Name: Vitro Yalnız arı yetiştirme: larva Risk faktörleri değerlendirmek için bir araç (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: Keşfedin yalnız arı larvalarını in vitro yetiştirme yöntemini ve fungisit muameleli polenin etkilerini. Bu teknik, polen mikrobiyomu ve ksenobiyotik stres faktörleri arasındaki ilişkileri araştırmak için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Kimball Clark ve Tim Osmia iç içe geçmiş sazlık sağlamak için Krogh, Meredith Nesbitt ve Molly Bidwell laboratuarı, Drs. Cameron Currie, Christelle Guédot, Terry Griswold, Michael Branstetter ve üç Anonim gözden geçiriciler için yardım için teşekkür ederiz el yazması geliştirilmiş onların yararlı yorum. Bu eser USDA Tarımsal Araştırma Servisi tahsis fon (geçerli araştırma bilgi sistemi #3655-21220-001), Wisconsin Tarım Bakanlığı, ticaret ve tüketici koruma (#197199), Ulusal Bilim Vakfı (altında tarafından desteklenmiştir Grant No Deb-1442148), DOE büyük göller Biyoenerji Araştırma Merkezi (DOE ofisi bilim BER DE-FC02-07ER64494).

1. Propiconazole çözümleri mantar ilacı pozlama deneyler için hazırlayın
<ol><li>Mantar ilacı çözüm x 0,1 denemenin gün ticari olarak satın alınan propiconazole ,3 steril su uygun birimler çözülerek hazırlayın. Tek taze hazırlanmış mantar ilacı çözüm için tüm tedaviler kullanıldığından emin olun.</li>
	<li>Mantar ilacı çözüm daha önce polen arı toplanan24 (0.361 PPM veya etkin madde g-1 polen µg) rapor propiconazole maksimum konsantrasyon elde etmek için polen hükmün gram başına x 0.1 23 µL ekleyin.</li>
</ol>2. hasat yumurta ve ana bilgisayar polen hükümler üzerinden Osmia sazlar
<ol><li>Steril neşter kullanarak, taze takılı Osmiasazlar iç içe yerleştirme, bireysel odaları ortaya çıkarmak için reed uzunluğu boyunca iki parçaya bölerek incelemek. Not: Her yuva arasında 8-14 Odalar ve bir oda içinde tek bir yumurta içerebilir.</li>
	<li>Görsel olarak daha önce yayımlanan yönergeleri77göre erkek yumurta içeren chambers tanımlamak için sazlık bakarak kontrol edin. Kullanım iç içe geçmiş reed her polen hükmü ile birlikte ilişkili yumurta kaldırmak ve temiz bir yer için steril bir bükülmüş iğne tekne tartın.</li>
	<li>Yavaşça yumurta temiz iyi boya fırçası kullanarak hükmü ayırmak ve polen hükmün taze ağırlık kayıt ve bir Standart laboratuvar denge kullanarak yumurta. Erkek polen hükümler ortalama ağırlığı hesaplayın.</li>
	<li>Hasar için yumurta aşırı sıcaklığa ve dehidratasyon maruz kalma azaltmak için en az gecikme ile sonraki adımları uygulayın.</li>
</ol>3. ana bitki polen hükümler hazırlayın
<ol><li>Hiç parazit mevcut78olmasını sağlamak için iç içe geçmiş odaları kazılan maternally toplanan ana-bitki polen bakarak kontrol edin. Herhangi bir potansiyel anne önyargı azaltmak için polen hükümler steril petri kabına içinde tek bir kitle içine birleştirmek ve iyi bir steril iğne kullanarak karıştırın.</li>
	<li>Birleştirilmiş her hükmün ağırlık doğal olarak ayrılmış bir erkek hüküm ortalama ağırlığı yaklaşık olarak eşit olduğu yeni polen hükümleri kombine kitle bölün (yani ± SE, 0.35 ± 0,01 g, N 42 =). Not: Çünkü Osmia sp. erkek çoluk çocuk, kadın77kıyasla erkek larvalar daha düşük vücut ağırlıkları içinde bu sonuçlar için daha küçük polen hükümler ayırır. Herhangi bir seks özgü farklılıklardan kaynaklanan bu tür önyargı önlemek için sadece erkek yumurta deneylerde kullanın.</li>
</ol>4. ana bitki polen hüküm hazırlayın
<ol><li>Ticari olarak satın alınan bal polen için bir Standart laboratuvar top-değirmen kullanarak ince bir toz arı toplanan ezmek.</li>
	<li>Ana bilgisayar maternally toplanan polen Hükümler (~ % 20) nem içeriğine göre uygun miktarda % 40 sterilize şeker çözüm79 ve karışımı iyice bir hamur gibi tutarlılık oluşturmaya kullanarak polen tozu hidrat.</li>
	<li>Bireysel polen kitleler her yaklaşık ortalama ağırlığı doğal olarak ayrılmış bir erkek hükmün aynı tartı bölün. Not: Nem maternally toplanan ana bilgisayar polen hükümler içinde önceden polen hükümler 30 rasgele seçilen erkek odaları80taze ve kuru ağırlığı karşılaştırarak standart olacak. Kuru ağırlığı elde etmek için polen hükümler bir lyophilizer içinde dondurularak olmalıdır (1.5 72 h için Pa).</li>
</ol>5. Multiwell hücre kültür tabak hazırlamak
<ol><li>Satır bireysel kuyu autoclaved Teneke Kupa (5 × 9 cm) ile steril 48-şey kültür plaka yapımı. Bu kadar hizmet polen hüküm steril forseps, yavaşça dışarı belgili tanımlık kapsül üst kenarında yetenek kullanarak.</li>
	<li>Ana bilgisayar veya ana bilgisayar polen hükmün tek bir kitle tedavi grubuna göre steril araçlarla teneke fincan içine yerleştirin. Not: çapraz bulaşma önlemek için tedavi ve kontrol grubu için ayrı levhalar kullanın.</li>
</ol>6. mantar ilaçları ekleyin
<ol><li>Steril bir tahta sopa kullanarak polen kitle içinde merkezi olarak yerleştirilmiş bir depresyon olun. Yeni bir sopa her polen hazırlama için kullanın.</li>
	<li>Uygun birimler (tedavi için) Mantar ilacı çözüm veya steril su (için denetimleri) depresyon içine ekleyin. Çimdik mantar ilacı arasında yüzey teması en aza indirmek için steril forseps kullanarak depresyon / steril su ve yumurta.</li>
	<li>Deneysel tasarım faktöriyel up ile hizalandığından emin olun şematik gösterimi (Şekil 4) tasvir.</li>
</ol><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57876/57876fig4.jpg"> Şekil 4. Deneysel kurulumunun şematik Gösterim. Deneme bir tamamen geçti 2 × 2 faktöriyel kurulumları temsil eder. Faktör 1 mantar ilacı pozlama temsil eder ve 2 düzey oluşur: (i) hiçbir fungisit (N = 10) ve (ii) Mantar ilacı (N = 10). Faktör 2 polen kaynağını temsil eder ve 2 seviyeden oluşur: (i) ana bilgisayar polen (N = 8) ve (ii) Sigara-ana bilgisayar polen (N = 8). <a href="/files/ftp_upload/57876/57876fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
7. arka ve larva gözlemlemek
<ol><li>Rasgele seçilen bir erkek yumurta temiz iyi boya fırçası kullanarak polen hüküm üst yüzey üzerine yerleştirin. Bir kez yumurta üzerinde tüm hükümler yer var, teyp köşelerdeki etiketleme ile güvenli hale getirme hücre kültür plaka kapağı değiştirin.</li>
	<li>Temiz bir tepsi üzerinde iyi tabak yerleştirin ve doğrudan güneş ışığı ile temas engel için karanlık bir bez ile kapak. Yer 6 iyi plaka içeren 30 mL steril su içinde kuruma önlemek için belgili tanımlık tepsi. Kuluçka tepsiler rahatsız bir kuluçka içinde oda sıcaklığında bekletin.</li>
	<li>Her gün bir diseksiyon mikroskop altında iyi tabak iyi plakaları kapağını kaldırmadan gözlemlemek. Hareket için kontrol ederek larvalar hayatta olduğundan emin olun. Hiçbir hareket algılanırsa, ölü larva ve kalan polen hükmü içeren Teneke Kupa atmak. Tüm hayatta kalan larvalar prepupal sahne ulaşana kadar iyi tabak içinde rahatsız edilmeden geliştirmek izin.</li>
	<li>Prepupal sahne41ulaştıktan sonra larva teneke bardaktan kaldırın. Kullanım herhangi temizlemek için fırça ipek Koza arınmak. Dikkatle diseksiyon mikroskop kullanarak ipek Koza kesilmiş ve kauçuk forseps ile prepupa ayıklayın.</li>
	<li>Yavaşça araçları yumuşak vücut delip değil emin olmak için prepupa başa. Taze ağırlık yumurta gelişim zaman prepupal sahneye (larva gelişimsel zaman) ve prepupa (prepupal biyokütle) kaydedin. Not: Herhangi bir ölü larva hemen kadavra ve artık polen hüküm istenmeyen mikrobiyal büyüme önlemek için atılmalıdır. Bu kalan sağlıklı larvalar için enfeksiyon riskini azaltır.</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Arılar laboratuvar koşullarında doğal onların iç içe geçmiş sazlık dışında yetiştirme larva, fitness ile ilgili birden fazla hipotezler test sağlar. Kimliği belirsiz faktörler devam ölçüde bu arı ölümleri neden, risk değerlendirme çalışmaları vitro kullanarak deneyler potansiyel tehditleri tanımlamak ve yönetim uygulamalarını wild pollinators 12 Bu tür zengini grup için bilgilendirmek yardımcı olabilir ,38,49,</su...

Böcek polinatörler1egemen grup olarak göz önüne alındığında, arı nüfusu genel kaybı gıda güvenliği ve ekosistem istikrar2,3,4,5,6 için bir tehdit oluşturmadığını ,7. Her iki yönetilen ve yabani arı nüfusu azalan eğilimler birkaç paylaşılan risk habitat parçalanması, yeni çıkan parazitler ve patojenler, genetik çeşitliliğin kaybı ve istilacı türlerin3 giriş de dahil olmak üzere faktörleri için atfedilen ,4,7,8,9,10,11,12. Özellikle, böcek ilaçları, (örneğin, neonicotinoids) kullanımı dramatik artış doğrudan arılar13,14,15arasında zararlı etkileri için bağlantılı olmuştur. Synergism neonicotinoids ve (EBI) Mantar ilaçları ergosterol biyosentezi inhibe arasında birden çok arı türleri16,17,18 arasında yüksek ölüm neden olabilir çeşitli çalışmalar göstermiştir , 19 , 20 , 21 , 22. Bununla birlikte, mantar uzun 'arı kipte' olarak kabul ilaçları, devam bloom bitkileri kadar İnceleme23olmadan püskürtülür. Yiyecek arılar rutin geri getirmek mantar ilacı artıkları24,25,26ile kontamine polen yükler için dokümante edilmiş. Bu tür mantar ilacı-ladenpollen tüketimi larva arılar27,28,29,30ve a maiyet-in yetişkin arılar16 arasında alt ölümcül etkiler arasında yüksek ölüm oranı neden olabilir , 31 , 32 , 33 , 34. bir çalışmada mantar ilaçları böylece kesintiye arılar ve polen yoluyla bulaşan mikropların35arasında kritik symbioses mikrobiyal toplum içinde polen, kovan depolanan değiştirerek arı kayıplara neden gösteriyor.
Yalnız arılar birkaç vahşi ve tarımsal bitki36,37,tozlaşma için çok önemli olmakla birlikte38, polinatörler bu farklı grup çalışmaları izleme pestisit çok daha az dikkat aldı. Her maternally toplanan polen ve nektar ve bir tek yumurta39sonlu bir kitle ile stoklanmayacaktır, Yetişkin bir yalnız kadın yuva 5-10 mühürlü damızlık odaları içerir. Tarama sonra larvalar ayrılmış polen hüküm ve yeterli beslenme40,41elde etmek için ilişkili polen kaynaklı microbiota güveniyor. Onlar bir sosyal yaşam tarzı faydaları eksikliği nedeniyle yalnız arılar pestisit pozlama42' ye karşı daha da savunmasız olabilir. Örneğin, açıkları sosyal arılar bir sprey takip ederken telafi için bazı işçiler tarafından genişletmek ve yeni damızlık gelişmekte olan, bir tek yetişkin yalnız kadın ölümü tüm üreme etkinlik43biter. Duyarlılık bu farklılıkları çeşitli arı takson yönetilen ve vahşi arılar hem için yeterli koruma sağlamak için ecotoxicological çalışmalarda dahil gerek vurgulayın. Ancak, çalışmalar bir avuç kenara etkisi soruşturmalar mantar ilacı maruz kalma öncelikle odaklanmıştır sosyal arılar18,23,32,44tarihinde,45 ,46,47,48,49.
Yalnız arılar Osmia (Şekil 1) ait Dünya çapında birkaç önemli meyve ve fındık bitkileri39,50,51,53, verimli tozlayıcı olarak kullanılmıştır 53. ile yönetilen diğer tozlayıcı24,54,55,56,57,58grupları, Yetişkin Osmia arılar rutin şunlardır bloom bitkileri44püskürtülür mantar ilaçları maruz. Yetişkin kadın üzerinde son zamanlarda püskürtülür bitkileri yiyecek arama toplayabilir ve sonra formlar tek diyet gelişmekte olan larvalar için mantar ilacı yüklü polen ile damızlık onların chambers stok. Kirlenmiş polen hükümler tüketen daha sonra mantar ilacı artıkları42larva açığa çıkarabilir. Maruz kalma riski yalnızca birkaç yakından ilişkili ana bilgisayar bitkiler59,60,61yem oligolectic türler arasında daha yüksek olabilir. Bazı megachilid arılar, örneğin, tercihen parazitizm62azaltmak anlamına gelir düşük kaliteli bitki polen için hayvan yemi için görünür. Ancak, hangi mantar ilaçları oligolectic yalnız arılar arasında larva fitness etkisi ölçüde ampirik olarak sayısal değil. Bu çalışmanın amacı ana test etmek için bir protokol geliştirmektir ve etkileşimli etkileri mantar ilacı pozlama ve polen kaynak vitro fitness yalnız arı yetiştirilen. Araştırmaya, O. ribifloris sensu lato (s.l.) yumurta ticari olarak elde edilebilir (tablo malzeme). Bu nüfus nedeniyle yerli tozlayıcı ve nektar zengini Mahonia aquifolium (Oregon üzüm) için onun güçlü tercih bölge53,63içinde,64 bulundu olarak önemini idealdir (Şekil 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57876/57876fig1.jpg"> Şekil 1. Bir yetişkin Osmia ribiflorisyüksek çözünürlüklü bir fotoğraf. Fotoğraf kredi Dr. Jim Cane, araştırma entomolog, USDA-ARS <a href="/files/ftp_upload/57876/Figure_1.pdf" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57876/57876fig2.jpg"> Şekil 2. Osmia ribifloris (s.l.) sazlık. ön planda iç içe geçmiş bir erkek ile iç içe geçirme Phragmite Odası bölümleri ve sazlık için terminal fişler masticated yapraklarından inşa edilir. Kredi Bay Kimball Clark, NativeBees.com fotoğraf <a href="/files/ftp_upload/57876/57876fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Bu çalışmada ilk mantar ilacı tedavi pollen larva fitness (geliştirme zamanı ve prepupal biyokütle açısından ölçülür) tüketen etkisini değerlendirmek için hedeftir. Yaygın olarak uygulanan mantar ilacı propiconazole maruz yetişkin arılar arasındaki artan ölüm için birkaç tür 23,24,32,44,45arasında, bağlantılı olmuştur iken 54,55,56,57,58,65,66,67, larva arılar üzerindeki etkisi azdır bilinen. Ana bilgisayar polen larva fitness üzerinde tüketen etkilerini değerlendirmek için bu çalışmanın ikinci amacı olduğunu. Önceki çalışmalarda oligolectic arı larvaları ne zaman ev sahibi polen68tüketmek zorunda geliştirmek başarısız gösterir. Böyle sonuçlar arı Fizyoloji69, polen Biyokimya70ve doğal polen hükümler71ile ilişkili yararlı microbiome atfedilen. Bu çalışmada üçüncü larva fitness etkileşimli mantar ilacı tedavi ve diyet polen etkilerini değerlendirmek için hedeftir.
Anne vücut boyutu da dahil olmak üzere çok sayıda biyolojik özellikleri sağlama oranı, yiyecek strateji ve polen miktarı72,73,74,75 arasında yalnız arı larva fitness etkileyen olduğu bilinmektedir. Bu faktörler savunulabilir Deneysel tasarımlar larva sağlık değerlendirirken gelişmekte olan bir meydan okuma teşkil sazlar arasında önemli değişkenlik tanıtabilirsiniz. Larva geliştirme mühürlü iç içe geçmiş sazlık içinde oluşur göz önüne alındığında, Ayrıca, Döl böyle değişkenlik etkileri ölümcül teknikleri (Şekil 3) kullanmadan görselleştirmek zor ve quantified vardır. Bu zorluğu aşmak için bu çalışma içinde bütün hipotezler kendi iç içe geçmiş sazlık dışında yetiştirilen larva kullanarak test edilmektedir. Deneysel tasarım bir tam çapraz 2 × 2 faktöriyel set-up, 2 düzey oluşan her faktörü ile temsil eder; Faktör 1: Mantar ilacı pozlama (mantar ilacı; Hiçbir fungisit); Faktör 2: Polen kaynak (ana bilgisayar polen, Sigara-host polen). Arılar prepupal sahneye steril multiwell hücre kültür plaka kontrollü laboratuvar koşullarında içinde yumurtadan yetiştirilir. Her şey ayrı ayrı standart miktarda polen sağlanması ve tek bir yumurta ile doludur. Tarama sonra larva kuyu içinde ayrılmış polen beslenir, larva geliştirme tamamlar ve pupation başlatır. Son çalışmalar açıklanamayan ölüm bu yapay yetiştirme ortamına vahşi49,76' karşılaştı içinde kaldırdı arılar arasında daha düşük olduğunu göstermiştir. Vitrokullanımı-arı yetiştirilen alan bazlı çalışmalar birçok avantajı vardır: 1) doğal değişkenliği ve kontrolsüz faktörleri genellikle ilgili alan bazlı çalışmalar ile; karıştırıcı etkilerini en aza indirir 2) birden çok düzeyleri aynı anda tedavi grupları arasında test edilmesi ilgi için her factor(s) manipülasyon sağlar; 3) çoğaltır sayısını önceden belirlenmiş olabilir ve her çoğaltma için deneysel etkenler ayrı ayrı yönetilebilir; 4) larva yanıt değişkenleri kolayca görselleştirildiği ve bağımsız olarak rahatsız edici bitişik larva kaydedildi; 5) protokolü multipl faktörler ve yanıt değişkenler içeren daha karmaşık Deneysel tasarımlar içerecek şekilde değişiklik.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57876/57876fig3.jpg"> Şekil 3. İçeriği içinde doğal bir iç içe geçmiş reed Osmia ribifloris (s.l.). Bireysel odaları, polen hükümler ve bölümleri ve (B) taze gösteren bir disseke reed (siyah bir çember ile gösterilen) ilişkili yumurta ve polen hükümler hasat (A) kapatın. <a href="/files/ftp_upload/57876/57876fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

<table><tbody><tr><td>O. ribifloris Sensu Lato (sl)</td><td></td><td></td><td>Kaysville, Davis County, Utah, ABD</td></tr><tr><td>Osmia sazları</td><td>Nativebees.com</td><td>NA</td><td>Yeni tıkalı sazlar</td></tr><tr><td>Diseksiyon seti</td><td>VWR</td><td>89259-964</td><td>Kullanmadan önce sterilize edin</td></tr><tr><td>Uzun Burunlu Pense</td><td>Husky</td><td>1006</td><td></td></tr><tr><td>6 kuyulu kültür plakaları</td><td>VWR</td><td>10062-892</td><td>Steril mühürlü</td></tr><tr><td>48 kuyulu kültür plakaları</td><td>VWR</td><td>10062-898</td><td>Steril sızdırmaz</td></tr><tr><td>Petri kapları</td><td>VWR</td><td></td><td>25373100 Steril sızdırmaz</td></tr><tr><td>Kare Tartı Tekneleri</td><td>VWR</td><td>10770-448</td><td></td></tr><tr><td>Deve Kılı Fırçası</td><td>Bioquip</td><td>1153A</td><td></td></tr><tr><td>Teneke kapsüller</td><td>EA Sarf Malzemeleri</td><td>D1021</td><td>Kullanmadan önce sterilize edin</td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>VWR</td><td>470302-808</td><td></td></tr><tr><td>Propiconazole 14.3</td><td>Quali-Ppro</td><td>60207-90-1</td><td>Propiconazole% 14.3</td></tr> <tr><td>Bal arısı poleni</td><td>Arı enerjili</td><td>897098001244</td><td>İşlenmemiş, doğal, ham polen</td></tr><tr><td>Mikro terazi</td><td>VWR</td><td>10204-990</td><td></td></tr><tr><td>Pulverisette</td><td>LAB SİNERJİ A.Ş.</td><td></td><td></td>30334913</tr><tr><td>Ahşap çubuklar</td><td>VWR</td><td>470146908</td><td>Kullanmadan önce sterilize edin</td></tr><tr><td>Sızdırmazlık bandı</td><td>VWR</td><td>89097-912</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>VWR</td><td>89403-384</td><td></td></tr><tr><td>Dikim tepsisi</td><td>VWR</td><td>470150-632</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>VWR</td><td>BDH1158-4LP</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj tüpü</td><td>VWR</td><td>21008936</td><td></td></tr><tr><td>Mikroşırınga</td><td>Cole-Palmer</td><td>UX-07940-07</td><td></td></tr><tr><td>Kauçuk cımbız</td><td>Amazon</td><td>B0135HWPN4</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga iğneleri</td><td>VWR</td><td>89219-334</td><td></td></tr><tr><td>Dondurarak kurutucu</td><td>Labcono</td><td>LFZ-1L</td><td></td></tr><tr><td>İstatistiksel yazılım</td><td>SPSS</td><td>Sürüm 21.0</td><td></td></tr></tbody></table>

vitro yalnız arı yetiştirme: larva risk faktörleri değerlendirmek için bir araç

In Vitro Rearing of Solitary Bees: A Tool for Assessing Larval Risk Factors

Her ne kadar yalnız arılar vahşi ve yönetilen bitkiler için çok önemli tozlaşma hizmetleri sağlamak, bu tür zengini grubu pestisit düzenleme çalışmaları büyük ölçüde gözden kaçırdığı. Mantar ilacı artıkları için maruz kalma riski sprey üzerinde veya yakınında ana bitkiler oluşursa arılar yuvalarına sağlama için polen topluyorlar iken özellikle yüksek olması muhtemeldir. Seçme arayabileceðiniz ve bitkiler (oligolecty) polen tüketmek tür Osmia için ev sahibi olmayan bitkilerin polen kullanamama mantar ilacı ile ilgili toksisite için onların risk faktörü artırabilirsiniz. Bu el yazması başarıyla oligolectic mason arılar, yumurta içinde hücre kültür plakaları Standart laboratuvar koşullarında prepupal aşamasına gelen Osmia ribifloris sensu lato arka için kullanılan iletişim kurallarını açıklar. Vitro-yetiştirilen arılar daha sonra arı fitness mantar ilacı pozlama ve polen kaynak etkilerini araştırmak için kullanılır. Bir 2 × 2 tamamen geçti faktöriyel tasarım dayalı, deneme mantar ilacı pozlama ve polen kaynak ana ve etkileşimli efektleri larva fitness, prepupal biyokütle, larva gelişimsel zaman ve yaşayanlar tarafından sayısal olarak inceliyor. Bu teknik önemli bir avantajı olduğunu vitrokullanarak-yetiştirilen arılar doğal arka plan değişkenliği azaltır ve aynı anda birden çok deneysel parametre manipülasyon sağlar. Açıklanan protokol hipotezler arı sağlığı etkileyen faktörler dizisi içeren test için çok yönlü bir araç sunar. Koruma çabalarına önemli, kalıcı başarı ile yerine getirilmesi arı düşüşler sürüş fizyolojik ve çevresel faktörlerin karmaşık etkileşim bu tür anlayışlar kritik olarak kanıtlamak.

Larva fitness üç ölçümleri (i) larva gelişimsel zaman, (ii) prepupal biyokütle ve (iii) yüzde yaşayanlar kullanarak sayısal. İki yönlü ANOVA mantar ilacı pozlama kullanılarak yapılmıştır (iki seviye: yok fungisit, mantar ilacı) ve polen kaynak (iki seviye: Ana bilgisayar polen, Sigara-host polen) bağımsız değişkenin ve bağımlı değişken olarak larva gelişimsel zaman olarak. Mantar ilacı pozlama için temel etkisi (F1,28 1,24, P = 0,28 =) Mantar ilacı tedavi (ort...

Çiçekli bitkiler mantar ilacı spreyler yalnız arı polen kaynaklı fungisit kalıntılarının yüksek konsantrasyonları maruz bırakabilir. Laboratuvar tabanlı deneyler vitroiçeren kullanarak-yetiştirilen arı larvaları, bu çalışmada mantar ilacı tedavi polen ana bilgisayar ve ev sahibi olmayan bitkilerden elde edilen tüketen etkileşimli etkilerini inceler.

Vitro Yalnız arı yetiştirme: larva Risk faktörleri değerlendirmek için bir araç

Although solitary bees provide crucial pollination services for wild and managed crops, this species-rich group has been largely overlooked in pesticide ...

Yalnız arı türleri, gezegendeki en çeşitli arı grubunu temsil eder, ancak larvaları yüksek kontrollü koşullar altında başarılı bir şekilde yetiştirmek oldukça zor olabilir. Yalnız arı türlerinin in vitro kültürü için bir yöntem oluşturduk ve bu da mikrobiyal simbiyontlarıyla ilişkili risk faktörlerini izole etmemize ve ölçmemize olanak tanıyor. Bazı kök yuvalama yalnız arı türleri arasında, kültürleme tekniklerinin genç larvalara ve onların polen kaynaklı mikrobiyal simbiyontlarına hitap etmesi kritik öneme sahiptir.Burada, çoklu stresörlerin ana ve etkileşimli etkilerini aydınlattık ve stresörlerin büyük ölçüde tek başına mı yoksa birlikte mi hareket ettiğini ayırt etmemizi sağladık. Prosedürü gösterenler, her ikisi de laboratuvarımdan Molly Bidwell ve Prarthana Dharampal olacak. Sterilize edilmiş bir neşter kullanarak, yeni tıkanmış Osmia yuvalama sazlarını inceleyin.Tek tek bölmeleri ortaya çıkarmak için sazları uzunlamasına iki parçaya bölün. Yuvalar tipik olarak, oda başına bir yumurta olmak üzere sekiz ila 14 oda içerir. Standart yöntemi kullanarak erkek yumurtaları tanımlayın.Polen sağlama boyutundaki cinsiyet yanlılığı nedeniyle bu deneyde sadece erkek yumurtalar kullanılmıştır. Erkek hükümleri tipik olarak kadın hükümlerinden daha küçüktür. Daha sonra sterilize edilmiş bir aletle, her bir polen kaynağını ilgili yumurta ile birlikte çıkarın ve temiz bir tartı teknesine yerleştirin.Tartı teknesinde, yumurtayı erzaktan nazikçe ayırın. Daha sonra polen maddesini ve yumurtayı ayrı ayrı tartın. Polenlerden uzak kalma sürelerini en aza indirmek için Osmia yumurtalarıyla hızlı bir şekilde çalışın.Konukçu polen sağlama hazırlıkları için, önce yuvalama odalarından çıkarılan anne tarafından toplanan konukçu bitki polenini parazitler açısından görsel olarak inceleyin. Daha sonra, olası maternal önyargıyı azaltmak için, polen hükümlerini tek bir kütle halinde birleştirin ve sterilize edilmiş bir iğne kullanarak karıştırın. Daha sonra, konakçı poleni yeni standart kütle hükümlerine bölün.Konukçu olmayan bitki poleni hükümleri hazırlamak için, ticari olarak satın alınan bal arısı tarafından toplanan polenleri standart bir laboratuvar kemik değirmeni kullanarak ince bir toz haline getirin. Daha sonra, konakçı polen hükümlerinin nem içeriğine bağlı olarak, sterilize edilmiş %40 şeker çözeltisi kullanarak polen tozunu nemlendirin. Bunu hamur benzeri bir kıvama gelene kadar karıştırın.Daha sonra, anne tarafından toplanan hükümlerle aynı ağırlıkta konakçı olmayan polen hükümleri yapın. Tedavi plakası için, 48 oyuklu bir kültür plakasının ayrı kuyularını otoklavlanmış teneke kaplarla hizalayın. Tedavi ve kontrol grupları için ayrı plaklar hazırlayın.Daha sonra steril forseps kullanarak, polen tedarikini barındırabilmeleri için bardakların üst kenarını nazikçe genişletin. Ardından, teneke kaplara tek polen hükümleri yükleyin. Şimdi her polen kütlesi içinde steril bir tahta çubuk kullanarak merkezi olarak yerleştirilmiş bir çöküntü yapın.Her polen tedariki için yeni bir çubuk kullanın. Depresyonun içine, kontroller için mantar ilacı ve steril su gibi uygun hacimlerde tedavi solüsyonu ekleyin. Her eklemeden sonra, temiz steril forseps kullanarak çöküntüyü kapatın.Başlamak için, her tedavi plakasını rastgele seçilmiş bir erkek yumurta ile iyice yükleyin. Temiz, ince bir boya fırçası kullanarak polen tabakasının üzerine yerleştirin. Yumurtalar yerleştirildikten sonra, köşelerdeki bant kullanarak kapağı tabağa sabitleyin.Daha sonra, hazırlanan her plakayı oda sıcaklığında tutulan bir inkübatöre yerleştirin. Kurumayı önlemek için steril su ile doldurulmuş altı oyuklu bir plaka ekleyin. Plakaları inkübatörün içinde rahatsız edilmeden bırakın.Kapağı çıkarmadan plakayı her gün diseksiyon mikroskobu altında kontrol edin. Larvalar canlıysa, hareket edeceklerdir. Herhangi bir hareket tespit edilmezse, ölü larvaları ve kalan polen hükümlerini içeren teneke kabı atın.Bir larva prepupal aşamaya ulaştığında, onu teneke kaptan çıkarın ve ipek kozasındaki frass'ı temizlemek için bir fırça kullanın. Daha sonra bir diseksiyon mikroskobu kullanarak ipek kozasını dikkatlice kesin ve tüy ağırlığı forseps kullanarak prepupa'yı çıkarın. Vücuduna herhangi bir zarar gelmesini önlemek için prepupayı nazikçe tutun.Şimdi prepupa kütlesini ve yumurtadan prepupal aşamaya kadar olan gelişim süresini kaydedin. Larva uygunluğu, larva gelişim süresi ve prepupal biyokütle kullanılarak ölçüldü. Mantar ilacı ile tedavi edilen ve edilmeyen gruplar arasında larva gelişim süresi ile prepupal biyokütle arasında anlamlı bir negatif korelasyon vardı.Konak olmayan polenler üzerinde üreyen larvalar için anlamlı bir negatif korelasyon olmasına rağmen, konak poleni üzerinde üreyen larvalar için böyle bir ilişki gözlenmemiştir. Polen kaynağının arı zindeliği üzerinde önemli bir ana etkisi olmuştur. Konakçı olmayan polenlerde yetiştirildiğinde, larva gelişim süresi önemli ölçüde artarken, prepupal biyokütle, konak poleni üzerinde yetiştirilen larvalara kıyasla hem mantar ilacı ile tedavi edilen hem de tedavi edilmeyen gruplar arasında önemli ölçüde azalmıştır.Mantar ilacı maruziyetinin zindelik üzerinde önemli bir ana etkisi yoktu. Mantar ilacı ile tedavi edilen ve tedavi edilmeyen gruplar arasında konakçı ve konakçı olmayan polenler üzerinde ortaya çıkan tedaviler için gelişim süresi ve prepupal biyokütle açısından istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu. Mantar ilacı maruziyeti ve polen kaynağının larva gelişim süresi ve prepupal biyokütle üzerinde anlamlı bir etkileşimli etkisi yoktu.Bu videoyu izledikten sonra, in vitro koşullar altında yalnız arı larvalarını nasıl başarılı bir şekilde yetiştireceğinizi iyi anlamış olmalısınız. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, arıları in vitro koşullar altında yumurtadan pupa aşamasına kadar yükseltmek için kullanılabilir ve aynı zamanda stresle başa çıkma işleminden minimum ölüme neden olur. Bu prosedürü kullanırken, yumurta veya çok genç larvaları kullanmayı unutmamak önemlidir.Bu, larvaların neredeyse tamamen diyet tedavilerinin amaçlanan manipülasyonu üzerine yetiştirilmesini sağlar. Bu protokol, diğer birkaç yalnız arı ve yaban arısı türüne genişletilebilir ve tozlayıcı sağlığını etkileyen çoklu risk faktörlerinin ana ve etkileşimli etkilerini test etmek için kolayca değiştirilebilir. Bu teknik, yalnız arı larvaları için in vitro kültür için bir araç sağlayarak, savunmasız arı popülasyonları arasında daha önce bilinmeyen risk faktörlerinin belirlenmesine yardımcı olabilir.Örneğin, bu protokole dayanan deneylerinden bazıları, polen mikrobiyomunun ksenobiyotik stres faktörlerine karşı değişen derecelerde direnç sağlamadaki rolünü belirlemeye yardımcı olabilir. Erişilebilir ve ucuz bir teknik olarak bu protokol, araştırmacılar tarafından kendi araştırma hedeflerini ele almak için kolayca değiştirilebilen hipotez testi için çok yönlü bir aracı temsil eder.

in-vitro-rearing-solitary-bees-tool-for-assessing-larval-risk

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Bal arısı (Apis mellifera) için geliştirilen Proboscis Extension Response (PER) koşullandırma protokolü, birçok böcek türünde birkaç farklı öğrenme mekanizmasını incelemek için ekolojik olarak ilgili ve kolayca ölçülebilir bir araç sağlar.

Bir burnumun Extension Tepki Böcekler Davranış Plastisitesi incelenmesi için protokol: Basic, Biyomedikal Uygulama ve Tarımsal Araştırma

Bu sunumun amacı in vivo ve entomopatojen nematodların yetiştirmesi için in vitro teknikleri göstermektir., In vitro yöntemler zengin ağar medya kullanmak ise in vivo yöntemler, bir böceğin bu nematodların yetiştirme düşünün.

In vivo ve in vitro Entomopatojenik Nematodlar Yetiştiriciliğinin olarak (Steinernematidae ve Heterohabditidae)

Burada sunduğumuz   Bir metot, bireysel bir bal arısı ve arı koloni hem pestisit kirlenmiş gıda yem için. Yöntem basit larva diyet in vivo besleme yoluyla ve aynı zamanda arı kovanı koloni doğal koşuluyla bağımsız bal arıları üzerinde pestisit etkisi değerlendirilmektedir.

Koloni Düzeyde Bireysel olan Bal Arısı Kalkınma Çevre Kimyasalların Etkisinin Değerlendirilmesi

Bu protokol için ant Vollenhovia emeryiiçin akraba evliliği haçlar iletken ve bu haçlar başarısını değerlendiren yöntemler açıklanmıştır. Bu protokoller seks belirlenmesi sistemlerinde Hymenoptera genetik temeli anlama amaçlayan deneyler için önemlidir.

İndüksiyon ve karınca, Vollenhovia Emeryi kullanarak akraba evliliği haçlar değerlendirilmesi

Burada, 1) federal tehlike altındaki Miami mavi kelebek laboratuvar esir yayılımı(Cyclargus thomasi bethunebakeri),ve 2) olgunlaşmamış gelişim süresi ve larva stadia sayısı gibi temel yaşam öyküsü bilgileri değerlendirmek için protokoller salıyoruz. Her iki yöntem de diğer ex situ koruma programları ile kullanılmak üzere uyarlanabilir.

Risk Kelebek Esir Yayılımı Programları Yaşam Tarihi Bilgi ve Etkili Ex Situ Koruma Teknikleri geliştirmek için

Burada iki protokolü tanımlıyoruz: birincisi, bal arısı pupalarını çıkarmak için bir yöntem de dahil olmak üzere, büyük miktarlarda bal arısı zarfsız virüs parçacıklarını yaymak, çıkarmak, saflaştırmak ve ölçmek ve ikincisi, yüksek oranda tekrarlanabilir, yüksek verimli bir kafes biyotahlili kullanarak viral enfeksiyonun etkilerini test etmek.

Bal Arılarının Oral Enfeksiyonu için Virüs Bakımından Zenginleştirilmiş İnokulum Hazırlanması (Apis mellifera)

Bu protokol, bal arısı kraliçelerini ve işçi bakıcılarını kontrollü, laboratuvar ortamında tarımsal kimyasallara maruz bırakmak ve ilgili yanıtlarını dikkatle izlemek için yöntemler belirleyerek tarımsal kimyasalların bal arısı (Apis mellifera) üremesini nasıl etkilediğinin anlaşılmasını geliştirmek için geliştirilmiştir.

ÇiftLeşme Bal Arısı Kraliçeleri için Tarımsal Kimyasal Riskin Değerlendirilmesi

Mevcut protokol, pestisitle kirlenmiş hükümleri yalnız arıların larvalarına, Osmia excavata'ya beslemek için bir yöntem açıklamaktadır. Prosedür, pestisitin yalnız arıların larvalarına ekotoksisitesini inceler.

Pestisitlerin yalnız arıların larvaları üzerindeki etkisinin değerlendirilmesi

Burada, sineklerin larvalarında ve dişilerinde besin kaynağı ve yumurtlama tercihlerini değerlendirmek için iki protokol detaylandırılmıştır. Bunlar, birbiriyle etkileşen iki faktöre sahip dört seçenekten oluşur: substrat tipi ve sıcaklık. Tahliller, larvaların besin kaynağı tercihinin ve dişiler için yumurtlama yeri tercihinin belirlenmesini sağlar.

Yaşam Öyküsü Seçimlerini Keşfetmek: Hava Sineği Larva ve Dişi Tercihleri için Etkileşimli Faktörler Olarak Sıcaklık ve Substrat Tipinin Kullanılması

Tarlada toplanan arıları güvenli bir şekilde işlemek için test edilmiş bir yöntem gösteriyoruz. Bu yöntem, örnekleme sırasında toplanan polenler aracılığıyla hızlı manipülasyon, tanımlama, genetik örnekleme ve bitki-böcek etkileşimlerinin doğrulanmasına olanak tanır. Kolayca uyarlanabilen bu yaklaşım, nadir böcek gruplarını incelemek için uygun maliyetli, ölümcül olmayan bir yol sunar.

Arıları tarlada hapsetmek ve güvenli bir şekilde işlemek için hızlı bir yöntem

Keşfedin yalnız arı larvalarını in vitro yetiştirme yöntemini ve fungisit muameleli polenin etkilerini. Bu teknik, polen mikrobiyomu ve ksenobiyotik stres faktörleri arasındaki ilişkileri araştırmak için kullanılır.

Vitro Yalnız arı yetiştirme: larva Risk faktörleri değerlendirmek için bir araç

Daha fazla video keşfet