Name: Ölçeklenebilir, Hızlı montaj ve biyoaktif proteinler ve Immunostimulants yükleme yolu ile birden parlamak Nanoprecipitation çeşitli sentetik Nanocarriers içine (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Öğrenin, flash nanoprecipitation yöntemiyle biyoaktif moleküller yüklenmiş, düşük polidispersiteli nanotasyıcıları hızlı ve ölçeklenebilir şekilde nasıl üreteceğinizi. Bu teknik, ilaç dağıtım sistemleri geliştirmek isteyen araştırmacılar için idealdir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Destek personeli ve araçları Northwestern Üniversitesi yapısal biyoloji tesisinden anıyoruz. R.H. Lurie kapsamlı Kanser Merkezi, Northwestern Üniversitesi ve Northwestern Üniversitesi yapısal biyoloji imkanları desteğinden kabul edilmektedir. Gatan K2 doğrudan elektron dedektörü Chicago toplum güven, Searle fonlarından destek ile Chicago Biyomedikal Konsorsiyumu tarafından sağlanan fonları ile satın alınmıştır. Biz de Northwestern Üniversitesi'nde aşağıdaki imkanları teşekkür: Keck disiplinlerarası yüzey bilim tesis, yapısal biyoloji tesis, biyolojik Imaging tesis, gelişmiş moleküler görüntüleme merkezi ve analitik Bionanotechnology ekipman çekirdek. Bu araştırma Ulusal Bilim Vakfı Hibe 1453576, sağlık Müdürü ulusal kurumları'nın yeni yenilikçi Ödülü 1DP2HL132390-01, rejeneratif Nanomedicine Catalyst Ödülü ve 2014 McCormick Catalyst Ödülü Merkezi tarafından desteklenmiştir. SDA kısmen NIH HGUGM Biyoteknoloji eğitim Grant T32GM008449 tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Stano, A., Scott, E. A., Dane, K. Y., Swartz, M. A., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunable+T+cell+immunity+towards+a+protein+antigen+using+polymersomes+vs.+solid-core+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Tunable T cell immunity towards a protein antigen using polymersomes vs. solid-core nanoparticles.</a> Biomaterials. 34 (17), 4339-4346 (2013).</li>
<li>Discher, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymersomes%3A+tough+vesicles+made+from+diblock+copolymers%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Polymersomes: tough vesicles made from diblock copolymers.</a> Science. 284 (5417), 1143-1146 (1999).</li>
<li>Vasdekis, A. E., Scott, E. A., O'Neil, C. P., Psaltis, D., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+intracellular+delivery+based+on+optofluidic+polymersome+rupture%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Precision intracellular delivery based on optofluidic polymersome rupture.</a> ACS Nano. 6 (9), 7850-7857 (2012).</li>
<li>Yi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailoring+Nanostructure+Morphology+for+Enhanced+Targeting+of+Dendritic+Cells+in+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Tailoring Nanostructure Morphology for Enhanced Targeting of Dendritic Cells in Atherosclerosis.</a> ACS Nano. 10 (12), 11290-11303 (2016).</li>
<li>Shum, H. C., Kim, J. W., Weitz, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+fabrication+of+monodisperse+biocompatible+and+biodegradable+polymersomes+with+controlled+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Microfluidic fabrication of monodisperse biocompatible and biodegradable polymersomes with controlled permeability.</a> Journal of the American Chemical Society. 130 (29), 9543-9549 (2008).</li>
<li>Pessi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics-assisted+engineering+of+polymeric+microcapsules+with+high+encapsulation+efficiency+for+protein+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Microfluidics-assisted engineering of polymeric microcapsules with high encapsulation efficiency for protein drug delivery.</a> International Journal of Pharmaceutics. 472 (1-2), 82-87 (2014).</li>
<li>O'Neil, C. P., Suzuki, T., Demurtas, D., Finka, A., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+the+encapsulation+of+biomolecules+into+polymersomes+via+direct+hydration%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">A novel method for the encapsulation of biomolecules into polymersomes via direct hydration.</a> Langmuir. 25 (16), 9025-9029 (2009).</li>
<li>Saad, W. S., Prud'homme, R. K. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1748013215301201">Principles of nanoparticle formation by flash nanoprecipitation.</a> Nano Today. 11 (2), 212-227 (2016).</li>
<li>Johnson, B. K., Prud'homme, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+for+rapid+self-assembly+of+block+copolymer+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Review+Letters%22%5BJournal%5D)">Mechanism for rapid self-assembly of block copolymer nanoparticles.</a> Physical Review Letters. 91 (11), 118302(2003).</li>
<li>Han, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+confined+impingement+jets+mixer+for+flash+nanoprecipitation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">A simple confined impingement jets mixer for flash nanoprecipitation.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 101 (10), 4018-4023 (2012).</li>
<li>Allen, S., Osorio, O., Liu, Y. G., Scott, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facile+assembly+and+loading+of+theranostic+polymersomes+via+multi-impingement+flash+nanoprecipitation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Facile assembly and loading of theranostic polymersomes via multi-impingement flash nanoprecipitation.</a> Journal of Controlled Release. 262, 91-103 (2017).</li>
<li>Bobbala, S., Allen, S. D., Scott, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+nanoprecipitation+permits+versatile+assembly+and+loading+of+polymeric+bicontinuous+cubic+nanospheres%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Flash nanoprecipitation permits versatile assembly and loading of polymeric bicontinuous cubic nanospheres.</a> Nanoscale. 10 (11), 5078-5088 (2018).</li>
<li>Allen, S. D., et al. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s12274-018-2069-x">Polymersomes scalably fabricated via flash nanoprecipitation are non-toxic in non-human primates and associate with leukocytes in the spleen and kidney following intravenous administration.</a> Nano Research. , (2018).</li>
<li>Karabin, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+micellar+delivery+via+inducible+transitions+in+nanostructure+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Sustained micellar delivery via inducible transitions in nanostructure morphology.</a> Nature Communications. 9 (1), 624(2018).</li>
<li>Mascoli, C. C., Weary, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limulus+amebocyte+lysate+%28LAL%29+test+for+detecting+pyrogens+in+parenteral+injectable+products+and+medical+devices%3A+advantages+to+manufacturers+and+regulatory+officials%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Parenteral+Drug+Association%22%5BJournal%5D)">Limulus amebocyte lysate (LAL) test for detecting pyrogens in parenteral injectable products and medical devices: advantages to manufacturers and regulatory officials.</a> Journal of the Parenteral Drug Association. 33 (2), 81-95 (1979).</li>
<li>Pustulka, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+nanoprecipitation%3A+particle+structure+and+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Flash nanoprecipitation: particle structure and stability.</a> Molecular Pharmaceutics. 10 (11), 4367-4377 (2013).</li>
<li>Tang, C., Amin, D., Messersmith, P. B., Anthony, J. E., Prud'homme, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+directed+self-assembly+of+pH-responsive+antioxidant+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Polymer directed self-assembly of pH-responsive antioxidant nanoparticles.</a> Langmuir. 31 (12), 3612-3620 (2015).</li>
<li>Gindy, M. E., Panagiotopoulos, A. Z., Prud'homme, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composite+block+copolymer+stabilized+nanoparticles%3A+simultaneous+encapsulation+of+organic+actives+and+inorganic+nanostructures%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Composite block copolymer stabilized nanoparticles: simultaneous encapsulation of organic actives and inorganic nanostructures.</a> Langmuir. 24 (1), 83-90 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Biz polymersomes PEG17-bl- PPS35kullanarak hızlı imalatı için ayrıntılı talimatlar hazırladık-SH diblock kopolimer. Veziküler polymersomes PEG Hidrofilik ve hidrofobik PPS blok moleküler ağırlık bu oranında monte birincil toplama morfolojisi vardır. Ne zaman birden çok kez gerilmelere, onlar bir çapa sahip ve ince film hidrasyon ile 200 nm membran sonra kalıptan çekilmiş polymersomes eşleşen polydispersity kurdu. Bu iletişim kuralı böylece monodisperse polymersome nanocarriers imal...

Nanocarriers küçük ve makromoleküllerin kargo, kontrollü teslimat için izin dahil olmak üzere etkin varlıklar, aksi takdirde kapsüllü, ya son derece parçalanabilir ve/veya Yönetim içinde vivoiçin de hidrofobik olurdu. Düzenli olarak fabrikasyon nanocarrier türleri morfoloji, polimer veziküller (polymersomes olarak da bilinir) lipozomlar benzer teklif Hidrofilik ve hidrofobik kargo1,2aynı anda yüklemek için yetenek. Gelecek vaat eden onların avantajlara rağmen polymersomes nedeniyle, kısmen, birkaç temel zorlukla onların imalat için klinik uygulamalarda hala nadirdir. Klinik kullanım için polymersome formülasyonları büyük ölçekli, steril ve tutarlı gruplar halinde yapılması gerekir.
Bir takım teknikler-ebilmek var olmak kullanılmış için formu polymersomes poly(ethylene glycol) -blokgibi bir diblock kopolimer üzerinden-poli (propilen sülfür) (PEG -bl- PPS), solvent dağılım3, ince film rehidrasyon1 içeren , 4, havacilik 5,6ve doğrudan hidrasyon7. Solvent dağılım uzun bir kuluçka kez proteinler gibi bazı biyoaktif payloads denatüre organik çözücüler huzurunda içerir. İnce film rehidrasyon kez kabul edilebilir monodispersity elde etmek için pahalı ve zaman alıcı ekstrüzyon teknikleri gerektiren kurulan polymersomes polydispersity üzerinde denetim sağlamaz. Ayrıca, microfluids ve doğrudan hidrasyon ölçek daha büyük üretim birimleri için zordur. Farklı nanocarrier imalat yöntemleri, flash nanoprecipitation (FNP) büyük ölçekli ve tekrarlanabilir formülasyonları8,9,10yapma yeteneğini sunmaktadır. Sırasında FNP daha önce katı çekirdekli nano tanecikleri formülasyon için rezerve edilen, laboratuarımıza son zamanlarda çeşitli PEG -bl- PPS nanostructure türleri morfoloji11, tutarlı oluşumu dahil etmek FNP kullanımı genişletti 12, polymersomes11 ve bicontinuous nanospheres12de dahil olmak üzere. İnce film rehidrasyon ve solvent dağılımı tarafından kurulan sigara kalıptan çekilmiş polymersomes göre üstün polydispersity dizin değerlerini sonuçlanan FNP ekstrüzyon, gerek kalmadan polymersomes monodisperse formülasyonları şekillendirme yeteneğine sahip olduğunu ortaya koymuştur 11. Bicontinuous nanospheres, onların büyük hidrofobik etki alanları ile bir dizi FNP12ile solvent koşul altında şekillendirme rağmen ince film rehidrasyon tarafından oluşturulmasına izin mümkün değildi.
Burada, biz bir sentezi için PEG -bl- PPS diblock kopolimer polymersome oluşumunda kullanılan ayrıntılarıyla, FNP FNP için kullanılan sınırlı sıkışma jetler (CIJ) Mikser protokol kendisi ve otomatik bir sistem uygulanması Kullanıcı değişkenliği azaltır. Yeterince endotoksin-Alerjik formülasyonları kullanım vivo içindeve FNP tarafından kurulan polymersomes karakterizasyonu ilgili temsilcisi verilerin için üretmek için sistem sterilize hakkında bilgi içerir. Bu bilgileri kullanarak, okuyucuların ilgi polymersomes vitro ve in vivo çalışmaları için kullanan ile steril, kendi monodisperse formülasyonları imal etmek mümkün olacak. Deneyime sahip okuyucular nanocarrier formülasyonları ve polimer sentez uzmanlığı ile hızla FNP geçerli formülasyonu teknikleri için potansiyel bir alternatif olarak kullanarak kendi polimer sistemleri test edebilecektir. Ayrıca, burada açıklanan protokoller eğitim araçları nanocarriers nanoteknoloji Laboratuvarı dersleri formülasyonu için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>CanaKit Raspberry Pi 3 Ultimate Başlangıç Kiti - 32 GB Edition</td><td>CanaKit</td><td>UPC 682710991511</td><td></td></tr><tr><td>Lineer Rulmanlı Platform (Küçük) - 8mm Çap</td><td>Adafruit</td><td>1179</td><td></td></tr><tr><td>Lineer Hareket 8 mm Şaft, 330 mm Uzunluk, Krom Kaplama, Sementasyon Sertleştirilmiş, Metrik</td><td>VXB</td><td>kit11868</td><td></td></tr><tr><td>Lineer Ray Mili Kılavuzu/Desteği - 8 mm Çap</td><td>Adafruit</td><td>1182</td><td></td></tr><tr><td>Manuel Konumlu Hassas Slayt 4.5" Strok, 15 lb yük kapasitesi</td><td>McMaster-Carr</td><td>5236A16</td><td></td></tr><tr><td>MTPM-P10-1JK43 Demir At DC motor</td><td>Demir At</td><td>MTPM-P10-1JK43</td><td></td></tr><tr><td>Resmi Raspberry Pi Vakfı 7" Dokunmatik LCD Ekran</td><td>Raspberry Pi</td><td>B0153R2A9I (ASIN)</td><td></td></tr><tr><td>PicoBorg Reverse - Raspberry Pi</td><td>PiBorg</td><td>BURN-0011</td><td></td> için gelişmiş motor kontrolü</tr><tr><td>Keskin GP2Y0D810Z0F Dijital Mesafe Sensörlü Pololu Taşıyıcı 10cm</td><td>Pololu</td><td>1134</td><td></td></tr><tr><td>Ruland PSR16-5-4-A Set Vidalı Kiriş Kaplini, Cilalı Alüminyum, İnç, 5/16" Delik A Çapı, 1/4" Delik B Çapı, 1 "OD, 1-1 / 4" Uzunluk, 44 lb-in Nominal Tork</td><td>Ruland</td><td>PSR16-5-4-A</td><td></td></tr><tr><td>Polietilen glikol monometil eter</td><td>Sigma Aldrich</td><td>202495</td><td></td></tr><tr><td>Metansülfonil</td><td>klorür Sigma Aldrich</td><td>471259</td><td></td></tr><tr><td>Toluen</td><td>Sigma Aldrich</td><td>179418</td><td></td></tr><tr><td>Toluen, Susuz</td><td>Sigma Aldrich</td><td>244511</td><td></td></tr><tr><td>Trietilamin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T0886</td><td></td></tr><tr><td>Elit 545 (Diyatomlu Toprak)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>419931</td><td></td></tr><tr><td>Diklorometan</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td>320269</tr><tr><td>Dietil eter</td><td>Sigma Aldrich</td><td>296082</td><td></td></tr><tr><td>N, N-Dimetilformamid, susuz</td><td>Sigma Aldrich</td><td>227056</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum karbonat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>791776</td><td></td></tr><tr><td>Tiyoasetik asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T30805</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahidrofuran</td><td>Sigma Aldrich</td><td>360589</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum oksit, nötr, aktif, Brockmann I</td><td>Sigma Aldrich</td><td>199974</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum metoksit çözeltisi, metanol içinde 0,5 M</td><td>Sigma Aldrich</td><td>403067</td><td></td></tr><tr><td>Propilen sülfür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P53209</td><td></td></tr><tr><td>Asetik asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>320390</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit çözeltisi 1.0 N</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S2770</td><td></td></tr><tr><td>Endotoksin içermeyen su</td><td>GE Healthcare Yaşam Bilimleri</td><td>SH30529.01</td><td></td></tr><tr><td>Kağıt pH şeritleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-640-508</td><td></td></tr><tr><td>Endotoksin içermeyen Dulbecco'nun PBS'si</td><td>Sigma Aldrich</td><td>TMS-012</td><td></td></tr><tr><td>Borosilikat cam sintilasyon şişeleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-337-4</td><td></td></tr><tr><td>1 mL tamamen plastik şırınga</td><td>Thermo Scientific</td><td>S75101</td><td></td></tr><tr><td>Sepharose CL-6B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CL6B200</td><td></td></tr><tr><td>Sıvı kromatografi kolonu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C4169</td><td></td></tr><tr><td>CIJ karıştırıcı, HDPE</td><td>Custom</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen peroksit çözeltisi</td><td>Sigma Aldrich</td><td>216763</td><td></td></tr><tr><td>HEK-Mavi hTLR4</td><td>InvivoGen</td><td>hkb-htlr4</td><td></td></tr><tr><td>RAW-Mavi Hücreler</td><td>InvivoGen</td><td>raw-sp</td><td></td></tr><tr><td>QUANTI-Blue</td><td>InvivoGen</td><td>rep-qb1</td><td></td></tr><tr><td>PYROGENT Jel Pıhtı LAL Testleri</td><td>Lonza</td><td>N183-125</td><td></td></tr></tbody></table>

Ölçeklenebilir, hızlı montaj ve biyoaktif proteinler ve immunostimulants yükleme yolu ile birden parlamak nanoprecipitation çeşitli sentetik nanocarriers içine

Rapid, Scalable Assembly and Loading of Bioactive Proteins and Immunostimulants into Diverse Synthetic Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

Nanomalzemeler tedavi ve görüntüleme uygulamaları için tek ve kombine moleküler payloads kontrollü teslimat özelleştirmek için seçenekleri çok çeşitli sunuyoruz. Bu artan özgüllüğü düşük yan etkileri ve daha düşük dozlarda ile daha yüksek güç de dahil olmak üzere önemli klinik üzerinde etkileri olabilir. Ayrıca, in situ hedefleme ve belirli hücre alt kümeleri kontrollü modülasyon temel biyolojik olayların içinde in vitro ve in vivo incelemeler geliştirmek ve hücre işlevini prob. Ne yazık ki, nano bilimi, kimya ve mühendislik kez gerekli uzmanlık yasaklamak laboratuvarlar bu alanlardaki deneyimi olmayan imalatı ve onların soruşturma için araçları veya Araçlar için Nanomalzemeler özelleştirme onların tedavi stratejileri. Burada, sentez ve ölçeklenebilir bir çok yönlü toksik olmayan blok kopolimer sistem facile oluşumuna müsait Meclisi ve biyomedikal uygulamalar için nano araçların yükleme için iletişim kuralları sağlar. Flash nanoprecipitation farklı nanocarriers poly(ethylene glycol) -blüzerinden hızlı imalatı için bir metodoloji olarak sunulan-poli (propilen sülfit) kopolimerler. Bu protokoller laboratuvarları geniş bir yelpazede uzmanlık ve kaynaklara kolayca izin ve tekrarlanarak gelişmiş nanocarrier dağıtım sistemleri uygulamaları için imal. Tasarım ve flash nanoprecipitation kolaylaştırmak için bir yüksek hızlı şırınga pompa istihdam otomatik bir araç inşaat süreci ve homojenliği gelişmiş denetime izin vermek için boyut, Morfoloji ve yük-in polymersome nanocarriers olduğunu açıklanan.

Burada, biz vivo içinde fare ve insan dışı primat Yönetim11,13için güvenli Hidrofilik ve hidrofobik kargo yükleme kapasitesine sahip nanocarriers formülasyonu için basit bir protokol sundu. Mekanik kontrollü sıkışma CIJ Mikser çözümleri için özel bir araç imalatı için bir açıklama ile birlikte temsilcisi sonuçlarımız kullanılan polimer sentezi için detaylı bir protokol de dahil ettik. Şekil 1...

Nanomalzemeler çok yönlü kontrollü tedavi teslimat temel bilim ve çevirim uygulamalar için mekanizmalar kullanır, ancak onların imalat kez en Biyomedikal laboratuvarlarda kullanılamaz uzmanlık gerektirir. Burada, iletişim kuralları ölçeklenebilir imalat ve terapötik flash nanoprecipitation kullanarak çeşitli kendi kendine monte nanocarriers yüklenmesini için mevcut.

Ölçeklenebilir, Hızlı montaj ve biyoaktif proteinler ve Immunostimulants yükleme yolu ile birden parlamak Nanoprecipitation çeşitli sentetik Nanocarriers içine

Nanomaterials present a wide range of options to customize the controlled delivery of single and combined molecular payloads for therapeutic and imaging ...

Karmaşık nanoyapıları bir araya getirmek için flaş nanoçökeltinin kullanılmasının, kimya, mühendislik veya nanomalzeme biliminde geniş deneyime sahip olmayan araştırmacıların kendi özel uygulamaları ve ihtiyaçları için bağımsız olarak gelişmiş ilaç dağıtım sistemleri üretmelerine izin vereceğine inanıyoruz. Bu tekniğin temel avantajı, yüksek konsantrasyonda, düşük polidispersiteye sahip ve tümü steril koşullar altında oluşturulan küçük moleküllü ilaçlar ve proteinler dahil olmak üzere biyoaktif moleküllerle yüklü büyük hacimlerde çeşitli nanoyapıların üretilmesidir. Genel olarak, polimer sentezine yeni başlayan bireyler, polipropilen sülfür bileşeninin havaya maruz kalmasıyla oksidasyona karşı oldukça hassas olması nedeniyle mücadele edebilir.Bu yöntemin görsel gösterimi kritiktir, çünkü art arda çok hızlı bir şekilde gerçekleştirilmeleri gerektiğinden, çoklu çarpma adımlarının öğrenilmesi zordur. Kapalı çarpma jetlerini veya CIJ karıştırıcısını sterilize etmek için, karıştırıcıyı tüm parçalar demonte edilmiş olarak gece boyunca sıfır noktası bir molar sodyum hidroksite daldırmak için biyolojik bir güvenlik kabini içinde çalışın. CIJ karıştırıcıyı yeniden monte edin ve luerlock şırıngaları kullanarak karıştırıcıdan endotoksin içermeyen su akıtın, suyun pH'ını test edin ve pH nötr olarak kaydedilene kadar su akıtmaya devam edin.Çarpma çözeltisi bir'i hazırlamak için, önce sentezlenen polimerin 20 miligramını bir nokta beş mililitrelik bir tüpe tartın. Ardından hidrofobik boyalar, ilaçlar veya diğer kargoları ekleyin. Son olarak, polimere ve kargoya 500 mikrolitre% 100 tetrahidrofuran ekleyin, çözünmesi için kuvvetlice girdaplayın.Çarpma çözeltisi ikinci hazırlamak için, polimer veziküller içine yüklenecek hidrofilik kargoyu 500 mikrolitre sulu bir tamponda çözün. Uygun büyüklükte bir rezervuara 2,5 mililitre sulu bir tampon ekleyin. Şimdi, rezervuarı, mikserden çıkan çıkış doğrudan rezervuara girecek şekilde CIJ mikserin altına yerleştirin.Çarpma solüsyonlarını ayrı bir mililitrelik plastik tek kullanımlık şırıngalara yükleyin, şırıngaları CIJ karıştırıcının üst kısmındaki luerlock adaptörlerine yerleştirerek aynı anda nanoyapılar oluşturmak için solüsyonları birbirine çarpın. Tek, pürüzsüz ve hızlı bir hareketle, her iki şırıngayı aynı anda ve eşit kuvvetle bastırın. Birden fazla çarpma gerçekleştirilecekse, valtower organik çözücü kaybını azaltmak için bunların mümkün olduğunca çabuk yapılması çok önemlidir.Birden fazla çarpma gerçekleştirmek için, yeni ortaya çıkan nanoyapı çözeltisini iki şırınga arasında bölün ve bu adımı dört kez daha tekrarlayın. Dışarı akışı sulu tampon dolu rezervuarda toplayın ve karıştırmayı sağlamak için hafifçe karıştırın. Boşaltılan kargoyu ve organik çözücüyü çıkarmak için birkaç seçenek vardır.Nanotaşıyıcı formülasyonu, tüketim vergisi dışlama veya tuzdan arındırma kolonu yoluyla, teğetsel akış filtrasyon sistemi yoluyla, vakumla kurutma yoluyla veya burada gösterildiği gibi diyaliz yoluyla çıkarılabilir. Nanotaşıyıcı formülasyonunu, çarpma için kullanılan aynı sulu tampon ve rezervuarda diyalize edin. En az iki tampon değişikliği ile en az 24 saat boyunca uygun bir moleküler ağırlık kesme borusu kullanın.Boşaltılan kargo organik çözücüden çıkarıldıktan sonra, üreticinin talimatlarını izleyerek bir spin yoğunlaştırıcı sistemi kullanarak nano taşıyıcı formülasyonunu konsantre edin. Nanotaşıyıcılar haftalarca veya aylarca dört santigrat derecede saklanabilir. Depolamadan sonra kullanımdan önce, nanotaşıyıcı formülasyonlar kısaca girdaplanmalıdır.Metin protokolünde açıklandığı gibi yüksek hızlı bir şırınga pompasının imalatını gerçekleştirin. Otomatik çalıştırma modunu kullanmak için ana menüden otomatik çalıştırmayı seçin. Sistem, kullanıcılardan motorun şırınga çıkarma platformunu hassas sürgünün başlangıcına otomatik olarak konumlandırmasına izin vermelerini isteyecektir.Devam etmeden önce metal plakanın önündeki ve arkasındaki yolun boş olduğundan emin olun. CIJ mikserini arka tahliye taşıyıcısının dikdörtgen açıklığına yerleştirin. Ardından, daha önce olduğu gibi bir mililitrelik plastik şırınga yükleyin ve şırıngaları CIJ mikserinin dişi yem konektörlerine monte edin.Cihazı çalıştırmadan önce, istenen motor hızını ayarlayın ve metin protokolünde açıklandığı gibi sistemin net olduğunu kontrol edin. Reaktanları şırıngalardan CIJ miksere atmak için yazılım arayüzündeki çalıştır düğmesine basın. Temsili kriyojenik iletim elektron mikrografları, tekrarlanan çarpmalardan sonra daha küçük ve daha mono dağılmış polimeromları gösterir.Dinamik ışık saçılımı analizi, tekrarlanan çarpmalardan sonra polimeromların boyut dağılımının sola doğru kaymasını doğruladı. Tekrarlanan beş çarpmadan sonra, polimeromların ortalama çapı ve polidispersitesi, ince film rehidrasyonu ile oluşturulan ekstrüde edilmiş numunelerinkiyle eşleşir. Flaş nanoçökeltme, polimeromlara çeşitli hidrofobik ve hidrofilik küçük molekülleri ve makromolekülleri yüklemek için kullanılabilir.Bu yöntem, immünoterapilerin ve aşıların nasıl çalıştığına dair fikir verebilse de, polimerlerin karmaşık nanoyapılara nasıl kendi kendine bir araya geldiğinin incelenmesine de uygulanabilir. Bu prosedürü takiben, hangi hücre alt kümelerinin nanopartikülleri içselleştirdiğini veya farklı nanoyapılar için temizleme yolunun ne olduğunu belirlemek için hayvan modellerine intravenöz veya subkutan uygulama gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir. Bu tekniğin etkileri, kalp hastalıkları ve kanserin tedavisinin yanı sıra bulaşıcı hastalıklar için aşıların geliştirilmesine kadar uzanır, çünkü bu nanotaşıyıcılar çok spesifik bağışıklık hücrelerine birden fazla ilacı hedefleyebilir.

rapid-scalable-assembly-loading-bioactive-proteins-immunostimulants

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu makale diblock co-polimerler kullanarak polimer bazlı nanopartiküller sentezlemek için nanoprecipitation yöntem açıklanır. Biz diblock sentezi co-polimerler, nanoprecipitation tekniği ve potansiyel uygulamalar ele alınacaktır.

Nanoprecipitation Tekniği Diblock Polimerik Nanopartiküller formülasyonu

Bu makale, yüksek bir verim yöntemi antijen sunan hücreler üzerinde belirli reseptörlerine yönelik olarak kullanım için polianhidrid Nanopartiküllerin yüzeyine oligosaccharidler ve ekin sentezi için sunulmuştur.

Polianhidrid Nanopartiküller Yüksek throughput Karbonhidrat sentezi ve işlevsel

Bir murin aşılama modelinde nanopartiküllerle bağışıklamaya yanıt olarak antijene özgü CD8+ T hücrelerinin genişlemesini izlemek için tüm hayvan görüntüleme ve akış sitometrisi tabanlı teknikleri açıklıyoruz.

Nanopartikül Aşılama sonrası analizi antijene özgü CD8 + T hücresi tepkileri için tüm hayvan Görüntüleme ve Akış Sitometrisi Teknikleri

Basit homojenizasyon, sinir büyüme faktörünü kapsüllemek için yeni, yüksek yoğunluklu, lipoprotein-taklit nanoparçacıklar hazırlamak için kullanıldı. Bu makalede, nanoparçacık hazırlığı, in vitro karakterizasyon ve in vivo çalışmalar için zorluklar, ayrıntılı protokoller anlatılmıştır.

Sinir Büyümesi Faktörü Kapsüllemesi için Yeni HDL&#39;yi taklit eden Nanopartiküllerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu

Burada, hızlı ve tekrarlanarak ayarlanabilir boyutu, şekli ve yüzey proteini tanıtımı için T hücre genişletme ex vivo veya içinde vivo hücre (aAPC) sunan biyolojik ilham, biyolojik olarak parçalanabilen articifical antijen üretmek için bir iletişim kuralı mevcut .

Yönbağımlı polimer yapay antijen hücreleri CD8 + T Hücre aktivasyonu için sunma imalatı

Flash NanoPrecipitation (FNP) polimer çekirdek-kabuk nano tanecikleri üretmek için ölçeklenebilir bir yaklaşımdır. Laboratuvar ölçekli formülasyonları hidrofobik veya hidrofilik therapeutics Kapsülleme için açıklanmıştır.

Hidrofobik ve hidrofilik bileşikler polimer nano tanecikleri Kapsülleme için NanoPrecipitation flash

Organik ve sulu çözücülerin arayüzünde, özel ampifilik elastin benzeri proteinler veziküller, lifler ve çevresel parametrelertarafından tetiklenen koaksivatlar gibi karmaşık supramoleküler yapılarda bir araya getirilir. Açıklanan montaj protokolleri, çeşitli kargoların kapsüllemesini sağlayan, tunable özelliklere sahip Protein Membran Tabanlı Bölmeler (PMBCs) verir.

Elastin benzeri Proteinlerin tanımlanmış Supramoleküler Yapılara Yönlendirilmiş Montajı ve Tüp Bebek Tespülasyonu

Lipid nanopartikülleri mRNA ve DNA kapsülleme için mikroakışkan karıştırma platformu yaklaşımı kullanılarak geliştirilmiştir.

Mikroakışkan Karıştırma Platformu Kullanarak Gen Teslimatı için Lipid Nanopartiküllerinin Formülei ve Karakterizasyonsu

Burada, poli (beta aminoester) polimerlere dayalı mRNA nanopartikülleri üretmek için basit bir protokol sunulmaktadır, kapsüllenmiş mRNA değiştirilerek uyarlanabilir. Polimerleri, nanopartikülleri ve in vitro temel karakterizasyonlarını sentezlemek için iş akışı da açıklanmıştır. Bağışıklama ile ilgili bir kavram kanıtı da ekleniyor.

Aşı Amacıyla mRNA Yüklü Poli (Beta Aminoesterler) Nanopartiküllerinin Sentezi ve Karakterizasyonu

Nanojeller, biyolojik maddelerin verilmesi için mükemmel ve çok yönlü bir nanoparçacık platformudur. Protein bazlı yükleri kapsülleyebilen uyaranlara duyarlı poli (etilen) glikol bazlı polimerik nano jeller, sulu koşullarda tek aşamalı çapraz bağlama ko-nanopolimerizasyon stratejisi kullanılarak sentezlendi. Bu yeni nanopartiküllerin optimal üretimi ve karakterizasyonu burada sunulmaktadır.

Sulu Tek Adımlı Çapraz Bağlama ve Ko-nanopolimerizasyon Kullanılarak Uyaranlara Duyarlı Nanojellerin Sentezi

İki jetli bir CIJ ve dört jetli çok girişli girdap karıştırıcı (μMIVM) dahil olmak üzere sınırlı çarpma jeti (CIJ) karıştırıcı teknolojileri kullanılarak lipid nanopartiküllerinin (LNP'ler) sentezlenmesi için ayrıntılı bir protokol gösterilmiştir. CIJ mikserleri, tekrarlanabilir, türbülanslı mikro karıştırma ortamları oluşturur ve bu da monodispers LNP'lerin üretilmesiyle sonuçlanır.

Lipid Nanopartiküllerinin Kapalı Çarpmalı Jet Karıştırıcılarda Türbülanslı Akışla Sentezlenmesi

Öğrenin, flash nanoprecipitation yöntemiyle biyoaktif moleküller yüklenmiş, düşük polidispersiteli nanotasyıcıları hızlı ve ölçeklenebilir şekilde nasıl üreteceğinizi. Bu teknik, ilaç dağıtım sistemleri geliştirmek isteyen araştırmacılar için idealdir.

Ölçeklenebilir, Hızlı montaj ve biyoaktif proteinler ve Immunostimulants yükleme yolu ile birden parlamak Nanoprecipitation çeşitli sentetik Nanocarriers içine (Video) | JoVE Journal

Ölçeklenebilir, Hızlı montaj ve biyoaktif proteinler ve Immunostimulants yükleme yolu ile birden parlamak Nanoprecipitation çeşitli sentetik Nanocarriers içine

Daha fazla video keşfet