Name: Venom toksinlerin Assassin böcek ve diğer Heteropteran böcekler hasat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Öğrenin assassin böceklerinden elektrostimülasyon ve gland diseksiyonu ile zehir toksinlerini nasıl hasat edeceğinizi. Bu yöntemler heteropteran böceklerde zehir bileşiminin karakterizasyonuna olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Mali anıyoruz Avustralya Ulusal Sağlık ve tıbbi araştırma Konseyi (asıl araştırma bursu Avustralya Araştırma Konseyi (hibe DP130103813 ve LP140100832 G.F.K., DECRA bursu DE160101142 için EABU için), destek APP1044414 G.F.K. için) ve Queensland Üniversitesi (doktora sonrası bursu A.A.W. için).

Bu iletişim kuralı sorumlu bakım ve hayvanların kullanımı öğretim ve araştırma (PPL 4.20.11) yanı sıra ulusal sağlık ve tıbbi araştırma Konseyi Avustralya şifre için kaygı ve kullanımı içinde yola University in Queenslands İlkesi ile uyumludur. hayvanların bilimsel amaçlar için (8th Edition 2013).
Dikkat: envenomated assassin hataları işlerken olmaması için dikkat ediniz. Zehir savunma tükürmek türler işlerken gözleri korumak için özen gösterin. Kendine iyi bak boyunca deneysel hayvan incitmek değil. Bu bağlar gibi lastik bantlar üzerinde baskı izleme ve hortum kırık değil sağlanması içerir.
Not: İsteğe bağlı olarak, CO2 0,5-2 için maruz hayvanlar uyuşturan min veya içinde zehir hasat öncesi 4-10 ° C'ye soğutma güvenli aktarımı ve kısıtlama kolaylaştırmak için 1-3 amaçlamaktadır. Anestezi kesinlikle gerekli değildir ancak güvenli kısıtlama çevik veya güçlü örneklerin kolaylaştırabilir. Ancak, hayvan zehir hasat izin vermek için uyanık olması gerekir. Aşağı akım uygulamaları proteaz inhibitörleri eklemek olup olmadığını karar verirken göz önünde bulundurun.
1. hasat zehir toksin elektrostimülasyon tarafından
<ol><li>Toksinler hasat edilecek canlı örnekleri edinin.</li>
	<li>Kullanım önceden hazırlanmış plastik cımbız pozitif ve negatif elektrotlar ile her iki ucuna monte. Elektrikli cımbız bir electrostimulator veya gerilim ayarlanmasını sağlar sabit voltaj kaynağı bağlanın.<ol>
<li>Küçük (~ 10 mm) ve büyük (~ 25 mm) katil böcekler için en yüksek voltaj 15 ve 25 V sırasıyla kullanın.</li>
		<li>Dev su böcekleri gibi daha büyük heteropterans için 40 V kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Canlı hata onlara göğüs üzerinde bir lastik bant kullanarak bir platforma şeritleme dizginlemek.</li>
	<li>Hortum ucu uygun bir toplama ucu yerleştirin. Assassin hatalar için P200 pipet ipucu kullanın. Dev su böcekleri için kapalı diyafram boyutunu artırmak için P200 bahşiş ekstremite kesti.<ol>
<li>Yavaşça hortum temiz cımbız kapalı bir çift ile Asansör ve hortum sonunda üzerinde toplama ucu açık diyafram itin.</li>
		<li>İstenirse, hortum toplama içine yerleştirerek önce µL ultrasaf su alımını ~ 5 ipucu. Hasat zehir seyreltilmiş rağmen bu ipucu içinde kalan zehir kayıplarını azaltır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Elektrostimülasyon uygulanır. 2.5 M NaCl/50% gliserol gibi iletken jel uyarıcı elektrotlar daldırma. Elektrotlar Toraks için geçerlidir. Belostomatids için iki elektrot başın arka dorsal yüzeye uygulanır.</li>
	<li>Autodegradation önlemek için zehir saklayın. Hızlı bir şekilde zehir kalıptan çekilmiş sonra bir tüp-20 ° C veya-60 ° C veya proteaz inhibitörü kokteyl içeren bir tüp aktarın.</li>
	<li>1,5 ve 1,6 yeterli zehir kazanılır veya başka hiçbir zehir gelecek kadar yineleyin.</li>
</ol>2. zehir toksin tarafından taciz hasat
<ol><li>Hayvanlar zehir hasat için hazırlamak ve alt bölümleri 1.1 ve 1.3-1.4 açıklandığı gibi bir koleksiyon giriş hortum ucu yerleştirin.</li>
	<li>Zehir kendiliğinden kalıptan çekilmiş, 2.3 adıma gidin. Eğer değilse, hayvanların zehiri üretilen kadar yavaşça bu bacaklar, karın ve anten cımbız ile dokunmak tarafından taciz.</li>
	<li>Hızlı bir şekilde zehir bir tüp-20 ° C-60 ° C veya bir tüp içeren proteaz inhibitörü kokteyl, istenirse aktarın.</li>
</ol>3. hasat tarafından taciz "Türler tükürme" Venom zehir toksinlerin
<ol><li>Uyuşturan veya kısmen uyuşturan, böcek herhangi bir erken savunma tükürme önlemek için onun muhafaza--dan çıkarmadan önce.</li>
	<li>Davranış tükürme zehir kışkırtmak. İçeren ve bir standart 90 x 16 mm Petri kabına derin kapağını kullanarak böcek yeniden konumlandırmak. Kapak biraz arka ve 1-4 cm uçuş önlemek için böcek yukarıda tutun. Çoğu böcek birkaç kez, genellikle hızlı bir şekilde tükürmek. Tüm zehir çanak alt toplanan emin olun.</li>
	<li>Venom 10 µL ultrasaf su ile durulama tarafından Petri kabına alt toplamak. Hızlı bir şekilde bir tüp-20 ° C veya-60 ° C veya proteaz inhibitörü kokteyl içeren bir tüp aktarın.</li>
</ol>4. hasat zehir toksin bezi diseksiyon tarafından
<ol><li>Hayvanlar kurban. Ağır uyuşturan veya öldürmek kullanarak Hayvanlar > 5 dk pozlama CO2. Saf CO2 doğrudan air-deliklere hayvanın konut bariyer boru.</li>
	<li>Diseksiyon tepsi için PIN böcek. Assassin hatalar için menfez yüzey (4.3) incelemek. Dev su böcekleri için sırt yüzey (4.4) incelemek.</li>
	<li>Ventral diseksiyon<ol>
<li>Üç pimleri böcek zehiri bezleri Delme olmadan basılı posterior karın içine takın.</li>
		<li>Kısa bir ensizyon minyatür neşter kullanarak karın ventral yüzeyde kesti. Minyatür makas Ensizyon exoskeleton sadece kesip iç yapıları zarar vermemeye dikkat çekici kafaya anteriorly genişletmek için kullanın.</li>
		<li>İç yapıları ortaya çıkarmak için Ensizyon böcek tarafına uzanan birden çok yan kesim yapmak. Sonra her flep iç yapıları ortaya çıkarmak için ventral ezilecektir pin.</li>
		<li>Büyük katil böcekler için dört yan kesik, orta Karin, ön karın, birinci ve ikinci bacak arasına ve ilk ayağı önünde olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dorsal diseksiyon<ol>
<li>Kanatları üssü yakınlarında kaldırın. Üç pimleri böcek zehiri bezleri Delme olmadan basılı posterior karın içine takın.</li>
		<li>Bir ensizyon baş minyatür makas ve neşter, exoskeleton sadece kesip iç yapıları zarar vermemeye dikkat çekici kullanarak karın kesme.</li>
		<li>Böcek iki yarısını ayrı zorlamak. Yanal iç boşluğu maruz bırakmak böcek uzunluğu boyunca birkaç iğne yerleştirin.</li>
		<li>Cımbız kullanarak uçuş kasları kaldırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Diseksiyon tepsi sel. Hata iç yapıları yukarı yüzer ve olmak izin vermek için batık kadar PBS daha kolayca görselleştirildiği ekleyin.</li>
	<li>Cımbız ve mikro-makas kullanarak, bağ ve sinir dokusu ve trakea dikkatli bir şekilde çıkarın. Zehir bezleri, yarı saydam yapıları kurbanın kanal her kenarı boyunca uzanan uzamış gibi görünür.<ol>
<li>Ana bezi tarafından anterior ve posterior LOB ve iki kanalları hilus toplantı ile karakteristik görünümünü tanımlayın.</li>
		<li>İstenirse, Aksesuar bezi kanal üzerinden hilus izini sürerek tanımlayın. Ana bezi hilus yayılan iki boru kesim tarafından ücretsiz.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İstenen bezi Lümen hasat. Bezinin bir microcentrifuge için PBS veya PBS 30 µL içeren buza aktarım proteaz inhibitörü kokteyl artı. Temiz keskin iğne ile bezleri lance.<ol>
<li>10 s ve bezi Lümen boşaltmak için santrifüj (1 dk, 5000 × g, 4 ° C) için girdap. Glandüler doku cımbız kullanarak kaldırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Toksin özü netleştirmek. Santrifüj (5 dk, 17.000 × g, 4° C) süpernatant istinat ve Pelet atarak herhangi bir katı parçacıkları kaldırmak için. -20 ° C veya autoproteolytic yıkımı önlemek için-60 ° C saklayın.</li>
</ol>

<ol><li>Walker, A. A., Weirauch, C., Fry, B. G., King, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venoms+of+heteropteran+insects%3A+A+treasure+trove+of+diverse+pharmacological+toolkits%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins%22%5BJournal%5D)">Venoms of heteropteran insects: A treasure trove of diverse pharmacological toolkits.</a> Toxins. 8 (2), 43(2016).</li>
<li>Ribeiro, J. M. C., Assumpção, T. C., Francischetti, I. M. B. <a target="_blank" href="https://www.hindawi.com/journals/psyche/2012/470436/">An insight into the sialomes of bloodsucking Heteroptera.</a> Psyche (Stuttg). 2012, 1-16 (2012).</li>
<li>Ambrose, D. P., Maran, S. P. M. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/320234828_Quantification_protein_content_and_paralytic_potential_of_saliva_of_fed_and_prey_deprived_reduviid_Acanthaspis_pedestris_Stal_Heteroptera_Reduviidae_Reduviinae">Quantification protein content and paralytic potential of saliva of fed and prey deprived reduviid Acanthaspis pedestris Stål (Heteroptera: Reduviidae: Reduviinae).</a> Indian Journal of Environmental Science. 3 (1), 11-16 (1999).</li>
<li>Edwards, J. S. <a target="_blank" href="http://jeb.biologists.org/content/38/1/61">The action and compostion of the saliva of an assassin bug Platymeris rhadamanthus Gaerst. (Hemiptera, Reduviidae).</a> Journal of Experimental Biology. 38, 61-77 (1961).</li>
<li>Zerachia, T., Bergmann, F., Shulov, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZerachia%2C+T+%22Animal+and+Plant+Toxins%22">Animal and Plant Toxins</a>. Kaiser, E. , Goldman. 143-146 (1973).</li>
<li>Walker, A. A., Hernández-Vargas, M. J., Corzo, G., Fry, B. G., King, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Giant+fish-killing+water+bug+reveals+ancient+and+dynamic+venom+evolution+in+Heteroptera%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Giant fish-killing water bug reveals ancient and dynamic venom evolution in Heteroptera.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. , (2018).</li>
<li>Walker, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Giant+fish-killing+water+bug+reveals+ancient+and+dynamic+venom+evolution+in+Heteroptera%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Giant fish-killing water bug reveals ancient and dynamic venom evolution in Heteroptera.</a> Cell. Mol. Life Sci. , (2018).</li>
<li>Walker, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+assassin+bug+Pristhesancus+plagipennis+produces+two+distinct+venoms+in+separate+gland+lumens%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">The assassin bug Pristhesancus plagipennis produces two distinct venoms in separate gland lumens.</a> Nature Communications. 9 (1), 755(2018).</li>
<li>Hernández-Vargas, M. J., Santibáñez-López, C. E., Corzo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+insight+into+the+triabin+protein+family+of+American+hematophagous+reduviids%3A+Functional%2C+structural+and+phylogenetic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins%22%5BJournal%5D)">An insight into the triabin protein family of American hematophagous reduviids: Functional, structural and phylogenetic analysis.</a> Toxins. 8 (2), 44(2016).</li>
<li>Dan, A., Pereira, M. H., Pesquero, J. L., Diotaiuti, L., Beirao, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+the+saliva+of+Triatoma+infestans+%28Heteroptera%3A+Reduviidae%29+on+sodium+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Entomology%22%5BJournal%5D)">Action of the saliva of Triatoma infestans (Heteroptera: Reduviidae) on sodium channels.</a> Journal of Medical Entomology. 36 (6), 875-879 (1999).</li>
<li>Corzo, G., Adachi-Akahane, S., Nagao, T., Kusui, Y., Nakajima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+peptides+from+assassin+bugs+%28Hemiptera%3A+Reduviidae%29%3A+isolation%2C+chemical+and+biological+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Letters%22%5BJournal%5D)">Novel peptides from assassin bugs (Hemiptera: Reduviidae): isolation, chemical and biological characterization.</a> FEBS Letters. 499 (3), 256-261 (2001).</li>
<li>Sahayaraj, K., Kumar, S. M., Anandh, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+milking+and+electric+shocks+for+venom+collection+from+hunter+reduviids%5BTitle%5D)+AND+%22Entomon%22%5BJournal%5D)">Evaluation of milking and electric shocks for venom collection from hunter reduviids.</a> Entomon. 31 (1), 65-68 (2006).</li>
<li>Silva-Cardoso, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paralytic+activity+of+lysophosphatidylcholine+from+saliva+of+the+waterbug+Belostoma+anurum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Paralytic activity of lysophosphatidylcholine from saliva of the waterbug Belostoma anurum.</a> Journal of Experimental Biology. 213 (19), 3305-3310 (2010).</li>
<li>Noeske-Jungblut, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Triabin%2C+a+highly+potent+exosite+inhibitor+of+Thrombin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Triabin, a highly potent exosite inhibitor of Thrombin.</a> Journal of Biological Chemistry. 270 (48), 28629-28634 (1995).</li>
<li>Noeske-Jungblut, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inhibitor+of+collagen-induced+platelet+aggregation+from+the+saliva+of+Triatoma+pallidipennis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">An inhibitor of collagen-induced platelet aggregation from the saliva of Triatoma pallidipennis.</a> Journal of Biological Chemistry. 269 (7), 5050-5053 (1994).</li>
<li>Sahayaraj, K., Borgio, J. F., Muthukumar, S., Anandh, G. P. <a target="_blank" href="http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1678-91992006000300011">Antibacterial activity of Rhynocoris marginatus (Fab.) and Catamirus brevipennis (Servile) (Hemiptera: Reduviidae) venoms against human pathogens.</a> Journal of Venomous Animals and Toxins Including Tropical Diseases. 12 (3), 487-496 (2006).</li>
<li>Haridass, E. T., Ananthakrishnan, T. N. <a target="_blank" href="http://agris.fao.org/agris-search/search.do?recordID=US201301326115">Functional morphology of the salivary system in some reduviids (Insecta-Heteroptera-Reduviidae).</a> Proceedings of the Indian Academy of Sciences. Animal Sciences. 90 (2), 145-160 (1981).</li>
<li>Ignacimuth, A., Sen, A., Janarthanan, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMaran%2C+SPM+%22Biotechnological+Applications+for+Integrated+Pest+Management%22">Biotechnological Applications for Integrated Pest Management</a>. , Oxford Publishing. 125-131 (2000).</li>
<li>Maran, S. P. M., Selvamuthu, K., Rajan, K., Kiruba, D. A., Ambrose, D. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMaran%2C+SPM+%22Insect+Pest+Management%2C+A+Current+Scenario%22">Insect Pest Management, A Current Scenario</a>. Ambrose, D. P. , Entomology Research Unit. 346-361 (2011).</li>
<li>Pereira, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticoagulant+activity+of+Triatoma+infestans+and+Panstrongylus+megistus+saliva+%28Hemiptera%2FTriatominae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Tropica%22%5BJournal%5D)">Anticoagulant activity of Triatoma infestans and Panstrongylus megistus saliva (Hemiptera/Triatominae).</a> Acta Tropica. 61, 255-261 (1996).</li>
<li>Ribeiro, J. M., Marinotti, O., Gonzales, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+salivary+vasodilator+in+the+blood-sucking+bug%2C+Rhodnius+prolixus%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">A salivary vasodilator in the blood-sucking bug, Rhodnius prolixus.</a> British Journal of Pharmacology. 101 (4), 932-936 (1990).</li>
<li>Ribeiro, J. M., Schneider, M., Guimarães, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+characterization+of+prolixin-S+%28nitrophorin+2%29%2C+the+salivary+anticoagulant+of+the+blood-sucking+bug+Rhodnius+prolixus%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Journal%22%5BJournal%5D)">Purification and characterization of prolixin-S (nitrophorin 2), the salivary anticoagulant of the blood-sucking bug Rhodnius prolixus.</a> Biochem Journal. 308 (1), 243-249 (1995).</li>
<li>Swart, C. C., Deaton, L. E., Felgenhauer, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+salivary+gland+and+salivary+enzymes+of+the+giant+waterbugs+%28Heteroptera%3B+Belostomatidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Biochemistry+and+Physiology+A+Molecular+%26+Integrative+Physiology%22%5BJournal%5D)">The salivary gland and salivary enzymes of the giant waterbugs (Heteroptera; Belostomatidae).</a> Comparative Biochemistry and Physiology A Molecular & Integrative Physiology. 145 (1), 114-122 (2006).</li>
<li>Rasmussen, S., Young, B., Krimm, H. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1469-7998.1995.tb02743.x/full">On the 'spitting' behaviour in cobras (Serpentes: Elapidae).</a> Journal of Zoology. 237 (1), 27-35 (1995).</li>
<li>Fink, L. S. <a target="_blank" href="https://bugguide.net/node/view/1371711">Venom spitting by the green lynx spider, Peucetia viridans (Araneae, Oxyopidae).</a> Journal of Arachnology. 12, 372-373 (1984).</li>
<li>Herzig, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogenesis%2C+gender%2C+molting+influence+the+venom+yield+in+the+spider+Coremiocnemis+tropix+%28Araneae%2C+Theraphosidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Venomous+Research%22%5BJournal%5D)">Ontogenesis, gender, molting influence the venom yield in the spider Coremiocnemis tropix (Araneae, Theraphosidae).</a> Journal of Venomous Research. 1, 76-83 (2010).</li>
<li>Sahayaraj, K., Subramanium, M., Rivers, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+and+electrophoretic+analyses+of+saliva+from+the+predatory+reduviid+species+Rhynocoris+marginatus+%28Fab%29%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+Polonica%22%5BJournal%5D)">Biochemical and electrophoretic analyses of saliva from the predatory reduviid species Rhynocoris marginatus (Fab).</a> Acta Biochimica Polonica. 60 (1), 91-97 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Assassin böcek zehiri hasat en kritik adımı uygun yönteme bağlı olarak çalışma amacı seçmektir. Heteropteran zehirlerini hasat için sunulan üç yöntemlerinden her birinin avantajları ve dezavantajları bağlı olarak aşağı akım uygulamaları vardır.
Böcek zehri gelen hortum (protokoller 1-3) sınırdışı inducing zehir kirlenme tarafından glandüler doku önler. Buna ek olarak, bu yöntemleri öldürücü olmayan ve birçok kez bir böceğin yaşamı boyunca tekrar edilebilir. Elektrostimülasyon genellikle zehir ...

Heteropteran zehirlerini kuvvetli biyoaktif maddeler1vardır. Örneğin, kan besleme Heteroptera kissing böcekler (Triatominae) ve yatak hata (Cimicidae) gibi zehir/tükürük salgılarını kolaylaştırır hemostaz2kesintiye tarafından besleme. Bu zehirlerini toksinler koagülasyon, trombosit toplama ve vazokonstriksiyona yanı sıra ağrı da dahil olmak üzere birden çok yolları hedef ve yolları kaşınıyor. Diğer çoğu heteropteran tür zehirlerini kan besleme yerine predasyona kolaylaştırmak için uyarlanmış. Onların zehirlerini felç, ölüm ve omurgasızlar3,4enjekte edildiğinde doku الرسالة neden. Omurgalılar enjekte edildiğinde onların venom aynı zamanda ciddi etkileri olabilir. Örneğin, omurgalıların içine assassin hata Holotrichius innesi zehir enjeksiyonu, ağrı, kas felci ve kanama neden olur; Fareler envenomated bu hata nedeniyle solunum felci5hızlı bir şekilde ölür.
Transcriptomic ve proteomik çalışmalar bazı heteropteran zehirlerini protein bileşimi ortaya çıkardı. Predaceous türlerin zehirlerini proteaz, diğer enzimler, peptidler ve proteinler bilinmeyen yapısı ve işlevi6,7,8de zengindir. Kissing böcek zehiri üyeleri derinden etkileyen koagülasyon, trombosit toplama ve vazokonstriksiyona2,9triabin protein ailesinden, zengindir. Ancak, hangi toksinler zehir çoğu bioactivities altında yatan bilinmemektedir. Örneğin, Triatoma infestans öpüşme böcek zehiri analjezik ve sodyum kanalları10inhibe bildirilmiştir, ama aydınlatılmamıştır için bileşenleri sorumlu kalır. Aynı şekilde, ne bileşenleri assassin böcek zehiri, felç veya ağrı neden bilinmemektedir. Belirli zehir bioactivities ve yapısı ve fonksiyonu romanı zehir toksinlerin karakterize sorumlu toksinler tanımlamak için bir ön koşul zehir almaktır.
Heteropterans elektrostimülasyon5,6,7,8,11,12,13tarafından savunma araçları provokasyon zehir elde edilen yanıt-e doğru4,8mekanik zehir bezleri8,17 dissekan Toraks12,14,15,16, sıkma, ,18,19,20,21,22ve23muscarinic asetilkolin reseptör agonistleri uygulanması. Potansiyel avantajları ve dezavantajları, herhangi bir yöntemin yargılamak karmaşık morfolojisi ile iki ayrı lümen, ön ana bezi (AMG) ve posterior ana bezi (PMG), ana bir bezi oluşur heteropteran zehir bezleri tarafından yanı sıra bir Aksesuar bezi (AG) ilişkili. Bu farklı bezi bölmeleri av yakalama, savunma ve ekstra oral sindirim8,17gibi farklı biyolojik işlevi için özelleştirilmiş farklı protein salgıları üretmek. Peiratine ve ectrichodiine assassin hataları, AMG av yakalama ve ekstra oral sindirim17ile PMG ile ilişkili olduğu düşünülmektedir. AMG savunma zehir8salgılaması için olan ise ancak, içinde harpactorine hata Pristhesancus plagipennis PMG av yakalama ve sindirim için uzmanlaşmıştır. AG assassin hata8 ' küçük salgı işleve sahip veya proteaz depolama dev su böcekleri23yılında büyük bir site olarak tarif edilmiştir. Açıkçası, daha fazla çalışma çeşitli heteropteran alt gruplar arasında her bezi bölmesi işlevini açıklığa kavuşturmak ve en zehir zehirli işlevini belirlemek için gereklidir. Bu raporu heteropterans bu hedefe doğru toksinlerin zehir hasat için protokolleri açıklamak.

<table><tbody><tr><td>Electostimulator</td><td>Grass Technologies</td><td>S48 Kare Nabız Stimülatörü</td><td>Darbeli elektrostimülasyona izin veren elektrostimülatör</td></tr><tr><td>Tüy kadar hafif cımbız</td><td>Avustralya Entomolojik Malzemeleri</td><td>E122B</td><td>Canlı zehirli böcekleri işlemek için</td></tr><tr><td>Proteaz inhibitörü kokteyli</td><td>Sigma</td><td>4693124001</td><td>Zehirin otoproteolitik sindirimini önlemek için</td></tr><tr><td>Diseksiyon ekipman</td><td>Avustralya Entomolojik Malzemeleri</td><td>E152Micro</td><td>İnce diseksiyonlar için</td></tr><tr><td>Böcek pimleri</td><td>Avustralya Entomolojik Malzemeleri</td><td>E162</td><td>İnce diseksiyonlar için</td></tr></tbody></table>

venom toksinlerin assassin böcek ve diğer heteropteran böcekler hasat

Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects

Heteropteran böcekler katil böcekler (Reduviidae) ve dev su böcekleri (Belostomatidae) gibi ortak bir predaceous ve zehirli atadan soyundan ve trofik bu strateji kaybolmamış heteropterans çoğunluğu korumak. Bazı heteropterans omurgalı kanıyla beslemeye geçiş (kissing hataları, Triatominae; gibi ve tahtakurusu, Cimicidae) diğerleri bitkiler (en Pentatomomorpha) beslemeye yayıncısıysanız iken. Ancak, kan besleme, küçük kolaylaştırmak için kissing böcek tarafından kullanılan tükürük dışında örümcekler, Akrep ve yılan zehirlerini karşılaştırıldığında heteropteran zehirlerini hakkında bilinir.
Yapısı ve fonksiyonu olan hem morfolojik karmaşık ve birden fazla biyolojik rolü (Savunma, av yakalama ve ekstra oral sindirim) gerçekleştirmek venom/Labyal bezlerinin heteropteran zehir toksin karakterizasyonu için bir engeldir. Bu makalede, biz başarılı bir şekilde heteropteran zehirlerini toplamak için kullanılan üç yöntem açıklanmaktadır. İlk olarak, biz mevcut elektrostimülasyon kez içine enjekte edildiğinde öldürücü zehir toplamak için kullanışlı bir yol av hayvanları ve hangi tarafından glandüler doku kirlenme namussuz. İkinci olarak, hayvanların nazik taciz hortum ve/veya heteropterans bazı gruplar halinde tükürük venom zehir ekstrüzyon üretmek için yeterli olduğunu göstereceğiz. Üçüncü olarak, zehir toksin zehir bezleri elde etmek için anaesthetized hayvanlar diseksiyon tarafından hasat yöntemleri açıklanmaktadır. Bu yöntem diğer yöntemler için tamamlayıcı olduğu takson elektrostimülasyon ve taciz etkisiz neden olan toksinlerin hasat izin verebilir. Bu protokoller araştırmacılar heteropteran böcekler yapı-fonksiyon karakterizasyonu ve olası uygulamaları tıp ve tarım için toksinlerin hasat için olanak sağlar.

Harpactorine P. plagipennis ve reduviine Platymeris rhadamanthus, bazı heteropteran türlerin büyük miktarlarda (5-20 µL) zehir elektrostimülasyon (Tablo 1) karşılık olarak, güvenilir bir şekilde verim. Genel olarak, çoğu peiratine, reduviine ve harpactorine böcek zehiri yanıt olarak bu yöntem verim. Stenopodaine böcek arasında elektrostimülasyon zehir Oncocephalus sp. ama sp Thodelmus elde edildi. Örnek holoptiline ve emesine hatalar ön...

Her ne kadar alt Heteroptera içinde birçok böcekler (Insecta: Hemiptera) zehirli, onların venom kompozisyon ve onların venom toksinleri işlevleri vardır çoğunlukla bilinmeyen. Bu iletişim kuralı heteropteran zehirlerini elektrostimülasyon, taciz ve bezi diseksiyon kullanarak daha fazla karakterizasyonu için hasat yöntemleri açıklar.

Venom toksinlerin Assassin böcek ve diğer Heteropteran böcekler hasat

Heteropteran insects such as assassin bugs (Reduviidae) and giant water bugs (Belostomatidae) descended from a common predaceous and venomous ancestor, ...

Suikastçı böcekler, avlarını felç etmek ve önceden sindirmek için zehir kullanan bir böcek grubudur. Bununla birlikte, hayvan zehirleri yeni ilaçlar, böcek ilaçları ve bilimsel araçlar olarak ilgi çekici olmasına rağmen, ürettikleri toksinler neredeyse tamamen karakterize edilmemiştir. Bunun bir nedeni, suikastçı böceklerin örümcekler ve akrepler gibi ikonik zehirli eklembacaklılara kıyasla daha az bilinmesidir.Diğer bir neden ise, yakın zamana kadar toksinlerinin nasıl hasat edileceği hakkında çok az bilgi bulunmasıdır. Bu videoda, araştırmacıların suikastçı böceklerden ve ayrıca dev balık öldüren su böcekleri gibi ilgili böceklerden zehir toksinlerini başarılı bir şekilde toplamalarını sağlayacak yöntemler sunacağız. Birinci protokol, elektrostimülasyon yoluyla zehrin nasıl hasat edileceğini açıklar.İlk önce uygun böcekleri toplayın. Yetişkinler ve büyük periler ile çalışmak en kolay olanlardır. Böceklerin beslenmeden iki ila yedi gün sonra kullanılması, böceklerin zehir stokları biriktirdiğinden ancak açlıktan ölmediğinden emin olmak için idealdir.Uçlarında elektrotlar bulunan bir çift forseps hazırlayın ve bunları bir elektrik kaynağına bağlayın. İdeal olarak, bu kaynak, beş Hertz'de beş milisaniye darbe verebilen bir elektrostimülatör olmalıdır. Küçük veya büyük böcekler için sırasıyla 15 ila 25 volt arasında tepe voltajları kullanın.Bir elektrostimülatör mevcut değilse, beş ila 12 voltluk sabit voltajlar kullanın. Lastik bantlar ve bir köpük platform kullanarak böceği kısıtlayın. Böceğin hortumunu bir toplama tüpüne yerleştirin.P200 pipet tüpü çoğu suikastçı böcek için idealdir. İsteğe bağlı olarak, zehrin maksimum geri kazanımını sağlamak için hasattan önce uca az miktarda su eklenebilir. Elektrotlara iletken jel sürün, güç kaynağını açın ve elektrikli cımbızı böceğe uygulayın.Hortumdan zehir atılmasını izlerken bir dizi temas noktasıyla deney yapın. Otoproteolitik sindirimi önlemek için zehri donma sıcaklıklarında saklayın. Daha fazla zehir çıkmayana kadar elektrostimülasyonu yeni bir pipet tüpü ile tekrarlayın.İkinci protokol, savunma tepkisini kışkırtarak zehrin nasıl hasat edileceğini açıklar. Yukarıda açıklandığı gibi bir böceği hazırlayın ve kısıtlayın, hortumu bir toplama ucuna yerleştirin. Hayvana zarar vermeden, savunma tepkisini kışkırtmak için böceği nazikçe taciz edin.Bazen, hayvanı basitçe kısıtlamak veya hortumu toplama tüpüne sokmak, hortumdan zehir atılmasının eşlik ettiği bir savunma reaksiyonuna neden olabilir. Değilse, zehri ortaya çıkarmak için hayvanın göğüslerine, bacaklarına, karnına ve özellikle antenlerine hafifçe dokunun. Üçüncü protokolde, bu makalenin yazılı biçiminde, savunma amaçlı zehir tüküren türlerden nasıl zehir toplanacağını da açıklıyoruz.Dördüncü protokol, zehrin diseksiyon yoluyla doğrudan zehir bezlerinden nasıl toplanacağını açıklar. Hayvanları 10 dakika boyunca karbondioksite maruz bırakarak uyuşturun. Zehir bezlerini delmeden böceği aşağıda tutmak için arka karın içine üç pim sokun.Minyatür bir neşter kullanarak karnın ventral yüzeyinde kısa bir orta hat kesisi yapın. Orta hattı ön yönde başa doğru uzatmak için minyatür makas kullanın, sadece dış iskeleti kesmeye ve iç yapılara zarar vermemeye dikkat edin. İç yapıları ortaya çıkarmak için, orta hat kesisinden böceğin yan tarafına uzanan çok sayıda yanal kesim yapın.Her iki kesik arasındaki ventral dış iskelet daha sonra iç yapıları ortaya çıkarmak için geriye doğru sabitlenebilir. Böcek suya batırana kadar tuzlu su çözeltisi kullanarak diseksiyon tepsisini doldurun, bu da iç yapıların yüzmesine ve daha kolay görüntülenmesine izin verir. Zehir bezleri, sindirim kanalının her iki tarafında uzanan yarı saydam uzun yapılar olarak görünecektir.Cımbız ve mikromakas kullanarak, sindirim kanalını veya zehir bezlerini yırtmamaya çalışarak bağ ve sinir dokusunu ve trakeayı dikkatlice çıkarın. Ana bez, ön ve arka lobları ve hilusta buluşan iki kanal ile karakteristik yapısı nedeniyle tanınabilir. Suikastçı böcekler ve belki de diğer heteropteranlar için, hemen hemen tüm toksinler ana bezin iki lobunun lümeninde depolanır.Bu nedenle, ana bezi soluk borusu ve bağ dokusundan kurtardıktan sonra, hilustan çıkan iki kanal kesilebilir ve ana zehir bezi toplanabilir. Aksesuar bezi de isteniyorsa, genellikle bağırsağa çok karşıdır ve hilustan kanalların izlenmesiyle açık bir şekilde tanımlanabilir. Her durumda, bezleri erken kırmamaya ve zehri çevredeki tuzlu suya kaptırmamaya dikkat edin.Ana bezin lobları ayrılacaksa, bunu salinden çıkardıktan sonra hızlı bir şekilde yapın ve yazılı el yazmasının 4.6 ve 4.7 adımlarında açıklandığı gibi bez lümenlerinin içeriğini hemen toplamaya devam edin. Sonuçlar, kullanılan böceğin tam alt protokolüne ve türüne bağlı olarak değişecektir. Bu videoda sunulan birinci ve ikinci alt protokoller, sırasıyla elektrostimülasyon ve taciz yoluyla zehir toksinlerinin nasıl toplanacağını gösterdi.Bu yöntemlerin her ikisi de tipik olarak yaklaşık 50 ila 250 miligram protein içeren konsantre bir sıvı ve enzimler, gözenek oluşturan toksinler ve peptitler dahil olmak üzere 100'den fazla protein bazlı bileşen verir. Bu protokollerin her ikisinin de temel avantajı, hızlı, öldürücü olmamaları ve zehrin glandüler doku tarafından kontamine olmamasıdır. Elektrostimülasyon veya taciz yoluyla hasat için en büyük dezavantaj, elde edilen zehrin glandüler kaynağının bilinmemesi ve hasat edilen zehrin protein içeriğinin protokole bağlı olarak farklılık gösterebilmesidir.Ayrıca, elektrostimülasyon ve taciz, tüm yırtıcı heteroptera türleri için etkili değildir. Son alt protokolde, toksinleri doğrudan toplamak için tıkanmış zehir bezlerinin nasıl inceleneceğini gösterdik. Bu teknik aynı zamanda çeşitli proteinlerden oluşan bir kokteyl verir, ancak bu durumda zehir toksinleri glandüler doku ile bir miktar kontaminasyon gösterebilir.Bununla birlikte, diseke bezlerden toksinlerin toplanmasının bir avantajı, glandüler orijin bölmesinin tam olarak bilinmesidir. Sonuç olarak, araştırmacıları araştırma sorularına uygun bir hasat yöntemi seçmeye teşvik ediyoruz. Örneğin, bir tür içindeki zehir kullanımının biyolojisi üzerine yapılan araştırmalar, birden fazla hasat tekniğinin kullanılmasından fayda sağlayacaktır.Biyoprospektif çalışmalar için, spesifik deney tasarımına bağlı olarak, birden fazla türden zehir toplamak için tek bir yöntem daha ekonomik olabilir. Bu videonun ve beraberindeki yazılı makalenin, araştırmacıların, bileşimini, biyoaktivitesini ve evrimini anlamak için bir ön koşul olan suikastçı böceklerden ve diğer heteropteran böceklerden zehir toplamalarını kolaylaştıracağını umuyoruz.

harvesting-venom-toxins-from-assassin-bugs-other-heteropteran

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Bu makale 1 için elektrik stimülasyonu kullanarak örümcekler zehir çıkarılması için bir protokol), proteomik karakterizasyonu yapmak 2) zehir bezi gen ifadesini uyarmak, ve 3) zehirlerinin fonksiyonel çalışmalar yapmak sağlar. Bu gen ifadesi çalışmaları için zehir bezi microdissections bir açıklama ile takip edilmektedir.

Proteomik ve Transkriptomik Analizleri Spiderlardan Venom çıkarımı ve Venom Bezi Microdissections

Daha sonraki analizler için ölçülebilir hemolenfleri küçük eklembacaklılardan verimli bir şekilde toplamak için bir yöntem tarif ediyoruz.

Küçük Eklembacaklılardan Hemolenf Toplamak için Kesin ve Ölçülebilir Bir Yöntem

Bu protokol, bir fitokimyasalın lepidopteran böcek larvaları üzerindeki potansiyel toksik etkisini değerlendirmek için zorunlu besleme testini açıklar. Bu, öldürücü ve öldürücü dozu, caydırıcı aktiviteyi ve fizyolojik etkiyi optimize etmek kolay, oldukça ölçeklenebilir bir böcek biyo-tahlilidir. Bu, çevre dostu böcek ilaçlarını taramak için kullanılabilir.

Fitokimyasalların Helicoverpa armigera Üzerindeki İnsektisidal Etkisinin Değerlendirilmesi için Beslenme Deney Sistemi Geliştirilmesi

Burada, Brezilya sağlık sisteminin talebini karşılamak için sonraki akrep panzehiri üretimi için zehir sağlamak amacıyla büyük ölçekli Tityus serrulatus Lutz ve Mello, 1922 (Brezilya sarı akrep) yetiştiriciliği için başarılı bakım ve zehir çıkarma protokolleri sunuyoruz.

Antivenom Üretimi için Tityus serrulatus'un (Brezilya Sarı Akrebi) Esir Bakımı ve Zehir Ekstraksiyonu

Burada, polietilen film ve amino asit çözeltisi ile oluşturulan yapay bir konakçı kullanarak Trichogramma dendrolimi'den zehir çıkarmak için bir protokol sunuyoruz.

Parazitoid Yaban Arısı Trichogramma dendrolimi'den Yapay Bir Konakçı Kullanarak Zehir Çıkarılması

Yabani hayvanlar genellikle çok çeşitli helmintler tarafından parazitlenir. Dört ana helmint türü "yuvarlak kurtlar" (nematodlar), "dikenli başlı solucanlar" (akantosefalanlar), "parazitler" (trematodlar) ve "tenyalar" (sestodlar). Burada helmintlerin omurgalı bir hayvandan nasıl toplandığını ve nasıl korunduğunu ve taksonomik olarak nasıl tanımlandığını açıklıyoruz.

Yaban Hayatından Helmint Toplama ve Tanımlama

Mikroalg yetiştiriciliğinin endüstriyel baca gazı ile entegrasyonu, sonuçta ağır metalleri ve diğer inorganik bileşikleri büyüme ortamına sokacaktır. Bu çalışma, ağır metallerin ve inorganik kirleticilerin fotobiyoreaktörlerde yetiştirilen Nannochloropsis salina'nın büyümesi üzerindeki nihai kaderini ve etkisini belirlemek için kullanılan bir prosedür sunmaktadır.

Ağır Metal ve Mikroalglerden Verimlilik Diğer İnorganik Bulaşanlar Kantitasyonu

Davranışsal tahliller, nöronal işlevi anlamak için güçlü araçlar sağlar. Burada, model nematod Pristionchus pacificus ve akrabalarında bulunan yırtıcı beslenme davranışını ölçmek için çeşitli protokoller sunuyoruz. Ek olarak, ağız yapıları ve dişler dahil olmak üzere yırtıcı beslenme adaptasyonlarını analiz etmek için yöntemler sunuyoruz.

içinde Yırtıcı Beslenme Davranışları tahlil<em&gt; Pristionchus</em&gt; Ve Diğer Nematodlar

Mikroplastlar, öngörülemeyen etkileri olan potansiyel olarak toksik organik kirleticilerin vektörü gibi davranır. Bu protokol, plastik topaklara adsorbe edilen organochlorine böcek ilacı düzeylerini değerlendirmek ve polimer kimyasal yapısını belirlemek için alternatif bir metodoloji anlatmaktadır. Odaklı, basınçlı sıvı özütleme ve zayıflatılmış toplam yansıma Fourier dönüşümü kızıl ötesi spektroskopisi üzerine odaklanmaktadır.

Plastik Peletlerden Organochlorine Pestisitlerin Çıkarılması ve Plastik Tipi Analizi

Yöntem atmosferik aerosollerde, bu yüzey hedeflenen ekstraksiyon ve kritik misel konsantrasyonunun (CMC) içeren su içinde mutlak konsantrasyonları ve yüzey gerilimi eğrilerinin belirlenmesi için sunulmaktadır.

Atmosferik Aerosoller ekstraksiyonu ve Yüzey Aktif Karakterizasyonu

Öğrenin assassin böceklerinden elektrostimülasyon ve gland diseksiyonu ile zehir toksinlerini nasıl hasat edeceğinizi. Bu yöntemler heteropteran böceklerde zehir bileşiminin karakterizasyonuna olanak tanır.

Venom toksinlerin Assassin böcek ve diğer Heteropteran böcekler hasat

Daha fazla video keşfet