Name: Diş implantları için farklı malzemeler üzerinde sözlü biyofilm oluşumu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 19 s
Description: Keşfedin, titanyum ve zirkonya diş implant malzemelerinde sözlü biyofilm oluşumunu in situ model ve ileri mikroskopi teknikleriyle karşılaştırın. Bu yöntem, bakteri canlılığı ve morfolojisini değerlendirerek malzeme seçimini optimize etmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar EDS ve SEM onun cömert yardım için teşekkür ederiz José Augusto Maulin mikroskobu çok kullanıcılı laboratuvar (Tıp Fakültesi, Ribeirão Preto) üzerinden analizleri ve kardeşim Teixeira Machado için video sürüm onun cömert teknik yardım.

Bu çalışma okul diş hekimliği Ribeirão Preto, kurumsal inceleme Kurulca kabul edildi ve gönüllü katılımcı yazılı izni (işlem 2011.1.371.583) imzaladı.
1. biyofilm oluşumu içinde in Situ
<ol><li>
Katılımcıların seçimi
	<ol>
<li>Aşağıdaki dahil ölçütlere göre hastalar seçin: tam bir diş ve ağız hastalıkları klinik belirtisi ile sağlıklı bir birey.</li>
		<li>Aşağıdaki dışlama ölçütleri temel alarak hastalar hariç: gebelik, emzirme, diş çürüğü, periodontal hastalık veya antibiyotik tedavisi son 3 ayda, Sigara içen veya herhangi bir sistemik hastalığı periodontal durum etkileyebilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İntraoral aygıt hazırlanması
	<ol>
<li>Kayıt bir aljinat Gösterim aracılığıyla üst kemer.</li>
		<li>Türü IV taş taş tozu 100 gr için 19 mL su ekleyerek hazırlayın. Taş bir model üst kemer yapmak için aljinat kalıba dökün.</li>
		<li>Tasarım ve test örnekleri (Titanyum ve seramik diskler) desteklemek için bir akrilik intraoral aygıt imal.<ol>
<li>NiCr tel (0.7 mm içinde çap) kullanarak ortodontik pense #139 gelen kuvvetli tokalar imal ve model üzerinde pozisyon. Üst premolars arasında kelepçe getirin böylece onlar bir döngü formu her tel bir ucunu bükebilir.<ol>
<li>Döngünün interdental papilla ve uyum. Oklüzal, temas noktaları ve oklüzyon ile müdahale etmemek için nazik bir eğrilik yerleştirin. 90 ° akrilik bir saklama için kelepçe sonundaki kat olun.</li>
				<li>Kelepçe üst ikinci azı sığdırmak için servikal üçüncü tel eğimi uyum (vestibüler) diş (distal) kontur ve 90 ° akrilik bir saklama için kelepçe sonundaki kat yapmak. Not: intraoral aygıt için yeterli saklama/istikrar sağlamak için kuvvetli tokalar üst premolars ve diş kemerinin her iki tarafında ikinci azı distal yönünü arasında konumlandırılmış.</li>
			</ol>
</li>
			<li>Kendi kendine kür akrilik reçine üreticinin yönergeleri doğrultusunda manipüle ve akrilik reçine arasında 2 cam tabak (3 mm kalınlığında rondela interpoze ile) 3 mm kalınlığında levha yapmak plastik aşamasında, tuşuna basın.</li>
			<li>Cihazın tasarım göre model, palatal bölgesindeki akrilik levha yatıyordu ve polimerizasyon önce bir carver ile ihtiyaç fazlası akrilik reçine döşeme.</li>
			<li>Kuvvetlendirmek için matrisin içinde erimiş mum yerleştirip balmumu için bekleyen metalik matris [10 mm çapında, 2 mm kalınlıkta (78,5 mm2yüzey alanı)] kullanarak balmumu diskleri imal. El ile 4 balmumu diskleri akrilik reçine, premolars ve diğer 2 yanında ikinci büyük azı dişleri arasında 2-in onları içine embed.</li>
			<li>Bir basınç tencerede 20 dk için basınçlı hava altında 20 psi polimerize akrilik reçine izin.</li>
			<li>İntraoral aygıt ile bir elektrikli diş Laboratuarı el probu ve kesici bitirmek ve aşındırıcı kauçuk ile Lehçe.</li>
			<li>Aygıt için uygun bir uyum yukarıda açıklanan kullanýlýyor ağız içinde ayarlayın.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Titanyum ve zirkon numunelerin hazırlanması Not: Numune (n = 14) 10 mm çapında ve 2 mm kalınlıkta olup yüzölçümü 78,5 mm2vardır.<ol>
<li>Numuneler yüzeyler aşındırıcılık azalan su soğutmalı sandpapers ile Lehçe (600, 1200 ve 2000 grit), yaklaşık 20 dk için. Not: Örnekleri parlatma yüzey pürüzlülüğü, 0.2 µm standartlaştırmak için gerçekleştirildi.</li>
		<li>Temiz ve dezenfekte numuneler ve sıvı deterjan ve musluk suyu ile intraoral aygıt ve için onları emici kağıt havlu ile Kuru 15 dk. sonra bir temizlik iÖin izopropil alkol ultrasonik banyo kullanmak.</li>
		<li>Numuneler intraoral sözlü cihazda toksik olmayan sıcak eritebilir yapıştırıcı (Şekil 1) yaklaşık 0.1 mL ile düzeltmek.</li>
		<li>Oral kavite içinde örnekler içeren aygıtı yükleyin. Not: örnekler içeren intraoral aygıtı için 48 h giyilmelidir. Aygıt kaldırıldı ve hasta yeme ve oral temizlik gerçekleştirme fosfat tamponlu tuz (PBS) depolanır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. bakteriyel canlılık değerlendirilmesi
Not: Örnek boyutu n = 10.
<ol><li>SYTO9 3 µL ekleyerek bir boyama çözüm hazırlamak (yeşil flüoresan nükleik asit boya) ve propidium iyodür (kırmızı floresan nükleik asit boya) 1 mL steril için 3 µL distile su. Not: ışıktan korunan çözümleri hazırlayın.</li>
	<li>24-şey plakasına örnekler aktarmak ve yapışık olmayan hücreler kaldırmak için PBS ile iyice yıkayın.</li>
	<li>Uygun hacmi (1 mL) biyofilm içeren numune kapsayacak şekilde floresan boya çözümü ekleyin. Boya biyofilm disorganize vermemek için çok dikkatli bir şekilde ekleyin.</li>
	<li>20-30 dakika oda sıcaklığında ışıktan korunan için numune kuluçkaya.</li>
	<li>Yavaşça biyofilm örnek aşırı herhangi bir boya kaldırmak için steril distile su ile yıkayın.</li>
	<li>Örnek bir cam alt tabak yerleştirin ve multiphoton lazer mikroskobu biyofilm analizi için tarama gerçekleştirin. Not: Bir multiphoton mikroskobu sistemi kullanılarak bakteri hücreleri canlılığı analizi yapılmıştır. Propidium iyodür floresans 546/680 bir uyarma/emisyon dalga boyu ile bir filtre kullanarak algılandı nm ve 477/600 nm SYTO9 için. Elde edilen görüntülerin boyutunu 5.16188 x 5.16188 mm, 26.64 mm2 her numune (78,5 mm2) toplam alanı veya toplam alanı 33.94 %'ye karşılık gelen oldu. Örnek en merkezi bölümünden 1024 x 1024 piksel çözünürlüğe sahip görüntüler yapıldı. Kırmızı kanalı ve yeşil kanal ayrı ayrı Fiji yazılım31kullanarak analiz edildi. Her hücre bir seçim aracını kullanarak seçildi ve floresan yoğunluğu görüntü arka plan çıkarılarak piksel yoğunluğu entegre ölçüldü.</li>
</ol>3. analiz örnekleri kimyasal enerji dağıtıcı spektroskopisi (EDS) tarafından
Not: Örnek boyutu n = 3.
<ol><li>3 her biyofilm ücretsiz numune örnekleri seçin ve taramalı elektron mikroskobu ile 10 kV32bir elektron ışını voltajı bir dağıtıcı enerji spektrometre için birleştiğinde kullanarak her numune kimyasal bileşimi 2 farklı alanlarda değerlendirmek.</li>
</ol>4. elektron mikroskobu tarama bakteriyel biyofilm morfolojik Analizi
Not: Örnek boyutu n = 1.
<ol><li>Biyofilm % 2.5 oxazolidin 0.1 M sodyum cacodylate tampon pH 7,0-7.3, 24 h için seyreltilmiş numune çeker tarafından tamir.</li>
	<li>Örnek PBS arabellekte yıkayın (pH 7,6 =).</li>
	<li>Biyofilm % 1 osmiyum tetroxide için 1 h ile postfix.</li>
	<li>Örnek PBS arabellekte yıkayın (pH 7,6 =).</li>
	<li>Biyofilm örnekleri dikkatle, koruma onları etanol çözümleri (% 50, % 70, % 90, %95 ve % 100) konsantrasyonları artan dalmış kurutmak. Not: %100 konsantrasyon, etanol 3 alışverişleri gerçekleştirmek. Toplam dehidratasyon adım yaklaşık 2 saat sürer.</li>
	<li>Kritik nokta kurutma makinesi örnekler aktarmak ve karbondioksit (CO2) ile birkaç oyuncu değişikliği yapmak örnekler kuru olana.</li>
	<li>Kurutulmuş numune cihaz kaldır ve taramalı elektron mikroskobu sahipleri mount.</li>
	<li>Sputter-ceket altın için 120 Numune'nın yüzeyine 20 nm tabakası s.</li>
	<li>Altın kaplı diskler taramalı elektron mikroskobu odasında yerleştirin. Her örnek, 20-30 kV değişken basınç altında ve 650 X büyütme125 farklı alanlardan görüntü elde.</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu çalışmada açıklanan protokol biyofilm oluşumu için protez ayakları bakteri hücre canlılığı ve morfolojik özellikleri analizi de dahil olmak üzere, titanyum ve zirkon malzemeler üzerinde değerlendirmek için geliştirilmiştir. Bunu gerçekleştirmek için bir in situ modeli biyofilm oluşumu, test materyalleri örnekleri uyum ve 48 h dinamik ağız ortamına maruz kalmalarını bir intraoral cihaz oluşan tasarlanmıştır. Cihaz rahat ve basit-e doğru eklemek, kaldırmak ve temiz tarafından gönüllü olarak kabul edildi. Henüz,...

Bakteriyel biyofilmler karmaşıktır, işlevsel ve yapısal olarak mikrobiyal topluluklar düzenlenen, bir hücre dışı, biyolojik olarak aktif polimer matris1,2sentez mikrobiyal türlerin çeşitliliğinin tarafından karakterize. Bakteriyel yapışma sağlar biyotik veya abiyotik yüzeyleri çoğunlukla oluşan tükürük glikoproteinlerin1,3,4' alınan film tabakası oluşumu ile öncesinde. Mikroorganizmaların ve film tabakası arasındaki zayıf fizikokimyasal etkileşimler başlangıçta kurulan ve bakteriyel adhesins ve glikoprotein reseptörlerinin alınan film tabakası, daha güçlü Hofstede tarafından takip etti. Mikrobiyal çeşitlilik giderek artar ikincil sömürgecilerin reseptörleri zaten ekli bakteri oluşturan bir multispecies topluluk1,3,4, , coaggregation ile 5.
Sözlü microbiota ve ana bilgisayar ile simbiyotik ilişkisi homeostazı ağız sağlığı korunmasında önemlidir. Dysbiosis oral biyofilmler içinde çürük ve periodontal hastalık2,5gelişimi için risk artabilir. Klinik çalışmalar biyofilm diş veya diş implantları birikimi ve dişeti iltihabı veya peri-implant Mukozit6,7gelişimi neden-sonuç ilişkisi göstermektedir. Enflamatuar süreç ilerlemesini peri-implantitis ve implant8sonucu kaybına yol açar.
Diş implantları ve protez bileşenlerinin bakteriyel kolonizasyon ve biyofilm oluşumu9yatkındır. Kimyasal kompozisyon ve düşük mikrobiyal yapışma sağlar yüzey topografyası malzemelerin kullanımı yaygınlığı ve peri-implant hastalıkları9,10ilerlemesini azaltabilir. Titanyum implantlar için protez ayakları üretimi için en çok kullanılan malzemedir; Ancak, seramik malzemeler son zamanlarda kullanılmaya başlanan ve estetik özellikleri ve biyouyumluluk11,12nedeniyle titanyum alternatif olarak popülerlik kazanmaktadır. Da önemlisi, seramik malzemeler mikroorganizmaların, ana toprak dolay iden onların yüzey pürüzlülüğü, wettability ve yüzey serbest enerji10,13uymak için sözde azaltılmış bir potansiyel ile ilişkilendirilmiştir.
Vitro çalışmalar mikrobiyal yapışma anlayış önemli gelişmeler protez ayağına yüzeyler9,14,15,16,17katkıda bulunmuştur. Ancak, farklı sıcaklık ve pH ve besin durumu yanı sıra kesme kuvvetleri, varlığı ile karakterize ağız boşluğu dinamik çevre vitro deneysel protokoller18'tekrarlanabilir değil, 19. Bu sorunu aşmak için bir alternatif in situ modelleri avantajlı ex vivo analiz10,20, , üç boyutlu yapısını korur biyofilm oluşumu kullanmaktır 21 , 22 , 23 , 24.
Sözlü yüzeylerde oluşan biyofilm karmaşık yapısını analiz mikroskobu teknikleri optik yoğun madde25görüntüleme kapasitesine sahip gerektirir. Multiphoton lazer mikroskobu tarama biyofilm yapısal analizi26için modern bir seçenektir. Doğrusal olmayan optik ile femtoseconds27ile Geniş puls kızılötesi dalga boyu, yakın bir aydınlatma kaynak kullanımı ile karakterizedir. Bu yöntem autofluorescence malzeme veya malzeme fluorophores, lineer olmayan optik sinyalleri ikinci harmonik üretimi bilinen bir fenomen türetilen tarafından oluşturulan görüntüler ek olarak işaretlenmiş resim alma için endikedir. Multiphoton mikroskobu avantajları arasında en düşük hücre hasarı uyarma ışık27yoğunluğu ile elde edilen büyük resim derinliğini olduğunu.
Biyofilm multiphoton mikroskobu tarafından abiyotik yüzeylerde canlılığı analizini, floresan nükleik asit kullanımı ile farklı spektral özellikleri Boyayıcılar ve bir penetrasyon bakteri hücreleri içinde gerekli28kapasitesidir. Fluorophores SYTO9 (yeşil-floresan) ve propidium iyodür (kırmızı-floresan) canlı ve ölü bakteriler28,29,30arasındaki görsel bir farklılaşma için kullanılabilir. SYTO9 sağlam ve güvenliği aşılan bir membran ile bakteri hücreleri girer iken Propidium iyodür hasarlı membranlar, tek bakteri nüfuz eder. Her iki boyalar bir hücre içinde bulunduğunda, propidium iyodür nükleik asitler için daha büyük bir ilgi vardır ve SYTO9, kırmızı28,30işaretleme displaces.
Sözlü ortamı karmaşıklığı ve oral biyofilm heterojenite görünümünde, diş ve Diş malzemeleri yüzeylerinin biyofilm analiz etkinleştirebilirsiniz teknikleri ihtiyaç vardır mikroskobu. Bu makalede, bir dizi sözlü biyofilm oluşumu titanyum ve protez ayakları için seramik malzemeler üzerinde yanı sıra sözlü biyofilmler analizleri, morfolojik ve hücresel düzeyde dahil yöntemleri karşılaştırmak için uygulanan protokol.

<table><tbody><tr><td>Hydrogum 5</td><td>Zhermack Dental</td><td>C302070</td><td></td></tr><tr><td>Durone IV</td><td>Dentsply</td><td>17130500002</td><td></td></tr><tr><td>NiCr teli&nbsp;</td><td>Morelli</td><td>55.01.070</td><td></td></tr><tr><td>JET otomatik polimerize akrilik</td><td>Cl&aacute; ssico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diş Balmumu&nbsp;</td><td>Cl&aacute; ssico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Basınçlı tencere&nbsp;</td><td>Essencedental</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zımpara Kağıtları 600 kumlu</td><td>NORTON</td><td>T216</td><td></td></tr><tr><td>Zımpara Kağıtları 1200 kumlu</td><td>NORTON</td><td>T401</td><td></td></tr><tr><td>Zımpara Kağıtları 2000 kumlu</td><td>NORTON</td><td>T402</td><td></td></tr><tr><td>Metalografik Parlatma Makinesi</td><td>Arotec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzopropil alkol</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>W292907</td><td></td></tr><tr><td>Sıcakta eriyen yapıştırıcı</td><td>TECSIL</td><td>PAH M20017</td><td></td></tr><tr><td>Filmtracer CANLI/ÖLÜ Biyofilm Canlılık Kiti</td><td>Invitrogen</td><td>L10316</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları, 10 & L</td><td>KASVI</td><td>K8-10&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları, 1.000 & mikro; L</td><td>KASVI</td><td>K8-1000B&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>24 oyuklu plaka&nbsp;</td><td>KASVI</td><td>K12-024</td><td></td></tr><tr><td>Cam Alt Çanak</td><td>Thermo Scientific</td><td>150680</td><td></td></tr><tr><td>AxioObserver ters mikroskop&nbsp;</td><td>ZEISS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chameleon vision ii lazer</td><td>Tutarlı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Objektif EC Plan-Neofluar 40x/1.30 Yağ DIC</td><td>ZEISS</td><td>440452-9903-000</td><td></td></tr><tr><td>SDD sensörleri - X-Max 20mm&sup2;</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehit çözeltisi</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>G5882</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum kakodilat Tamponu&nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>97068&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Osmiyum tetroksit</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>201030</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>S9638</td><td>Fosfat tamponlu tuzlu su</td></tr><tr><td>< KH>sub2PO4</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P9791&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>MERK</td><td>1.06404</td><td></td></tr><tr><td>Kcl</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P9333&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Analiz için mutlak etanol EMSURE</td><td>MERK</td><td>1.00983</td><td></td></tr><tr><td>CPD 030 Kritik Nokta Kurutucu</td><td>BAL-TEC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>JSM-6610 Serisi Taramalı Elektron Mikroskobu</td><td>JEOL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SCD 050 Püskürtmeli Kaplayıcı</td><td>BAL-TEC</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

diş implantları için farklı malzemeler üzerinde sözlü biyofilm oluşumu

Oral Biofilm Formation on Different Materials for Dental Implants

Diş implantları ve protez bileşenlerinin bakteriyel kolonizasyon ve biyofilm oluşumu yatkındır. Düşük mikrobiyal yapışma sağlar malzeme kullanımı yaygınlığı ve peri-implant hastalıkların ilerlemesini azaltabilir. Sözlü ortamı karmaşıklığı ve oral biyofilm heterojenite görünümünde, diş ve Diş malzemeleri yüzeylerinin bir biyofilm analiz etkinleştirebilirsiniz teknikleri ihtiyaç vardır mikroskobu. Bu makalede, bir dizi sözlü biyofilm oluşumu titanyum ve protez ayakları için seramik malzemeler üzerinde yanı sıra sözlü biyofilmler analizleri, morfolojik ve hücresel düzeyde dahil yöntemleri karşılaştırmak için uygulanan protokol. Bu çalışmada açıklandığı gibi sözlü biyofilm oluşumu titanyum ve zirkon malzemeler için diş protez ayakları üzerinde değerlendirmek için situ modeli böylece metodolojik yeterliliği gösteren 48 h biyofilm tatmin edici bir koruma sağlar. Multiphoton mikroskobu numuneler üzerinde oluşan biyofilm bir alan temsilcisi analiz sağlar. Buna ek olarak, fluorophores kullanımı ve multiphoton mikroskobu kullanarak görüntü işleme bakteriyel canlılığı analiz mikroorganizmalar çok heterojen bir nüfusa sağlar. Elektron mikroskobu biyolojik numunelerin hazırlanması biyofilm, iyi görüntüler ve hiçbir yapıları yapısal korunması teşvik etmektedir.

Situ büyüme 48 saat sonra biyofilm kolonizasyon yoğunluğu bu çalışmada kolonize alanı kullanarak multiphoton mikroskobu (numune taranan toplam yüzölçümü ile ilgili olarak titanyum ve zirkon disklerdeki oranı tarafından temsil edildi 26.64 mm2). Şekil 2 3 test edilmiş malzemelerin yüzeyinde bakteriyel kolonizasyon yoğunluk temsil eder. Biyofilm, yüksek yoğunluklu döküm yüzeylerinde ve işlenmiş titanyum disklerdeki gözlenmiştir (0.0292 µm<su...

Burada, sözlü biyofilm oluşumu için diş protez ayakları bakteri hücreleri canlılığı ve morfolojik özellikleri analizi de dahil olmak üzere, titanyum ve zirkon malzemeler üzerinde değerlendirmek için bir protokol mevcut. Güçlü mikroskobu teknikleri ile ilişkili bir in situ modeli sözlü biyofilm analizi için kullanılır.

Diş implantları için farklı malzemeler üzerinde sözlü biyofilm oluşumu

Dental implants and their prosthetic components are prone to bacterial colonization and biofilm formation. The use of materials that provides low ...

Dental implantlar için farklı materyaller üzerinde oral biyofilm oluşumu. Bakteriyel biyofilmler, hücre dışı, biyolojik olarak aktif polimer matrisi sentezleyen çeşitli mikrobiyal türlerle karakterize edilen karmaşık, işlevsel ve yapısal olarak organize edilmiş mikrobiyal topluluklardır. Dental implantlar ve protez bileşenleri bakteri kolonizasyonuna ve biyofilm oluşumuna eğilimlidir.Düşük mikrobiyal yapışma sağlayan kimyasal bileşime ve yüzey topografyasına sahip malzemelerin kullanılması peri-implant hastalıkların prevalansını ve ilerlemesini azaltabilir. Genel çevre karmaşıklığı ve oral biyofilm heterojenliği göz önüne alındığında, dişlerden ve dental materyal yüzeylerinden biyofilmin yapısal analizini sağlayabilecek mikroskobik tekniklere ihtiyaç vardır. Bu makale, dental implantlar için farklı materyaller üzerinde oral biyofilm oluşumunu karşılaştırmak için uygulanan bir dizi protokolü açıklamaktadır.Bu çalışmada biyofilm oluşumunun kullanımında yer alan adımlar aşağıdaki gibidir: Maksiller arkı bir aljinat izlenimi ile kaydedin. Bir maksiller kemer modeli imal etmek için aljinat izlenimini Tip IV taşla dökün. Mikro krom telden kalıcı klipsler üretin ve bunları model üzerinde bulun.Kendi kendine kürlenen akrilik reçineyi üreticinin talimatlarına göre manipüle edin ve üç milimetre kalınlığında bir tabaka yapmak için plastik faz sırasında akrilik reçineyi iki cam plaka arasına bastırın. Akrilik levhayı, cihazın tasarımına göre modelin damak bölgesine yerleştirin ve polimerizasyondan önce fazla akrilik reçineyi kesin. 10 milimetre çapında ve iki milimetre kalınlığında bir matris kullanarak balmumu diskleri üretin.Akrilik reçinenin içine, ikisi küçük azı dişleri arasında ve diğer ikisi ikinci azı dişlerinin yanında olmak üzere dört balmumu diski gömün. Akrilik reçinenin 20 dakika boyunca 20 pound basınçlı hava altında bir basınçlı kapta polimerize olmasına izin verin. Ağız içi cihazı elektrikli bir el aleti ve frezeleme ve parlatma noktaları kullanarak bitirin.Numunenin yüzeylerini, aşındırıcılığı azalan su soğutmalı zımpara kağıtları ile cilalayın. Numuneleri sıvı deterjan ve musluk suyu ve izopropil alkol ultrasonik banyosu ile 15 dakika boyunca temizleyin. Daha sonra emici kağıt havlularla kurulayın.Numuneleri ağız içi cihaza toksik olmayan sıcakta eriyen yapıştırıcı ile sabitleyin. Numuneleri içeren cihazı ağız boşluğuna yerleştirin. Numuneleri içeren ağız içi cihaz 48 saat boyunca giyilmelidir.Bir mililitre steril damıtılmış suya üç mikrolitre SYTO 9 ve üç mikrolitre propidyum iyodür ekleyerek bir boyama çözeltisi hazırlayın. Numuneleri 24 oyuklu bir plakaya aktarın ve yapışmayan hücreleri çıkarmak için PBS ile iyice yıkayın. Biyofilm içeren numuneyi kaplamak için uygun hacimde floresan boya çözeltisi ekleyin.Biyofilmi bozmamak için boyayı çok dikkatli bir şekilde ekleyin. Numuneyi ışıktan korunan oda sıcaklığında 20 ila 30 dakika inkübe edin. Fazla boyayı çıkarmak için biyofilm örneğini steril damıtılmış suyla nazikçe yıkayın.Numuneyi, çoklu foton lazer tarama mikroskobu kullanarak biyofilm analizi için cam tabanlı bir kaba yerleştirin. Elde edilen görüntülerin boyutu 5.16 x 5.16 mm idi, bu da her bir örneğin toplam alanının 26.64 milimetre karesine veya toplam alanın% 33.94'üne karşılık geliyor. Görüntüler Fiji yazılımı kullanılarak analiz edildi.Her hücre seçim aracı kullanılarak seçildi ve floresan yoğunluğu, görüntü arka planı çıkarılarak piksellerin entegre yoğunluğu ile ölçüldü. Her test malzemesinden üç numune seçin ve bir dağıtıcı enerji spektrometresine bağlı bir taramalı elektron mikroskobu kullanarak her numunenin iki farklı alanındaki kimyasal bileşimi değerlendirin. Numuneleri 24 saat boyunca 0,1 M sodyum kakodilat tamponu içinde seyreltilmiş %2,5 glutaraldehit içine daldırarak biyofilmi sabitleyin.PBS tamponunda yıkayın. Bir saat boyunca% 1 osmiyum tetroksit ile sabitleyin. PBS tamponunda yıkayın.Biyofilm örneklerini dikkatli bir şekilde kurutun ve artan konsantrasyonlarda etanol çözeltilerine daldırın. Numuneleri kritik nokta kurutucuya aktarın ve numuneler kuruyana kadar karbondioksit ile birkaç ikame yapın. Kurumuş numuneleri cihazdan çıkarın ve taramalı elektron mikroskobu tutucularına monte edin.20 nanometre altın tabakadan oluşan bir kaplamayı 120 saniye boyunca numune yüzeylerine dağıtın. 48 saatlik yerinde büyümeden sonra biyofilmin kolonizasyon yoğunluğu, bu çalışmada, çoklu foton mikroskobu kullanılarak numunenin toplam taranan alanına göre kolonize alanın titanyum ve Zirkonya disklerine oranı ile temsil edildi. Şekil, test malzemelerinin yüzeylerine yapışan bakterileri göstermektedir.Dökme ve işlenmiş titanyum disklerin yüzeylerinde zirkonya disklere göre daha yüksek bir biyofilm yoğunluğu gözlenmiştir. Bu şekil, örneklerin yüzeyine yapışmış canlı ve ölü bakterileri göstermektedir. Bu protokolde, nükleik asitle boyanmış propidyum iyodür sadece hasarlı zarı olan bakterilere nüfuz eder ve bu nedenle ölü hücrelerle ilgili kırmızı bir floresan sinyali yayar.SYTO 9, bozulmamış veya bozulmuş zar ile bakteri hücrelerine nüfuz eder ve canlı mikroorganizmalardan yeşil floresan sinyali yayar. Hücresel bakteri canlılığı, tüm gruplarda canlı mikroorganizmaların baskın olduğu test materyalleri arasında benzerdi. Parlatma ve/veya işleme işlemi sırasında oluşan çatlaklar, oluklar veya aşınma kusurları, analiz edilen farklı malzemelerin yüzeyinde mevcuttu.Zirkonya disklerde, mikroorganizmaların yokluğu ve esas olarak kok ve basiller ile filamentli bakterilerden oluşan küçük polimorfik mikrobiyal agregatların varlığı ile geniş alanlar gözlenmiştir. Kok ve basillerin varlığı, işlenmiş titanyum disklerin yüzeylerine dağılmıştır. Dökme titanyum örnekleri, yüzeyde biyofilm benzeri bir görünüme sahip bir matriste yer alan mikroorganizma kolonilerini sundu.Zirkonya disklerin yüzeyinde, işlenmiş titanyum ve dökme titanyum disklere kıyasla daha az matris malzemesi gözlendi. EDS analizi, zirkonya disklerinde Zirkonya'nın% 70.83'ünü ortaya çıkardı. Dökme titanyum disklerde 95.16 titanyum ve işlenmiş titanyum disklerde %89.86 titanyum.Bu çalışmada açıklanan protokol, 48 saatlik biyofilmin tatmin edici bir şekilde korunmasını sağladı ve bu nedenle metodolojik yeterliliği gösterdi. Floro kaynağının kullanılması ve görüntülerin çoklu foton mikroskobu kullanılarak işlenmesi, bu örneğin temsili bir alanından çok heterojen bir mikroorganizma popülasyonunda bakteri bütünlüğünün minimum hücresel hasarla analiz edilmesine izin verdi. Elektron mikroskobu için biyolojik örneklerin hazırlanması, biyofilmin yapısal olarak korunmasını destekledi, bu da iyi çözünürlüklü ve artefakt olmayan görüntü ile sonuçlandı.Bu, yapışan mikroorganizmaların görselleştirilmesine ve morfolojik karakterizasyonuna izin verdi.

oral-biofilm-formation-on-different-materials-for-dental-implants

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Diş yüzeylerinde oluşan Biyofilmler, son derece karmaşık ve kendi mimari modüle doğuştan sabit ve dışsal çevre sorunlarına, fizyoloji ve transcriptome maruz. Bileşimi, yapısal organizasyon ve oral biyofilmlerin biyofilm araştırmanın diğer alanlara adapte olabilen gen ekspresyonu, incelemek için bir araç kutusu geliştirdi.

Analitik Oral Biyofilmler Kapsamlı biyokimyasal, yapısal ve Transcriptome Değerlendirme Aracı-box mutans Streptokok tarafından aracılığı ile

Ortodontik aletler doğal oral biyofilm yapısal ve kompozisyon analizi için bir protokol...

Floresan In-Situ Hibridizasyon ve Konfokal Lazer Tarama Mikroskopi Palatal Genişleticilerden Oral Biyofilm Analizi

Kaynak: Schlafer, S ve Frost Kristensen, M. Konfokal Mikroskopi kullanarak Çapraz Krallık Biyofilmlerinde Hücre Dışı PH'ın İzlenmesi. J. Vis. Exp. (2020)Bu video, Streptococcus mutans ve Candida albicans'ın ağız benzeri koşullarda biyofilmler çapraz yetiştirilişini göstererek bakteriyel-mantar etkileşimlerini modellemekte; böylece mikrobiyal sinerji, glukan aracılı yapışma ve ağızdan patogenezde asidijenik virülans incelenmesini mümkün kılar.

Ağızdan Patogenezi İnceleme İçin Bakteriyel-Mantar Çapraz Biyofilmlerin Oluşturulması

Biyofilmler içindeki üç hücresel ve hücre dışı bileşenin eşzamanlı niceliği ve karşılaştırılması için bir protokol sunulmuştur. Metodoloji, konfokal lazer tarama mikroskobu, biyofilm yapısal analiz ve görselleştirme yazılımı ve istatistiksel analiz yazılımının kullanımını içerir.

Hücresel ve Biyofilmler Ekstrasellüler Bileşenleri Eşzamanlı Kantitasyonu

Bu yöntemler kağıt amacı tipik insan Mikrobiyal dental plak tespit türler içeren çok tür biyofilm gelişmesi için mikroakışkan sisteminin kullanımını tarif etmektir. Yöntem biyofilm mimarisi, biyofilm canlılığı ve vurgulanır kültür-bağımlı veya kültür-bağımsız analizler için hasat biyofilm bir yaklaşım açıklamak için.

Yüksek verimli bir kullanımı<em&gt; İn Vitro</em&gt; Mikroakışkan Sistemi Ağız Çok türler biyofilm Geliştirmek İçin

Çocukluk boyunca oral microbiome ilgi büyüyen değişikliklerdir. Farklı microbiome çalışmalar karşılaştırılması Standart örnekleme iletişim kurallarının eksikliği ortaya koymaktadır. Sınırlı alanlarda çocukların zorlu ses subgingival sulkus örnekleme yapar. Kağıt noktası örnekleme yönteminin seçimi için bu alanı olarak ayrıntılı olarak burada sunulur.

Sağlıklı çocuklarda Microbiome analiz için sözlü biyofilm örnekleme

Doğal ürünler, yeni ilaçların ve terapötik ajanların gelişimi için umut verici başlangıç noktalarını temsil eder. Bununla birlikte, yüksek kimyasal çeşitlilik nedeniyle, bitkilerden yeni terapötik bileşikler bulmak zor ve zaman alıcı bir iştir. Bitki özlerinden ve fraksiyonlarından antimikrobiyal ve antibiyofilm moleküllerini tanımlamak için basitleştirilmiş bir yaklaşım tanımlıyoruz.

Diş Çürüklerini Önlemek İçin Bitkilerin Özlerinden ve Fraksiyonlarından Yeni Antimikrobiyal ve Antibiyofilm Moleküllerini Tanımlamak için Sistematik Yaklaşım

Mevcut protokol, klinik karar vermeye katkıda bulunmak için in vitro implant yüzey dekontaminasyonu ve pürüzlülük araştırmaları için kullanılabilecek mürekkep boyamaya dayalı deneysel bir modeli tanımlamaktadır.

Peri-implantitis tedavisinde kullanılan mekanik yöntemlerin implant yüzey dekontaminasyonu ve pürüzlülüğü üzerine etkileri

Mevcut pilot in vitro çalışma, üç farklı dekontaminasyon aracının temizlik etkinliğini ve işlem sonrası olası yüzey değişikliklerini değerlendirmeyi amaçladı; kalıcı kırmızı mürekkep kullanarak ağız biyofilminin varlığını taklit etti.

Farklı dekontaminasyon yöntemlerinin implant yüzeyleri üzerindeki temizlik yeteneği ve etkilerini değerlendirmek için pilot in vitro çalışma

Yöntemi kullanarak insan dental pulpa kök hücrelerinin (hDPSCs) izolasyonu ve karakterizasyonu...

İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen

Keşfedin, titanyum ve zirkonya diş implant malzemelerinde sözlü biyofilm oluşumunu in situ model ve ileri mikroskopi teknikleriyle karşılaştırın. Bu yöntem, bakteri canlılığı ve morfolojisini değerlendirerek malzeme seçimini optimize etmeye yardımcı olur.

Diş implantları için farklı malzemeler üzerinde sözlü biyofilm oluşumu

Daha fazla video keşfet