Name: Endojen nöral kök hücre etkinleştirme en az Medulla Spinalis Yaralanmalarında, fare modeli değerlendirmek için bir Neurosphere tahlil (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Öğrenin minimal omurilik yaralanması modelinde fare kullanarak endojen nöral kök hücre aktivasyonunu değerlendirmek için nörosfer analizini. Bu yöntem rejeneratif tıp araştırmalarında hücre davranışlarını incelemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser (çalışma hibe CMM) Krembil Vakfı tarafından finanse edilmektedir. WX Carlton Marguerite Smith Öğrenci Ödülü alıcı oldu. NL bir Ontario lisansüstü öğrenim bursu aldım.

Bu iletişim kuralı Toronto Üniversitesi, hayvan bakımı Komitesi tarafından kabul edildi ve "Kılavuzu için bakım ve kullanım, deneysel hayvan uygun olarak" (2nd Edition, hayvan bakımı, Kanada Konseyi 2017).
1. en az omurilik yaralanma cerrahi
Not: ameliyat öncesi tüm cerrahi aletler ve malzemeler uygun yöntemlerle (Şekil 1A) sterilize emin olun.
<ol><li>Gazlı bez 4 – 5 karelerinin haddeleme ve onları birlikte gazlı bez sabit bir rulo elde etmek için ortada taping tarafından bir göğüs destek kemer oluşturmak.</li>
	<li>İndüksiyon odasında fareyi getirin ve anestezi ile %5 isoflurane işlemini başlatın. Devam etmeden önce yanı sıra prosedürü boyunca ayak çimdik refleks yokluğu onaylayın. Ameliyat-ebilmek almak 30 dk dan fazla tamamlamak için en az isoflurane maruz kalma (%5 5 dk) ve kalan zamanda da % 2-3 en iyi şekilde.</li>
	<li>% 2 – 3 isoflurane idame dozu, anestezik makineye bağlı bir burun konisi için fareyi aktarın. Saç kesme makineleri kürk deri ameliyat için geniş dikdörtgen bir alan ortaya çıkarmak için boyun/kulakları çok orta yedeklemek hayvandan patolojisi kaldırmak için kullanın.</li>
	<li>Fare burnu bağlı burun konisi yerleştirip kafatası kulak çubuklarla sabitleme stereotaksik bir araç olarak aktarın. Fare stereotaksik aygıtı güvenli bir kez isoflurane % 5 yerleşim kulak çubuklarının ve başa % 2 – 3 alt sırasında korumak.</li>
	<li>Ameliyat öncesi analjezik ilaçlar intraperitoneally yönetmek — Meloksikam (2.0 mg/kg). Cömertçe göz yağlama anestezi ne zaman altında kornea kuruma önlemek için açık fare gözleri üzerine uygulayın.</li>
	<li>Torasik destek kemer fare karın altında fare vücut ve omurga kuyruk temel alınarak hafifçe çekerek düzleştirme sırasında yerleştirin. Teyp etiketleme laboratuvar kuyruğu ve bir yıldız gibi pozisyon tüm genişletilmiş bacaklarda güvenliğini sağlamak için kullanın. Güvenli bir kez torasik destek kemer rostrally, üst toraks doğru fare karın üzerinden itmek — torasik omurga yukarı (Şekil 1B) desteklemek için.</li>
	<li>Steril Cerrahi alan povidone-iyot tarafından takip adım %1,3 70 etanol ile hazırlanan deri kürk Kırpılan alanı dezenfekte tarafından hazırlayın. İki kez tekrarlayın. Bir geniş steril tutmak bir steril cerrahi örtüsü uygulanır.</li>
	<li>#10 neşter bıçak kullanmadan, bir dikey kesi torasik omurga eğriliği için paralel hayvanın boyuna ekseni olarak her iki kürek kemikleri orta noktasından olun. Yumuşak doku ve omurga dağılımı (Şekil 1 c) duyurmak cilt geri çek.</li>
	<li>Supraskapular yağ yastığı (T4/5 vertebra düzeyi demarcates) alt kenarını tanımlamak. Aynı #10 bıçakla geri-kas tendon sütundan ayırmak için vertebra kemik T5-T8/9 her iki tarafında boyunca dikkatle ama bir güçle, kesin.</li>
	<li>Ekartör diş omurganın her iki tarafında kesi siteleri ekleyin. Yeterince omurga retrakte kas tabakaları (Şekil 1 d) üzerinde çok fazla yük koymadan yükseltmesine ekartör genişleterek pozlamayı ayarlayın.</li>
	<li>Cerrahi mikroskop altında kalan kas ve diğer yumuşak doku vertebra kemik (Şekil 1E) ortaya çıkarmak için omurga örten dikkatle temizleyin. Vertebra spinöz proses ile dişli forseps clasping ve biraz yukarı hareket ettirerek kaldırılacak ve aşağı omurga tanımlayın. Not: Bu kimlik intervertebral eklemlerin izin ve faiz vertebra altında küçük açıklıklar (intervertebral foramina) ortaya çıkarmak.</li>
	<li>Maruz intervertebral deliği, eksize için vertebra lamina için kaudal her iki tarafındaki eğri körelmenin makas bir kafa yerleştirin ve çift taraflı bağlantı intervertebral eklem kesti.</li>
	<li>Lamina yukarı kaldırın ve lamina yalıtmak ve kemiği kaldırmak için üst eki kesti. Not: Bu omurilik (Şekil 1F) içeren sağlam dural kese geçirecek. Aşırı olabilir hangi-ebilmek var olmak güdümlü yanında duvar ilanı kanama 1 cm x 1 cm tül üzerine etkilenen bölgelere precut ve/veya yıkama ile steril PBS.</li>
	<li>Bir dönüm noktası hizmet veren dorsal orta hat ven ile orta çizgi her iki tarafında dorsolateral spinal kord (yaklaşık 1 mm derin), yaklaşık 0,5 mm lateral yüzeyine 45 ° bükülmüş şaft (ile iğne eğim yukarı bakacak şekilde) 30 G iğne ucu yerleştirin.</li>
	<li>Kablosunu iğneyi eğimi tüm uzunluğu eklenir böylece ~ 2 mm iğne kaudal rostral (paralel) orta hat olarak taşıyın. İğne girişi (Şekil 1G) yolu ile retracing tarafından kaldırın. Not: Kanama olmalı ancak spinal dokusunun şişmesi bu adımda görülebilir.</li>
	<li>Yarayı kapatmak için Retraktörü kaldırmak ve yaralanma 6-0 absorbe dikiş kullanarak midline birlikte her iki tarafında sırt kasları dikiş. 4-0 steril ipek dikiş örten cilt daha sonra kapatmak için kullanın.</li>
	<li>Antibiyotikli bir krem ameliyat sonrası enfeksiyon bir pamuklu çubukla ucu kullanarak önlemek için yüzeysel dikilmiş deri uygulamak. Post-operatif analjezik 0.1 mg/kg buprenorfin subkutan sıvı (1 mL lactated zil'ın çözeltisi) birlikte yönetmek.</li>
	<li>İsoflurane Buharlaştırıcı ve oksijen kapatın. Stereotaksik aygıt ve yer yok yatak takımları ile temiz bir kafeste fareyi kaldırın.</li>
	<li>İçinde belgili tanımlık kafes yaklaşık 30 cm uzakta a ısı lamba Kurtarma uyanma takip anestezi ve monitör çalışma biçiminden için fareyi getirin. Fare 5-10 dk içinde uyanıyorum ve hind-ekstremite fonksiyonu ile mümkün taraflidir ve/veya kuyruk zayıflık uyanma üzerine.</li>
	<li>Önümüzdeki birkaç gün içinde fare davranışı izlemek ve uygun ameliyat sonrası bakım ve analjezikler (yani, püre, lactated zil'ın çözüm sıvı subkutan, 0.1 mg/kg buprenorfin 2 x 2 – 3 gün ve uygun ağırlık kontrolü için subkutan günlük ) uygun olarak yerel hayvan tesisi düzenlemeleri ve bireysel olarak kurtarma olarak değişebilir.</li>
</ol>2. Neurosphere tahlil diseksiyon
Not: uygun steril doku kültürü yordamları izleyin.
<ol><li>Enzimatik solüsyona hazırlık
	<ol>
<li>32 mL, Earle ün dengeli tuz çözüm (EBSS) albümin ovomucoid inhibitörü içeren cam şişe ve yavaşça eriyene kadar girdap ekleyin.</li>
		<li>EBSS 5 mL önceden alakart papain cam şişe ekleyin ve çözülmeye 37 ° C su banyosu içinde yer. Çözüm olacak (Çözüm 1) temizleyin.</li>
		<li>EBSS 500 µL alıp önceden alakart DNaz konsantrasyonu 1 mg/mL (Çözüm 2) elde etmek için şişe cam ekleyin. Şişeyi ileri geri eğerek hafifçe karıştırın ve bu karışımı 250 µL çözüm 1'e ekleyin. Not: tüm çözümleri (Çözüm 1 ve 2) yapılan doku iki adet işlenmesi için yeterlidir. Eğer daha fazla doku parçaları işleme, daha fazla çözüm hazırlık ile karşılamak.</li>
	</ol></li>
	<li>Doku hazırlık ve diseksiyonu
	<ol>
<li>Yer laboratuvar mendil isoflurane fare kafes içine batırılmış ve 2-3 dk buharlar tamamen fare anestezi için izin verir. Aşağıdaki nakavt, fare kafesinden çıkarmak ve bir ayak parmağı-çimdik refleks yokluğu onaylayın.</li>
		<li>Metal körelmiş (yani, metal kafes kartı) Hayvan ötenazi yapmak ile servikal çıkığı gerçekleştirin. Sprey cömertçe % 70 etanol ile orta arka için onun boynundan hayvan euthanized.</li>
		<li>Kafatası tabanında makas kafasını kesti ve bir biyo torbaya atmak için kullanın. İçinde belgili tanımlık deri kas ve vertebra kemik dağılımı (Şekil 2A) ortaya çıkarmak için geri tüm uzunluğu boyunca bir ensizyon olun.</li>
		<li>Her kürek kemiği medial yönünü kaldırın (i.e., kürek kemiği — yağ yastığı örten tarafından tanımlanan) ve uzak (arasında scapulae ve omurga) yumuşak doku kesmek için makas kullanın. Ayrı tamamen temel vertebral sütunun ortaya çıkarmak için.</li>
		<li>Omurga eğriliği, makas aynı çifti üst göğüs diyafram yerleştirin ve vertebral sütunun uzakta ekli kaburga, kas ve iç organlarda (Şekil 2B) keserek ayırmak.</li>
		<li>Makas kaudal vertebra deliği/ataşını ve lamina (dorsal yüzeyi) her iki tarafında intervertebral eklem kesti. Sağlam kablonun zarar vermemesi için belirli kendine iyi bak. İstenen seviyeye kadar bu işleme devam edin ve/veya kablonun uzunluğunu maruz kalmaktadır.</li>
		<li>Dikkatle yanal kordon spinal kord doku içine bir petri düzenli yapay serebrospinal sıvı ile aktarma önce uzanan spinal nerve(s) kesin. Örnek buz (Şekil 2C) üzerinde tutun.</li>
		<li>Diseksiyon mikroskop altında ~ 2 mm rostral ve kaudal yaralanma siteye eklemek omurilik doku kes. Forseps iki çift yavaşça kordon boyuna dorsal ve ventral çatlaklar boyunca 2 yarıya içine ayırmak için kullanın (Şekil 2C').</li>
		<li>Microscissors ile yaralı dorsolateral beyaz madde kesmek. 15 mL konik tüp içine yerleştirin.</li>
		<li>Bir tane tuttuğunu forseps ile omurilik yarısı alay ve beyaz madde istenen periventriküler bölge yalıtmak için spinal kord rostrocaudal ölçüde bir çift daha iyi forseps kullanarak kaldırın. Spinal kord diğer yarısı için yineleyin.</li>
		<li>Periventriküler doku parçaları ayrı 15 mL konik tüpler içine yerleştirin. Hafifçe konik tüpler duvara karşı doku kıyma ve microscissors kullanın. Not: Doku ayrılma değişiklikler Papain ayrılma sistemi Protokolü23 ve yukarıda açıklanan doku hazırlık işlemleri24vardır.</li>
		<li>Yeni çözüm 1 (adım 2.1.3) 2.5 mL için doku örneği ekleyin ve bir rock'çı 30 dk 37 ° C'de yerleştirin.</li>
		<li>Yavaşça 1.000 µL pipet ucu ile çözümde doku triturate. 300 x g RT., 5 min için de bulutlu hücre süspansiyon santrifüj kapasitesi</li>
		<li>Earle ün dengeli tuz solüsyonu, ovomucoid inhibitörü çözüm (adım 2.1.1) 300 µL 2.7 mL ile çözüm 3 hazırlamak ve 150 µL DNaz, ben çözüm (adım 2.1.3).</li>
		<li>Süpernatant adım (adım 2.2.13) iptal et ve önceki adımdaki (adım 2.2.14) çözüm 3 1.5 ml resuspend.</li>
		<li>Bu yeni hücre süspansiyon (adım 2.2.15) 5 mL ovoimucoid inhibitörü çözeltisi (adım 2.1.1) kesintili yoğunluğu gradyan oluşturmak için yeni bir 15 mL tüp konik üst katman. Dik, 5 min için 300 x g , santrifüj</li>
		<li>Süpernatant atın ve 2 mL neurobasal medya resuspend. 3 dk RT. az için 300 x g , santrifüj</li>
		<li>Süpernatant atın ve 1 mL neurobasal medya resuspend. 4 mL 5 mL toplam hacmi için medyanın ardından 20 µm hücre süzgeç kullanarak süspansiyon filtre.</li>
	</ol></li>
	<li>Kaplama
	<ol>
<li>Neurobasal medya ile epidermal büyüme faktörü (20 ng/mL) ilave tarafından neurosphere büyüme için kültür ortamı hazırlamak / fibroblast büyüme faktörü (20 ng/mL) / heparin (2 µg/mL) [için kesin NSCs] veya [için ilkel NSCs] leukemina inhibitör faktörü (10 ng/mL). Her iki medya 10 mL 25 mL doku kültürü şişesi ekleyin.</li>
		<li>Bir hemasitometre ve Trypan mavi boya süspansiyon (adım 2.2.18)25hücrelerde sayısını hesaplamak için kullanın. Bir kez hesaplanır, doku kültürü şişeler (adım 2.3.1) hazırlanan hücreleri eklemek klonal yoğunluğunun eklenen hücreleri ile 10 hücre/µL ve yer doku kültürü şişesi içine kuluçka makinesi 24 h (37 ° C, % 95 nem oranı, % 5 CO2) için. Not: Sayım tekniği örneği aşağıdaki gibidir: Trypan mavi boya 10 µL ile hücre süspansiyon ve mix al 10 µL. Bu karışımdan 10 µL bir hemasitometre ekleyin. 10 X ışık mikroskobu altında canlı hücreleri sayı ve 4 / 4 x 4 çeyrek dairelerin içinde sayılan tüm hücreleri toplayın. Formülünü kullanın: 100.000/[(X cells/4) x 2 x 10 x 1.000] hücre süspansiyon her 25 mL doku kültürü şişeye klonal yoğunluğu (10 hücre/µL) sağlamak için kaplama hacmi vermek.</li>
		<li>24 h sonra yavaşça şişeye girdap ve içeriği 15 mL konik tüp içine dökün. Dik, 5 min için 300 x g , santrifüj</li>
		<li>Süpernatant atın ve 1-2 mL taze neurobasal medya hücrelerde yeniden askıya alma.</li>
		<li>2.3.2 500 µL her onların anılan sıraya göre mitojenle takıma medya (EFH kesin NSC büyüme için) ve ilkel NSC büyüme için LIF içeren bir 24-iyi doku kültürü plaka klonal yoğunluğu, süspansiyon ve plaka hücrelerde hücre sayısını saymak için adımları yineleyin. Not: x 2 x 10 x 1.000 adapte formülü (5000 / [hücre/4 X) kullanın) her şey 500 µL medya içeren kaplama için hücre süspansiyon hacmi hesaplamak için.</li>
		<li>7 gün boyunca da kuluçka (37 ° C, % 95 nem oranı, % 5 CO2) büyümeye hücreleri içeren tabak koyun.</li>
	</ol></li>
	<li>Sayma
	<ol>
<li>7 gün içinde kültür plakaları kaldırmak ve ışık mikroskop altında görüntüleyin. Neurospheres olan küresel kolonileri sayarak ölçmek > dNSCs kültürler için çapı 80 µm ve > 50 µm çapı pNSCs kültürler için. Not: arzu edilirse, neurospheres daha fazla pasajlı26 olabilir veya Ayrıştırılan. Hücreleri artık gerekiyorsa, orta renk sarı döner böylece hızlandırılmış hidrojen peroksit wells (yaklaşık 1 mL) 20 dk için ekleyerek atın. Sonra atın.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Johansson, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+neural+stem+cell+in+the+adult+mammalian+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of a neural stem cell in the adult mammalian central nervous system.</a> Cell. 96 (1), 25-34 (1999).</li>
<li>McKay, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+in+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Stem cells in the central nervous system.</a> Science. 276 (5309), 66-71 (1997).</li>
<li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mammalian neural stem cells.</a> Science. 287 (5457), 1433-1438 (2000).</li>
<li>Temple, S., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+in+the+adult+mammalian+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurology%22%5BJournal%5D)">Stem cells in the adult mammalian central nervous system.</a> Current Opinion in Neurology. 9 (1), 135-141 (1999).</li>
<li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+neural+stem+cells+contribute+to+stroke-induced+neurogenesis+and+neuroblast+migration+toward+the+infarct+boundary+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Cerebral+Blood+Flow+And+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Activated neural stem cells contribute to stroke-induced neurogenesis and neuroblast migration toward the infarct boundary in adult rats.</a> Journal Of Cerebral Blood Flow And Metabolism. 24 (4), 441-448 (2004).</li>
<li>Komitova, M., Mattsson, B., Johansson, B. B., Eriksson, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enriched+environment+increases+neural+stem%2Fprogenitor+cell+proliferation+and+neurogenesis+in+the+subventricular+zone+of+stroke-lesioned+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Enriched environment increases neural stem/progenitor cell proliferation and neurogenesis in the subventricular zone of stroke-lesioned adult rats.</a> Stroke. 36 (6), 1278-1282 (2005).</li>
<li>Faiz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+neural+stem+cells+from+the+subventricular+zone+give+rise+to+reactive+astrocytes+in+the+cortex+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Adult neural stem cells from the subventricular zone give rise to reactive astrocytes in the cortex after stroke.</a> Cell Stem Cell. 17 (5), 624-634 (2015).</li>
<li>Ren, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ependymal+cell+contribution+to+scar+formation+after+spinal+cord+injury+is+minimal%2C+local+and+dependent+on+direct+ependymal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Reports+-+UK%22%5BJournal%5D)">Ependymal cell contribution to scar formation after spinal cord injury is minimal, local and dependent on direct ependymal injury.</a> Science Reports - UK. 7, (2017).</li>
<li>Mothe, A. J., Tator, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation%2C+migration%2C+and+differentiation+of+endogenous+ependymal+region+stem%2Fprogenitor+cells+following+minimal+spinal+cord+injury+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Proliferation, migration, and differentiation of endogenous ependymal region stem/progenitor cells following minimal spinal cord injury in the adult rat.</a> Neuroscience. 131 (1), 177-187 (2005).</li>
<li>Thuret, S., Moon, L. D., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+interventions+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Therapeutic interventions after spinal cord injury.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7 (8), 628-643 (2006).</li>
<li>Bethea, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemically+administered+interleukin-10+reduces+tumor+necrosis+factor-alpha+production+and+significantly+improves+functional+recovery+following+traumatic+spinal+cord+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Systemically administered interleukin-10 reduces tumor necrosis factor-alpha production and significantly improves functional recovery following traumatic spinal cord injury in rats.</a> Journal of Neurotrauma. 16 (10), 851-863 (1999).</li>
<li>Donnelly, D. J., Popovich, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+its+role+in+neuroprotection%2C+axonal+regeneration+and+functional+recovery+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Inflammation and its role in neuroprotection, axonal regeneration and functional recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 209 (2), 378-388 (2008).</li>
<li>Cummings, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cells+differentiate+and+promote+locomotor+recovery+in+spinal+cord-injured+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+USA%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cells differentiate and promote locomotor recovery in spinal cord-injured mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 102 (39), 14069-14074 (2005).</li>
<li>Beattie, M. S., Hermann, G. E., Rogers, R. C., Bresnahan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+death+in+models+of+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Cell death in models of spinal cord injury.</a> Progress in Brain Research. 137, 37-47 (2002).</li>
<li>Metz, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+the+weight-drop+contusion+model+in+rats%3A+a+comparative+study+of+human+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Validation of the weight-drop contusion model in rats: a comparative study of human spinal cord injury.</a> Journal of Neurotrauma. 17 (1), 1-17 (2000).</li>
<li>Faulkner, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+astrocytes+protect+tissue+and+preserve+function+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reactive astrocytes protect tissue and preserve function after spinal cord injury.</a> Journal of Neuroscience. 24 (9), 2143-2155 (2004).</li>
<li>Cheriyan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+injury+models%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Spinal cord injury models: a review.</a> Spinal Cord. 52 (8), 588-595 (2014).</li>
<li>Deleyrolle, L. P., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+expansion%2C+and+differentiation+of+adult+Mammalian+neural+stem+and+progenitor+cells+using+the+neurosphere+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Cell+Transplantation%3A+Methods+and+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation, expansion, and differentiation of adult Mammalian neural stem and progenitor cells using the neurosphere assay.</a> Neural Cell Transplantation: Methods and Protocols. , 91-101 (2009).</li>
<li>Singec, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+actual+sensitivity+and+specificity+of+the+neurosphere+assay+in+stem+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Defining the actual sensitivity and specificity of the neurosphere assay in stem cell biology.</a> Nature Methods. 3 (10), (2006).</li>
<li>Mignone, J. L., Kukekov, V., Chiang, A. S., Steindler, D., Enikolopov, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+and+progenitor+cells+in+nestin-GFP+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neural stem and progenitor cells in nestin-GFP transgenic mice.</a> The Journal of Comparative Neurology. 469 (3), 311-324 (2004).</li>
<li>Xu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+basic+protein+regulates+primitive+and+definitive+neural+stem+cell+proliferation+from+the+adult+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Myelin basic protein regulates primitive and definitive neural stem cell proliferation from the adult spinal cord.</a> Stem Cells. 35 (2), 485-496 (2017).</li>
<li>Sachewsky, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primitive+neural+stem+cells+in+the+adult+mammalian+brain+give+rise+to+GFAP-expressing+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Primitive neural stem cells in the adult mammalian brain give rise to GFAP-expressing neural stem cells.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 810-824 (2014).</li>
<li>Worthington Biochemical Corporation. Papain Dissociation System. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.worthington-biochem.com/PDS/default.html">http://www.worthington-biochem.com/PDS/default.html</a> (2018).</li>
<li>Mothe, A., Tator, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+neural+stem%2Fprogenitor+cells+from+the+periventricular+region+of+the+adult+rat+and+human+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of neural stem/progenitor cells from the periventricular region of the adult rat and human spinal cord.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), (2015).</li>
<li>Absher, M. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B978012427150050098X">Hemocytometer counting.</a> Tissue Culture. , 395-397 (1973).</li>
<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+expansion+of+the+adult+mouse+neural+stem+cells+using+the+neurosphere+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and expansion of the adult mouse neural stem cells using the neurosphere assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (45), (2010).</li>
<li>Xiong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconditioning+with+isoflurane+produces+dose-dependent+neuroprotection+via+activation+of+adenosine+triphosphate-regulated+potassium+channels+after+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Preconditioning with isoflurane produces dose-dependent neuroprotection via activation of adenosine triphosphate-regulated potassium channels after focal cerebral ischemia in rats.</a> Anesthesia and Analgesia. 96 (1), 233-237 (2003).</li>
<li>Metz, G. A., Merkler, D., Dietz, V., Schwab, M. E., Fouad, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+testing+of+motor+function+in+spinal+cord+injured+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Efficient testing of motor function in spinal cord injured rats.</a> Brain Research. 883 (2), 165-177 (2000).</li>
<li>Hamers, F. P., Koopmans, G. C., Joosten, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CatWalk-assisted+gait+analysis+in+the+assessment+of+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">CatWalk-assisted gait analysis in the assessment of spinal cord injury.</a> Journal of Neurotrauma. 23 (3-4), 537-548 (2006).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Cerrahi işlem sırasında nerede araştırmacı belirli en iyi sonuçları elde etmek ve hayvanlar arasında değişkenlik en aza indirmek için özen birkaç önemli adımlar vardır. Anestezi nöroprotektif etkileri uzun süre maruz27olduğu gösterildiği gibi (isoflurane) inhale anestezi ile ameliyat sırasında özen göstermelidir. Buna göre omurilik yaralanma takip yeniden üretim kapasitesini okurken kadar hızlı ve verimli karıştırıcı değişkenleri önlemek için mümkün olduğunca ameliyat için çaba göster. Aynı isoflu...

Merkezi sinir sistemi kendi kendini yenileyerek, multipotent kök hücrelerin tüm farklı olgun sinir hücre türleri1,2,3,4' e çıkmasına kapasitesine sahip bir subpopulation içerir. Bu sinir kök hücreleri (NSCs) beyin ve omurilik özel niş yer alır ve çoğalırlar, göç ve olgun sinir hücrelerine ayırt etmek için yaralanma takip etkinleştirilebilir. NSCs ve onların Döl kortikal hasar modelleri5,6yaralanma sitedeki geçirilecek gösterilmiştir. Beyinde, NSCs nerede gliyal yara oluşumu7' ye katkıda astrocytes içine ayırt sitesine yaralanma lateral ventrikül geçirilecek gösterilmiştir. Omurilik, ancak, bu aynı endojen NSCs Medulla Spinalis Yaralanmalarında takip kurtarma tanıtmak için harnessed olabilir eğer sormak kaç çalışmalar yapılmıştır. Nitekim, şu anda bir tartışma olup doğrudan fiziksel zarar merkezi kanal8 astar periventriküler niş omurilik kök hücre havuzda aktivasyonu gerektirir veya spinal hasar (kök bırakarak parankimi kordon hücre niş olduğu gibi) endojen NSCs9etkinleştirmek yeterli olur.
Omurilik yaralanma (SCI) modeller bir dizi akut ve kronik yaralanması Patofizyoloji eğitim için kullanılmaktadır. Bu modeller de neuroprotection, immunomodulation ve gelişmekte olan hücre nakli/değiştirme stratejileri10,11,13SCI tedavisinde potansiyel tedaviler test etmek için kullanılmıştır. Geçerli modelleri büyük ölçekli fonksiyonel açıkları yanı sıra geniş lezyonlar ve kavite kordon14,15' te neden sıkıştırma ve/veya kontüzyonu yaralanmaları içerir. Sonuç gliyal izleri genişliği/çevresi omurilik16çoğunluğu ile birlikte birkaç spinal segmentler yayılabilir. Böylece, bu modeller klinik olmakla birlikte, endojen NSCs yaralanma aşağıdaki yanıt eğitimi için önemli sorunlar paraları. Daha hafif formların merkezi kanal17yedek yaralanma neden için uyarlanmış yaralanma kimyasal modellerdir. Ancak, bu tür yaralanma SCI ile ilişkili demiyelinizasyon odaklanmak ve travmatik bilimleri ile ilişkili fiziksel ve/veya mekanik hasar klinik modeli değildir
Geçerli yaralanma modellerin sınırlarını adrese, orijinal fare9, bir yetişkin fare modeli uygulama için gelişmiş bir iğne parça en az SCI modeli, adapte olması. Adapte yaralanma modelimiz tutarlı bir lezyon fare omurilik dorsolateral bölgesinin oluşturabilir ve merkezi canal yaralanma seviyelerine adlı yedek. Bu modelin avantajı bu NSC kinetik çalışma ruhsatı mı yaralanma ve onların potansiyel radyal geçiş yaralanma siteye aşağıdaki. Bir fare modeli kullanımı da soy izleme endojen NSCs ve yaralanma takip onların Döl izin transgenik fareler kullanımına izin verir. NSCs özelliklerini daha da bu protokol için tanıttı vitro neurosphere tahlil değiştirilmiş bir formu kullanarak tespit edilebilir.
Neurosphere tahlil NSCs yalıtım mitogens huzurunda izin veren bir vitro koloni oluşturan tahlil olduğunu. Klonal kaplama yoğunlukları bireysel NSCs NSCs küçük bir subpopulation ve ataları18,19büyük bir çoğunluğu oluşan hücre serbest yüzer küresel sömürgelerine çıkmasına çoğalırlar. Bizim iletişim kuralında, spinal kord periventriküler bölgesinden iki farklı ve lineally ilgili NSCs yalıtım göstermek — temel koşullar altında ve ardından en az SCI modelimiz. Kesin sinir kök hücreleri (dNSCs) hızlı testin ve gliyal fibrillary asidik protein (GFAP'nin) ve epidermal büyüme faktörü (EGF), fibroblast büyüme faktörü (FGF) ve heparin (birlikte olarak adlandırdığı EFH)20huzurunda yetiştirilmektedir. Bu dNSCs için çok az neurospheres vitrosebebiyet veren saf spinal kord nadirdir. Ancak, biz dNSCs en az SCI, periventriküler bölge21kimden izole neurospheres sayıda genişleyen takip etkinleştirilir gösterir. İlkel sinir kök hücreleri (pNSCs) ters yönde nöral kök hücre soy dNSCs. pNSCs pluripotency işaretçiyi Oct4 düşük düzeyde son derece nadir, hızlı ve lösemi inhibitör faktörü (LIF) duyarlı22. pNSCs ne zaman yetişkin fare spinal kord miyelin temel protein (MBP) birincil kültür varlığı nedeniyle gelen izole neurospheres oluşturmaz; Ancak, pNSC neurospheres MBP eksik fareler izole olabilir ve genişletilmiş aşağıdaki yaralanma onların sayılardır — dNSCs21benzer. Son olarak, biz dNSC elde edilen neurospheres erken kez en az bilm takip yaralanma siteden izole olabilir göstermek Bu bulgular bizim yaralanma modeli ve deneyleri periventriküler NSCs yeteneklerini çoğalırlar ve yaralanma yanıt olarak göç gibi etkinleştirme özellikleri değerlendirebilir göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>Agricola Ekartör</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>17005-04</td><td></td></tr><tr><td>Moria Vannas-Wolff Yaylı Makas (Kavisli)</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>15370-50</td><td>Körelmiş uçlar almak için sipariş verirken özelleştirin</td></tr><tr><td>Graefe Forseps (Düz, 1 x 2 Diş)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11053-10</td><td></td></tr><tr><td>Ekstra İnce Graefe Forseps (Kavisli, Tırtıklı)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11152-10</td><td>Veya Hartman Hemostats'ı dikmek için başka herhangi bir forseps</td></tr><tr><td>(Düz)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>13002-10</td><td>Veya</td></tr><tr><td>Neşter Sapı #3</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>10003-12</td><td>Veya başka herhangi bir uygun</td></tr><tr><td>Saç kesme makinesi</td><td>amazon.ca</td><td>https://www.amazon.ca/Wahl-Professional-8685-Classic-Clipper/dp/B00011K2BA</td><td>veya başka herhangi bir uygun</td></tr><tr><td>Stereotaksik enstrüman</td><td>Stoeling</td><td>51500</td><td>veya başka herhangi bir uygun</td></tr><tr><td>Buprenorfin</td><td></td><td></td><td>veya hayvan bakım tesisim</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td></td><td></td> veya hayvan bakım tesisi Tears Naturale P.M. <td>tarafından onaylanmış herhangi bir uygun uygun yaptırım uygulanmıştır</td></tr><tr><td>.</td><td>Alcon</td><td>https://www.amazon.ca/Alcon-Tear-Gel-Liquid-Eye-Gel/dp/B00HHXGUXE</td><td>veya başka herhangi bir uygun</td></tr><tr><td>Isoflurane</td>, <td>Baxter International Inc</td><td>, DIN 02225875</td><td>veya anestezi için uygun olan herhangi bir</td></tr><tr><td>başka Q-tips, Cottom Swabs</td><td>amazon.ca</td><td></td><td></td>https://www.amazon.ca/Q-Tips-Cotton-Swabs-500-Count/dp/B003M5UO6U/ref=pd_lpo_vtph_194_bs_tr_img_1/140-7113119-8364127?_encoding=UTF8&psc=1&refRID=JC16N542KVRF2N62N3DS</tr><tr><td>Pamuklu Gazlı Bez</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-761-52</td><td></td></tr><tr><td>30 G İğneler</td><td>Becton Dickinson</td><td>305106</td><td>Yaralanma İçin</td></tr><tr><td>25 G İğneler</td><td>Becton Dickinson</td><td>305122</td><td>İlaç enjeksiyonları için</td></tr><tr><td>İlaç enjeksiyonları için</td> <td>1 mL Şırınga</td><td>Becton Dickinson</td><td>3090659</td></tr><tr><td>3 mL Şırınga</td><td>Becton Dickinson</td><td>309657</td><td>sıvı enjeksiyonları için</td></tr><tr><td>4-0 Sütür</td><td>uoftmedstore.com</td><td>2297-VS881</td><td>cilt dikişi için</td></tr><tr><td>6-0 Sütür</td><td>uoftmedstore.com</td><td>VS889</td> kas <td>dikişi için</td></tr><tr><td>Polisporin merhem</td><td>amazon.ca 102051</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzofluran Buharlaştırıcı</td><td>VetEquip</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>15 mL konik tüpler</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Herhangi bir uygun</td></tr><tr><td>Petri Kabı</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>herhangi bir uygun</td></tr><tr><td>Tripan Blue</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Herhangi bir</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Herhangi bir uygun</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Herhangi bir</td></tr><tr><td>uygun Standart Diseksiyon Aleti</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000</td><td></td></tr><tr><td>Sayma Mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>CKX41</td><td></td></tr><tr><td>Nöral Bazal-A Orta</td><td>İnvitrojen</td><td>10888-022</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>İnvitrojen</td><td>17404-044</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin- Streptomisin</td><td>Gibco</td><td>15070</td><td></td></tr><tr><td>L- Glutamin</td><td>Gibco</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>İnvitrojen</td><td>12100046</td><td></td></tr><tr><td>F12</td><td>İnvitrojen</td><td>12700075</td><td></td></tr><tr><td>% 30 Glikoz</td><td>Sigma</td><td>G6152</td><td>1 M, 100 mL dH'de 9.01 g dH2O</td></tr><tr><td>1 M Glikoz</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>% 7.5 NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761</td><td>155 mM, 100 mL dH'de 1,30 g2O</td></tr><tr><td>155 mM NaHCO3</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 M HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td>100 mL dH'de 23,83 g2O</td></tr><tr><td>Apo-Transferrin</td><td>R& D Sistemleri</td><td>3188-AT</td><td></td></tr><tr><td>Putrescine&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P7505</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin</td><td>Sigma</td><td>I5500</td><td></td></tr><tr><td>Selenyum</td><td>Sigma</td><td>S9133</td><td></td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma</td><td>P6149</td><td></td></tr><tr><td>Papain Ayrışma Sistemi&nbsp;</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>PDS</td><td>1 flakon papain 2 numune için kullanılabilir</td></tr><tr><td>Epidermal Büyüme Faktörü</td><td>Invitrogen</td><td>PMG8041 Tozu,</td><td>1 mL Hormon Karışımı ile sulandırılır ve dondurucuda saklanmak üzere 20uL şişelere alikote</td></tr> edilir, <tr><td>Fibroblast Büyüme Faktörü</td><td>İnvitrojen</td><td>PHG0226 Tozu,</td><td>0.5 mL Hormon Karışımı ile yeniden oluşturulur ve 20 & mu'ya aliquoted edilir; Dondurucuda saklanacak L şişeleri</td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma</td><td>H3149</td><td></td></tr><tr><td>Lösemi İnhibitör Faktör</td><td>Ev İçi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>24 kuyulu Plakalar</td><td>NUNC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 M NaCl</td><td>Sigma</td><td>S5886</td><td>100 mL dH2O'da 11.69 g</td></tr><tr><td>1 M KCL</td><td>Sigma</td><td>P5405</td><td>100 mL dH2O'da 7,46 g</td></tr><tr><td>1 M MgCl2</td><td>Sigma</td><td>M2393</td><td>100 mL dH2O</td></tr><tr><td>108 mM CaCl2</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>C7902</td><td>100 mL dH2O'da 1,59 g</td></tr></tbody></table>

endojen nöral kök hücre etkinleştirme en az medulla spinalis yaralanmalarında, fare modeli değerlendirmek için bir neurosphere tahlil

A Neurosphere Assay to Evaluate Endogenous Neural Stem Cell Activation in a Mouse Model of Minimal Spinal Cord Injury

Sinir kök hücreleri (NSCs) Yetişkin memeli spinal kord nispeten mitotically sakin bir nüfus okudu vitro neurosphere tahlil kullanarak olabilir periventriküler hücre vardır. Bu koloni oluşturan tahlil NSCs cevaben bir tabak içinde eksojen faktörleri incelemek için güçlü bir araçtır; Ancak, bu aynı zamanda vivo içinde manipülasyonlar etkisi güçlü doğru anlayış ve tahlil sınırlamaları ile eğitim için kullanılabilir. Klinik ilgi bir manipülasyon yaralanma endojen NSC etkinleştirme üzerinde etkisi olduğunu. Medulla Spinalis Yaralanmalarında güncel modelleri ortak kontüzyonu, sıkıştırma ve transeksiyon modelleri şiddeti neden olarak kök hücre bulunduğu sitesinde yaralanma NSC niş imha bu çalışma için bir meydan okuma sağlar. Burada, Yetişkin fare omurilik alt torasik düzeyi (T7/8) Yüzeysel dorsolateral yüzeyde yerelleştirilmiş hasara neden olur en az yaralanma modeli açıklar. Bu yaralanma modeli yaralanma düzeyde merkezi kanal yedek ve yaralanma takip çeşitli zaman noktalarda lezyon düzeyinde bulunan NSCs analizine izin verir. İşte, nasıl neurosphere tahlil omurilik periventriküler bölge - ilkel ve kesin NSCs ikamet NSCs iki farklı ve lineally ilgili nüfus aktivasyonu çalışma için kullanılması gereken göstermektedir (pNSCs ve dNSCs, sırasıyla). Nasıl saptamak ve bu NSCs yaralanma ve beyaz madde yaralanma site düzeyinde periventriküler bölge kültür göstermektedir. Bizim ameliyat sonrası omurilik diseksiyonlarının artan sayıda pNSC ve dNSC elde edilen neurospheres periventriküler bölge yaralı iplerden denetimleri, onların harekete geçirmek yolu ile yaralanma konuşan göre göster. Ayrıca, yaralanma, dNSC elde edilen neurospheres yaralanma sitesinden ayrılmış olabilir — NSCs onların periventriküler niş yaralanma sitelere geçirme yeteneği gösteren.

Ameliyat, kuyruk ve olası hind-bacak taraflidir için en fazla 24 saat içeren en az motor açıkları fareler deneyim gerekir. Bu saatten sonra fareler hiçbir hind-felç ve/veya taraflidir ve minimal değişiklikler yürüyüş deneyim gerekir.
Şekil 3 5 gün en az Medulla Spinalis Yaralanmalarında temsilcisi neurosphere tahlil sonuçlarını gösterir. DNSC elde edilen neurospheres (EFH içinde yetiştirilen) kesin ...

Burada, biz orta kanal niş konut endojen sinir kök hücreleri (NSCs) yedek bir yetişkin fare en az omurilik yaralanma modelinde performansını göstermek. Neurosphere tahlil harekete geçirmek ve yaralanma takip kesin ve ilkel NSCs geçirilmesi ölçmek için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

Endojen nöral kök hücre etkinleştirme en az Medulla Spinalis Yaralanmalarında, fare modeli değerlendirmek için bir Neurosphere tahlil

Neural stem cells (NSCs) in the adult mammalian spinal cord are a relatively mitotically quiescent population of periventricular cells that can be studied ...

Bu yöntem, rejeneratif tıpta nöral öncü hücrelerin rolü ile ilgili soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Özellikle, yaralanmanın nöral öncü hücrelerin davranışını nasıl etkilediğini sorabiliriz. Bu tekniğin temel avantajı, omurilik yaralanmasının endojen nöral öncü hücre kinetiği üzerindeki etkisini incelemek için bir yaklaşım sağlamasıdır.Bu tekniklerin görsel gösterimi çok önemlidir. Cerrahi ve diseksiyon adımları hassasiyet gerektirdiğinden ve pratikle mükemmelleştirilebilmelerine rağmen öğrenilmesi zor olabilir. Prosedüre başlamadan önce, anestezi uygulanmış bir farenin sırtından kürkü sırtın ortasından boynuna ve kulaklarına çıkarmak için saç kesme makinesi kullanın.Fareyi stereotaktik bir cihaza sabitledikten sonra, vücudu ve omurgayı düzeltmek için kuyruğun tabanını hafifçe çekerken karnın altına dört ila beş parça rulo gazlı bez yerleştirin. Torasik omurgayı desteklemek için torasik gazlı bez rulosunu fare karnından rostral olarak üst toraksa doğru itin. Ve kuyruğu ve uzuvları yıldız benzeri bir yönde sabitlemek için laboratuvar bandı kullanın.Maruz kalan cildi sıralı% 70 etanol ve povidon iyot çubukları ile dezenfekte ettikten sonra, her iki kürek kemiğinin orta noktasın

a-neurosphere-assay-to-evaluate-endogenous-neural-stem-cell

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video protokolü yetişkin fare periventriküler bölge nöral kök hücreler oluşturmak ve genişletmek için neurosphere assay yöntemi gösterir ve bir tekrarlanabilir neurosphere kültürleri elde edebilirsiniz sağlamak için teknik bilgiler sağlar.

Neurosphere Testi Yetişkin Fare Nöral Kök Hücre İzolasyonu ve Genişleme

Bu video protokolü, embriyonik gün 14-fare beyninde ganglion eminences nöral kök hücrelerin izolasyonu ve genişleme için neurosphere testinin uygulama göstermektedir.

Neurosphere Testi kullanarak Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre Kültürü oluşturulması

Bu video, mikroskobik analiz yoluyla nöral öncü hücre nörosfer göç testini (nörosferden nöral öncü hücrelerin göç tepkisini incelemek için bir in vitro test) göstermektedir.

NPC Nörosfer Testi: Nörosferden Nöral Öncü Hücrelerin Göç Tepkisini Değerlendirmek İçin Bir İn Vitro Test

Kaynak: Lakshman, N.,  et al. Minimal Omurilik Yaralanması Fare Modelinde Endojen Nöral Kök Hücre Aktivasyonunu Değerlendirmek İçin Bir Nörosfer Testi. J. Vis. Uzm. (2018). Bu video, bir fare omurilik yaralanması modelinde nöral kök hücrelerin (NSC'ler) aktivasyonunu ve göçünü göstermektedir. Omuriliği ortaya çıkarmak için, anestezi uygulanmış bir fareden omurganın torasik bölgesinden bir omur çıkarılır. Daha sonra omuriliğin beyaz maddesinde, merkezi kanalı koruyan bükülmüş bir iğne...

 Nöral kök hücre aktivasyonu ve göçünü incelemek için minimal bir omurilik yaralanması modeli

Büyüme faktörlerini içeren fibrin matrisi tam omurilik kesisi sitelerine aşılı nöral kök hücrelerini korumak için kullanılmıştır. Aşılı hücreler tamamen lezyon boşluğu doldurdu ve uzun mesafelerde konak omuriliğe aksonlarını uzatıldı nöronlar da dahil olmak üzere birden fazla nöral hücre tipleri, ayrışmıştır.

Şiddetli Spinal Kord Yaralanması sonra fibrin ve Büyüme Faktörü kokteyller ile Nöral Kök Hücre Survival ve Farklılaşma Tanıtım

Omurilik yaralanması ciddi morbidite ve mortalitesi yüksek bir neden travmatik bir durumdur. Bu çalışmada detaylı olarak nöral kök hücrelerin bir nakli ardından farelerde omurilik yaralanması bir kontüzyon modelini tarif.

Omurilik Yaralanması Deneysel Kontuzif Modelinde Sinir Kök Hücre Nakli

Yetişkin memeli omuriliği, kültürde izole edilebilen ve genişletilebilen nöral kök/progenitör hücreler (NSPC'ler) içerir. Bu protokol, erişkin omuriliğinin periventriküler bölgesinden sıçandan ve insan organ nakli donörlerinden üretilen NSPC'lerin toplanmasını, izolasyonunu, kültürünü ve geçişini açıklar.

Periventriküler Yetişkin Rat Bölgesinde ve İnsan Omurilik gelen Nöral Kök / Progenitör Hücreler izolasyonu

Bu makalede, yenidoğan faresinde tekrarlanabilir omurilik kompresyon yaralanması (SCI) oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Model, spontan fonksiyonel iyileşmenin altında yatan adaptif plastisite mekanizmalarını incelemek için avantajlı bir platform sağlar.

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Burada, E13 fare embriyo ganglionic itibar bir roman mikrocerrahi teknik nöral kök hücrelerin izolasyonu için tanıtmak.

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Bu makalede, ayrıntılı olarak, postnatal fare nöral kök hücrelerinden nörosfer kültürlerin üretimi için bir protokol ana fare nörojenik nişler türetilmiştir açıklar. Nörosferler öncühücre sayılarının tahmin ine izin beyin dokusundan nöral kök hücreleri tanımlamak için kullanılır. Ayrıca, bu 3D yapılar farklıkoşullarda kaplanmış olabilir, nöronlar neden, oligodendrositler ve astrositler, hücre kaderini çalışma sağlayan.

Postnatal (P1−3) Fare Nörojenik Nişlerden Nörosferlerin İzolasyon ve Genişlemesi

Burada, erişkin murin subventriküler bölgesinden izole edilen genişletilmiş nöral kök hücrelerde (NSC'ler) gen iletim verimliliğini artırmak için tasarlanmış bir nükleofeksiyon sistemini açıklıyoruz. Bulgular, bu yöntemin NSC'lerde gen bozulmasını önemli ölçüde iyileştirdiğini, geleneksel transfeksiyon protokollerinin etkinliğini aştığını ve hücre sağkalım oranını artırdığını göstermektedir.

Erişkin Murin Subventriküler Bölgesinden Nöral Kök Hücrelerin İzolasyonu, Genişlemesi ve Nükleofeksiyonu

Öğrenin minimal omurilik yaralanması modelinde fare kullanarak endojen nöral kök hücre aktivasyonunu değerlendirmek için nörosfer analizini. Bu yöntem rejeneratif tıp araştırmalarında hücre davranışlarını incelemeye yardımcı olur.

Endojen nöral kök hücre etkinleştirme en az Medulla Spinalis Yaralanmalarında, fare modeli değerlendirmek için bir Neurosphere tahlil (Video) | JoVE Journal

Endojen nöral kök hücre etkinleştirme en az Medulla Spinalis Yaralanmalarında, fare modeli değerlendirmek için bir Neurosphere tahlil

Daha fazla video keşfet