi içine Madsen ve ark18tarafından kanıtlanmıştır. Ayrıca, intrakranial subarachnoidal yolu enfeksiyonu farelerde uygulayarak, biz S. suis küçük RNA rss04 menenjit bizim önceki çalışma10katkıda göstermiştir.
Mevcut çalışma, intrakranial subarachnoidal yolu enfeksiyonu farelerde S. suis menenjit biyofilmler rollerini araştırmak için kullanıldı. Fareler planktonik hücreleri veya S. suis biyofilm devlet hücreleri ile enfeksiyon bu yoldan bulaşmış. Histopatolojik Analizi ve TLR2 ve sitokinler biyofilm devlet hücreleri enjekte farelerin beyin dokusundan artan mRNA ifadesi açıkça S. suis biyofilm menenjit için katkıda belirtti.

<table><tbody><tr><td>Todd Hewitt Et Suyu (THB)</td> <td>Becton, Dickinson ve Şirketi</td><td>DF0492078</td><td>30 g tozu 1 L arıtılmış suda çözün. 121 ° C'de otoklav; 15 dk.</td></tr><tr><td>Agar</td><td>DSBIO</td><td>16C0050</td><td>15 g tozu 1 L THB içinde çözün. 121 ° C'de otoklav; 15 dk.</td></tr><tr><td>Milli-Q Referans Su Arıtma Sistemi</td><td>Merck KGaA</td><td>Z00QSVCUS</td><td>Dnas/ Rnase</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Olmadan Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>10019318</td><td>8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.42 g Na2HPO3, 0.27 g KH2PO4'ü 1 L arıtılmış suda çözün. 121 ° C'de otoklav; 15 dk. PH'ı 7.4'e ayarlamak için KOH kullanın.</td></tr><tr><td>Na2HPO3</td><td>Xilong Scientific Co., Ltd</td><td>9009012-01-09</td><td>8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.42 g Na2HPO3, 0.27 g KH2PO4'ü 1 L arıtılmış suda çözün. 121 ° C'de otoklav; 15 dk. PH'ı 7.4'e ayarlamak için KOH kullanın.</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Xilong Scientific Co., Ltd</td><td>9009017-01-09</td><td>8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.42 g Na2HPO3, 0.27 g KH2PO4'ü 1 L arıtılmış suda çözün. 121 ° C'de otoklav; 15 dk. PH'ı 7.4'e ayarlamak için KOH kullanın.</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Xilong Scientific Co., Ltd</td><td>9009019-01-09</td><td>8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.42 g Na2HPO3, 0.27 g KH2PO4'ü 1 L arıtılmış suda çözün. 121 ° C'de otoklav; 15 dk. PH'ı 7.4'e ayarlamak için KOH kullanın.</td></tr><tr><td>KOH</td><td>Xilong Scientific Co., Ltd</td><td>9009014-01-09</td><td>8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.42 g Na2HPO3, 0.27 g KH2PO4'ü 1 L arıtılmış suda çözün. 121 ° C'de otoklav; 15 dk. PH'ı 7.4'e ayarlamak için KOH kullanın.</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sionpharm Kimyasal Reaktif Co, Ltd</td><td>10010618</td><td>Eşit hacimde arıtılmış su ile seyreltilmiş, 121 ° C'de otoklav; 15 dakika boyunca</td></tr><tr><td>% 4 paraformaldehit</td><td>Sionpharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>80096675</td><td></td></tr> %<tr><td>25 Glutaraldehit</td><td>Sionpharm Chemical Reagent Co., Ltd 30092436</td><td></td><td>fiksasyon için arıtılmış su ile 10 kat seyreltilmiştir.</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sionpharm Kimyasal Reaktif Co, Ltd</td><td>10009218</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Sionpharm Kimyasal Reaktif Co, Ltd</td><td>10006818</td><td></td></tr><tr><td>Spctrofotometre</td><td>DeNovix Inc.</td><td>DS-11 +</td><td></td></tr> <tr><td>Ultrason hücre kırıcı</td><td>NingBo Scientz Biotechnology Co., Ltd</td><td>JY96-IIN</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Hitachi Koki Co., Ltd</td><td>CT15RE</td><td></td></tr><tr><td>Buzdolabı</td><td>Aucma Co., Ltd</td><td>DW-86L500</td><td></td></tr><tr><td>Taramalı elektron mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>EVO-LS10</td><td></td></tr><tr><td>FastRNA Pro Yeşil Kit</td><td>MP Biyomedikal</td> <td># 6045-050</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio 6 Flex</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4485689 1124310110</td> SensoQuest GmbH için FastPrep-24 Enstrüman MP Biyomedikal 116005500 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> Cihazı <tr><td>SYBR Premix Ex Taq II</td><td>Takara Biyomedikal Technology (Beijing) Co., Ltd</td><td>gDNA Silgisi</td> ile RR820A <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> PrimeScript RT reaktif kiti <td></td></tr><tr><td></td><td>Takara Biyomedikal Technology (Beijing) Co., Ltd</td><td>RR047A</td><td></td></tr><tr><td>Tamamen Kapalı Doku İşlemcisi</td><td>Leica Biosystems Nussloch GmbH</td><td>ASP200S</td><td></td></tr><tr><td>Isıtmalı Parafin Gömme Modülü</td><td>Leica Biosystems Nussloch GmbH</td><td>EG1150H</td><td></td></tr><tr><td>Yarı Otomatik Döner Mikrotom</td><td>Leica Biosystems Nussloch GmbH</td><td>RM2245</td><td></td></tr><tr><td>Parafin bölümleri için su banyosu</td><td>Leica Biosystems Nussloch GmbH</td><td>HI1210</td><td></td></tr><tr><td>Autostainer XL</td><td>Leica Biosystems Nussloch GmbH</td><td>ST5010</td><td></td></tr><tr><td>Agilent 2100</td><td>Agilent Technologies</td><td>G2939A</td><td></td></tr><tr><td>Optik mikroskop</td><td>Olympus</td><td>BX51</td><td></td></tr></tbody></table>

kafa içi subarachnoidal rota için soruşturma rolleri streptokok suis biyofilmler menenjit bir fare enfeksiyon modeli içinde enfeksiyon

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Streptokok suis sadece domuz dünya çapında büyük bir bakteriyel patojen aynı zamanda gelişmekte olan Hayvansal ajanı var. İnsanlar ve domuzlar, menenjit S. suis enfeksiyonların büyük bir tezahürüdür. Uygun enfeksiyon manken patojenlerin yol açtığı hastalıklar mekanizmaları anlamak için önemli bir araçtır. Enfeksiyon farelerde birçok yolların S. suis enfeksiyon patogenezi okumaya geliştirilmiştir. Ancak, enfeksiyon mayi, etkilerinin ve intravenöz yolları menenjit gibi hücre dışı matriks biyofilmler üzerinden doğrudan beyindeki S. suis yüzey bileşenlerinde rolleri eğitim için uygun değildir. Her ne kadar intracisternal aşılama S. suis enfeksiyonu için kullanılan, hassas enjeksiyon yeri tarif değil. Burada, intrakranial subarachnoidal yolu enfeksiyonu S. suis menenjit biyofilmler rollerini araştırmak için bir fare modeli tanımlanmıştır. S. suis planktonik hücreleri veya biyofilm devlet hücreleri doğrudan 3, 5 mm bregma rostral bulunan enjeksiyon sitesi aracılığıyla farelerin Subaraknoid boşluk içine enjekte edildi. Histopatolojik Analizi ve TLR2 artan mRNA ifade ve sitokinler biyofilm devlet hücreleri enjekte fareler gelen beyin dokusunun S. suis biyofilm S. suis menenjit kesin rol oynar açıkça belirtti. Bu yolu enfeksiyonu diğer yolları enfeksiyonu, ana bilgisayar-bakteri etkileşim çalışma izin üzerinde belirgin avantajları vardır. Ayrıca, bakteriyel bileşenleri etkisi ana bilgisayar bağışıklık yanıtı doğrudan beyindeki değerlendirilmesi için izin verir ve merkezi sinir sistemi bakteriyel giriş taklit eder. Bu yolu enfeksiyonu diğer bakterilerin neden olduğu menenjit mekanizmalarının araştırılması için genişletilebilir. Üstelik, o da bakteriyel menenjit karşı ilaçların etkinliğini test etmek için kullanılabilir.

SEM analiz biyofilm oluşumu deneysel koşullar altında incelemek için gerçekleştirildi. Şekil 1' de gösterildiği gibi biyofilm oluşumu planktonik hücreleri (Şekil 1A) ve biyofilm devlet hücreleri (Şekil 1B) arasında önemli bir fark vardır. SEM analiz biyofilm bakteri kümeleri ve planktonik bakteriler tek tek daha az yoğun ve esas olarak dağınık iken birden çok katman ...

Burada, enfeksiyon biyofilmler streptokok suis menenjit içinde rolleri çalışma farelerde intrakranial subarachnoidal rotanın tarif. Bu enfeksiyon model diğer bakteriyel menenjit patogenezi ve bakteriyel menenjit karşı yeni ilaçların etkinliğini çalışmak için uygundur.

Kafa içi Subarachnoidal rota için soruşturma rolleri streptokok suis biyofilmler menenjit bir fare enfeksiyon modeli içinde enfeksiyon

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

Bu yöntem, streptococcus suis'in biyofilmlerinden elde edilen hücre dışı matris gibi birçok bölgedeki bileşenlerinin rolleri hakkındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, doğrudan beyinde bağışıklık tepkilerini etkileyen bakteri bileşenlerinin araştırılmasına olanak sağlaması ve bakterilerin merkezi sinir sistemine girişini taklit etmesidir. Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan bir yüksek lisans öğrencisi olan Bay Shouming Zhang olacak.P1 / 7 planktonik hücrelerini toplamak için, önce orta kilit faz kültüründen beş mililitre hücre toplayın. Hücreleri PBS'de üç kez yıkamadan önce 8000 kez G'de üç dakika santrifüjleyin. Hücreleri THB'de beş mililitre% 25 gliserol ile yeniden askıya alın ve beş tüpe alın.Alternatif olarak, P1 / 7 biyofilm durum hücrelerini toplamak için, gece boyunca 20 mililitre kültür alın ve 180 mililitre taze THB'ye ekleyin. Seyreltilmiş kültürü 10 yuvarlak kültür plakasına eşit olarak bölün, ardından plakaları 24 saat boyunca% 5 karbondioksit içinde 37 santigrat derecede inkübe edin. İnkübasyonun ardından, plakaya yapışmamış bakterileri yeniden askıya almak ve tortunun yeniden askıya alınmasını önlemek için plakayı hafifçe s

intracranial-subarachnoidal-route-infection-for-investigating-roles

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kaynak: Zhang, S. ve diğerleri. Fare enfeksiyonu modelinde menenjitte streptococcus suis biyofilmlerinin rollerini araştırmak için intrakraniyal subaraknoidal enfeksiyon yolu. J. Vis. Exp. (2018).Bu video, bakteri enfekte bir fare beyninde hedef gen ifadesinin tespitini gösteriyor. RNA çıkarılır, DNA bozdurucu bir enzimle işlenir ve cDNA'ya ters transkribe edilir. cDNA, gen spesifik primerlerle termal döngüyle amplifikasyon yapılırken, DNA bağlayan bir boya amplifikasyon DNA'ya bağlanarak...

Bakteri Enfekte Fare Beyninde Hedef Gen İfadesinin Tespiti

Kaynak: Lenhard, A. ve diğerleri. Streptococcus pneumoniae'nin viral eş-enfeksiyon sonrası kolonizerden patojene geçişi için fare modeli, yaşa bağlı hastalığı özetliyor. J. Vis. Exp. (2022)Bu video, grip virüsünün Streptococcus pneumoniae'nin kolonizatordan patojene geçişini tetiklediği bir fare ortak enfeksiyon modelini gösteriyor. Bakteriyel kolonizasyon, viral enfeksiyon ve hastalık ilerlemesiyle ilgili adımları özetler.

Viral Ortak Enfeksiyon Sonrası Streptococcus pneumoniae'nin Patojenik Geçişini İnceleyen Fare Modeli

Bu videoda, Neisseria meningitidis'in menenjit enfeksiyonu oluşturmak için bir fare modeline intrasternal iletimini gösteriyoruz.

Meningokok Menenjitini İndüklemek için Meningokokların Fare Modellerine İntrasternal Verilmesi

Neisseria meningitidis kan damarları bulaşan bir insan özgü patojendir. Bu protokolde insan mikrodamarlar bağışıklığı fare üzerine insan cildi aşılama yaparak bir fare sokulur. Bakteriler genellikle insan durumda gözlenen purpurik döküntü vasküler hasar ve gelişimine yol açan, insan gemilere yoğun yapışır.

Insanlaşmış Fare Modeli mikrovaskülatürde Hedefleme Bakteriyel Enfeksiyonlar Eğitim için

Hayvan modelleri kronik inflamasyon gelişimine katkıda konak ve patojen spesifik mekanizmaları tanımlarken paha biçilmez araçlardır olduğu kanıtlanmıştır. Burada, lokal ve sistemik inflamasyon bölgelerinde ilerlemesini değerlendirmek için insan patojeni Porphyromonas gingivalis ve detay metodolojileri ile ağızdan enfeksiyondan bir fare modeli tarif eder.

Lokal ve sistemik Yer de patojen kaynaklı kronik enflamasyon Fare Modeli

Burada bir prosedür, Escherichia coli K1 kültürleri ile neonatal sıçanda sistemik enfeksiyon kurulması için tarif edilmiştir. Bu non-invazif prosedür da koroid pleksusa de mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu, sistemik dolaşıma patojenin translokasyonu ve merkezi sinir sisteminin istilası izin verir.

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli Escherichia coli Yenidoğan Sıçan Enfeksiyon

Streptococcus pneumoniae, kalpte ayrık pürülan olmayan mikroskobik lezyonlar oluşturur. Kardiyak mikrolezyon oluşumunun bir murin modeli için protokol ana hatlarıyla belirtilmiştir. Mikroskopi kullanılarak mikrolezyon görselleştirmesi, erken ve geç mikrolezyonlar arasında ayrım ve nekahat dönemindeki hayvanların kalplerinde kardiyak yeniden şekillenmeyi tespit etme yöntemleri hakkında talimat verilmektedir.

Görselleştirme<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Kalp Microlesions ve sonraki Kardiyak Tadilat içinde

Burada, erişkin farelerde intrasisternal enfeksiyon yolu ile meningokok menenjitini tetikleyen bir yöntem tanımlıyoruz. İnokül inosiyal enfeksiyona kadar meningokok enfeksiyonunun adım adım protokolünü sıyoruz; sonra hayvan hayatta kalma kaydetmek ve mindik dokularında bakteri yükleri değerlendirmek.

İntrasisternal Doğum yoluyla Farelerde Meningokok Menenjit Serogroup C Indükleyen

Bu yazıda, viral enfeksiyon sırasında pnömokokların asemptomatik bir kolonizatörden hastalığa neden olan bir patojene geçişi için yeni bir fare modeli açıklanmaktadır. Bu model, hastalık progresyonunun farklı aşamalarında ve çeşitli konakçılarda polimikrobiyal ve konakçı-patojen etkileşimlerini incelemek için kolayca uyarlanabilir.

Streptococcus pneumoniae'nin Viral Ko-Enfeksiyon Üzerine Kolonizatörden Patojene Geçişi İçin Bir Fare Modeli, Yaşın Şiddetlendirdiği Hastalıkları Özetler

Mevcut protokol, implant ile ilişkili enfeksiyonları araştırmak için subkutan dorsal implantasyon kullanan, patofizyolojik mekanizmaların kapsamlı bir şekilde araştırılmasını sağlayan ve hedefe yönelik terapötik stratejilerle tanı kriterlerinin geliştirilmesini destekleyen bir fare modelini tanımlamaktadır.

Farelerde İmplantla İlişkili Enfeksiyonların Hayvan Modeli

Burada, Klebsiella pneumoniae'nin burun içi instasyonu yoluyla fare sepsis immünosupresyon modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz ve modeli çeşitli göstergelerle doğruluyoruz.

Bakterilerin Burun İçinden İnstasyonu Yoluyla Fare Sepsisiyle İmmünosupresyon Modelinin Oluşturulması

Öğrenin farelerde intrakraniyal subaraknoidal enfeksiyon modeli kullanarak Streptococcus suis biyofilmlerinin menenjit patogenezindeki rollerini. Bu yöntem, bağışıklık yanıtlarını ve yeni ilaç etkinliğini doğrudan beyinde araştırmaya olanak tanır.

Kafa içi Subarachnoidal rota için soruşturma rolleri streptokok suis biyofilmler menenjit bir fare enfeksiyon modeli içinde enfeksiyon (Video) | JoVE Journal

Kafa içi Subarachnoidal rota için soruşturma rolleri streptokok suis biyofilmler menenjit bir fare enfeksiyon modeli içinde enfeksiyon

Daha fazla video keşfet