Name: Yalıtım, genişleme ve Adipojenik indüksiyon CD34 + CD31 + insan Omental ve deri altı yağ dokusu endotel hücrelerden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 28 s
Description: Keşfedin, insan CD34+CD31+ endotel hücrelerinin yalıtımı ve beyaz/bej adipositlere farklılaşması için kullanılan bu yöntemi. Obezite ve metabolik sağlık araştırmalarında adipojenik yanıtları anlamak için uygundur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Becky Marquez, klinik Koordinatörü Sentara Bariatric Merkezi, eleme ve açıklanması kabul etmiş hasta süreci ile yardımını kabul etmek istiyorum. Bu araştırma için Anca ö Dobrian R15HL114062 tarafından desteklenmiştir.

Kurumsal teftiş kurulu Derneği Doğu Virginia Tıp Fakültesi, araştırma ve çalışmada kullanılan insan yağ doku örnekleri toplanması onayladı. Bilinçli yazılı izni hastalardan toplanmıştır.
1. hazırlanması arabellekleri, medya ve aletleri
<ol><li>Krebs Ringer Bicarbonate-Buffered çözüm (KRBBS) hazırlamak: 135 mM sodyum klorür, 5 mM potasyum klorür, 1 mM magnezyum sülfat, 0.4 mM potasyum fosfat dibasic, 5.5 mM glikoz, 1 mM Adenozin, % 0,01 antibiyotik/antimycotic mix (50 µg/mL penisilin, 50 µg/mL streptomisin, gentamisin 30 µg/mL, amfoterisin 15 ng/mL) ve 10 mM HEPES (pH 7.4 =). Bu çözüm doku toplama ve sindirim için her zaman taze hazırlanır.</li>
	<li>Taze collagenase çözüm hazırlamak: 1 mg/mL collagenase, tip 1, KRBSS; 3 mL/g yağ olun. Doku sindirim önce su banyosunda 37 ° C'de collagenase çözüm önceden ısıtmak.</li>
	<li>CD34 hücre izolasyon arabellek hazırlamak: % 2 fetal Sığır serum (FBS) ve 1 mM EDTA steril fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS).</li>
	<li>Adipogenesis ortam hazırlamak: DMEM/F12, % 5 FBS, 50 µg/mL penisilin/streptomisin, 1,25 µL/mL (5 µg/mL veya 144 mU/mL) insan insülin ve 0,36 µL/mL 2.8 mM rosiglitazone (1 µM).</li>
	<li>%0,3 yağ kırmızı O (ORO) hisse senedi çözüm (ağırlık/hacim) ORO 0.3 g isopropanol 100 mL içine çözülerek hazırlayın.</li>
</ol>2. yağ Stromal vasküler kesir yalıtım
Not: Morbid obez tip 2 diyabetik (T2D) ve Sentara metabolik ve kilo kaybı cerrahi Merkezi'nde (Sentara Medikal Grubu, Norfolk, VA) obezite cerrahisi uygulanan diyabetik olmayan konular, 18-65 yaş arası kesitsel bir kohort çalışma dahil. Dışlama kriterleri bir otoimmün hastalığı tip 1 diyabet, kronik immünsüpresif tedavi, Anti-inflamatuar ilaçlar, thiazolinendiones, etkin tütün kullanımı, kronik veya akut enfeksiyonlar veya bir geçmiş gerektiren koşullar da dahil olmak üzere dahil Son 12 ay içinde tedavi malignite. T2D 126 mg/dL veya daha büyük bir açlık plazma glukoz, 200 mg/dL veya daha büyük 2 h glikoz tolerans testi sonra bir glukoz veya antidiyabetik ilaçların kullanımı tanımlanmıştır.
<ol><li>İnsan omental (OM) ve subkutan (SC) Yağ dokusundan (AT) insan denekler obezite cerrahisi uygulanan toplamak.</li>
	<li>OM ve SC AT hemen doku çıkarma sonra Hank tamponlu tuz solüsyonu ile 50 µg/mL penisilin/streptomisin, oda sıcaklığında içeren ayrı şişeleri tutun.</li>
	<li>Dikkatli bir şekilde temiz ve fibrotik ve dağlanmış bölümleri doku örneği laboratuarda doku çıkarma sonra geldiğinde % 70 etanol makas örnek aldım ve cımbız kullanarak kaldırın.</li>
	<li>Yağ dokusu tartmak ve BT 5 g (veya daha az) aliquots collagenase sindirim için bölüm.</li>
	<li>İnce iki çift makas kullanarak at 5 ml collagenase çözüm oda sıcaklığında bir mercek şişe içinde 5 g kıyma.</li>
	<li>15 mL toplam için kıyılmış doku için ek bir 10 mL collagenase çözeltisi ekleyin.</li>
	<li>Sürekli titriyor ile bir su banyosu içinde 37 ° C'de 1 h için örnekleri sindirmek.</li>
	<li>Künt bir son yapmak için bir 20 mL şırınga ihbar kesti.</li>
	<li>250 µm kafes üzerinden 9 cm x 9 cm kare şeklinde bir kesik ve künt son şırınga kullanarak 50 mL konik tüp yarıya kadar itin.</li>
	<li>Örnekleri 20 mL künt son şırınga ve 250 µm naylon mesh adiposit ve stromal damar hücreleri sindirilmemiş dokusundan ayırmak için 50 mL konik tüp içine filtreden içine dökün. Not: mesh aşırı fibrotik sindirilmemiş malzeme nedeniyle tıkanmış olsun AT 5 g 50 mL konik Tüp, başına birden fazla kullanmayın.</li>
	<li>KRBBS 10 mL ile mercek şişe dışarı yıkama ve kalan hücreleri toplamak için filtreden dök.</li>
	<li>Filtre uygulanmış örnekleri, oda sıcaklığında 5 min için kuluçkaya. Not: Adipositler float tüp üstünde ve bazı stromal damar hücreleri tüpün dibinde yerleşmek için izin vermek bu adım önemlidir.</li>
	<li>20 mL şırınga ve bir 20 G x 6'pipetting iğne stromal vasküler kesir katmanı kaldırın ve temiz 50 mL konik tüp aktarmak için kullanmak.</li>
	<li>KRBBS 10 mL ekleyin ve oda sıcaklığında 5 min için bankta oturmak örnekleri sağlar.</li>
	<li>2.12-2,14 adımları iki kez tekrarlayın. Not: Aşağıdaki adımları hiçbir kirlenme ile kayan adiposit stromal vasküler hücre olduğundan emin olun.</li>
	<li>Aşağıdaki adımlarda açıklandığı gibi her iki depoları için daha fazla alay, buzda stromal vasküler kesirler tutmak. Not: Bu hücre canlılığı üzerinde bir etkiye sahip gibi hücreleri daha 1 h, buz üzerinde terk etmeyin. Adiposit deneyler için taze kullanılan ya da flash donmuş sıvı azot uzun süreli depolama için olabilir.</li>
</ol>3. yağ dokusu endotel hücre izolasyon
<ol><li>500 x g 4 ° C'de 5 min için de stromal vasküler kesirler (SVF) spin</li>
	<li>Örnekler santrifüj kaldır ve dikkatle süpernatant dökün; SVF hücreleri içeren pelet tutun.</li>
	<li>Yavaşça hücre topakları PBS 5 mL resuspend. Not: bir AT depo daha--dan 5 g (bkz. Adım 2.4) birden çok aliquots işlendiyse, hücre topakları birlikte havuz.</li>
	<li>Örnekleri 500 x g 4 ° C'de 5 min için de spin</li>
	<li>Süpernatant kaldırmak, PBS 1 mL hücrelerde resuspend ve hücreleri saymak. Not: Burada, bir otomatik hücre sayaç hücre sayımı için kullanıldı. Hücre canlılığı 12 µL hücre süspansiyon, akridin turuncu/propidium iyodür (AO/PI) çözümünü 12 µL ile karıştırılarak elde edildi ( Tablo malzemelerigörmek). Hücreleri her depo için at gram başına ortalama sayısı: (a) OM depo: 1,69 x 105 ± 4.51 x 104; (b) SC depo: 1,24 x 105 ± 6.45 x 104. Her iki depoları hücrelerden canlılığı yapıldı > % 90.</li>
	<li>Örnekleri 500 x g 4 ° C'de 5 min için de cips Not: CD34 immunomagnetic seçim Protokolü ( Tablo malzemelerigörmek) adımlar için 3.7-3.15 uyarlanmıştır.</li>
	<li>Pelet CD34 yalıtım arabellek 100 µL içinde resuspend. Not: Toplam hücre sayısı aşağıdaki re-süspansiyon birimleri gerektirir: (a) < 2 x 107 hücreleri: Pelet 100 µL; resuspend (b) 2 x 108–5 x 108 hücreleri: pelet 1 mL resuspend. 3.9-3,16, adımda kullanılan reaktifler hacimleri için küçülttüm < 2 x 107 hücreleri.</li>
	<li>CD34 kokteyl 10 µL ekleyin ve 15 dakika oda sıcaklığında örnek kuluçkaya.</li>
	<li>Manyetik boncuklar 5 µL ekleyin ve örnek oda sıcaklığında 10 dakika için kuluçkaya.</li>
	<li>CD34 yalıtım arabellek 2.5 mL her örnek için ekleyin ve oda sıcaklığında 5 min için mıknatıs örnekleri yerleştirin.</li>
	<li>Mıknatıs 5 için ters çevir'i s yalıtım tampon dökün.</li>
	<li>Örnekler mıknatıs kaldırmak ve 3.10 ve 3,11 4 x arasındaki adımları yineleyin.</li>
	<li>Tüp mıknatıs kaldır ve CD34 yalıtım arabellek 2 mL ekleyin.</li>
	<li>Hücreleri 500 x g 4 ° C'de 5 min için de cips</li>
	<li>Hücre topakları 1 mL CD34 yalıtım arabellek resuspend ve hücreleri saymak. Not: İşte, at gram başına ortalama sayısı: (a) OM depo: 4,75 x 104 ± 3,36 x 104; (b) SC depo: 1,06 x 104 ± 9,53 x 103. Bir CD31 plastik immunobead iletişim kuralı için adımları 3,16-3,34 ( Tablo malzemelerigörmek) uyarlanmıştır.</li>
	<li>Hücreleri 500 x g 5 min için de cips ve Pelet arabellek b 250 µL ve yıkama arabelleği 250 µL'resuspend.</li>
	<li>İyice CD31 boncuk vortexing tüp tarafından resuspend.</li>
	<li>20 µL CD31 boncuk ekleyin. Not: Toplam hücresini nedeniyle sayar > 1 x 106, birimin üreticinin giriş göre küçültülmüş.</li>
	<li>Oda sıcaklığında 30 dakika sallanan ile örnek kuluçkaya.</li>
	<li>Bir süzgeç steril 50 mL konik tüp takın. Not: Süzgeç büyük açılış üstte olması gerekir.</li>
	<li>Önce hücre ayırma, yıkama arabelleği süzgeç equilibrate 1 mL ekleyin. Süzgeç 3,16 adıma altında oluşturulan karışımı uygulamak.</li>
	<li>Dairesel bir hareketle toplam hacmi 20 mL için süzgeç yıkama arabelleği 5 mL ile yıkayın. Bağlayıcı bir steril 50 mL konik tüp takmak ve radarı kilit kapatın.</li>
	<li>Süzgeç konektöre takın. Yıkama arabellek süzgeç duvar boyunca 1 mL ekleyin. Süzgeç duvar boyunca aktif arabellek D 1 mL ekleyin. Örnek hafifçe girdap ve oda sıcaklığında 10 dakika için kuluçkaya.</li>
	<li>Yıkama arabellek 1 mL ekleyin. Yukarı ve aşağı 10 x pipetting tarafından boncuk ayrı hücreler. Not: hava kabarcıkları oluşturulmasını engellemek.</li>
	<li>Radarı-kilidi açmak ve 50 mL konik tüp içine akmaya müstakil hücreleri izin vermek. Süzgeç 10 yıkama yıkama arabelleği her zaman 1 mL x.</li>
	<li>Bağlayıcı ve süzgeç atmak ve 300 x g 4 ° C'de 10 dakika için de örnekler santrifüj kapasitesi Hücre Pelet komple EGM-2 Medya kültürü için 2 ml resuspend. Not: Hücreler bu noktada at gram başına ortalama sayısıdır: (a) OM depo: 5.92 x 103 ± 4.27 x 103; (b) SC depo: 4.12 x 103 ± 2.1 x 103. Her iki depoları hücrelerden canlılığı üzerinde % 90 oldu.</li>
</ol>4. indüksiyon Adipogenesis izole endotel hücrelerinde
<ol><li>6-iyi doku kültürü tedavi plakaları hücrelerde bir 37 ° C'de % 5 CO2 kuluçka komple EGM-2 medya ile büyümek. Ortamı her 3-4 hücreleri % 80 – 90 izdiham ulaşana kadar gün değiştirin. Not: 2-3 gün arasında nüfus katlama olduğunu.</li>
	<li>100 mm Petri yemekler üzerinde kaplama tarafından hücreleri genişletin ve 1:3 kez hücreleri bölme. Bu aşamada, geçiş 2 hücrelerdir.</li>
	<li>(Bkz. Tablo reçetesi) otomatik bir hücre kullanarak hücreleri counter Count.</li>
	<li>Tohum yaklaşık 100-200.000 hücrelere 6-şey plakaları her depo ve onları buna 2 gündür EGM-2 medya tamamlandı kültür için yinelenen wells sağlanması.</li>
	<li>Aspire herhangi bir büyüme medya ve DMEM/F12 2 mL % 5 ile onun yerine FBS ve 50 µg/mL penisilin/streptomisin denetim için hücreleri ve 2 mL (bkz. Adım 1.4) Adipogenesis medya için tedavi hücreleri ile değiştirin.</li>
	<li>Hücreleri oksijen %5 37 ° C'de kuluçkaya ilgili medya her 3-4 gün yerine CO2 kuluçka 13 gündür. Not: Hücreleri tedavi 4 gün sonra lipidler toplamaya başlayacaktır.</li>
	<li>ORO ve Nil yayınlanan yöntemleri15-17göre boyama kırmızı yürütmek.</li>
	<li>Bir RNA çıkarılması için hücreleri izole etmek için 6-iyi indüksiyon plakalar medyayı çıkarın ve 1 mL steril PBS ile yıkayın.</li>
	<li>Guanidium thiocyanate-fenol-kloroform çözüm 350 µL ekleyin (her şey ve oda sıcaklığında 5-10 dk için kuluçkaya Malzemeler tablobkz:).</li>
	<li>Hücreleri kullanarak bir hücre sıyırıcı plaka kapalı kazımak ve hücreleri bir 1.5 mL microcentrifuge tüp aktarın. Not: Örnekleri RNA çıkarma ve daha sonraki bir tarihte işlenmesi için-80 ° C dondurucuda saklanabilir.</li>
	<li>MRNA adapte bir RNA ayıklama kullanarak örnekleri ayıklamak ( Tablo malzemelerigörmek) protokol.</li>
	<li>Bir gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) gen ifade aşağıdaki problar kullanarak değerlendirmek için gerçekleştirmek: adiponektin, UCP-1 ve CIDEA (bkz: Malzemeler tablo). Not: Burada, RT-PCR yordamlar aşağıdaki standart protokolü kullanılarak yapılmıştır: denatürasyon (95 ° C; 15 s), tavlama ve uzantısı (60 ° C; 1 dk) 40 döngüleri için. CT değerleri ile gen ifade örnekleri > 35 belirlenemeyen kabul.</li>
</ol>

<ol><li>Tang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White+fat+progenitor+cells+reside+in+the+adipose+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">White fat progenitor cells reside in the adipose vasculature.</a> Science. 322 (5901), 583-586 (2008).</li>
<li>Lee, Y. H., Petkova, A. P., Granneman, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+an+adipogenic+niche+for+adipose+tissue+remodeling+and+restoration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Identification of an adipogenic niche for adipose tissue remodeling and restoration.</a> Cell Metabolism. 18 (3), 355-367 (2013).</li>
<li>Min, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+%27brite%2Fbeige%27+adipocytes+develop+from+capillary+networks%2C+and+their+implantation+improves+metabolic+homeostasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Human 'brite/beige' adipocytes develop from capillary networks, and their implantation improves metabolic homeostasis in mice.</a> Nature Medicine. 22 (3), 312-318 (2016).</li>
<li>Gupta, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zfp423+expression+identifies+committed+preadipocytes+and+localizes+to+adipose+endothelial+and+perivascular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Zfp423 expression identifies committed preadipocytes and localizes to adipose endothelial and perivascular cells.</a> Cell Metabolism. 15 (2), 230-239 (2012).</li>
<li>Tran, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+of+the+adipose+tissue+gives+rise+to+both+white+and+brown+fat+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium of the adipose tissue gives rise to both white and brown fat cells.</a> Cell Metabolism. 15 (2), 222-229 (2012).</li>
<li>Rodeheffer, M. S., Birsoy, K., Friedman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+white+adipocyte+progenitor+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of white adipocyte progenitor cells in vivo.</a> Cell. 135 (2), 240-249 (2008).</li>
<li>Scott, M. A., Nguyen, V. T., Levi, B., James, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+methods+of+adipogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">Current methods of adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells and Development. 20 (10), 1793-1804 (2011).</li>
<li>Macotela, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+differences+in+adipocyte+precursor+cells+from+different+white+fat+depots%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Intrinsic differences in adipocyte precursor cells from different white fat depots.</a> Diabetes. 61 (7), 1691-1699 (2012).</li>
<li>Lee, Y. H., Petkova, A. P., Mottillo, E. P., Granneman, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+identification+of+bipotential+adipocyte+progenitors+recruited+by+beta3-adrenoceptor+activation+and+high-fat+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">In vivo identification of bipotential adipocyte progenitors recruited by beta3-adrenoceptor activation and high-fat feeding.</a> Cell Metabolism. 15 (4), 480-491 (2012).</li>
<li>Xue, Y., Xu, X., Zhang, X. Q., Farokhzad, O. C., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+diet-induced+obesity+in+mice+by+adipose+tissue+transformation+and+angiogenesis+using+targeted+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Preventing diet-induced obesity in mice by adipose tissue transformation and angiogenesis using targeted nanoparticles.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (20), 5552-5557 (2016).</li>
<li>Villaret, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+endothelial+cells+from+obese+human+subjects%3A+differences+among+depots+in+angiogenic%2C+metabolic%2C+and+inflammatory+gene+expression+and+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue endothelial cells from obese human subjects: differences among depots in angiogenic, metabolic, and inflammatory gene expression and cellular senescence.</a> Diabetes. 59 (11), 2755-2763 (2010).</li>
<li>Miranville, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+postnatal+neovascularization+by+human+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Improvement of postnatal neovascularization by human adipose tissue-derived stem cells.</a> Circulation. 110 (3), 349-355 (2004).</li>
<li>Sengenes, C., Lolmede, K., Zakaroff-Girard, A., Busse, R., Bouloumie, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preadipocytes+in+the+human+subcutaneous+adipose+tissue+display+distinct+features+from+the+adult+mesenchymal+and+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Preadipocytes in the human subcutaneous adipose tissue display distinct features from the adult mesenchymal and hematopoietic stem cells.</a> Journal of Cellular Physiology. 205 (1), 114-122 (2005).</li>
<li>Moller, D. E., Flier, J. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1881419">Insulin resistance--mechanisms, syndromes, and implications.</a> The New England Journal of Medicine. 325 (13), 938-948 (1991).</li>
<li>Pittenger, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilineage+potential+of+adult+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells.</a> Science. 284 (5411), 143-147 (1999).</li>
<li>Novikoff, A. B., Novikoff, P. M., Rosen, O. M., Rubin, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organelle+relationships+in+cultured+3T3-L1+preadipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Organelle relationships in cultured 3T3-L1 preadipocytes.</a> The Journal of Cell Biology. 87 (1), 180-196 (1980).</li>
<li>Satish, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+analysis+of+human+adipose-derived+stem+cells+during+in+vitro+differentiation+to+an+adipocyte+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Medical+Genomics%22%5BJournal%5D)">Expression analysis of human adipose-derived stem cells during in vitro differentiation to an adipocyte lineage.</a> BMC Medical Genomics. 8 (41), (2015).</li>
<li>Gimbrone, M. A., Cotran, R. S., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+vascular+endothelial+cells+in+culture.+Growth+and+DNA+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Human vascular endothelial cells in culture. Growth and DNA synthesis.</a> The Journal of Cell Biology. 60 (3), 673-684 (1974).</li>
<li>Burridge, K. A., Friedman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+and+vascular+bed+origin+influence+differences+in+endothelial+transcriptional+profiles+of+coronary+and+iliac+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Environment and vascular bed origin influence differences in endothelial transcriptional profiles of coronary and iliac arteries.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 299 (3), H837-H846 (2010).</li>
<li>Paruchuri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pulmonary+valve+progenitor+cells+exhibit+endothelial%2Fmesenchymal+plasticity+in+response+to+vascular+endothelial+growth+factor-A+and+transforming+growth+factor-beta2%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Human pulmonary valve progenitor cells exhibit endothelial/mesenchymal plasticity in response to vascular endothelial growth factor-A and transforming growth factor-beta2.</a> Circulation Research. 99 (8), 861-869 (2006).</li>
<li>Hewett, P. W., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+microvessel+endothelial+cells%3A+isolation%2C+culture+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Development+Biology%22%5BJournal%5D)">Human microvessel endothelial cells: isolation, culture and characterization.</a> In Vitro Cellular & Development Biology. 29 (11), 823-830 (1993).</li>
<li>Hewett, P. W., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+lung+microvessel+endothelial+cells%3A+isolation%2C+culture%2C+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Human lung microvessel endothelial cells: isolation, culture, and characterization.</a> Microvascular Research. 46 (1), 89-102 (1993).</li>
<li>Hewett, P. W., Murray, J. C., Price, E. A., Watts, M. E., Woodcock, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+microvessel+endothelial+cells+from+human+mammary+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Development+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of microvessel endothelial cells from human mammary adipose tissue.</a> In Vitro Cellular & Development Biology. 29 (4), 325-331 (1993).</li>
<li>Xiao, L., McCann, J. V., Dudley, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+expansion+of+tumor-specific+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture expansion of tumor-specific endothelial cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (105), e53072(2015).</li>
<li>Berry, R., Rodeheffer, M. S., Rosen, C. J., Horowitz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+residing+progenitors+%28adipocyte+lineage+progenitors+and+adipose+derived+stem+cells+%28ADSC%29%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Molecular+Biology+Reports%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue residing progenitors (adipocyte lineage progenitors and adipose derived stem cells (ADSC).</a> Current Molecular Biology Reports. 1 (3), 101-109 (2015).</li>
<li>Zhou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evaluation+of+endothelial+progenitor+cells+from+adipose+tissue+as+potential+angiogenic+cell+sources+for+bladder+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In vitro evaluation of endothelial progenitor cells from adipose tissue as potential angiogenic cell sources for bladder angiogenesis.</a> PLoS One. 10 (2), e0117644(2015).</li>
<li>Curat, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+blood+monocytes+to+adipose+tissue-resident+macrophages%3A+induction+of+diapedesis+by+human+mature+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">From blood monocytes to adipose tissue-resident macrophages: induction of diapedesis by human mature adipocytes.</a> Diabetes. 53 (5), 1285-1292 (2004).</li>
<li>Sidney, L. E., Branch, M. J., Dunphy, S. E., Dua, H. S., Hopkinson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+evidence+for+CD34+as+a+common+marker+for+diverse+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: evidence for CD34 as a common marker for diverse progenitors.</a> Stem Cells. 32 (6), 1380-1389 (2014).</li>
<li>Traktuev, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+population+of+multipotent+CD34-positive+adipose+stromal+cells+share+pericyte+and+mesenchymal+surface+markers%2C+reside+in+a+periendothelial+location%2C+and+stabilize+endothelial+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">A population of multipotent CD34-positive adipose stromal cells share pericyte and mesenchymal surface markers, reside in a periendothelial location, and stabilize endothelial networks.</a> Circulation Research. 102 (1), 77-85 (2008).</li>
<li>Frontini, A., Giordano, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+of+adipose+tissues%3A+a+niche+of+adipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells of adipose tissues: a niche of adipogenesis.</a> Cell Cycle. 11 (15), 2765-2766 (2012).</li>
<li>Sengenes, C., Miranville, A., Lolmede, K., Curat, C. A., Bouloumie, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+endothelial+cells+in+inflamed+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">The role of endothelial cells in inflamed adipose tissue.</a> Journal of Internal Medicine. 262 (4), 415-421 (2007).</li>
<li>Ong, W. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+specific+cell-surface+markers+of+adipose-derived+stem+cells+from+subcutaneous+and+visceral+fat+depots%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Identification of specific cell-surface markers of adipose-derived stem cells from subcutaneous and visceral fat depots.</a> Stem Cell Reports. 2 (2), 171-179 (2014).</li>
<li>Ong, W. K., Sugii, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells%3A+fatty+potentials+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Biochemistry+%26+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells: fatty potentials for therapy.</a> The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 45 (6), 1083-1086 (2013).</li>
<li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abundance+of+two+human+preadipocyte+subtypes+with+distinct+capacities+for+replication%2C+adipogenesis%2C+and+apoptosis+varies+among+fat+depots%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Endocrinoloy+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Abundance of two human preadipocyte subtypes with distinct capacities for replication, adipogenesis, and apoptosis varies among fat depots.</a> American Journal of Physiology-Endocrinoloy and Metabolism. 288 (1), E267-E277 (2005).</li>
<li>van de Vyver, M., Andrag, E., Cockburn, I. L., Ferris, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thiazolidinedione-induced+lipid+droplet+formation+during+osteogenic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Thiazolidinedione-induced lipid droplet formation during osteogenic differentiation.</a> Journal of Endocrinology. 223 (2), 119-132 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Yalıtım, genişleme ve Adipojenik indüksiyon CD34 + CD31 + visseral ve subkutan depoları insan yağ dokusunun endotel hücrelerden bir metodoloji sağlamak için bu kağıt odak noktasıdır.
Metodolojisi kemirgenler veya öncelikle teknikleri fluorescently etiketli veya manyetik boncuklar-18, birleştiğinde CD31 antikorları kullanarak dahil insanlar çeşitli vasküler yatak endotel hücrelerinin yalıtım için bildirilmiştir 19 , <sup clas...

Son kanıtlar hem fareler ve insanlar, yağ dokusu damarlara ikamet eden hücre alt grubunu beyaz veya bej/kahverengi adiposit1,2,3Ayrıştırılan gösterir. Bu tür hücrelerin fenotip tartışmalara, endotel hücreleri, düz kas/pericyte veya ara fenotipleri4,5,6,7bir spektrum destekleyen kanıt ile bir konudur. Bu metodoloji geliştirme kapsam CD34 + CD31 + endotel hücreleri obez insanlar farklı yağ depoları dan izole Adipojenik potansiyelini test etmek için yapıldı. Diğer çalışmalar literatürde potansiyel toplam stromal vasküler fraksiyonunun veya bilinen adipocyte ataları2,8,9Adipojenik üzerinde duruluyor. Şu anda mevcut teknolojilerin özellikle yağ dokusu endotel hücreleri ilaç teslim10için hedef olabilir olduğundan, potansiyel böyle hücrelerinin Adipojenik geçmesi anlama indüksiyon beyaz veya bej adiposit doğru için önemlidir gelecekte hedefli tedaviler.
Farklı gruplar CD31 ve CD34 işaretleri arada insan yağ dokusu11,12,13endotel hücreleri izole etmek için vekilleri olarak bildirdi. Genellikle, yalıtım iki sıralı adımları ve manyetik boncuklar kullanarak pozitif seçimi kullanılarak gerçekleştirilir. Bu raporda, CD31 plastik boncuk ile kombine CD34 + manyetik bir boncuk kullanarak immunoseparation kullanılmıştır. Bu teknik sıralı manyetik immunoseparation tipik Arnavut kaldırımlı endotel morfoloji korunması ile ilgili olarak daha üstün bulduk. Ayrıca, 1-2 g yağ gibi küçük başlangıç genişleme ve Adipojenik indüksiyon için gerekli yeterince hücre oluşturmak başardık. Küçük örnek biyopsi subkutan yağ hücreleri aşağı akım uygulamaları için gerekli miktarı üretmek için yeterli olacaktır. Bu açıdan özellikle bu yöntem insan denekler Adipojenik indüksiyon bir kavramaları için tarama için kullanılacaktır, potansiyel olarak önem kazanır.
Literatürde bildirilen diğer sistemlerin aksine, bu yöntem CD34 + CD31 + hücrelerinin Adipojenik indüksiyon için sadece iki malzemeler kullanır: bir PPARγ agonist — rosiglitazone — ve insan insülin. Önemlisi, insanlar14post-absorptive insülin dolaşan normal/yüksek Aralık içinde kullanılan insülin miktarı düşer. Akt fosforilasyon tarafından ölçülen hücreleri vitro, insülin duyarlılık derecesini indüksiyon kokteyl tepki yeteneğini kendi ile ilişkili değil. İlginçtir, bu indüksiyon kokteyl ve deneysel koşullar kullanarak, beyaz ve bej/kahverengi hücreleri bir karışımı elde edilen boyutu ve sayıda hücre içi lipid damlacıkları ve moleküler işaretleyicilerin görünümünü ifade tarafından belirlendiği gibi. Bu basit ve maliyet-etkin indüksiyon Protokolü (bej beyaz vs. ) Yanıtlayıcı hücrelerinin fenotip kantitatif değerlendirilmesi ile birlikte potansiyel olarak farklılaştırılmış bej dengesini değiştirebilir ajanlar bir tarama için izin verir : beyaz adiposit.
Bu yöntem aynı zamanda insan yağ dokusu içinde vasküler endotel ataları adipogenesis temel mekanizmaları anlamak için translasyonel bir yaklaşım sağlar. Bu özel yalıtım/farklılaşma tekniği kullanarak, müfettişler çeşitli yolları yalın ve obez insanlarda çeşitli yağ depoları dan adipogenesis vasküler endotel hücre alt grubunu içinde sorumlu sorguya çekebiliriz.

<table><tbody><tr><td> <güçlü>Büyük Ekipman </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Biyogüvenlik Kabini </td><td> Nuaire </td><td> nu-425-400 </td><td></td></tr><tr><td> Hücre Kültürü İnkübatörü </td><td> Thermo-Fisher Scientific </td><td> 800 DH </td><td></td></tr><tr><td> Su Banyosu </td><td> Forma Scientific </td><td> 2568 </td><td> Karşılıklı Çalkalayıcı </td></tr><tr><td> RT-PCR Makinesi </td><td> BIO-RAD </td><td> CFX96-C1000 </td><td></td></tr><tr><td> Elektroforez Kutusu </td><td> BIO-RAD </td><td> Mini PROTEAN 3 Hücreli </td><td></td></tr><tr><td> Transblot Kutusu </td><td> BIO-RAD </td><td> Mini Trans-Blot Hücresi </td><td></td></tr><tr><td> Elektroforez Güç Kaynağı </td><td> BIO-RAD </td><td> PowerPac Basic </td><td></td></tr><tr><td> ELISA Okuyucu </td><td> Moleküler Cihazlar </td><td> SpectraMax M5 </td><td></td></tr><tr><td> Blot Reader </td><td> LI-COR </td><td> Odyssey </td><td> Yakın Kızılötesi </td></tr><tr><td> Soğutmalı Santrifüj </td><td> Eppendorf </td><td> 5810 R </td><td></td></tr><tr><td> Masa Üstü Santrifüj </td><td> Eppendorf </td><td> MiniSpin Plus </td><td></td></tr><tr><td> Floresan Mikroskop</p</td><td> > Olympus </td><td> BX50 </td><td></td></tr><tr><td> Ters Mikroskop </td><td> Nikon </td><td> TMS </td><td></td></tr><tr><td> KRBSS Tampon </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Research Products International</s> </td><td> H75030 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum bikarbonat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 792519 </td><td></td></tr><tr><td> Kalsiyum klorür dihidrat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C7902 </td><td></td></tr><tr><td> Potasyum fosfat monobazik </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P5655 </td><td></td></tr><tr><td> Magnezyum sülfat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M2643 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum klorür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 746398 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum fosfat monobazik monohidrat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S9638 </td><td></td></tr><tr><td> Potasyum klorür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P9333 </td><td></td></tr><tr><td> Glikoz </td><td> Acros Organics </td><td> 410950010 </td><td></td></tr><tr><td> Adenozin </td><td> Acros Organics </td><td> 164040250 </td><td></td></tr><tr><td> Sığır Serum Albümini </td><td> GE Healthcare Bio-Sciences </td><td> SH30574.02 </td><td></td></tr><tr><td> Penisilin / Streptomisin </td><td> Thermo-Fisher Scientific </td><td> 15070063 </td><td></td></tr><tr><td> Doku Sindirimi </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20 mL Şırınga </td><td> Global Medical< > </td><td> 67-2020</s> </td><td></td></tr><tr><td> Naylon Mesh, 250 ve mikro; m </td><td> Sefar </td><td> 03-250/50 </td><td></td></tr><tr><td> Pipetleme İğneleri </td><td> Popper </td><td> 7934 </td><td></td></tr><tr><td> İnce Makas<td> > Güzel Bilim Aletleri</s> </td><td> 14058-11 </td><td></td></tr><tr><td> Doku Forseps </td><td> George Tiemann & Co </td><td> 160 </td><td></td></tr><tr><td> Kollajenaz, Tip I </td><td> Worthington Biyokimyasal </td><td> LS004196 </td><td></td></tr><tr><td> Petri Kapları, 100 mm </td><td> ABD Bilimsel < </td><td> > 5666-4160 </td><td> TC Tedavi Edilmiş </td></tr><tr><td> Eppendorf Tüpleri, 1,5 mL </td><td> USA Scientific </td><td> 1615-5500 </td><td></td></tr><tr><td> Konik Tüpler, 15 mL </td><td> Nest Scientific </td><td> 601052 </td><td></td></tr><tr><td> Konik Tüpler, 50 mL </td><td> Nalgene </td><td> 3119-0050 </td><td></td></tr><tr><td> Sintilasyon Şişeleri </td><td> Kimble </td><td> 74505-20 </td><td> Doku Doğrama </td></tr><tr><td> Hücre İzolasyonu </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cellometer </td><td> Nexcelom </td><td> Auto 2000 </td><td></td></tr><tr><td> Cellometer Slides </td><td> Nexcelom </td><td> CHT4-SD100-002 </td><td></td></tr><tr><td> Cellometer Canlılık Boyası </td><td> Nexcelom </td><td> CS2-0106-5mL </td><td> Akridin Portakal/Propidin yum İyot </td></tr><tr><td> Anti-CD34 Manyetik Boncuklar </td><td> StemCell Teknolojileri </td><td> 18056 </td><td> Kit </td></tr><tr><td> EasySep Magnet </td><td> StemCell Technologies </td><td> 18000 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-CD31 Plastik Boncuklar </td><td> pluriSelect USA </td><td> 19-03100-10 </td><td></td></tr><tr><td> pluriSelect 10x Yıkama Tamponu </td><td> pluriSelect USA </td><td> 60-00080-10 </td><td></td></tr><tr><td> pluriSelect Bağlantı Halkası </td><td> pluriSelect USA </td><td> 41-50000-03 </td><td></td></tr><tr><td> pluriSelect Ayırma Arabelleği </td><td> pluriSelect USA </td><td> 60-00046-12 </td><td></td></tr><tr><td> pluriSelect Kuluçka Tamponu </td><td> pluriSelect USA </td><td> 60-00060-12 </td><td></td></tr><tr><td> pluriSelect S Hücre Süzgeci </td><td> pluriSelect USA </td><td> 43-50030-03 </td><td></td></tr><tr><td> Cell Culture </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 oyuklu Plakalar </td><td> USA Scientific </td><td> CC7682-7506 </td><td> TC Tedavi Edilmiş </td></tr><tr><td> 4- iyi odacıklı slaytlar </td><td> Corning Life Sciences </td><td> 354559 </td><td> Fibronektin kaplı </td></tr><tr><td> 4 kuyulu odacıklı slaytlar </td><td> Thermo-Fisher Scientific </td><td> 154526PK </td><td> Kaplamasız cam </td></tr><tr><td> İnsan Yağ Mikrovasküler Endotel Hücreleri (HAMVEC) </td><td> Sciencell Araştırma Laboratuvarları </td><td> 7200 </td><td> Birincil hücre hattı </td></tr><tr><td> Endotel Hücre Ortamı (ECM) </td><td> ScienCell Araştırma Laboratuvarları </td><td> 1001 </td><td> Komple Kit </td></tr><tr><td> DMEM/F12 Bazal Ortam </td><td> Thermo-Fisher Scientific </td><td> 11320082 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal Sığır Serumu (FBS) </td><td> Rocky Mountain Biologicals </td><td> FBS-BBT </td><td></td></tr><tr><td> İnsülin </td><td> Lilly<td> > U-100 </td><td> Humalog </td></tr><tr><td> Rosiglitazone </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R2408 </td><td></td></tr><tr><td> Cell Analysis </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Oil Red O Dye </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> O0625 </td><td> İzopropanol içinde hazırlanmıştır </td></tr><tr><td> 96 kuyulu plakalar </td><td> USA Scientific </td><td> 1837-9600 </td><td></td></tr><tr><td> 96 kuyu PCR plakaları </td><td> Genesee Scientific </td><td> 24-300 </td><td></td></tr><tr><td> RNA Ekstraksiyonu </td><td> Zymo Research<td> > R2072<td> > Kit </td></tr><tr><td> cDNA Sentezi </td><td> BIO-RAD </td><td> 1708841 </td><td> Supermix </td></tr><tr><td> JumpStart PCR Polimeraz </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D9307-250UN </td><td> PCR <Tamponu ile sıcak başlatma> </td></tr><tr><td> Magnezyum Klorür Çözeltisi </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M8787-5ML </td><td> PCR reaksiyonunda 3 mM final </td></tr><tr><td> dNTPs </td><td> Promega </td><td> U1515 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan AdipoQ </td><td> Thermo-Fisher Scientific </td><td> Hs00605917_m1 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan CIDEA </td><td> Thermo-Fisher Scientific</s> </td><td> Hs00154455_m1</s> </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan RPL27 </td><td> Thermo-Fisher Scientific </td><td> Hs03044961_g1 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan UCP1</s> </td><td> Thermo-Fisher Scientific </td><td> Hs00222453_m1 </td><td></td></tr><tr><td> BCA Testi </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> QPBCA-1KT </td><td> Kit </td></tr><tr><td> Bis-akrilamid </td><td> BIO-RAD </td><td> 1610146 </td><td> 40% stok solüsyonu </td></tr><tr><td> Amonyum Persülfat </td><td> BIO-RAD </td><td> 1610700 </td><td></td></tr><tr><td> TEMED </td><td> BIO-RAD </td><td> 1610800</s> </td><td></td></tr><tr><td> Tris </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T1503 </td><td></td></tr><tr><td> Glisin </td><td> BIO-RAD </td><td> 1610718 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum Dodecal Sülfat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> L3771 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Fisher Scientific </td><td> S311-100 </td><td></td></tr><tr><td> Bromofenol Mavisi </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B8026 </td><td></td></tr><tr><td> Blot Membran </td><td> EMD Millipore </td><td> IPFL00010 </td><td></td></tr><tr><td> Metanol </td><td> Fisher Scientific</s> </td><td> A452-SK4 </td><td></td></tr><tr><td> Odyssey Engelleme Tamponu, Tris</s> </td><td> LI-COR </td><td> 927-50000 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-AKT antikoru </td><td> Hücre Sinyal Teknolojisi </td><td> 2920S </td><td> Fare monoklonal </td></tr><tr><td> Anti-pAKT antikoru </td><td> Hücre Sinyal Teknolojisi </td><td> 9271S < </td><td> p>Tavşan poliklonal </td></tr><tr><td> Anti-UCP1 antikoru </td><td> Abcam </td><td> ab10983 </td><td> Tavşan poliklonal </td></tr><tr><td> Anti-Fare IgG antikoru </td><td> LI-COR </td><td> 926-68070 </td><td> Keçi Poliklonal, IRDye 680RD </td></tr><tr><td> Anti-Tavşan IgG antikoru </td><td> LI-COR </td><td> 926-32211 </td><td> 2>< </td></tr> p <tr><td> > <Tavşan Karşıtı IgG antikoru>< </td><td> Jackson ImmunoResearch< > </td><td> 111-025-003 </td><td> Keçi Poliklonal, TRITC </td></tr><tr><td> Fosfat Tampon Salin </td><td> Thermo-Fisher Scientific </td><td> 10010049 </td><td></td></tr><tr><td> 37% Formaldehit Çözeltisi </td><td> Elektron Mikroskobu Bilimleri </td><td> 15686 </td><td> hücre fiksasyonu için 4% çözelti </td></tr><tr><td> Normal Keçi Serumu </td><td> Vektör Laboratuvarları </td><td> S-1000 </td><td> 10% engelleme çözümü </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> X-100 </td><td> 0. % 1 geçirgenlik çözeltisi </td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Thermo-Fisher Scientific< > </td><td> D1306 </td><td></td></tr><tr><td> Calcein </td><td> Thermo-Fisher Scientific </td><td> 65-0853-39 </td><td> Hücre floresan görselleştirme </td></tr><tr><td> Matrigel Temel Membran Matrisi </td><td> Corning Life Sciences </td><td> 356231 </td><td> Büyüme faktörü azaltıldı </td></tr><tr><td> DiI etiketli Asetillenmiş LDL</s> </td><td> Thermo-Fisher Scientific </td><td> L3484 </td><td></td></tr></tbody></table>

yalıtım, genişleme ve adipojenik indüksiyon cd34 + cd31 + insan omental ve deri altı yağ dokusu endotel hücrelerden

Isolation, Expansion, and Adipogenic Induction of CD34+CD31+ Endothelial Cells from Human Omental and Subcutaneous Adipose Tissue

Obezite bir geniş yağ dokusu adipocyte hipertrofisi ile öncelikle remodeling tarafından eşlik ediyor. Aşırı adipocyte büyüme insülin, yerel hipoksi ve inflamasyon zavallı bir yanıt sonuçlanır. Tarafından ataları gelen fonksiyonel beyaz adiposit farklılaşma uyarıcı, radikal hipertrofisi adipocyte nüfusun önlenebilir ve sonuç olarak, yağ dokusu metabolik sağlık bir azalma ile birlikte geliştirilebilir iltihap. Ayrıca, bej/kahverengi adiposit bir farklılaşma uyararak, toplam vücut enerji harcaması, kilo kaybına kaynaklanan artırılabilir. Bu yaklaşım obezite komorbiditeler tip 2 diyabet ve kardiyovasküler hastalık gibi gelişimini engelleyebilir.
Bu kağıt yalıtım, genişleme ve beyaz ve bej adiposit CD31 ve CD34 işaretleri Co hızlı insan yağ dokusu endotel hücre alt grubunu üzerinden farklılaşma açıklanmaktadır. Yöntem nispeten ucuzdur ve emek yoğun değil. İnsan yağ dokusu erişimi gerektirir ve subkutan depo örnekleme için uygundur. Bu iletişim kuralı için taze yağ doku örnekleri morbid obez bir konu [vücut kitle indeksi (VKİ) > 35] Bariatrik cerrahi prosedürler sırasında toplanır. Stromal vasküler kesir üzerinden sıralı bir immunoseparation kullanarak, yeterince hücre gibi 2-3 g yağ küçük üretilmektedir. Bu hücreler kültür-ebilmek var olmak genişlemek 10-14 gün içinde cryopreserved ve geçiş kadar 5-6 passaging ile onların Adipojenik özellikleri korurlar. Hücreleri bir Adipojenik insan insülin bir arada ve PPARγ agonist-rosiglitazone kullanarak kokteyl ile 14 gün için kabul edilir.
Bu yöntem-ebilmek var olmak kullanılmış yağ endotel hücrelerinde Adipojenik yanıt-e doğru götürmek moleküler mekanizmaları üzerinde kavramı deneyler kanıtı elde etmek için veya Adipojenik artırabilir yeni ilaçlar eleme için yanıt ya beyaz doğru yönetmen ya da bej/kahverengi adipocyte farklılaşma. Küçük subkutan biyopsi kullanarak, Bu metodoloji Yanıtlayıcı olmayan konular için klinik çalışmalarda bej/kahverengi ve beyaz adiposit komorbiditeler ve obezite tedavisi için teşvik etmek amaçlı dışarıda için kullanılabilir.

Bizim iletişim kuralı CD34 + CD31 + insan yağ dokusunun farklı depoları damar hücreleri Adipojenik potansiyelini belirlemek için bir vitro yaklaşım sunmayı amaçlamaktadır. Basitleştirilmiş akış diyagramı Şekil 1A<...

Yağ dokusu vasküler ataları gelen beyaz ve bej adiposit farklılaşma obezite metabolik iyileştirme için potansiyel taşımaktadır. CD34 + CD31 + insan yağı endotel hücre izolasyon ve bir sonraki vitro genişleme ve farklılaşma beyaz ve bej adiposit içine iletişim kurallarını açıklar. Birkaç aşağı akım uygulamaları ele alınmıştır.

Yalıtım, genişleme ve Adipojenik indüksiyon CD34 + CD31 + insan Omental ve deri altı yağ dokusu endotel hücrelerden

Obesity is accompanied by an extensive remodeling of adipose tissue primarily via adipocyte hypertrophy. Extreme adipocyte growth results in a poor ...

Bu yöntem, yağ dokusunun yeniden şekillenmesi sırasında sağlam bir adipojenik yanıtı önleyen temel faktörlerin ve mekanizmaların belirlenmesi gibi obezite alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, küçük miktarlarda doku ile başlayarak insan yağ dokusundan CD34+CD31+endotel hücrelerinin izolasyonuna olanak sağlamasıdır. Bu yöntem için ilk olarak, insan yağ damar sistemindeki adipojenik stimülasyona yanıt veren hücreleri tanımlamak istediğimizde aklımıza geldi.Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik öneme sahiptir, çünkü çoğu zaman taze insan yağ dokusuna sınırlı erişim nedeniyle hücre izolasyon adımlarının uygulanması zordur. Bariatrik cerrahi geçiren insan deneklerden insan omental ve deri altı yağ dokusu toplayın. Doku ekstraksiyonundan hemen sonra, insan omental ve deri altı yağ dokusunu, oda sıcaklığında mililitre başına 50 mikrogram penisilin streptomisin ile Hank'in tamponlu tuz çözeltisini içeren ayrı şişelerde tutun.Doku ekstraksiyonundan sonra numune laboratuvara ulaştığında, %70 etanol çubuklu makas ve cımbız kullanarak dokunun fibrotik ve koterize bölümlerini dikkatlice temizleyin ve çıkarın. Yağ dokusunu tartın ve k

isolation-expansion-adipogenic-induction-cd34-cd31-endothelial-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu videoda, murin periaortik ark yağ dokusundan floresan etiketli nöral krestten türetilmiş adipoz türevli kök hücrelerin (ADSC'ler) izole edilmesi ve kültürlenmesi için bir teknik gösterilmektedir. İzolasyonu takiben, NCADSC'ler tespit edilir, floresanla aktive edilen hücre sıralaması kullanılarak sıralanır ve daha sonra hücre proliferasyonunu teşvik ederek bir plaka üzerinde kültürlenir.

Murin Periaortik Yağ Dokusundan Yağ Kaynaklı Kök Hücrelerin İzole Edilmesi

İnsan adipoz kaynaklı stromal hücrelerindeki transkripsiyonel heterojenlik, hücre yüzeyi belirteçleri ve osteojenik genler kullanılarak tek hücre düzeyinde tanımlanabilir.  Bu çalışmada, kraniyofasiyal iskelet rekonstrüksiyonunu arttırmak için kullanılabilecek artmış osteojenik potansiyele sahip hücre alt popülasyonlarının izolasyonu için akış sitometrisi kullanan bir protokol tanımlanmıştır.

İzolasyon ve İnsan zenginleştirilmesi Gelişmiş Osteogenezi için Stromal Hücreleri adipoz-türevi

Burada Manyetik Aktif Hücre Ayırma (MCS) kullanarak Perivasküler Adipoz Doku (PVAT) Adiposit Progenitör Hücre (APC) popülasyonlarının izolasyonu için bir yöntem rapor. Bu yöntem, floresan-Aktive Hücre Ayırma (FACS) ile karşılaştırıldığında, yağ dokusunun gramı başına APC'nin artan bir izolasyonuna izin verir.

Manyetik Aktive Hücre Ayırma ile İzole Edilen Perivasküler Adipoz Doku&#39;ndan Adiposit Progenitörlerinin Genleşmesi ve Adipogenez İndüksiyonu

Bu protokol, adipojenik ve fibro-inflamatuar stromal hücre alt popülasyonlarını murin karın içi beyaz yağ dokusu (WAT) depolarından floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması veya immünmanyetik boncuk ayırma yoluyla izole etmek için teknik yaklaşımı açıklar.

Murin İntraabdominal Yağ Depolarından Adipojenik ve Fibroinflamatuar Stromal Hücre Alt Popülasyonlarının İzolasyonu

Floresan aktif hücre sıralamasını kullanarak fare epidididimal yağ pedlerinden yüksek oranda uygulanabilir yağ progenitör hücrelerini izole etmek için basit bir yöntem sunuyoruz.

Fare Epidididimal Yağ Dokularından Yağ Progenitör Hücrelerinin Hazırlanması

Bu protokol, fare yağ depolarının diseksiyonu ve endotel hücre popülasyonunu serbest bırakmak ve daha sonra tanımlamak için ilgili arterlerin izolasyonu ve sindirimi için bir yöntemi detaylandırır. Aşağı akış uygulamalarında kullanılan taze izole edilmiş hücreler, vasküler hücre biyolojisinin ve vasküler disfonksiyon mekanizmalarının anlaşılmasını ilerletecektir.

Vasküler Endotel Hücrelerinin Aşağı Akış Uygulamaları için Farklı Yağ Depolarından İzolasyonu ve Tanımlanması

Bu protokol, Sprague Dawley sıçanlarından yağ dokusu kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin (MSC'ler) izole edilmesi ve tanımlanması için bir metodoloji açıklamaktadır.

Sprague Dawley Sıçanlarının Yağ Dokusundan Elde Edilen Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Tanımlanması

Bu protokol, preadipositleri elde etmek ve in vitro adiposit diferansiyasyonunu sağlamak için stromal vasküler fraksiyonun (SVF) murin yağ dokusundan yarı otomatik izolasyonunu tanımlar. Kollajenaz sindirimi için bir doku ayrıştırıcısı kullanmak deneysel varyasyonu azaltır ve tekrarlanabilirliği arttırır.

Bir Doku Dissosiyatör Kullanarak Stromal Vasküler Fraksiyonun Murin Beyaz Yağ Dokusundan Yarı Otomatik İzolasyonu

Burada, perivasküler yağ dokusu fonksiyonunun ve vasküler hücrelerle ilişkisinin incelenmesine izin vererek, fare periaortik yağ dokusundan stromal vasküler fraksiyondan türetilen preadipositlerin izolasyonunu, kültürünü ve adipojenik indüksiyonunu açıklıyoruz.

Fare Periaortik Yağ Dokusundan Stromal Vasküler Fraksiyon Kaynaklı Preadipositlerin İzolasyonu, Kültürü ve Adipojenik İndüksiyonu

Yağ dokusu mükemmel bir mezenkimal kök hücre kaynağıdır. Burada, İsviçre fareleri epididimal yağ dokusundan yağ dokusu türevli kök hücrelerin (ADSC'ler) adım adım ekstraksiyonunu, yetiştirilmesini ve karakterizasyonunu getiriyoruz.

Fare Epididimal Yağ Dokusundan Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu, İn Vitro Genişletme ve Karakterizasyonu

Olgun adipositlerin büyüklüğü ve kırılganlığı, çalışmaları ve izolasyonları için mevcut teknik ve araçları sınırlamıştır. Burada, farklı yağ depoları ve fare diyetleri için kolayca uyarlanabilen olgun murin adipositlerinin izolasyonu için bir protokol açıklanmaktadır.

Yağsız ve Obez Farelerden Primer Murin Adipositlerinin İzolasyonu ve Kültürlenmesi

Keşfedin, insan CD34+CD31+ endotel hücrelerinin yalıtımı ve beyaz/bej adipositlere farklılaşması için kullanılan bu yöntemi. Obezite ve metabolik sağlık araştırmalarında adipojenik yanıtları anlamak için uygundur.

Yalıtım, genişleme ve Adipojenik indüksiyon CD34 + CD31 + insan Omental ve deri altı yağ dokusu endotel hücrelerden

Daha fazla video keşfet