3 boyutlu (3D)-yüksek işlem hacmi zebra balığı diziliyor embriyo için şablon basılı
1 Haziran 2018
Burada, tasarım ve yüksek işlem hacmi zebra balığı embriyo bir 96-şey plaka diziliyor için böyle şablon kullanımı ayrıntılı yordam tarafından ardından arraying bir zebra balığı embriyo imal için bir protokol mevcut.
Bu yöntem, Zebra balığı embriyo dizileme prosedürünü önemli ölçüde hızlandırabilir ve Zebra Balığı'nı yüksek verimli tarama için gerçekten uygun hale getirebilir. Bu tekniğin ana avantajı, Zebra balığı embriyolarını 96 veya 384 oyuklu bir matrise önceden dizmek için 3D baskılı bir şablonun kullanılmasıdır, bu da yüksek verimli bir plaka hazırlama sürecini kolaylaştırır. Yöntem fikri ilk olarak, modüler bir plakanın her bir oyuğuna tek tek embriyoları manuel olarak seçip seçerek nanopartiküllerin taranmasını gerçekleştirirken aklımıza geldi ve verimliliği artırmak istedik.
Tianyu'ya ek olarak, diğer yüksek lisans öğrencisi Yue Jiang da prosedürü gösterecek. Bu prosedüre, standart bir 96 kuyulu plakaya uyan on ikiye sekiz 96 kuyulu bir düzene sahip dizi şablonunun tasarımıyla başlayın. Metin protokolünde ayrıntılı olarak açıklandığı gibi.
Şablonu yazdırmak için 0,1 milimetre hassasiyete sahip bir 3D yazıcı kullanın. Şablonun bazı temel bileşenleri, tuzak odası, tuzak kuyusu, vakum odası ve hava giriş çıkışıdır. Zebra balığı embriyo yumurtlamasını gerçekleştirmek için önce erkek ve dişileri şeffaf bir plastik bölücü ile ayırın.
Ardından, yumurtlamadan bir gün önce çiftleşme kutusuna iki çift erkek ve dişi balık yerleştirin. Yumurtlama gününde, erkek ve dişi balıkları karıştırmak için sabahları bölücüleri çıkarın. Erkek ve dişi balıkları çıkarın ve ince gözenekli bir süzgeç kullanarak Zebra balığı embriyolarını toplayın.
Embriyoları 250 mililitre yumurta suyu ile yıkayın. Toplanan embriyoları Holtfreter Solüsyonu ile Petri kaplarına aktarın. Stereo mikroskop kullanarak ölü ve döllenmemiş embriyoları çıkarın.
Embriyoları 28,5 santigrat derecelik bir inkübatöre yerleştirin. Döllenmeden dört saat sonra embriyoları gözlemleyin ve ölü ve sağlıksız embriyoları çıkarın. Embriyolar artık bir sonraki adım için hazırdır.
Şablonu beş dakika kurutma fırınına koymadan önce 500 mililitre deiyonize su ile iki ila üç kez yıkayın. Ardından, alt hazneyi bir parça sızdırmazlık filmi ile bantlayın. Sızdırmazlık filmi ile kapatılmış haznede negatif basınç oluşturmak için şablonun altındaki hava çıkışından bir vakum pompası bağlayın.
Plastik bir transfer pipeti kullanarak, şablona yaklaşık 150 embriyo yerleştirin. Her bir oyukta bir embriyo sıkışana kadar tüm şablonu yatay olarak sallayın. Bu adımda, mevcut her Zebra balığı embriyosunu kontrol etmek ve emin olmak çok önemlidir.
Holtfreter arabelleği çok düşükse, şablonu sallayarak ek arabellek eklenebilir. Fazladan Holtfreter Solüsyonunu ve kuyucuklarda sıkışıp kalmayan embriyoları atın. Vakum pompasını kapatın ve bağlantısını kesin.
Standart bir 96 kuyulu plakayı şablona karşı baş aşağı yerleştirin ve her ikisini de aynı anda döndürün. Sıkışan tüm embriyoları şablondan 96 oyuklu plakaya aktarmak için şablonun altına dokunun veya hava çıkışını sıkıştırılmış bir gaz toz alma kabına bağlayın. Son olarak, sızdırmazlık filmini çıkarın ve şablonu ileride kullanmak üzere 500 mililitre deiyonize su ile yukarıdan aşağıya üç kez yıkayın.
Burada, şablon tarafından dizilmiş 96 oyuklu bir plakanın kısmi görüntüsü gösterilmektedir. Tersine, bu görüntü manuel olarak dizilmiş 96 oyuklu bir plakanın kısmi görüntüsünü göstermektedir. Embriyoların manuel ve dizilim şablonu yöntemleri ile kaplandıktan sonraki genel sağlık durumu burada görüntülenir.
Embriyoların yumurtadan çıkma, sağkalım ve malformasyon oranlarına dayanarak, her iki durumda da embriyoların genel sağlığı üzerinde önemli bir etki gözlenmemiştir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, uygun şekilde uygulanırsa sadece iki ila üç dakika içinde bir 96 veya 384 kuyulu plaka hazırlayacaktır. Geliştirilmesinden sonra, bu teknik, araştırmacıların bu model organizmanın yeni özelliklerinden tam olarak yararlanmalarının ve in vitro yüksek verimli taramayı gerçekten başarmalarının yolunu açtı.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu makale, yüksek verimli 96 kuyuluk plakalara dizilmesini sağlayan bir zebra balığı embriyo dizilişi şablonu tasarlama ve üretme protokolü sunar. Yöntem, zebra balığı embriyo dizilişi prosedürünün verimliliğini önemli ölçüde artırır.
Çalışmanın Ana Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Gelişimsel Biyoloji
- Yüksek Verimli Tarama
Arka Plan
- Zebra balıkları, şeffaf embriyoları nedeniyle biyolojik araştırmalarda yaygın olarak kullanılır.
- Yüksek verimli tarama uygulamaları için verimli embriyo dizilişi çok önemlidir.
- Geleneksel yöntemler manuel seçim içerir, bu da zaman alıcı olabilir.
- 3D baskılı bir şablonun kullanılması, verimliliği artırmak için yeni bir çözüm sunar.
Çalışmanın Amacı
- Yüksek verimli zebra balığı embriyo dizilişi için bir protokol geliştirmek.
- Etkili embriyo yerleşimi için 3D baskılı bir şablon kullanmak.
- Nanopartikül testi de dahil olmak üzere çeşitli uygulamalar için tarama sürecini geliştirmek.
Kullanılan Yöntemler
- 12'ye 8 düzenli bir 3D baskılı dizilişi şablonunun tasarımı.
- Zebra balığı embriyolarının 96 veya 384 kuyuklu bir matris içine ön dizilmesi.
- Lisans öğrencileri tarafından prosedürün gösterimi.
- Uygulama için ayrıntılı metin protokolü.
Ana Sonuçlar
- 3D baskılı şablon, hızlı ve verimli embriyo dizilişi sağlar.
- Manuel yöntemlere kıyasla önemli zaman tasarrufu.
- Yüksek verimli tarama yeteneklerini kolaylaştırır.
- Deneyler için plakalar hazırlamada etkinliği gösterilmiştir.
Sonuçlar
- Geliştirilen protokol, zebra balığı embriyo dizilişi verimliliğini artırır.
- 3D baskılı bir şablonun kullanılması önemli bir yeniliktir.
- Bu yöntem, yüksek verimli taramalarda bulunan araştırmacılar için yararlıdır.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
High throughput zebrafish embryo arraying is a critical bottleneck in phenotypic screening and early-stage compound evaluation. The introduction of a 3D-printed template with vacuum manipulation enables rapid, reproducible preparation of multi-well plates, directly supporting scalable screening workflows. This innovation enhances operational efficiency and supports portfolio-wide compound triage in discovery-stage biopharma R&D.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Accelerates preparation of zebrafish embryos for hypothesis-driven compound testing.
- Enables robust phenotypic screening by standardizing embryo placement across wells.
- Supports functional target validation by facilitating high-content, parallelized assays.
Screening & Assay Development
- Delivers rapid, reproducible arraying of embryos for multi-well plate-based screening.
- Improves assay throughput and consistency, reducing manual variability.
- Enables efficient scaling to 96- and 384-well formats for compound libraries.
Translational & Preclinical Research
- Supports disease-relevant phenotypic assays in zebrafish embryos for translational insights.
- Facilitates continuity from early discovery to preclinical model validation.
- Reduces operational barriers to implementing high-throughput in vivo screening platforms.
Pipeline & Workflow Integration
This 3D-printed template method integrates at the interface of early discovery and screening, enabling seamless transition from embryo collection to high-throughput phenotypic assays.
- Discovery Biology: Streamlines hypothesis testing by enabling rapid setup of parallel experimental conditions.
- Screening: Provides standardized, reproducible embryo arraying for quantitative screening outputs.
- Analytics: Supports consistent measurement of phenotypic endpoints across large sample sets.
- Translational Research: Bridges early discovery and preclinical validation by enabling scalable in vivo assays.
- Enterprise Reuse: Offers a reusable, adaptable platform for repeated high-throughput screening campaigns.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces biological variability in screening assays.
- Operational Value: Standardizes embryo arraying, enabling reproducibility and scalability.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision quality and resource allocation in early discovery.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization by enabling robust, high-throughput phenotypic data generation.
Implementation Considerations
- Requires access to precision 3D printing and basic vacuum instrumentation.
- Demands operator proficiency in embryo handling and template operation.
- Standardization of washing and transfer steps is critical for reproducibility.
- Adaptable to both 96- and 384-well plate formats for diverse screening needs.
- Template cleaning and maintenance are essential for sustained performance.
