Timus bağlı ve timus bağımsız immünglobulin izotip yanıt Immunosorbent Assay enzim bağlı kullanarak farelerde karakterizasyonu

Bu yöntem, immünoloji alanında antijen bağışıklamasına bağlı bağımlı ve bağımsız antikor yanıtlarının yanı sıra B hücresi aktivasyonu ve germinal merkez reaksiyonları hakkındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, farelerde B hücre aktivasyonu ve humoral bağışıklığın doğrudan karşılaştırılması ile güvenilir ve kantitatif Ig izotip yanıt ölçümleri sağlamasıdır. TNP-polisakkarit bağışıklaması için, fare başına 100 mikrolitre taze hazırlanmış antijen çözeltisi ile bir mililitre insülin şırıngası yükleyin ve alt organ enjeksiyonunu önlemek için iğneyi her hayvanın sağ alt çeyreğine yaklaşık 30 derecelik bir açıyla yerleştirin.

Tüm fareler enjekte edildiğinde, hayvanları belirli bir patojen içermeyen tesiste barınmak üzere kafeslerine geri koyun. Uygun deneysel zaman noktalarında, retro-orbital kanama ile aşılanmış her hayvandan 150 ila 200 mikrolitre kan toplayın ve örneklerin oda sıcaklığında bir ila iki saat boyunca pıhtılaşmasına izin verin. İnkübasyonun sonunda, pıhtılaşmış kan örneklerini santrifüjleyin ve berrak serumu her bir kan pıhtısının üstünden steril bir 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne aktarın.