Name: Hücre mekanik ile boncuk-Alerjik Optik cımbız Drosophila embriyo sondalama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Öğrenin optik cımbız ve ışık sayfası mikroskobisi kullanarak Drosophila embriyolarında hücre mekanik özelliklerini canlı görüntüleme ile ölçme yöntemini. Bu teknik, doku morfojenezisi sırasında gerilim ve riyolojik analiz yapmayı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser bir FRM Equipe Grant FRM DEQ20130326509, Agence Nationale de la Recherche ANR-Blanc Grant, Morfor ANR-11-BSV5-0008 (için s.-Tayback) tarafından desteklenmiştir. Fransız Ulusal Araştırma Ajansı (ANR-10-INBS-04-01, «Yatırımlar gelecek için») tarafından desteklenen Fransa-BioImaging altyapı anıyoruz. Biz Brice Detailleur ve Claude Moretti PICSL-FBI altyapı teknik destek için teşekkür ederiz.

<ol><li>Lecuit, T., Lenne, P. -F., Munro, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+generation%2C+transmission%2C+and+integration+during+cell+and+tissue+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+cell+and+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Force generation, transmission, and integration during cell and tissue morphogenesis.</a> Annual review of cell and developmental biology. 27 (1), 157-184 (2011).</li>
<li>Heisenberg, C. -P., Bellaïche, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forces+in+tissue+morphogenesis+and+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Forces in tissue morphogenesis and patterning.</a> Cell. 153 (5), 948-962 (2013).</li>
<li>Sugimura, K., Lenne, P. -F., Graner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+forces+and+stresses+in+situ+in+living+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Measuring forces and stresses in situ in living tissues.</a> Development. 143 (2), Cambridge, England. 186-196 (2016).</li>
<li>Campàs, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+toolbox+to+explore+the+mechanics+of+living+embryonic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+cell+%26+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">A toolbox to explore the mechanics of living embryonic tissues.</a> Seminars in cell & developmental biology. 55, 119-130 (2016).</li>
<li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> Journal of Cell Biology. 149 (2), 471-490 (2000).</li>
<li>Farhadifar, R., Roper, J. C., Aigouy, B., Eaton, S., Julicher, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+cell+mechanics%2C+cell-cell+interactions%2C+and+proliferation+on+epithelial+packing%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">The influence of cell mechanics, cell-cell interactions, and proliferation on epithelial packing.</a> Current Biology. 17 (24), 2095-2104 (2007).</li>
<li>Rauzi, M., Verant, P., Lecuit, T., Lenne, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nature+and+anisotropy+of+cortical+forces+orienting+Drosophila+tissue+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+biology%22%5BJournal%5D)">Nature and anisotropy of cortical forces orienting Drosophila tissue morphogenesis.</a> Nature Cell biology. 10 (12), 1401-1410 (2008).</li>
<li>Ma, X., Lynch, H. E., Scully, P. C., Hutson, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+embryonic+tissue+mechanics+with+laser+hole+drilling%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Biology%22%5BJournal%5D)">Probing embryonic tissue mechanics with laser hole drilling.</a> Physical Biology. 6 (3), 036004(2009).</li>
<li>Hutson, M. S., Tokutake, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forces+for+morphogenesis+investigated+with+laser+microsurgery+and+quantitative+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Forces for morphogenesis investigated with laser microsurgery and quantitative modeling.</a> Science. 300 (5616), 145-149 (2003).</li>
<li>Bonnet, I., Marcq, P., Bosveld, F., Fetler, L., Bellaïche, Y., Graner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+state%2C+material+properties+and+continuous+description+of+an+epithelial+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society%2C+Interface+%2F+the+Royal+Society%22%5BJournal%5D)">Mechanical state, material properties and continuous description of an epithelial tissue.</a> Journal of the Royal Society, Interface / the Royal Society. 9 (75), 2614-2623 (2012).</li>
<li>Etournay, R., Popović, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+of+cell+dynamics+and+epithelial+tension+during+morphogenesis+of+the+Drosophila+pupal+wing%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Interplay of cell dynamics and epithelial tension during morphogenesis of the Drosophila pupal wing.</a> eLife. 4, e07090(2015).</li>
<li>Rauzi, M., Lenne, P. -F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+forces+in+cell+shape+changes+and+tissue+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+topics+in+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Cortical forces in cell shape changes and tissue morphogenesis.</a> Current topics in developmental biology. 95, 93-144 (2011).</li>
<li>Saha, A., Nishikawa, M., Behrndt, M., Heisenberg, C. -P., Jülicher, F., Grill, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+Physical+Properties+of+the+Cell+Cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+journal%22%5BJournal%5D)">Determining Physical Properties of the Cell Cortex.</a> Biophysical journal. 110 (6), 1421-1429 (2016).</li>
<li>Desprat, N., Supatto, W., Pouille, P. A., Beaurepaire, E., Farge, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+deformation+modulates+twist+expression+to+determine+anterior+midgut+differentiation+in+Drosophila+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+cell%22%5BJournal%5D)">Tissue deformation modulates twist expression to determine anterior midgut differentiation in Drosophila embryos.</a> Developmental cell. 15 (3), 470-477 (2008).</li>
<li>Mitrossilis, D., Röper, J. -C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanotransductive+cascade+of+Myo-II-dependent+mesoderm+and+endoderm+invaginations+in+embryo+gastrulation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Mechanotransductive cascade of Myo-II-dependent mesoderm and endoderm invaginations in embryo gastrulation.</a> Nature Communications. 8, 13883(2017).</li>
<li>Campàs, O., Mammoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+cell-generated+mechanical+forces+within+living+embryonic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantifying cell-generated mechanical forces within living embryonic tissues.</a> Nature Methods. 11 (2), 183-189 (2013).</li>
<li>Serwane, F., Mongera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+quantification+of+spatially+varying+mechanical+properties+in+developing+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">In vivo quantification of spatially varying mechanical properties in developing tissues.</a> Nature Methods. 14 (2), 181-186 (2017).</li>
<li>Chiou, K. K., Hufnagel, L., Shraiman, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+stress+inference+for+two+dimensional+cell+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+computational+biology%22%5BJournal%5D)">Mechanical stress inference for two dimensional cell arrays.</a> PLoS computational biology. 8 (5), e1002512(2012).</li>
<li>Ishihara, S., Sugimura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bayesian+inference+of+force+dynamics+during+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+theoretical+biology%22%5BJournal%5D)">Bayesian inference of force dynamics during morphogenesis.</a> Journal of theoretical biology. 313, 201-211 (2012).</li>
<li>Brodland, G. W., Veldhuis, J. H., Kim, S., Perrone, M., Mashburn, D., Hutson, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CellFIT%3A+a+cellular+force-inference+toolkit+using+curvilinear+cell+boundaries%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">CellFIT: a cellular force-inference toolkit using curvilinear cell boundaries.</a> PLoS ONE. 9 (6), e99116(2014).</li>
<li>Svoboda, K., Block, S. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7919782">Biological applications of optical forces.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 23, 247-285 (1994).</li>
<li>Huisken, J., Swoger, J., Del Bene, F., Wittbrodt, J., Stelzer, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+sectioning+deep+inside+live+embryos+by+selective+plane+illumination+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical sectioning deep inside live embryos by selective plane illumination microscopy.</a> Science. 305 (5686), 1007-1009 (2004).</li>
<li>Bambardekar, K., Clément, R., Blanc, O., Chardès, C., Lenne, P. -F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+laser+manipulation+reveals+the+mechanics+of+cell+contacts+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Direct laser manipulation reveals the mechanics of cell contacts in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , (2015).</li>
<li>Clément, R., Dehapiot, B., Collinet, C., Lecuit, T., Lenne, P. -F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscoelastic+Dissipation+Stabilizes+Cell+Shape+Changes+during+Tissue+Morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+biology%3A+CB%22%5BJournal%5D)">Viscoelastic Dissipation Stabilizes Cell Shape Changes during Tissue Morphogenesis.</a> Current biology: CB. 27 (20), (2017).</li>
<li>Chardès, C., Ménélec, P., Bertrand, V., Lenne, P. -F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Setting-up+a+simple+light+sheet+microscope+for+in+toto+imaging+of+C.+elegans+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments%22%5BJournal%5D)">Setting-up a simple light sheet microscope for in toto imaging of C. elegans development.</a> Journal of visualized experiments. 87, e51342(2014).</li>
<li>Serge, A., Bertaux, N., Rigneault, H., Marguet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+multiple-target+tracing+to+probe+spatiotemporal+cartography+of+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Dynamic multiple-target tracing to probe spatiotemporal cartography of cell membranes.</a> Nature Methods. 5 (8), 687-694 (2008).</li>
<li>Cavey, M., Lecuit, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Cellular+and+Molecular+Dynamics+in+Live+Embryos+Using+Fluorescent+Proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila%22%5BJournal%5D)">Imaging Cellular and Molecular Dynamics in Live Embryos Using Fluorescent Proteins.</a> Drosophila. 420, 219-238 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Optik cımbız mutlak mekanik ölçümler doğrudan gelişmekte olan embriyonik epitel içinde non-invaziv bir şekilde gerçekleştirmek için izin verir. Bu anlamda, invaziv ve göreli ölçüler, manyetik kuvvetler, enjeksiyonları gerektiren sağlamak veya güçlü varsayımlara dayanır kesmesi zorla ve aynı zamanda göreceli sağlayan lazer ablasyon gibi diğer yöntemler üzerinde avantajları sunar ölçümleri.
İletişim kuralı birkaç kritik adımları içerir. İlk olarak, objektif lens renk sapmalarını ve lazer tuzağı ...

Embriyonik gelişim sırasında hücre ve dokulara gelecekteki hayvan şekli deforme son derece tekrarlanabilir bir süreçtir. Bu tür deformasyonlar güçler hücre düzey1,2de etkin nesil gerektirecek şekilde gösterilmiştir. Morfogenetik işlemleri sırasında hücre ve dokuların onların şekli Dönüştür anlamak için o bu nedenle hücreleri ilgili mekanik özelliği değerlendirmek ve doku içinde güçler sırasında işlem3,4 ölçmek için anahtarıdır . Epitel katmanlarda, özellikle Drosophila, yaygın olarak onların yarı-2D geometri nedeniyle ve onların kolayca idare incelenmiştir.
Bir takım teknikler böylece bize ve diğer geliştirme sırasında epitel mekaniği vivo içinde değerlendirmek için tarafından geliştirilmiştir. Biz üç ana teknikleri içinde epitel doku kullanılan hızlı bir bakış verecektir. Yerel mekanik stres hücre kavşak5,6,7,8 veya daha büyük ölçekli9,10,11 ortaya çıkarmak için lazer ablasyon, yaygın olarak kullanılan bir yöntem sağlar hedef mekanik bütünlüğünü bozmaya yerel kesim yaparak. Kesme takip açılış dinamikleri stres önceki ablasyon hem doku12,13Reolojisi bilgi sağlar. İse bir lazer Ablasyon yerel bozulma hücre korteksin gerektirdiği invaziv, dezavantajıdır. Bir doku bütünlüğünün korunması istiyorsa bu nedenle, biri yalnızca ablations sınırlı sayıda yapabilirsiniz. Başka bir dezavantajı açılış hızı genellikle bilinmemektedir viskoz sürtünme üzerinde bağımlı olduğundan ablations sadece gerginlik, hücre kişiler, göreli tahminleri sağlamak olduğunu. Manyetik manipülasyon ayrıca geliştirilmiş ve ferrofluids14 kullanımı ya da ultramagnetic lipozomlar15içeren Drosophilaiçinde kullanılan. Mutlak ölçümler16,17sağlayabilirsiniz, ancak aynı zamanda invaziv Onlar sonda istediğiniz yere, enjeksiyon gerektirir anlamda. Bu her zaman hassas enjeksiyon için müsait değildir sistemine bağlı olarak çok yanıltıcı olabilir. Üçüncü bir teknik, tamamen non-invaziv, kuvvet çıkarım18,19,20' dir. Kuvvet çıkarım mekanik (tricellular kavşak veya köşeleri) puan Equilibrium'da varsayımına dayanır ve gerilimler hiç hücre-hücre kişiler (ve muhtemelen, baskılar tüm hücrelerdeki) tarafından ters bir problem çözme tahmin etmesine olanak verir. Gerginlikler için her köşe iki denklemler (X ve Y) sağlar. Bu gerginlik, tüm hücre kişileri değerlendirmek için bazı koşullar altında ters Lineer Denklem büyük bir sistem verir. Sadece kesimli bir görüntü ve hiçbir ilave deney veya kurulum gerektirir gibi bu yöntem çok çekici olmakla birlikte, onun doğruluğunu henüz tespit etmektir ve tekrar sadece sürece bir mutlak kalibrasyon ölçüm gerçekleştirilir göreli değerleri sağlar.
Bazı bu sınırlamalar üstesinden gelmek için biz tanıtmak bu makalede bir Kur Optik cımbız kontrollü güçler Drosophila melanogasterembriyonik epitel hücre ölçeğinde de uygulamak için hafif levha mikroskop için birleştiğinde. Optik cımbız tek protein ve organelleri ve hücreleri21manipülasyon üzerinde ölçümler de dahil olmak üzere çok sayıda biyolojik uygulamaları için kullanılmaktadır. Burada, küçük bir kaç düzine pN aralığında uygulanan kuvvetler raporu henüz yerel deformasyonlar hücre kişileri ikna etmek ve mekanik ölçümler vivo içindegerçekleştirmek yeterli. Genellikle, hücre kişileri, kymographs, analizi ile izlenen dik sehimi kuvvet deformasyon için ilişkilendirmek için kullanılır. Önemlisi, Optik cımbız doğrudan kuvvetleri hücre-hücre kişiler üzerinde uygulamak için güçlü olduğu gibi bizim ayarlarına boncuk doku, istenen konumda enjeksiyon gerektirmez. Hafif levha mikroskop için Optik cımbız kaplin bir aydınlatma beri çok kayda değer bir mekanik analiz kısa süre ölçekler ve azaltılmış fototoksisite, hızlı görüntüleme (birkaç kare / saniye), gerçekleştirmek izin verir örnek22Imaging uçak için sınırlıdır.
Genel olarak, Optik cımbız bir non-invaziv kontrollü güçler hücre kişiler içinde Drosophila embriyo vivo de uygulamak için ve sertlik ve hücre kişiler23, gerginlik rheological Özellikler gibi mekanik bilgileri ayıklamak için bir yoludur 24ve degrade veya anizotropi gerginlik23.

<table><tbody><tr><td>İterbiyum Fiber Lazer LP, 10 W, CW</td><td>IPG Lazer</td><td>YLM-10-LP-SC</td>, <td>kolimatör LP dahil: ışın D = 1.6 mm ve kırmızı kılavuz lazer</td></tr><tr><td>&Oslash; 1/2" Optik Işın Deklanşörü</td><td>Thorlabs</td><td>SH05</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Işın Çaplı Galvanometre Sistemleri</td><td>Thorlabs</td><td>GVS001</td><td>X deplasmanı için 1, Y deplasmanı için 1</td></tr><tr><td>1D veya 2D Galvo Sistemi Lineer Güç Kaynağı</td><td>Thorlabs</td><td>GPS011</td><td>galvanometre güç kaynağı</td></tr><tr><td>2 lens f = 30 mm</td><td>Thorlabs</td><td>LB1757-B</td><td>röle teleskopu 2 galva</td></tr><tr><td>Lens f = 200 mm</td><td>Thorlabs</td><td>LB1945-B</td><td>2.5X teleskop</td></tr><tr><td>Lensi f = 500 mm</td><td>Thorlabs</td><td>LB1869-B</td><td>2.5X teleskop</td></tr><tr><td>Dişli Kafes Çubuk Delikli Dik Açılı Kinematik Eliptik Ayna Montajı</td><td>Thorlabs</td><td>KCB1E</td><td>Periskop</td></tr><tr><td>Lazer Güvenlik Gözlükleri, Açık Yeşil Lensler, %59 Görünür Işık İletimi, Evrensel Stil</td><td>Thorlabs</td><td>LG1</td><td></td></tr><tr><td>45&derece; AOI, 50.0 mm Çap, Sıcak Ayna</td><td>Edmund Optics</td><td>#64-470</td><td></td></tr><tr><td>Çoklu Foton Yayıcı HC 750/S</td><td>AHF</td><td>HC 750/SP</td><td></td></tr><tr><td>CompactDAQ Şasi</td><td>National Instruments</td><td>cDAQ-9178</td><td></td></tr><tr><td>C Serisi Voltaj Çıkış Modülü</td><td>National Instruments</td><td>NI-9263</td><td>Analog çıkış modülü</td></tr><tr><td>C Serisi Voltaj Giriş Modülü</td><td>National Instruments</td><td>NI-9215</td><td>Analog giriş modülü</td></tr><tr><td>FluoSpheres Karboksilat Modifiye Mikroküreler, 0.5 & m, kırmızı floresan (580/605), %2 katı</td><td>madde ThermoFisher Scientific</td><td>F8812</td><td>kalibrasyon boncukları</td></tr><tr><td>C++ (Qt) ev yapımı optik cımbız yazılımı</td><td></td><td></td><td>Olivier Blanc ve Claire Chard's tarafından geliştirilmiştir. Alternatif çözüm: labview</td></tr></tbody></table>

hücre mekanik ile boncuk-alerjik optik cımbız drosophila embriyo sondalama

Probing Cell Mechanics with Bead-Free Optical Tweezers in the Drosophila Embryo

Morfogenez genetik desenlendirme ve sağlam hücre ve dokuların şekillendirmek için mekanik kuvvetleri arasındaki koordinasyon gerektirir. Bu nedenle, morfogenetik süreçleri anlamak için bir meydan okuma doğrudan hücresel kuvvetler ve mekanik özellikleri içinde vivo embriyogenez sırasında ölçmek etmektir. Burada, bir Kur Optik cımbız doğrudan kuvvetleri erken Drosophila embriyo hücre-hücre kişiler üzerinde uygulamak için izin verir, bir hafif levha mikroskop birleştiğinde mevcut görüntüleme birkaç kare / saniye hızında iken. Bu teknik genellikle orta sonda üzerinde optik kuvvetleri sarf kullanılan embriyo içine boncuk enjeksiyon gerektirmeyen avantajı vardır. Biz adım adım Kur uygulanması ayrıntı ve deneylerden mekanik bilgi ayıklamak için araçlar önermek. Hücre-hücre kişiler gerçek zamanlı talebiyle izleyerek, bir gerilim ölçümleri gerçekleştirmek ve hücre kişilerinizin Reolojisi araştırmak.

Şekil 5 tuzak sinüsoidal bir hareketi koyarak elde edilen deneysel verileri gösterir. Tuzak bir saptırma arabirimin adıyla 3 ardışık arabirimi pozisyonlar (Şekil 5A)23gösterilen 3 anlık görüntüleri tarafından örneği oluşturur. Kaydedilmiş film bir kymograph (Şekil 5B) oluşturmak için kullanılan ve daha fazla her çerçeve için x yön boyunca bir Gauss kullanılarak altpiksel çözüm...

Biz Optik cımbız hafif levha mikroskop ve hücre mekaniği Drosophila embriyo boncuklar olmadan soruşturma için uygulanması için birleştiğinde bir kurulumu mevcut.

Hücre mekanik ile boncuk-Alerjik Optik cımbız Drosophila embriyo sondalama

Morphogenesis requires coordination between genetic patterning and mechanical forces to robustly shape the cells and tissues. Hence, a challenge to ...

Bu yöntem doku morfogenezi sırasında hücre temaslarının uzay ve zamanda nasıl değiştiği gibi doku mekaniğinde anahtar soruların yanıtlatına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı zayıf invaziv olması ve ışık sac mikroskobu gibi canlı görüntüleme ile uyumlu olmasıdır. Bu teknik dokuya boncuk enjeksiyonu gerektirmez.Genellikle froses almak için hangi demiere sondalar olarak kullanılan, ben heyecanlıyım. Süreci gösteren Chardes, bir mühendis, ve Raphael Clement, arazi benim düzeyde araştırma bilim adamı olacaktır. Başlamak için, yatay düz ışık levha mikroskobu için dik bir mikroskop kurmak, sonra optik cımbız olarak hareket lazer ve optik hazırlamak.Sonra, bir cam cuvette için 500 nanometre floresan boncuk bir mikro litre dışarı boru, ve distile su 10 mililitre ekleyin. Cuvette'yi hedefin altına çivi tutucuya yerleştirin ve hedefin odak noktasını, amacın su yüzeyine değecek şekilde ayarlayın. Şimdi, satın alma yazılımını denetlemek için kullanılan Entegre Geliştirme Ortamı QT Creator'ı açın.MicroRheo'yu açarak satın alma yazılımını açın. profili ve canlı satın alma modunu canlı seçerek açın. Lazeri açmadan önce, güvenlik gözlüğü tonulayın, sonra lazer gücünü bir watt'a ayarl

probing-cell-mechanics-with-bead-free-optical-tweezers-drosophila

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu protokol, mikroenjeksiyon ve yüksek çözünürlüklü görüntüleme kullanımı...

Mitoz incelenmesi için Mikroenjeksiyon Teknikleri Drosophila melanogaster Sinsityal Embriyo

SAC kardeş kromatidler arasında mitotik segregasyon izlenmesi, sinyali başlatır nerede kinetochore olduğunu. A metodunda kromozom hareketi ile kinetochore proteinler ve koordinasyon birinin seçilmesi ve devir görselleştirme tarif...

Living Görselleştirilmesi Dinamik Kinetochore Protein Davranış ve Kromozom Hareket tarafından Mitotik Checkpoint incelenmesi<em&gt; Drosophila</em&gt; Sinsityal Embriyolar

Biz, merkezi sinir sistemi içinde tek nöron etiketlenmesine yönelik bir yöntem (CNS)...

Merkez Sinir Sistemi Tek Hücreler Etiketleme<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Malzeme özellikleri ve tensional parametreleri içinde vivo ölçmek için Araçlar eksikliği onların rolleri geliştirme sırasında doğrulama engeller. Atomik Kuvvet Mikroskobu (AFM) ve mekanik özellikleri bozulmamış Zebra balığı embriyo sarısı cep epiboly sırasında ölçmek için nanopartikül izleme çalıştırmaya başladık. Bu, güvenilir ve yaygın olarak uygulanabilir müdahaleci müdahaleler kaçınarak yöntemlerdir.

AFM ve Zebra balığı embriyo sarısı hücre Microrheology

Mekanik kuvvetler hücre göçlerini kontrol etmek için önemlidir. Bu protokol, hücre yapısı ve göç değişiklikleri ortaya çıkarmak için yerel bir sertlik gradyan ile hücreleri uyarmak için bir cam mikropipette ve bir mikromanipülatör kullanılarak deforme edilebilir elastik hidrojellerin kullanımını göstermektedir.

Hücresel Hareketin Mekanik Kontrolünün Ve İlgili Sinyal Olaylarının Değerlendirilmesi için Tek Hücreli Durotaksis Tsay

Burada sunulan mikroenjekte etmek ve aynı anda görüntü birden fazla Drosophila embriyoembriyonik gelişim sırasında bir plaka tabanlı, yüksek içerik görüntüleyici kullanarak bir protokoldür.

Drosophila Embriyo Hazırlama ve Canlı Hücre Mikroskopisi Için Mikroenjeksiyon Otomatik Yüksek İçerik Analizörü Kullanılarak Gerçekleştirildi

Bu protokolün amacı, Drosophila larvalarında mekanik nosiception için geliştirilmiş bir tahlilin nasıl gerçekleştirildiğini göstermektir. Buradaki tahlilleri, Drosophila larvalarında mekanik aşırı duyarlılığın (allodynia ve hiperaljezi) var olduğunu göstermek için kullanıyoruz.

Drosophila Larvalarında Mekanik Nosiception Ölçümü için Geliştirilmiş Bir Tahlil ve Araçlar

Burada, izole embriyonik zebra balığı hücrelerinin hücre içi mekanik özelliklerini optik bir tuzakla doğrudan kuvvet ölçümü ile üç boyutlu hapsetmede araştırmak için bir protokol sunuyoruz.

Optik Cımbız Kullanarak Hapsetmede Hücre Altı Mekaniğinin Doğrudan Kuvvet Ölçümleri

Erken Drosophila embriyosunda, birçok organel hareketlidir. Prensip olarak, belirli floresan problar aracılığıyla canlı olarak görüntülenebilirler, ancak yumurta kabuğu embriyoya doğrudan uygulamayı önler. Bu protokol, bu tür probların mikroenjeksiyon yoluyla nasıl tanıtılacağını ve daha sonra parçacık  görüntü velosimetrisi yoluyla toplu organel hareketinin nasıl analiz edileceğini açıklar.

Drosophila Embriyolarında Lipid İçeren Organellerin Sitoiskelete Bağımlı Ticaretinin Görselleştirilmesi

Aktomiyosin kontraktilitesi hücre ve doku morfogenezinde önemli bir rol oynar. Bununla birlikte, aktomiyosin kontraktilitesini in vivo akut olarak manipüle etmek zordur. Bu protokol, Drosophila embriyolarında Rho1 aracılı aktomiyosin kontraktilitesini hızla inhibe eden ve aktomiyozinin in vivo inaktivasyonundan sonra epitel gerginliğinin ani kaybını ortaya çıkaran bir optogenetik sistemi tanımlar.

Drosophila Embriyolarında Epitelyal Gerginliğin Ölçümü ile Birlikte Rho1 Aracılı Aktomiyosin Kontraktilitesinin Optogenetik İnhibisyonu

Bu protokoller, kontrol ve mutant Drosophila embriyonik epitelisindeki pileli septat bağlantılarının organizasyonu ve kapatma fonksiyonunun nasıl karakterize edileceğini açıklar.

Drosophila embriyonik epitelinde çekirdek pileli septat bağlantı proteinlerini tanımlamak için immünboyama ve boya penetrasyonu deneyleri

Öğrenin optik cımbız ve ışık sayfası mikroskobisi kullanarak Drosophila embriyolarında hücre mekanik özelliklerini canlı görüntüleme ile ölçme yöntemini. Bu teknik, doku morfojenezisi sırasında gerilim ve riyolojik analiz yapmayı sağlar.

Hücre mekanik ile boncuk-Alerjik Optik cımbız Drosophila embriyo sondalama

Daha fazla video keşfet