Pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi için kuyruk ucu kan örnekleme farelerde sık

Sık kuyruk ucu kan örneklemesinin genel amacı, uyanık, anestezi uygulanmamış ve normal davranan farelerde LH olarak adlandırılan pulsatil luteinize edici hormon sekresyonunun ölçümü için tam kan örnekleri elde etmektir. Bu yöntem, farelerde luteinize edici hormon pulsatil sekresyonunu değerlendirmek için güvenilir bir protokol sağlayarak üreme nöroendokrinolojisi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, sık kullanım ve alışkanlığın, akut veya kronik deneysel tedavileri takiben sağlam ve güvenilir luteinize edici hormon nabız ölçümleri sağlamasıdır.

Kan alımından önceki beş hafta boyunca, fareleri pazartesiden cumaya günlük olarak kullanın. Son iki haftada, fareleri Cumartesi ve Pazar günleri de ele alın. Fare işleme rejimini bir biyo-güvenlik kabininde gerçekleştirin.

İlk fareyi kafesinden çıkarın ve kabin içinde uygun bir yüzeye yerleştirin. Kuyruğunun tabanını tutarak fareyi bu yüzeyde nazikçe tutun. Sonra, diğer elinizle kuyruğun ventral yüzeyini tabandan uca doğru sıkıca vurun.

Bunu toplam altı kez yapın ve ardından fareyi kafesine geri koyun. Bu, bir işleme seti oluşturur. Şimdi altı dakika bekleyin ve başka bir işleme seti gerçekleştirin.

Bu düzene kümeler arası aralıklarla devam ederek, işleme oturumu başına dört işleme kümesi gerçekleştirin. Toplamda bu, seans başına yirmi dört kuyruk vuruşu sağlar. Örnekleme süresi boyunca deneysel tedaviler, scruffing veya intraperitoneal enjeksiyon gibi herhangi bir ek işleme yöntemini içerecekse, işleme seansları sırasında fareleri bu tür işleme aktivitesine de alıştırın.

Planlanan kan alma gününden iki hafta önce, örnekleme döneminde bozulmalarını en aza indirmek için fareleri çiftler halinde barındırın. Kan alımları için kan saklamak için 0.6 mililitrelik mikro santrifüj tüpleri hazırlayın. Tüpleri etiketleyin ve üç mikrolitre kan alımı için her tüpe elli yedi mikrolitre ACES tamponu ekleyin.

Hazırlandıktan sonra tüpleri dört santigrat derecede saklayın. Biyo-güvenlik kabininde aşağıdaki öğeleri hazır bulundurun: pipet uçları, bir çöp kutusu, bir zamanlayıcı, bir deneyim kaydı, kan alma tüplerini içeren bir buz kovası, keskin, steril makas, kalıcı bir işaretleyici ve küçük bir gazlı bez. Kan alımına başlamadan kırk beş dakika önce, ilk fareyi kafesinden çıkarın ve uygun bir yüzeye yerleştirin.

Ardından, bu fareyi kafes ortağından hızlı bir şekilde ayırt etmek için kuyruğu işaretleyin. Şimdi kuyruğun ucunun bir ila iki milimetresini çıkarmak için makas kullanın. Bu kuyruğu kırptıktan sonra, ucunda bir damla kan oluşana kadar kuyruğu dikkatlice okşayın.

Daha sonra üç mikrolitre kan toplayın ve hem kanı hem de ucunu çöp kutusuna atın. Ardından, kan akışının durduğundan emin olun. Gerekirse, steril gazlı bezle hafif baskı uygulayın.

Ardından fareyi altı dakika boyunca kafesine geri koyun. Şimdi kırk beş dakika boyunca altı dakikalık aralıklarla, fareden ek kan örnekleri almak için kuyruğu sıkıca okşayın. Bir kan damlası oluşmazsa, kan pıhtısını temizlemeye yardımcı olmak için kuyruğu tuzlu suya batırılmış bir gazlı bezle kurulayın.

Ön örnekleme döneminde, tüm kan alikotlarını atın. Kırk beş dakika sonra örnekleme periyoduna başlayın. Numune alırken, üç mikrolitre kanı bir toplama tüpüne aktarın, tüpü ters çevirerek karıştırın ve tekrar buzun üzerine koyun.

Şimdi gerektiği kadar örneklemeye devam edin. Bir kez sonra farelere ötenazi yapın veya kuyruk kan akışının tamamen durduğundan emin olun ve ardından farelere temiz bir kafes sağlayın. Daha sonra kan örneklerini bir saklama kutusuna aktarın ve örnekleri analiz edilinceye kadar eksi yirmi santigrat derecede saklayın.

Luteinize Edici Hormon veya LH, akut psikososyal stres sorununa yanıtı belirlemek için sık kan örneklerinde ölçüldü. Yetişkin dişi C57 siyah altı fare yumurtalıktan çıkarıldı ve LH pulsatil sekresyonunun ön tedavi temelini oluşturmak için doksan dakika boyunca kan örnekleri toplandı. Doksan dakikalık örnekleme sırasında stres tedavisi için deney hayvanları kemirgen kısıtlama cihazlarına konuldu ve yeni bir kafese taşınırken, kontroller ev kafeslerinde kaldı ve kısıtlanmadı.

Analiz, kontrol hayvanlarının tüm örnekleme süresi boyunca net ve kesin LH darbelerine sahip olduğunu gösterdi. Buna karşılık, kısıtlamanın psikososyal stresi, deney grubundaki pulsatil LH sekresyonunu hızlı ve açık bir şekilde baskıladı. Bu tekniği kullanmaya hazırlanırken, fareleri strese sokabilecek ve pulsatil LH sekresyonunu kesintiye uğratabilecek gürültü veya diğer araştırmacılar tarafından yapılan kesintiler gibi çevresel rahatsızlıkları en aza indirmeyi unutmamak önemlidir.

Chen laboratuvarında Dr. Stein ve diğerleri tarafından geliştirilmesinden bu yana, bu teknik, nöroendokrinoloji alanındaki araştırmacıların, karmaşık moleküler ve genetik araçların pratik ve mevcut olduğu bir türde LH nabız regülasyonunu keşfetmelerinin önünü açmaya başladı.