Name: Fare Orthotopic metastatik meme kanseri Model oluşturma ve fare radikal mastektomi gerçekleştirme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 5 s
Description: Öğrenin meme kanseri ilerlemesini fare ortotopik modeliyle incelemeyi. Biyolüminesans görüntüleme ile tümör yükünü ölçün ve radikal mastektomi sonrası düşük nüks oranlarını keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser bioluminescence görüntüleri paylaşılan kaynak görüntüleme translasyonel paylaşılan kaynak Roswell Park tarafından satın alınan K.T. farelere NIH grant R01CA160688 ve Susan G. Komen Vakfı araştırmacı araştırma başlatılan Hibe (IIR12222224) tarafından desteklenmiştir Büyük Kanser Merkezi Destek Grant (P30CA01656) ve paylaşılan araçları hibe (S10OD016450) tarafından desteklenen kapsamlı Kanser Merkezi.

Roswell Park kapsamlı Kanser Merkezi kurumsal hayvan bakım ve kullanım komite onayı için tüm deneylerin elde edildi.
Not: Dokuz on iki hafta-yaşlı kadın BALB/c farelere elde edilir. 4T1-luc2 hücreler, hızlı luciferase için tasarlanmış BALB/c fare türetilmiş bir fare meme adenokarsinom hücre satırı kullanılır. Bu hücreler Roswell Park Memorial Enstitüsü (RPMI) 1640 orta % 10 fetal Sığır serum (FBS) ile kültürlü.
1. Araçlar hazırlanması
<ol><li>Donmuş jelatinimsi protein karışımı (örneğin, Matrigel) doku kültürü başlıklı buz çözme.</li>
	<li>Temiz ve basınçlı kap iki ameliyat öncesi cerrahi aletleri (mikrodiseksiyon makas, Adson forseps ve bir iğne bağı) ayarlar. Steril 5-0 ipek sütür hazırlamak ve sterilant (seri ameliyatlar planlanan zaman) kuru.</li>
	<li>Bir kesme makinesi kullanarak fare orta göğüs kılları klip ve cerrahi zaman önce kulak delme tarafından fareler kimlik için işaretleyin.</li>
	<li>
Hemen işlem için kullanılan yordam tablo hazırlamak.
	<ol>
<li>Bir emici Ped yaymak ve köşe bandı ile düzeltmek, anestezi burun koni sterilant ve dezenfektan (klorheksidin, iyot ve % 75 etanol) teyp ile çalışma alanının düzeltmek ve fareler işlemi sipariş.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. (10 fareler için) hücreleri hazırlanması
Not: Hücreleri içinde 1 h azalma hücre canlılığı önlemek için yemek ilişkisi kesildi sonra aşılamak. Özellikle, hücre süspansiyon 15 dk içinde jelatinimsi protein karışımı içine canlılığı korumak için çanak hücrelerden ayırma sonra karışık olması.
<ol><li>Kültür 4T1-luc2 hücreleri, luciferase, RPMI 1640 medya % 10 ile ifade bir fare meme adenokarsinom hücre kültürünü FBS oksijen kuluçka 37 ° c % 5 CO2.</li>
	<li>Fosfat tamponlu tuz (PBS) kullanarak bir 10 mL serolojik pipet ile 10 cm çanak yapisan 4T1-luc2 hücrelerde yıkayın. 1 mL % 0.25 tripsin P1000 pipet kullanarak ekleyin ve sonra örnek 5 min için 37 ° C'de kuluçkaya. Daha sonra büyüme ortamının 4 mL ekleyin (RPMI-%1640 10 ile FBS) 5 mL serolojik pipet kullanıp bir doku kültürü başlıklı 15 mL konik tüp hücre süspansiyon aktarmak. 180 x g 5 min için de hücre süspansiyon santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Süpernatant Aspire edin ve PBS 2 mL hücrelerde resuspend; sonra hemasitometre kullanarak hücreleri saymak.</li>
	<li>2 x 106 4T1-luc2 hücreleri 40 μL soğuk PBS (pH 7.4, 4 ° C) doku kültürü mahallede askıya alma.</li>
	<li>40-μL hücre süspansiyon 360 μL 1.5 mL microcentrifuge tüp buz doku kültürü başlıklı jelatinimsi protein karışımı karıştırın. Not: Son 1 x 105/20 μL bölgedir (1:9 PBS: jelatinimsi protein karışımı). Orthotopic modeli için (mastektomi), 1 x 104/20 μL son konsantrasyon ötenazi ölçüt (tümör boyutu > 2 cm) iki hafta içinde ulaşmasını önlemek için da kullanıldı.</li>
</ol>3. kanser hücre aşı
<ol><li>Fareler sakince nefes kadar fareler % 2-4 isoflurane ve 0,2 L/dak oksijen akışı ile anestezi indüksiyon odasında koymak (2-3 dakika).</li>
	<li>Fare kavramak ve 0,05 mg/kg buprenorfin subkutan onun omuz enjekte.</li>
	<li>Bir ayak çimdik tepki eksikliği ile yeterli anestezi onaylayın. Fare burun inhalational anestezi ile % 2-4 isoflurane ve kömür teneke kutu birimine bağlı 2 L/dak oksijen akışını sağlar fare maskesi deliğe yerleştirin.</li>
	<li>Laboratuvar bant kullanarak fare bacaklarda dizginlemek ve derisi klorheksidin, iyot ve % 75 etanol, pamuk temizleme bezi kullanarak kullanarak sterilize.</li>
	<li>Steril mikrodiseksiyon makas, sağ tarafındaki yanında belgili tanımlık kesme cilt ve cilt makası kullanarak göğüs duvarından bağlantısını kesin ve sonra sağdaki #2 ortaya çıkarmak için cilt ters çevir'i Asansör kullanan ön göğüs duvarı ortasında bir 5 mm Cilt kesi yapmak Meme yağ yastığı.</li>
	<li>Dikkatle 20 μL kanser hücre süspansiyon 1 mL insülin 28,5 G iğne ile yara yoluyla direkt görüş altında yağ yastığı içine kullanarak enjekte et. Not: İğne yara, deri gider. Jelatinimsi protein karışımı kuvvetlendirmek için zaman sağlar, çekmeye iğne 5 s rahip için yağ yastığı holding tutun.</li>
	<li>Cilt kesi dikişi tarafından steril 5-0 absorbe olmayan dikiş kullanarak kapatın.</li>
	<li>Ameliyattan sonra hayvanlar temiz kafes için dönmek ve kadar iyileşti ve serbestçe hareket ediyor onları izlemek (sonra ~ 1-2 dk). Bir hayvan sağlıklı cerrahinin 24 h içinde olmak görünmüyorsa buprenorfin (0.2 mg/kg) yönetme.</li>
	<li>Anestezi altında dikiş çıkarın (bkz. Adım 3.1) ameliyattan sonra 7 d.</li>
</ol>4. mastektomi
Not: Mastektomi zamanlaması çok önemlidir. Çok erken yapılırsa akciğer metastazı oluşmaz. Çok geç yapılırsa birincil tümör tam bir onkolojik rezeksiyon zorlayıcı olun büyük kan damarları işgal etmiştir. Böylece, birden fazla zaman puan mastektomi hangi zaman noktası rezeksiyon çok zor olmadan önce metastaz için bekleyen içinde uygun denge üretilen belirlemek için test edildi. 50'den fazla fare deneylerinde bunu yaptıktan sonra bu 8 gün sonra kanser hücre aşılama, mastektomi (veya tümör boyutu 5 mm ulaştığında) ideal olduğunu sunuldu zaman13denge elde etmek için nokta.
<ol><li>Bir fare ile inhale % 2-4 isoflurane anestezi ve buprenorfin enjekte (3.1 ve 3.2 adımlara bakın).</li>
	<li>Fare dizginlemek ve derisi sterilize (bkz. Adım 3.4).</li>
	<li>5 mm Cilt kesi 2 mm sola mikrodiseksiyon makas kullanarak ilk kanser hücre aşı yapılmıştı ameliyat izi üzerinden yapmak. Kök doğru kesi forelimb tümörü, uzatma, ameliyat izi ve tümör gibi aksiler lenf nodu Havzası ile temas lezyon içinde çoğu zaman da dahil olmak üzere deri görünür hiçbir lenf nodu mastect anda bulunmaktadır. Omy13. Aksiler damar zarar vermeyeceğine emin olun.</li>
	<li>Cilt kusurları dikişi tarafından "Y" şeklinde steril 5-0 absorbe olmayan dikiş kullanarak kapatın.</li>
	<li>Aynı adım 3,8, olduğu gibi geri dönüş fare temiz kafes ve monitör kadar ele geçirdiler.</li>
	<li>Anestezi altında dikiş çıkarın (bkz. Adım 3.1) ameliyat sonrası 7 gün.</li>
</ol>5. kollarındaki Quantification birincil tümör (Orthotopic aşılama mastektomi olmadan) veya akciğer metastazı (mastektomi modeli)
Not: Birincil tümör yükünü miktar için bioluminescence x bir hafta sonra orthotopic aşılama günden itibaren ölçülen 2'dir. Akciğer metastazı miktar için bioluminescence x bir hafta sonra mastektomi günden itibaren ölçülen 2'dir.
<ol><li>D-biyoluminesans Dulbecco'nın fosfat tamponlu tuz (DPBS) 15 mg/mL bir doku kültürü Hood son bir konsantrasyon için geçiyoruz. Aliquot ışık korumalı 1.5 mL microcentrifuge içine tüpleri. Mağaza-80 ° C'de seyreltilmiş çözüm Not: 20 g fare için seyreltilmiş D-biyoluminesans 200 µL gereklidir.</li>
	<li>Görüntüleme yazılımını açın ve Başlat' ı tıklatın. Not: Şarj kuplajlı cihaz (CCD) serin için yaklaşık 15 dakika sürer. CCD set sıcaklık ulaştığında, sıcaklık çubuğunun rengini kırmızıdan yeşile değiştirir.</li>
	<li>Fare ile % 2-4 isoflurane görüntüleme önce adanmış indüksiyon odasında anestezi (bkz. Adım 3.1).</li>
	<li>Fareler tartın.</li>
	<li>150 mg/kg D-biyoluminesans intraperitoneally orta Karin 28,5 G iğne kullanarak, noktasında enjekte.</li>
	<li>Her fare burun konisi içinde sırtüstü pozisyonda (yer en fazla beş fareler aynı anda) görüntüleme sistemi ile uygun. Anestezi % 1 - % 3 isoflurane (içinde % 100 oksijen), burun koni ile görüntüleme sırasında korumak.</li>
	<li>
Bir resim her 5 dk 50 dk (veya onaylanmış en yüksek bioluminescence kadar) en yüksek bioluminescence algılamak için yakalama.
	<ol>
<li>Işıma Otomatik, ortamolarak Binning görüş alanı Dolarak olarak seçin.</li>
		<li>Görüntü yakalamak için Al düğmesini tıklatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fareler için onların cage(s) dönün ve onlar (bkz. Adım 3.8) iyileşti kadar onları izlemek.</li>
</ol>6. akciğer metastazı tümör yükünü miktar yanında Ex Vivo düşsel
Not: Akciğer metastazı miktar orthotopic aşılama ile ve ezelî mastektomi modelleri için geçerlidir. Mastektomi modelinde, ex vivo •ardışık görüntü• ya da hayatta kalma gözlem amacına bağlı seçilir. Orthotopic aşı (olmadan mastektomi) modelinde, çoğu zaman birincil tümör boyutu ötenazi ölçüt (> 2 cm) yaklaşık 21 gün sonra aşı üretmek.
<ol><li>Akciğer metastatik lezyonlar ex vivo görüntüleme kanser hücre aşı tarafından sonra 21 gün ölçmek.</li>
	<li>Fare ile % 2-4 isoflurane adanmış indüksiyon odasında anestezi (bkz. Adım 3.1).</li>
	<li>Fareler tartın.</li>
	<li>İntraperitoneally 150 mg/kg D-biyoluminesans enjekte (bkz. Adım 5.6).</li>
	<li>Servikal yerinden çıkması, 15 dk sonra enjeksiyon tarafından fareler ötenazi.</li>
	<li>Karın eğri Mayo makas kullanarak orta karında cilt ve karın zarını keserek açın. Belgili tanımlık kesme sağa ve sola genişletir. Diyafram görüntülenir kadar karaciğerinden forseps ile çekin; sonra diyafram kesti.</li>
	<li>Eğri Mayo makas kullanılarak üzerinden ikili kaburga caudad kesme (12 kaburga) için cephalad (akciğer anterior toraks duvarı lanetleme tarafından ortaya çıkarmak için 1 kaburga).</li>
	<li>Bir kordon forseps kullanarak akciğerler kaldırarak için omurga, akciğer bağlanma gibi görünüyor torasik özofagus tanımlamak ve sonra yemek borusu mikrodiseksiyon makas kullanarak kesti.</li>
	<li>Asansör iki taraflı akciğer ve forseps (aşağı, yönünde cephalad için caudad çekerek traksiyon uygulamak) kullanarak ve sonra nefes borusu ve büyük gemiler akciğer apex kesilmiş kalp cephalad, mikrodiseksiyon makas kullanarak. Not: Bu akciğer ve kalp vücuttan yalıtım sağlar.</li>
	<li>Kalp akciğer mikrodiseksiyon makas kullanarak kaldırın.</li>
	<li>Akciğerleri bir 10 cm Petri kabına koyun.</li>
	<li>Bioluminescence görüntü yakalama (bkz. Adım 5.7.1 ve 5.7.2) 5 dk sonra ötenazi (20 dk sonra biyoluminesans enjeksiyon).</li>
</ol>

<ol><li>Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+exploring+the+pharmacokinetics+of+breast+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Metabolism+%26+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).</li>
<li>Schuh, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trials%2C+tribulations%2C+and+trends+in+tumor+modeling+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Trials, tribulations, and trends in tumor modeling in mice.</a> Toxicologic Pathology. 32, 53-66 (2004).</li>
<li>Katsuta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+breast+cancer+model+for+preclinical+immunotherapy+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Modified breast cancer model for preclinical immunotherapy studies.</a> Journal of Surgical Research. 204 (2), 467-474 (2016).</li>
<li>Sidell, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composite+mandibulectomy%3A+a+novel+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngology-Head+and+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Composite mandibulectomy: a novel animal model.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 146 (6), 932-937 (2012).</li>
<li>Ewens, A., Mihich, E., Ehrke, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distant+metastasis+from+subcutaneously+grown+E0771+medullary+breast+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Research%22%5BJournal%5D)">Distant metastasis from subcutaneously grown E0771 medullary breast adenocarcinoma.</a> Anticancer Research. 25, 3905-3915 (2005).</li>
<li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e51967(2015).</li>
<li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+syngeneic+orthotopic+murine+model+of+human+breast+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research+and+Treatment%22%5BJournal%5D)">An improved syngeneic orthotopic murine model of human breast cancer progression.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 147 (3), 501-512 (2014).</li>
<li>Bertozzi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence%2C+risk+factors%2C+and+prognosis+of+peritoneal+metastasis+from+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22SpringerPlus%22%5BJournal%5D)">Prevalence, risk factors, and prognosis of peritoneal metastasis from breast cancer.</a> SpringerPlus. 4, 688(2015).</li>
<li>Kennecke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+behavior+of+breast+cancer+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Metastatic behavior of breast cancer subtypes.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (20), 3271-3277 (2010).</li>
<li>Valero, M. G., Golshan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+the+Axilla+in+Early+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+and+Research%22%5BJournal%5D)">Management of the Axilla in Early Breast Cancer.</a> Cancer Treatment and Research. 173, 39-52 (2018).</li>
<li>National Comprehensive Cancer Network. Breast Cancer, NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf ">https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf </a> (2018).</li>
<li>Versteeg, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+tissue+factor+signaling+suppresses+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Inhibition of tissue factor signaling suppresses tumor growth.</a> Blood. 111 (1), 190-199 (2008).</li>
<li>Katsuta, E., Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+breast+cancer+mastectomy+model+that+predicts+patient+outcomes+for+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Murine breast cancer mastectomy model that predicts patient outcomes for drug development.</a> Journal of Surgical Research. 219, 310-318 (2017).</li>
<li>Veenhof, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+stress+response+and+postoperative+immune+function+after+laparoscopy+or+open+surgery+with+fast+track+or+standard+perioperative+care%3A+a+randomized+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical stress response and postoperative immune function after laparoscopy or open surgery with fast track or standard perioperative care: a randomized trial.</a> Annals of Surgery. 255 (2), 216-221 (2012).</li>
<li>Wei, S., Siegal, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surviving+at+a+distant+site%3A+The+organotropism+of+metastatic+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Diagnostic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Surviving at a distant site: The organotropism of metastatic breast cancer.</a> Seminars in Diagnostic Pathology. 35 (2), 108-111 (2018).</li>
<li>Nagahashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphingosine-1-phosphate+produced+by+sphingosine+kinase+1+promotes+breast+cancer+progression+by+stimulating+angiogenesis+and+lymphangiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Sphingosine-1-phosphate produced by sphingosine kinase 1 promotes breast cancer progression by stimulating angiogenesis and lymphangiogenesis.</a> Cancer Research. 72 (3), 726-735 (2012).</li>
<li>Jones, C., Lancaster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+Operative+Technique+for+Mastectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Evolution of Operative Technique for Mastectomy.</a> Surgical Clinics of North America. 98 (4), 835-844 (2018).</li>
<li>Rashid, O. M., Maurente, D., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Systematic+Approach+to+Preclinical+Trials+in+Metastatic+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Chemotherapy+%28Los+Angeles%29%22%5BJournal%5D)">A Systematic Approach to Preclinical Trials in Metastatic Breast Cancer.</a> Chemotherapy (Los Angeles). 5 (3), (2016).</li>
<li>Ramaswamy, S., Ross, K. N., Lander, E. S., Golub, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+signature+of+metastasis+in+primary+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">A molecular signature of metastasis in primary solid tumors.</a> Nature Genetics. 33 (1), 49-54 (2003).</li>
<li>Aoki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+long-term+obstructive+jaundice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Murine model of long-term obstructive jaundice.</a> Journal of Surgical Research. 206 (1), 118-125 (2016).</li>
<li>Terracina, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+metastatic+murine+colon+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Development of a metastatic murine colon cancer model.</a> Journal of Surgical Research. 199 (1), 106-114 (2015).</li>
<li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Disease%22%5BJournal%5D)">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model?</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li>
<li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resection+of+the+primary+tumor+improves+survival+in+metastatic+breast+cancer+by+reducing+overall+tumor+burden%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Resection of the primary tumor improves survival in metastatic breast cancer by reducing overall tumor burden.</a> Surgery. 153 (6), 771-778 (2013).</li>
<li>Troy, T., Jekic-McMullen, D., Sambucetti, L., Rice, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+comparison+of+the+sensitivity+of+detection+of+fluorescent+and+bioluminescent+reporters+in+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Quantitative comparison of the sensitivity of detection of fluorescent and bioluminescent reporters in animal models.</a> Molecular Imaging. 3 (1), 9-23 (2004).</li>
<li>Adams, S. T. Jr, Miller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+D-luciferin%3A+expanding+the+scope+of+bioluminescence+imaging+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Beyond D-luciferin: expanding the scope of bioluminescence imaging in vivo.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 21, 112-120 (2014).</li>
<li>Close, D. M., Xu, T., Sayler, G. S., Ripp, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescent+imaging+%28BLI%29%3A+noninvasive+visualization+and+interrogation+of+biological+processes+in+living+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescent imaging (BLI): noninvasive visualization and interrogation of biological processes in living animals.</a> Sensors (Basel). 11 (1), 180-206 (2011).</li>
<li>Chen, H., Thorne, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+Methods+for+Molecular+In+Vivo+Optical+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cytometry%22%5BJournal%5D)">Practical Methods for Molecular In Vivo Optical Imaging.</a> Current Protocols in Cytometry. 59 (1224), (2012).</li>
<li>Wurdinger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+secreted+luciferase+for+ex+vivo+monitoring+of+in+vivo+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">A secreted luciferase for ex vivo monitoring of in vivo processes.</a> Nature Methods. 5 (2), 171-173 (2008).</li>
<li>Aoki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+sphingosine+kinase+1+worsens+pancreatic+cancer+peritoneal+carcinomatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Host sphingosine kinase 1 worsens pancreatic cancer peritoneal carcinomatosis.</a> Journal of Surgical Research. 205 (2), 510-517 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Son on yıldır ki meme kanser modelleri3,7,13,16,20,21de dahil olmak üzere birden çok fare kanser modelleri kurulması. Daha önce biz meme kanseri hücre orthotopic aşılama direkt görüş altında meme bezi doku haline daha büyük bir tümör hücreleri bir cerrahi kesi7 olmadan meme çevresinde enjekte için karşılaştı...

Hayvan modelleri kanser araştırmalarında önemli bir rol oynar. Bir hipotez tüp bebek kanıtlanmış zaman içinde vivo klinik önemini değerlendirmek için sınanmalıdır. Kanser ilerlemesi ve metastaz genellikle daha iyi tüp bebek modelleri ile karşılaştırıldığında hayvan modelleri tarafından yakalanır ve ilaç geliştirme1,2için preklinik bir çalışma olarak bir hayvan modelinde yeni bir ilaç test etmek esastır. Ancak, teknik ayrıntılarını hayvan deneyleri de zorlu model başarılı çoğaltmak için yapım o yayınlanan makalelerinde açıklanan değildir. Gerçekten de, bu orthotopic aşılama ve mastektomi modeller kuran yazarlar deneme yanılma uzun ve titiz süreçler gitti. Sonra kanser hücre aşılama başarısını belirlemek için önemli faktörlerden biri ve verimlilik bir hayvan tumorigenesis başarı oranını3çalışma. Hücre ve hücre aşılamak için aşı site ve fareler suşu sayısı tüm önemli faktörlerdir. İyi için tüp bebek teknikleri ile karşılaştırıldığında bireysel farklılıklar nedeniyle hayvan deneyleri sonuçlarına büyük varyasyon vardır bilinmektedir. Bu nedenle, köklü bir model ile standart bir teknikle istikrarlı sonuçları, hayvan deneyleri verimliliğini artırmak ve yanıltıcı sonuçlar önlemek için elde etmek önemlidir.
Bu İnceleme köklü teknikleri4 meme kanseri orthotopic ve mastektomi fare modelleri oluşturmak için sağlar. 1) insan meme kanseri ilerleme ve tedavi kursları taklit etmek için 2) daha fazla verimlilik ve diğer meme kanseri aşısı veya mastektomi teknikleri ile karşılaştırıldığında daha yüksek başarı oranları ile içinde vivo deneyler için bu yöntemlerin amacı vardır. Orthotopic kanser hücre aşı insan meme kanseri ilerleme, taklit etmek için biz #2 meme yağ yastığı göğüs içinde yer alan bir aşı site olarak seçin. Çalışmaların çoğunda, meme kanseri hücrelerinin subkutan aşılanmış5. Bu teknik ameliyat gerektirmez ve böylece, basit ve anlaşılır olmuştur. Ancak, subkutan microenvironment oldukça farklı kanser ilerlemesi ve hatta moleküler profilleri6,7ile sonuçlanır meme bezi microenvironment farklıdır. Bazı çalışmalarda #4 meme bezi, karın içinde bulunan bir aşı Makinası6olarak kullanın. #4 meme dokuları karın içinde yer alır, ancak, periton carcinomatosis7metastatik meme kanseri8az % 10 ile oluşur, en yaygın metastatik deseni vardır. #2 meme bezi burada anlatılan tekniği ile üretilen meme kanseri en sık görülen meme kanseri metastatik siteleri9biridir akciğer için metastaz.
Bu teknik ile aynı zamanda diğer meme kanseri aşılama teknikleri ile karşılaştırıldığında çok az tümör boyutu değişkenliği ile daha yüksek bir tumorigenesis oranı elde etmek için hedeftir. Bunu yapmak için kanser hücrelerinin bir jelatinimsi protein karışımı askıya bir medyan ön göğüs duvarı kesi yoluyla direkt görüş altında aşı. Bu teknik ile tümör boyutu ve şekli daha önce bildirilen3,7olarak subkutan veya cerrahi olmayan enjeksiyon kıyasla daha az değişkenlik yüksek tumorigenesis oranı üretir.
Biz de hangi orthotopic meme tümör çevre dokular ve aksiler lenf düğümleri ile rezeke bir fare radikal mastektomi teknik tanıtmak. Klinik, standart meme kanserli hastalarda olmadan uzak metastaz hastalık için tedavi mastektomi10,11ayardır. Daha önce bir mastektomi, aksiler lenf nodu metastazı görüntüleme ve sentinel lenf nodu biyopsisi tarafından incelenmiştir. Hasta aksiler lenf nodu metastazı kanıtı yok ise, bir toplam veya kısmi mastektomi aksiler lenf nodu rezeksiyon atlandı, o zaman kabul edilir. Toplam mastektomi meme kanseri tüm meme dokusu ile en bloc çıkarabileceğim için bir tekniktir kısmi mastektomi meme kanseri normal meme dokusu sadece, çevresindeki kenar boşluğu ile dalağı ise böylece kalan normal meme dokusunun korunması hasta. Ancak, sonra kısmi bir mastektomi normal meme dokusu kalan korumak hastalar postoperatif radyoterapi yerel yineleme10önlemek için gerektirir. Radikal mastektomi meme kanseri ile tüm normal kaldıran taahhüt aksiler lenf nodu metastazı olan hastalarda meme dokusu ve aksiller lenf düğümleri ve doku tr blok10,11işgal. Fare modelinde, gözetleme aksiler lenf nodu metastazı ve/veya post operatif radyasyon için uygun ya da mümkün değil. Böylece, biz yerel veya aksiler lenf nodu metastazı önlemek için radikal mastektomi tekniği kullanır.
Kanser hücre aşılama yolu ile kuyruk damar en yaygın akciğer metastazı fare modeli12, sözde "deneysel metastaz" var. Bu model oluşturmak kolaydır ve ameliyat gerektirmez; Ancak, farklı metastatik hastalık davranışlara neden olabilir insan meme kanseri ilerleme taklit değil. Metastaz kez Mastektomi sonra oluştuğu insan meme kanseri tedavi sahası taklit etmek için birincil tümör orthotopic kanser hücre aşı sonra kaldırılır. Bu teknik olarak daha önce raporlanmış13, basit Tümör rezeksiyonu kıyasla daha az yerel yineleme üretir ve Roman therapeutics, preklinik çalışmaları ve metastatik meme kanseri araştırma çalışmaları için yararlıdır. Burada açıklanan teknikler çoğu meme kanseri orthotopic modeli deneyler için geçerlidir. Ancak, jelatinimsi protein karışımı microenvironment etkileyebilir ve cerrahi stres/bağışıklık yanıtı14etkileyebilir dikkate almak önemlidir. Bu nedenle, microenvironment ve/veya stres/bağışıklık yanıtı eğitim müfettişler faktörler semptomlarıdır potansiyelini bilmelidir.

<table><tbody><tr><td>Mikro Diseksiyon Makası</td><td>Roboz</td><td>RS-5983</td><td>Kanser hücresi aşılaması ve masstektomi için</td></tr><tr><td>Adson Forseps</td><td>Roboz</td><td>RS-5233</td><td>Kanser hücresi aşılaması ve masstektomi için</td></tr><tr><td>İğne Tutucu</td><td>Roboz</td><td>RS-7830</td><td>Kanser hücresi inokülasyonu ve masstektomi için</td></tr><tr><td>Mayo</td><td>Roboz</td><td>RS-6873</td><td>Ex vivo</td></tr><tr><td>5-0 ipek sütürler</td> <td>içinLook</td><td>774B</td><td>Kanser hücresi aşılaması ve masstektomi için</td></tr><tr><td>Kuru sterilant (Germinator 500)</td><td>Braintree Scientific</td><td>GER 5287-120V</td><td>Kanser hücresi inokülasyonu ve masstektomi için</td></tr><tr><td>Clipper</td><td>Wahl</td><td>9908-717</td><td>Kanser hücresi inokülasyonu ve masstektomi için</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>Kanser hücresi aşılaması için</td></tr><tr><td>D-Luciferin, potasyum tuzu</td><td>GOLD-Bio</td><td>LUCK-1K</td><td>Biyolüminesans miktar tayini için</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Insitute 1640</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td>Hücre kültürü için</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serub</td><td>Gibco</td><td>10437028</td><td>Hücre kültürü için</td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (%0.25)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Hücre kültürü için</td></tr></tbody></table>

fare orthotopic metastatik meme kanseri model oluşturma ve fare radikal mastektomi gerçekleştirme

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

Meme kanseri ilerleme değerlendirmek için in vivo fare modelleri preklinik ilaç gelişmeler de dahil olmak üzere kanser araştırmaları için gereklidir. Ancak, pratik ve teknik ayrıntılarını çoğunluk sık, bu nedenle, özellikle cerrahi teknikleri gerektirdiğinde modelleri çoğaltmak zor hale getiren yayımlanan el yazmaları içinde göz ardı edilir. Bir tümör aşikar olmadığında bile bioluminescence teknoloji kanser hücrelerinin küçük miktarlarda değerlendirme için sağlar. Kanser hücrelerinin luciferase ifade kullanmak, biz bir meme kanseri orthotopic aşılama tekniği yüksek tumorigenesis oranı ile kurmak. Akciğer metastazı bir ex vivo tekniği kullanılarak değerlendirilir. Biz, o zaman, mastektomi manken metastatik tümör yükünü değerlendirmek için düşük yerel yineleme oranıyla kurmak. Burada, biz, ayrıntılı olarak orthotopic implantasyon ve mastektomi meme kanseri ile bir yüksek tumorigenesis oranı ve düşük yerel nüks oranları, cerrahi teknikleri sırasıyla, meme kanseri modeli verimliliği artırmak için açıklar.

Orthotopic modeli amacı insan kanseri ilerleme (yani, ardından lenf nodu metastazı ve sonra uzak akciğer metastazı birincil tümör büyümesini) taklit etmektir15. Kanser hücre aşı sonra bioluminescence düzenli olarak sayılabilir (2-3 kez / hafta) (Şekil 1A). Akciğerlerde bioluminescence daha derin ve birincil lezyon daha küçük. Bioluminescence esas olarak canlı fareler3 (Şekil 1B</str...

Biz bir fare orthotopic meme kanseri modeli ve radikal mastektomi modeli insan meme kanseri ilerleme taklit etmek için tümör yükünü ölçmek için bioluminescence teknolojisi ile tanıtmak.

Fare Orthotopic metastatik meme kanseri Model oluşturma ve fare radikal mastektomi gerçekleştirme

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...

Bu yöntem, bir fare modelinde insan meme kanseri ilerleme ve tedavi taklit hakkında meme kanseri alanında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir. Bu fare meme kanseri modelinin en büyük avantajı ortotopik implantasyon sonrası yüksek tümörigenez oranına ve mastektomi sonrası düşük lokal nüks oranına sahip olmasıdır. Anestezili dişi farede ayak parmak kıskacına yanıt eksikliğini onaylayarak ve hayvanın uzuvlarını cerrahi tahtaya bantlayarak başlayın.Steril pamuk bezleri nin kullanılması cerrahi bölgeyi klorheksidin, iyot ve %75 etanol ile sterilize eder. Ve ön göğüs duvarının ortasında beş milimetrelik deri kesiği yapın. Sonraki kesi bitişik cildin sağ tarafını kaldırın ve göğüs duvarından cilt ayırmak için steril mikrodiseksiyon makası kullanın.Doğru iki numaralı meme yağ yastığıortaya çıkarmak için cilt ters ve dikkatle yağ yastığı içine yara yoluyla kanser hücresi süspansiyon 20 mikrolitre enjekte etmek için 28,5-gauge iğne ile donatılmış bir mililitrelik insülin şırınga kullanın. Jelatinimsi kanser hücresi protein karışımının iğneyi çıkarmadan önce katılaşmasını sağlamak ve kesiyi steril 5-0 emilemez dikişlerle kapatmak için iğneyi yağ yastığının içinde beş saniye tutun. Sonra tam recumbency kadar izleme ile temiz bir kafese hayvan yerleştirin.Kanser aşısı sekiz gün sonra mastektomi gerçekleştirmek için sadece gösterildiği gibi cerrahi için fare hazırlamak, ve kanser hücresi inoülasyonu cerrahi yara iki milimetre solunda beş milimetrelik deri kesi yapmak. Tümörü çıkarmak için ön ekstremite köküne doğru kesi genişletin, ve deri, cerrahi yara dahil, ve tümör ile temas lezyon, ve genellikle görünür lenf düğümleri mastektomi sırasında mevcut aksiller lenf düğümü havzası. Daha sonra y.şeklinde steril 5-0 emilir dikişler ile cilt kusurlarını kapatın ve tam görevde kalakadar izleyerek hayvanı kafesine geri döndürün.İnogülasyondan 21 gün sonra akciğer metastazı niceliği için ötanaziden 15 dakika önce d-Luciferin IP kilogramı başına 150 miligram enjekte edin. Ve orta karın deri ve periton açmak için kavisli Mayo makas kullanın. Diyafram görüntülenebilir kadar karaciğer aşağı basın, ve diyafram ve bilateral kaburga caudad cephalad kesti.Akciğerleri ortaya çıkarmak için ön toraks duvarını çevirin ve akciğerleri kaldırarak akciğerleri omurilikle bağlayan bir kordona benzeyen torasik özofagusu tanımlayın. Mikrodiseksiyon makas ile yemek borusu kesin ve kaudad doğru ikili akciğerler ve kalp çekmek için forceps kullanın. Sonra sefalad de akciğer apeks için trakea ve büyük damarları kesmek ve biyolüminesans görüntüleme için 10 santimetre Petri çanak içine akciğerler yerleştirin.Akciğer dokusundan kalp kaldırmak için makas kullanın. Meme yağ yastığı kanser hücresi aşılama yaklaşık sekiz gün sonra başlayan akciğerlerde biyolüminesans daha derin ve canlı farelerde birincil tümör yükünü yansıtan primer lezyon daha küçüktür. Kaliperlerle tümör boyutunun ölçülmesi, tümör hacminin yerinde tahmin insasına olanak sağlar.Bu mastektomi modeli aynı zamanda hayvanları ötenazi ye gerek kalmadan seri metastatik tümör yükünün izlenmesine olanak sağlar. Akciğer metastazlarının tümör yükü de ex vivo görüntüleme ile ölçülebilir, ancak sınırlama farelerin ötenazi olması gerektiğidir. Cerrahi tedavi sonrası fare sağkalım da translatable klinik uç nokta olarak izlenebilir.Bu teknik, geliştirilmesinden sonra meme kanseri alanında araştırmacıların sadece yeni ilaç gelişimini değil, genel olarak meme kanseri araştırmalarını da keşfetmelerinin önünü açmıştır.

generating-murine-orthotopic-metastatic-breast-cancer-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Video, bir fare modelinde meme kanseri ortotopik aşılama tekniğini göstermektedir. Bu teknik, deri altı veya cerrahi olmayan enjeksiyona kıyasla tümör boyutu ve şeklinde daha az değişkenlik ile yüksek bir tümör oluşumu oranı üretir.

Ortotopik Enjeksiyon: Dokuya Özgü Kanser Hücrelerinin Yetişkin Bir Fareye İmplante Edilmesi

Bu videoda, kanserin ilerlemesini incelemek için bir fareden tüm meme bezinin cerrahi olarak çıkarılması için kullanılan radikal mastektomi tekniği açıklanmaktadır.

Radikal Mastektomi: Kanserin İlerlemesini İncelemek İçin Bir Fareden Tüm Meme Bezinin Cerrahi Olarak Çıkarılması

Kanser tümörü çevreleyen dokunun hem de yerel pro- ve anti-inflamatuar aracılar tarafından etkilenir kompleks bir hastalıktır. Bu nedenle, daha çok deri altı modellere göre ortotrop enjeksiyon modelleri, bir şekilde daha iyi taklit eden insan patoloji kanser ilerlemesinin incelemek için yararlı olabilir.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür.

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

over kanseri periton yayılması çok adımlı süreci açıklamak için, mevcut çalışma bu tümör hücreleri ile ortotopik aşılamadan yoluyla orijinal tümör gelişimi ve periton metastazı bir fare deneysel modeli sunar.

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz<em&gt; yoluyla</emYumurtalık Kanseri Hücreleri ile&gt; Ortotopik aşılama

Meme kanseri metastazını hedef alan adjuvan tedaviyi değerlendiren klinik öncesi modeller eksiktir. Buna değinmek için, de novo pulmoner meme adenokarsinom metastazına ait bir fare modeli geliştirdik, burada adjuvan ortamında (primer tümörlerin cerrahi sonrası rezeksiyonu) uygulanan terapiler önceden tohumlanmış pulmoner metastazları etkilemek için etkinlik açısından değerlendirilebilir.

Klinik Öncesi Bir Murin Modeli İçin Cerrahi Prosedürler ve Metodoloji<emDe Novo</emMeme Kanseri Metastazı

Burada, biz meme kanseri hücrelerinin basit, daha az invaziv ve ele kolay bir şekilde meme yağ yastığı içine implant için bir protokol mevcut ve bu fare orthotopic meme kanseri model uygun meme yağ yastığı yapısına sahip çeşitli yönlerini incelemek için kullanılabilir kanser.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Bu protokol, ortopik osteosarkom ve pulmoner metastaz lezyonlarını taşıyan fare modelleri oluşturmak için intratibia osteosarkom hücre enjeksiyonunu tanımlamaktadır.

Ortotopik Osteosarkom ve Akciğer Metastazı Fare Modelleri Oluşturmak için İntratibiyal Osteosarkom Hücre Enjeksiyonu

El yazması, ortotopik olarak enjekte edilen meme tümörlerinden spontan akciğer metastazının kurulması ve uzunlamasına büyüme izlemesi için metastatik kaskadının tüm aşamalarında müdahaleye uygun bir metodolojiyi açıklamaktadır.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Öğrenin meme kanseri ilerlemesini fare ortotopik modeliyle incelemeyi. Biyolüminesans görüntüleme ile tümör yükünü ölçün ve radikal mastektomi sonrası düşük nüks oranlarını keşfedin.

Fare Orthotopic metastatik meme kanseri Model oluşturma ve fare radikal mastektomi gerçekleştirme

Daha fazla video keşfet