Name: Pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi için kuyruk ucu kan örnekleme farelerde sık (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 58 s
Description: Öğrenin, kuyruk ucu kan örnekleme yöntemiyle sıçanlarda pulsatil luteinizan hormon salgısını değerlendirmeyi. Bu protokol, stresi en aza indirerek güvenilir hormonal ölçümler sağlar ve üreme nöroendokrinolojisi araştırmalarına katkıda bulunur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Drs. Jennifer Yang ve Alexander (Sasha) Kauffman yanı sıra çok sayıda yararlı ve önemli tartışmalar bu tekniği ile teknik destek için teşekkür ederiz. Serum hormon testleri tarafından Yang vd., 2017 üreme Ligand tahlil ve analiz çekirdek, Eunice Kennedy Shriver NICHD/NIH (NCTRI) Grant P50-HD28934 tarafından desteklenen araştırma için Virginia Üniversitesi Merkezi'nde yapıldı.
Araştırma Destek kaynakları: R01 NICHD 86100 (KMB), RBM T32 NICHD 007203 tarafından desteklenen.

Burada açıklanan yöntemi ulusal kurumları sağlık hayvan bakım ve kullanım yönergeleri ile anlaşma ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi San Diego Kaliforniya Üniversitesi tarafından yetkili olmamıştır.
1. İklimlendirme işleme için
<ol><li>İşlemi ele<ol>
<li>Yer fare Biyogüvenlik kabini kafesleri. Birinci fare kafesi ve Biyogüvenlik kabini içinde (Örneğin bir temiz kafes kapak) uygun bir yüzey üzerinde yer kaldırın.</li>
		<li>Yavaşça çalışma yüzeyinin üzerinde fareyi bir elin başparmak ve işaret parmağı ile kuyruk tabanı tutarak dizginlemek. O zaman, diğer elin başparmak ve işaret parmağı ile kuyruk ucuna tabanından kuyruk ventral yüzeyinde sıkıca inme. Bu 6 kez okşayarak tekrar (yani 1 set) ve fare için onun kafes.</li>
		<li>6 dk bekleyin ve 1.1.2 arasındaki adımları yineleyin. Not: böylece her fare işleme her gün yapılan toplam 24 kuyruk vuruşları alacaksınız toplam olarak, adım 1.1.2 4 kez (yani 4 Set 6 vuruş), fare yinelenir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Günlük kullanım sıklığı<ol>
<li>Beşten önce planlanan kan toplama günü iki hafta kadar fareler adım 1.1, beş gün haftada (fareler Cumartesi veya Pazar iklimlendirme son iki hafta kadar işlenmez) açıklandığı gibi işlemek.</li>
		<li>Deneysel tedavi örnekleme süresi boyunca herhangi bir ek işleme (Örneğin scruffing veya mayi enjeksiyon) eklerseniz, fareler için bu işleme etkinliği her işleme oturumu sırasında parkenizin. Not: enjeksiyon yordamlarına iklimlendirme için sahte enjeksiyon gerçekleştirmek için körelmenin bir iğne kullanın.</li>
		<li>Planlanan kan toplama gün önce iki hafta boyunca, haftada yedi gün 1. 1 ', açıklandığı gibi fareler başa.</li>
		<li>En az iki hafta önce planlanan kan toplama günü fare örnekleme sırasında fareler kesintileri en aza indirmek için çiftler halinde ev.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. kan toplama boru hazırlanması
<ol><li>Vericiyi LH tahlil arabellekte bir cam şişe hazırlayın: %0,2 sığır serum albümin ve % 0.05 Ara-20 PBS [0.2 g KCl, 8 g NaCl, 1.44 g Na2HPO4 (susuz), 0,24 g KH2PO4, 1 L, pH 7.4, filtre ve basınçlı kap Ultrasaf Su] , mağaza 4 ° C'de 1 Not: hazırlanacak NEMS LH tahlil arabellek hacmi tabanlı örnekleri ve (2.2 & tartışma) aşağıda belirtildiği şekilde örnek başına birim sayısı hesaplanabilir</li>
	<li>Kan toplama tüpler (0,6 mL microcentrifuge tüpler) hazırlayın. Etiket tüpleri ve aliquot tahlil arabellek (57 µL tampon tüp; başına dikkat edin, bu birimin toplanan kan kan hacmi veya istenen arabelleğine kan oranı bağlı olarak farklı olabilir). Tüpler örnekleme öncesinde gün hazır olun, 4 ° C'de depolayın</li>
</ol>3. kan toplama
<ol><li>Kan toplama malzemeleri hazırlanması.<ol>
<li>Biyogüvenlik kabini kullanıma hazırlamak ve başlık veya bir sepeti aşağıdaki belgeleri düzenlemek: 10 µL (3 µL veya istenen kan toplama hacmi ayarlı), pipet ipuçları pipet, atık kutusu için kullanılan pipet ipuçları, Zamanlayıcı, çıktının hayvan sayıları ve örnek numaraları () ile örnekleme veya hayvan sorunları ile ilgili notlar için) kova kan toplama tüpler, makas ve küçük gazlı bez (2 "x 2") ile buz. Çünkü fareler rahatsız bir sesli alarm yok Not: "say" işlev laboratuvar zamanlayıcıyla yararlıdır</li>
		<li>Örnekleme sırasında doğru fare hızlı kimlik ile yardımcı olmak için her fare işaretçisini (temel) kuyruğunu işaretlemek için kalıcı bir kalem kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kuyruk ve öncesi kan toplama hazırlanması kırpma.<ol>
<li>45 dk kan toplama başlamadan önce ilk fare kendi kafesinden çıkarmak ve yüzeyinde (temiz kafes kapak iyi çalışıyor) bir uygun Biyogüvenlik içinde kabine yerleştirin.</li>
		<li>1-2 mm aseptik hazırlık takip fare kuyruk ucu kaldırmak için keskin, steril makas kullanın (yani alkol ve betadin ile fırçalayın). Not: Bu uyanık hayvanlarda nazik kısıtlama veya isoflurane anestezi altında yapılabilir.  Ayrıca, analjezi yerel IACUC tavsiyesi takip sağlanabilir.</li>
		<li>Dikkatle fare kuyruğu yukarıda açıklandığı gibi inme (1.1.2; 1-2 vuruş genellikle yeterlidir) damlacık kan formları kuyruk ucuna kadar.</li>
		<li>Bir pipet temiz bir ucu ile kuyruk uç--dan 3 µL kan toplamak ve kan pipet ucuyla atmak için kullanın.</li>
		<li>Fareyi onun kafes için göndermeden önce kan akışını durdurdu emin olun. Gerekirse, steril gazlı bezle hafif basınç uygulayın.</li>
		<li>3.2.1 - 3.2.5 tüm fareler için yineleyin. Sonraki kan örnekleri fare kuyruk kuyruk ucu kan formları bir damlacık kadar sıkıca okşayarak tarafından toplanabilir. Not: Eğer kan damlacık sonra sert vuruş oluşturmak değil, kuyruk salin batırılmış bir gazlı bez pad ile sildi. Pıhtı forma daha büyük olasılıkla daha az sıklıkla örnekleme sırasında (yani > 15 dk aralıklarla). Pıhtı damar temizlenir sonra örnekleme devam edebilirsiniz.</li>
		<li>Bu ön kan toplama hazırlık döneminde her 6 dakikada yaklaşık 45 dakika için yukarıda açıklandığı gibi her fare üzerinden 3 µL kan toplamaya devam. Kan ve Pipet Ucu atın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kan örnekleme<ol>
<li>Yukarıda açıklandığı gibi kuyruk ucu 3 µL kan toplamak. Tüm 3 µL örnek pipet ucu (olmadan kabarcıklar veya yatak kirlenme) içine alınır emin olmak için dikkatli. Etiketli bir tüp tahlil arabellekte içine kan örneği çıkarma. INVERSION tarafından mix ve buz için tüp dönmek.</li>
		<li>Fareyi onun kafes için göndermeden önce kan akışını durdurdu emin olun. Gerekirse, steril gazlı bezle hafif basınç uygulayın.</li>
		<li>3.3.1 - 3.3.2 için her fare, her 6 dk önceden belirlenmiş örnekleme süresi için yineleyin. Her hayvan için sıkıntı (örneğin kısmen kapalı göz kapakları, kambur konum [başka bir tedavi tarafından neden olduğu değil] veya işleme yanıt eksikliği) belirtileri izlemek ve örnekleme, sonlandırmak. Not: Davranış sıkıntı veya örnekleme sona ermesi gerektiren başka komplikasyonlara yol son derece seyrek bizim laboratuvar olarak ortaya çıkar.</li>
		<li>Hayvan are değil euthanized kan örnekleme takip, kuyruk ucundan kan akımı tamamen durdurdu emin. Her hayvanın kafes (veya değişiklik kafesleri) içinden dökülmüş kan silin ve hayvan kafesleri konut raf dönün.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. örnek işleme ve analiz
<ol><li>-20 ° C'de kan örnekleri analiz kadar saklayın. Not: Tam kan örneklerinde tahlil arabellekte seyreltilmiş LH denetlesinler; hiçbir ayrım sera veya plazma depolama veya analiz önce gereklidir.</li>
	<li>Tahlil kan örnekleri vericiyi ELISA tarafından daha önce1 ve rapor değerleri ng/ml tam kan tahlil arabellekte örnek hacminin seyreltme için düzeltme aşağıdaki açıklanan.</li>
	<li>LH bakliyat veri kümesi tanımlayın. Hesaplamak ve kötü darbe genlik ve darbe frekansını (arası nabız aralığı) gerektiği veya veri kümesi için karşılaştırın. Not: Yayımlanmış ölçüt13,14 ve programları, LH darbeleri tespit için15,16 bulunmaktadır.</li>
</ol>

<ol><li>Steyn, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+methodology+for+and+assessment+of+pulsatile+luteinizing+hormone+secretion+in+juvenile+and+adult+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Development of a methodology for and assessment of pulsatile luteinizing hormone secretion in juvenile and adult male mice.</a> Endocrinology. 154 (12), 4939-4945 (2013).</li>
<li>McArdle, C. A., Roberson, M. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcArdle%2C+CA+%22Knobil+and+Neill%27s+Physiology+of+Reproduction%22">Knobil and Neill's Physiology of Reproduction</a>. Plant, T. M., Zeleznik, A. J. , (2015).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapy. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Steiner, R. A., Bremner, W. J., Clifton, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+luteinizing+hormone+pulse+frequency+and+amplitude+by+testosterone+in+the+adult+male+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Regulation of luteinizing hormone pulse frequency and amplitude by testosterone in the adult male rat.</a> Endocrinology. 111 (6), 2055-2061 (1982).</li>
<li>Moore, A. M., Prescott, M., Marshall, C. J., Yip, S. H., Campbell, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+a+robust+arcuate+GABAergic+input+to+gonadotropin-releasing+hormone+neurons+in+a+model+of+polycystic+ovarian+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+National+Academy+of+Science+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Enhancement of a robust arcuate GABAergic input to gonadotropin-releasing hormone neurons in a model of polycystic ovarian syndrome.</a> Proceedings of National Academy of Science U S A. 112 (2), 596-601 (2015).</li>
<li>Czieselsky, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulse+and+Surge+Profiles+of+Luteinizing+Hormone+Secretion+in+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Pulse and Surge Profiles of Luteinizing Hormone Secretion in the Mouse.</a> Endocrinology. 157 (12), 4794-4802 (2016).</li>
<li>Campos, P., Herbison, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetic+activation+of+GnRH+neurons+reveals+minimal+requirements+for+pulsatile+luteinizing+hormone+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+National+Academy+of+Science+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Optogenetic activation of GnRH neurons reveals minimal requirements for pulsatile luteinizing hormone secretion.</a> Proceedings of National Academy of Science U S A. 111 (51), 18387-18392 (2014).</li>
<li>Yang, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Psychosocial+Stress+Inhibits+LH+Pulsatility+and+Kiss1+Neuronal+Activation+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Acute Psychosocial Stress Inhibits LH Pulsatility and Kiss1 Neuronal Activation in Female Mice.</a> Endocrinology. 158 (11), 3716-3723 (2017).</li>
<li>Clarkson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definition+of+the+hypothalamic+GnRH+pulse+generator+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+National+Academy+of+Science+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Definition of the hypothalamic GnRH pulse generator in mice.</a> Proceedings of National Academy of Science U S A. 114 (47), E10216-E10223 (2017).</li>
<li>Lewis, V. J., Thacker, W. L., Mitchell, S. H., Baer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technic+for+obtaining+blood+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">A new technic for obtaining blood from mice.</a> Laboratory Animal Science. 26 (2 Pt 1), 211-213 (1976).</li>
<li>Abatan, O. I., Welch, K. B., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+saphenous+venipuncture+and+modified+tail-clip+blood+collection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+of+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Evaluation of saphenous venipuncture and modified tail-clip blood collection in mice.</a> Journal of the American Association of Laboratory Animal Science. 47 (3), 8-15 (2008).</li>
<li>Durschlag, M., Wurbel, H., Stauffacher, M., Von Holst, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+blood+collection+in+the+laboratory+mouse+by+tail+incision--modification+of+an+old+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Repeated blood collection in the laboratory mouse by tail incision--modification of an old technique.</a> Physiology and Behavior. 60 (6), 1565-1568 (1996).</li>
<li>Goodman, R. L., Karsch, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsatile+secretion+of+luteinizing+hormone%3A+differential+suppression+by+ovarian+steroids%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Pulsatile secretion of luteinizing hormone: differential suppression by ovarian steroids.</a> Endocrinology. 107 (5), 1286-1290 (1980).</li>
<li>Clarke, I. J., Cummins, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+gonadotropin-releasing+hormone+pulse+frequency+associated+with+estrogen-induced+luteinizing+hormone+surges+in+ovariectomized+ewes%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Increased gonadotropin-releasing hormone pulse frequency associated with estrogen-induced luteinizing hormone surges in ovariectomized ewes.</a> Endocrinology. 116 (6), 2376-2383 (1985).</li>
<li>Vidal, A., Zhang, Q., Medigue, C., Fabre, S., Clement, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DynPeak%3A+an+algorithm+for+pulse+detection+and+frequency+analysis+in+hormonal+time+series%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">DynPeak: an algorithm for pulse detection and frequency analysis in hormonal time series.</a> PLoS One. 7 (7), e39001(2012).</li>
<li>Merriam, G. R., Wachter, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Algorithms+for+the+study+of+episodic+hormone+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Algorithms for the study of episodic hormone secretion.</a> American Journal of Physiology. 243 (4), E310-E318 (1982).</li>
<li>Xie, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Deletion+of+Ghrelin-O-Acyltransferase+on+the+Pulsatile+Release+of+Growth+Hormone+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Effect of Deletion of Ghrelin-O-Acyltransferase on the Pulsatile Release of Growth Hormone in Mice.</a> Journal of Neuroendocrinology. 27 (12), 872-886 (2015).</li>
<li>Koch, C. E., Leinweber, B., Drengberg, B. C., Blaum, C., Oster, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+circadian+rhythms+and+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Stress%22%5BJournal%5D)">Interaction between circadian rhythms and stress.</a> Neurobiology of Stress. 6, 57-67 (2017).</li>
<li>Tuli, J. S., Smith, J. A., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corticosterone%2C+adrenal+and+spleen+weight+in+mice+after+tail+bleeding%2C+and+its+effect+on+nearby+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal%22%5BJournal%5D)">Corticosterone, adrenal and spleen weight in mice after tail bleeding, and its effect on nearby animals.</a> Laboratory Animal. 29 (1), 90-95 (1995).</li>
<li>United States Department of Agriculture. Animal Welfare Inspection Guide. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.aphis.usda.gov/animal_welfare/downloads/Animal-Care-Inspection-Guide.pdf">https://www.aphis.usda.gov/animal_welfare/downloads/Animal-Care-Inspection-Guide.pdf</a> (2017).</li>
<li>Steyn, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+method+for+the+determination+of+pulsatile+growth+hormone+secretion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Development of a method for the determination of pulsatile growth hormone secretion in mice.</a> Endocrinology. 152 (8), 3165-3171 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada tarif biz pulsatil LH salgılanmasını farelerde değerlendirilmesi için tam kan kuyruk ucu örnekleri sık sık kan toplanması için bir iletişim kuralı. Bu iletişim kuralı örnekleri akut değişiklikler psikososyal stres maruz takip pulsatil LH salgılanmasını algılanması için toplama sağlar ve LH darbeleri altında diğer akut veya kronik manipülasyonlar değerlendirilmesi için uygundur.
Yükleme-boşaltma kritik bileşenidir LH bakliyat güvenilir ve sağlam profilleri elde etmek için bu protokolü ik...

Erbezi işlevi memelilerde gonadotropin salgısını, luteinizan hormon (LH) ve folikül uyarıcı hormon, hipofiz bezi üzerine bağlıdır. Gonadotropins yanıt-e doğru hipotalamik gonadotropin - releasing hormon (GnRH) salgılanmasını pulsatil veya akım desende salgılanan. Sentez ve LH ve FSH salgılanmasını molekülleri hipotalamik GnRH, gonad steroid hormonlar ve aktivin-inhibin-follistatin sisteminin yanı sıra çok sayıda dahil olmak üzere çeşitli endokrin, parakrin ve otokrin eylem ile düzenlenmektedir stres ve enerji dengesi dahil olmak üzere fizyolojik koşullar. 2
LH pulsatil desen kan yaklaşık üstel eleme tarafından takip periferik kana LH oldukça ani bir deşarj doğar. Önemli her LH deşarj frekans ve genlik LH yanıtının Özellikler desen, ikisi de, kısmen, GnRH. son sürüme hipofiz hipotalamik portal kan ölçümü için toplama zorluk tarafından dikte pulsatil GnRH, örnekleme ve LH ölçümü bir proxy olarak hipofiz gonad hipotalamik eksen GnRH düzenlenmesi için kullanılır. Bu nedenle, önemli bilgileri tek bir örnek belirlenemiyor LH bakliyat genliği ve sıklığı kodlanmış olduğunu.
Pulsatil LH salgılanmasını Analizi tarihsel olarak büyük kan hacmi ve sık sık kan örnek koleksiyon için tolerans nedeniyle büyük memeliler (insan, primatlar ve koyun) için sınırlı olmuştur. Kemirgenler, sık sık kan örnekleme fare sınırlıydı ve atriyal kateter kalıcı yolu ile elde. 3 , 4 nispeten düşük maliyet ve genetik kullanılabilirliği (Örneğin cre-lox, CRISPR) ve karmaşık sinir devresi (Örneğin optogenetics, chemogenetics) manipülasyon yapmak fareler bir çekici model organizma; Ancak, sık sık kan örnekleri kazanma ve LH konsantrasyonu daha sonraki analiz kadar son zamanlarda, zor olduğu kanıtlandı. Bu anıtsal görev Steyn ve iş arkadaşları tarafından öncülük. 1 beri o zaman, birkaç labs sık kan örnekleme ve pulsatil LH salgılanmasını deneysel paradigmalar çeşitli değerlendirmek için Ultra-duyarlı LH deneyleri kullanmaya başladı. 5 , 6 , 7 , 8 , 9 bu fareler birden fazla kan örnekleri toplama pratik bir yöntem takip için en az 40 yıl10 yol boyunca yapılan birden fazla iyileştirmeler ile sürdürülen olmuştur belirtilmelidir. 11 , 12
Değerlendirmesi LH darbe desenleri (yani frekans ve genlik), bazal gonadotropin salgısını genetik olarak uysal bu hayvan modelinde izlenmesinde önemli bir arıtma gösterir. Geleneksel olarak, LH konsantrasyonu farelerde tek kan örneği belirlenmiştir. LH konsantrasyonu doğal olarak her darbe sırasında dalgalanıyor çünkü tek nokta örneklerinin bir zayıflık bir son derece değişken veri kümesidir. İzole ölçümleri doğal olarak kritik bilgi LH darbe salgı desenleri tarafından aktarılmaktadır özledim başka bir zayıflıktır. Böylece, özgürce davranmaya içinde sık sık kan örnekleri toplamak için bir yöntemi (dışında nazik işleme sırasında örnekleme) sınırsız fareler gelişmiş bilgi sağlamak ve pulsatil hormon düzenleme araştıran birçok laboratuvarlar için yararlı.
Burada, biz sık topluluğu için bir iletişim kuralı tanımlamak (her 6 dk) kan örnekleri uyanık, yasayı, fareler. Önemlisi, biz bir işleme dahil hangi öncesi ve sonrası değerlendirme akut bir meydan okuma için bir süre kararlı, tam kan örneklerinde pulsatil LH salgılanmasını sağlam ve sürekli tespiti üzerine toplanan için izin veren iklimlendirme Protokolü psiko-sosyal stres immobilizasyon ve kısıtlama yanıt gibi. Etkili bir tahlil LH konsantrasyonu tam kan örneklerinden için daha önce açıklanan; 1 bu protokolü LH nabız ölçümü için kan örnekleri toplamak için bir yöntemi üzerinde duruldu.

<table><tbody><tr><td>Biosaftey dolap</td><td>Lab Products Inc</td><td>L / FB</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma</td><td>A5403</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4 (susuz)</td> <td>Sigma</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Ultra saf su</td><td>Millipore</td><td></td><td>Arıtılmış ve filtrelenmiş su</td></tr><tr><td>Süpürge Kemirgen Kısıtlama Cihazı</td><td>Harvard Aparatı</td><td>52-0460</td><td>Kan alımı için gerekli değildir, ancak temsili verilerin toplanmasında kullanılmıştır.</td></tr><tr><td>DynPeak</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0039001</td></tr></tbody></table>

pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi için kuyruk ucu kan örnekleme farelerde sık

Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion

Birçok endokrin sistemlerinde, dolaşımdaki faktörler veya hormonlar sürekli serbest bırakılmaz, ancak yanıt releasing faktör olarak ayrık bir darbe olarak salgılanan. Tek-noktaya örnekleme önlemler tamamen pulsatil hormonlarının normal fizyolojik koşullar altında veya bozukluk koşulları sırasında salgı desen biyolojik önemini anlamak yetersizdir. Luteinizan hormon (LH) anterior hipofiz gonadotrope hücreleri tarafından sentezlenen ve sık sık kan örnekleri topluluğu için nabız değerlendirme gerektiren pulsatil desen salgılanan. İçin bir teknik gelişme sık düşük hacimli örnek koleksiyon, başlangıçta Steyn ve meslektaşları tarafından açıklanan ve bu kadar yüksek-duyarlı LH tahlil gelişimi nedeniyle son zamanlarda, farelerde mümkün olmamıştır. 1 burada tarif biz sık periferik kan örnek koleksiyonundan pulsatil LH salgılanmasını algılamaya yeterli işleme iklimlendirme ile fareler için bir iletişim kuralı. Geçerli protokol LH sağlam ve sürekli darbeleri değerlendirilmesi üzerinde birden fazla saat izin veren bir genişletilmiş iklimlendirme dönemi ayrıntıları. Bu iletişim kuralı, kuyruk ucu kırpılır ve kan el bir pipet kullanarak kuyruk toplanır. Gonadectomized farelerde pulsatil LH değerlendirmesi için seri örneklerdir önemlisi, her 5-6 min 90-180 dakika süreyle toplanan kan toplanması ve LH sağlam darbeleri ölçülmesi yeterli işleme verilen uyanık, özgürce davranmaya farelerde başarılı İklimlendirme ve çevre stresler en aza indirmek için çaba. Yeterli iklimlendirme kan toplama önce 4-5 hafta içinde elde edilebilir. Bu iletişim kuralı tam kan örnekleri pulsatil LH salgılanmasını desenleri değerlendirmesi Mouse, nöroendokrin araştırma için güçlü bir hayvan modeli birden çok saat üzerinde toplama sağlamak için metodoloji gelişmeler vurgulamaktadır.

Temsilcisi LH darbe 4 fareler desenlerini Şekil 1 ' de (veri Yang vd., 2017 yeniden basıldı) gösterilir. LH bir akut psiko-sosyal stres sınama yanıt belirlemek için sık sık kan örneklerinde ölçüldü. Yetişkin kadın C57/Bl6 fareler Ovariektomili ve bu iletişim kuralı için sık sık kan toplama içinde ayrıntılı olarak ele alınır. Kan örnekleri ilk 90 dk LH pulsatil salgı bir ön arıtma temel kurmak için tüm hayvanlar için toplanmıştır. İkinci 90 dk örnekle...

Burada kontrolsüz farelerde sık örnek koleksiyon için bir kuyruk ucu kan örnekleme iletişim kuralı mevcut. Bu yöntem, pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi desenleri yararlıdır ve dolaşımdaki diğer faktörleri analiz için adapte.

Pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi için kuyruk ucu kan örnekleme farelerde sık

In many endocrine systems, circulating factors or hormones are not released continuously, but are secreted as a discrete pulse in response to a releasing ...

Sık kuyruk ucu kan örneklemesinin genel amacı, uyanık, anestezi uygulanmamış ve normal davranan farelerde LH olarak adlandırılan pulsatil luteinize edici hormon sekresyonunun ölçümü için tam kan örnekleri elde etmektir. Bu yöntem, farelerde luteinize edici hormon pulsatil sekresyonunu değerlendirmek için güvenilir bir protokol sağlayarak üreme nöroendokrinolojisi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, sık kullanım ve alışkanlığın, akut veya kronik deneysel tedavileri takiben sağlam ve güvenilir luteinize edici hormon nabız ölçümleri sağlamasıdır.Kan alımından önceki beş hafta boyunca, fareleri pazartesiden cumaya günlük olarak kullanın. Son iki haftada, fareleri Cumartesi ve Pazar günleri de ele alın. Fare işleme rejimini bir biyo-güvenlik kabininde gerçekleştirin.İlk fareyi kafesinden çıkarın ve kabin içinde uygun bir yüzeye yerleştirin. Kuyruğunun tabanını tutarak fareyi bu yüzeyde nazikçe tutun. Sonra, diğer elinizle kuyruğun ventral yüzeyini tabandan uca doğru sıkıca vurun.Bunu toplam altı kez yapın ve ardından fareyi kafesine geri koyun. Bu, bir işleme seti oluşturur. Şimdi altı dakika bekleyin ve başka bir işleme seti gerçekleştirin.Bu düzene kümeler arası aralıklarla devam ederek, işleme oturumu başına dört işleme kümesi gerçekleştirin. Toplamda bu, seans başına yirmi dört kuyruk vuruşu sağlar. Örnekleme süresi boyunca deneysel tedaviler, scruffing veya intraperitoneal enjeksiyon gibi herhangi bir ek işleme yöntemini içerecekse, işleme seansları sırasında fareleri bu tür işleme aktivitesine de alıştırın.Planlanan kan alma gününden iki hafta önce, örnekleme döneminde bozulmalarını en aza indirmek için fareleri çiftler halinde barındırın. Kan alımları için kan saklamak için 0.6 mililitrelik mikro santrifüj tüpleri hazırlayın. Tüpleri etiketleyin ve üç mikrolitre kan alımı için her tüpe elli yedi mikrolitre ACES tamponu ekleyin.Hazırlandıktan sonra tüpleri dört santigrat derecede saklayın. Biyo-güvenlik kabininde aşağıdaki öğeleri hazır bulundurun: pipet uçları, bir çöp kutusu, bir zamanlayıcı, bir deneyim kaydı, kan alma tüplerini içeren bir buz kovası, keskin, steril makas, kalıcı bir işaretleyici ve küçük bir gazlı bez. Kan alımına başlamadan kırk beş dakika önce, ilk fareyi kafesinden çıkarın ve uygun bir yüzeye yerleştirin.Ardından, bu fareyi kafes ortağından hızlı bir şekilde ayırt etmek için kuyruğu işaretleyin. Şimdi kuyruğun ucunun bir ila iki milimetresini çıkarmak için makas kullanın. Bu kuyruğu kırptıktan sonra, ucunda bir damla kan oluşana kadar kuyruğu dikkatlice okşayın.Daha sonra üç mikrolitre kan toplayın ve hem kanı hem de ucunu çöp kutusuna atın. Ardından, kan akışının durduğundan emin olun. Gerekirse, steril gazlı bezle hafif baskı uygulayın.Ardından fareyi altı dakika boyunca kafesine geri koyun. Şimdi kırk beş dakika boyunca altı dakikalık aralıklarla, fareden ek kan örnekleri almak için kuyruğu sıkıca okşayın. Bir kan damlası oluşmazsa, kan pıhtısını temizlemeye yardımcı olmak için kuyruğu tuzlu suya batırılmış bir gazlı bezle kurulayın.Ön örnekleme döneminde, tüm kan alikotlarını atın. Kırk beş dakika sonra örnekleme periyoduna başlayın. Numune alırken, üç mikrolitre kanı bir toplama tüpüne aktarın, tüpü ters çevirerek karıştırın ve tekrar buzun üzerine koyun.Şimdi gerektiği kadar örneklemeye devam edin. Bir kez sonra farelere ötenazi yapın veya kuyruk kan akışının tamamen durduğundan emin olun ve ardından farelere temiz bir kafes sağlayın. Daha sonra kan örneklerini bir saklama kutusuna aktarın ve örnekleri analiz edilinceye kadar eksi yirmi santigrat derecede saklayın.Luteinize Edici Hormon veya LH, akut psikososyal stres sorununa yanıtı belirlemek için sık kan örneklerinde ölçüldü. Yetişkin dişi C57 siyah altı fare yumurtalıktan çıkarıldı ve LH pulsatil sekresyonunun ön tedavi temelini oluşturmak için doksan dakika boyunca kan örnekleri toplandı. Doksan dakikalık örnekleme sırasında stres tedavisi için deney hayvanları kemirgen kısıtlama cihazlarına konuldu ve yeni bir kafese taşınırken, kontroller ev kafeslerinde kaldı ve kısıtlanmadı.Analiz, kontrol hayvanlarının tüm örnekleme süresi boyunca net ve kesin LH darbelerine sahip olduğunu gösterdi. Buna karşılık, kısıtlamanın psikososyal stresi, deney grubundaki pulsatil LH sekresyonunu hızlı ve açık bir şekilde baskıladı. Bu tekniği kullanmaya hazırlanırken, fareleri strese sokabilecek ve pulsatil LH sekresyonunu kesintiye uğratabilecek gürültü veya diğer araştırmacılar tarafından yapılan kesintiler gibi çevresel rahatsızlıkları en aza indirmeyi unutmamak önemlidir.Chen laboratuvarında Dr. Stein ve diğerleri tarafından geliştirilmesinden bu yana, bu teknik, nöroendokrinoloji alanındaki araştırmacıların, karmaşık moleküler ve genetik araçların pratik ve mevcut olduğu bir türde LH nabız regülasyonunu keşfetmelerinin önünü açmaya başladı.

frequent-tail-tip-blood-sampling-mice-for-assessment-pulsatile

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video otoimmün hipofizitis SJL fareler ve histopatoloji ile şiddetini değerlendirmek için nasıl ikna etmek için nasıl gösterir.

SJL Farelerde Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon

Bu videoda, periferik kanı toplamak için bir fare modelinde kuyruk kesme prosedürünü gösteriyoruz. Toplanan kan daha sonra daha ileri deneyler için kullanılabilecek ayrı plazma için santrifüjlemeye tabi tutulur.

Periferik Kan Alma ve Plazma İzolasyonu için Bir Fare Kuyruğu Snip Prosedürü

Kan örnekleri, in vivo fizyolojik durumların veya hastalıkların biyobelirteçlerini değerlendirmek için yararlıdır. Burada, sıçandaki lateral kuyruk damarından kan örneği almak için metodolojiyi açıklıyoruz. Bu yöntem, minimum ağrı ve invazivlik ile hızlı numuneler sağlar.

Rat Yanal Kuyruk Ven gelen Kan Örnekleme

Biz bir yalın PCOS gibi fare modeli ile PCOS ve belgili tanımlık çoluk çocuk bu PCOS benzeri baraj üzerinden Patofizyoloji çalışmaya dihidrotestosteron Pelet gelişimi tanımlamak.

Polikistik over sendromu çalışmaya Hyperandrogenic fare modeli

Bu çalışmada kan örnekleme kuyruk ven gözlük büyüteç ile bir vakum ekstraksiyon tüp sistemi kullanan farelerde gelen raporlar. Bizim Yöntem uygulama için kolay ve tekrar kan örnekleme farelerde için kullanılabilir.

Kuyruk damarlar bir vakum kan toplama sistemi ve gözlük büyüteç ile sigara anestezi farelerin koleksiyonundan değiştirilmiş kan

Bu makale, farelerde lipid metabolizmasını değerlendirmek için üç kolay ve erişilebilir test sağlar.

Farelerde Tüm Vücut Lipid Taşıma Kapasitesinin Değerlendirilmesi

Bu makalede, farelerde anksiyete benzeri davranışları azaltarak rutin elleçlemeyi kolaylaştıran ve mevcut iki ilgili teknikle (tünel ve kuyruk elleçleme) ayrıntıları sunan 3D işleme tekniği açıklanmaktadır.

Farelerde Stresi Azaltmak için Elleçleme Teknikleri

Bu çalışma, polikistik over sendromu fare modelinde hepatik glikoz üretiminin hem oruç hem de glikoz bakımından zengin durumlarda kuyruk damarı yoluyla stabil bir izotopik glikoz izleyici kullanılarak doğrudan ölçülen ölçümünü açıklar.

Polikistik Over Sendromu Fare Modelinde Hepatik Glikoz Üretiminin Değerlendirilmesi

Luteinize edici hormon (LH) pulsatilitesi, üreme fonksiyonunun ayırt edici özelliğidir. Seri otomatik kan alımına bağlı belirli nöronal popülasyonların uzaktan aktivasyonu için bir protokol açıklıyoruz. Bu teknik, bilinçli serbest hareket eden ve rahatsız edilmemiş hayvanlarda zamanlanmış hormonal modülasyona, çoğullamaya ve LH seviyeleri üzerindeki manipülasyon etkilerini en aza indirmeye izin verir.

Farelerde Dolaşımdaki Luteinize Edici Hormonu İndüklemek ve Ölçmek için Otomatik Kan Örneklemesi ile Birleştirilmiş Uzaktan Nöronal Aktivasyon

Protokol, indüksiyon kemoterapisine yanıtın dinamiklerine dayalı olarak akut lenfoblastik löseminin nüksetmesine neden olan bir fare modelini tanımlamayı amaçlamaktadır.

Akut Lenfoblastik Lösemi için İndüksiyon Kemoterapisine Nüks Löseminin Murin Modeli

Öğrenin, kuyruk ucu kan örnekleme yöntemiyle sıçanlarda pulsatil luteinizan hormon salgısını değerlendirmeyi. Bu protokol, stresi en aza indirerek güvenilir hormonal ölçümler sağlar ve üreme nöroendokrinolojisi araştırmalarına katkıda bulunur.

Pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi için kuyruk ucu kan örnekleme farelerde sık

Daha fazla video keşfet