Vahşi balık Nekropsi tabanlı sağlık değerlendirmesi

Nekropsi temelli balık sağlığı değerlendirmesi, rutin izleme için yabani balıkların sağlığını değerlendirmek, bölgeleri karşılaştıran özel çalışmalar ve daha derinlemesine analiz için doku toplama için bir temel olarak kullanılır. Balıklar sürekli olarak karmaşık kimyasallar, patojenler ve parazitler gibi stres faktörlerinin bir kombinasyonuna maruz kalırlar. Bu stres faktörlerinin kombinasyonları, hastalık direncinin azalması, kanser ve üreme yetmezliği gibi olumsuz etkilere yol açabilir.

Gösterilen teknikler, görünür anormalliklerin standart bir değerlendirmesine ve histopatoloji için kan ve dokuların, yaş için otolitlerin ve diğer aşağı akış analizleri için dokuların toplanmasına izin verir. İlk olarak, histopatoloji için kan, otolit ve doku toplama ile rutin nekropsi temelli değerlendirmeyi tek bir balık kullanarak göstereceğiz. İmmün fonksiyon tahlilleri için ön böbreğin toplanması ve gen ekspresyonu için karaciğer veya diğer dokuların toplanması bu yönteme ayrıca göstereceğimiz eklemelerdir.

Herhangi bir ölüm sonrası değişiklikten kaçınmak için dokuları mümkün olduğunca çabuk toplamak önemlidir. Bu nedenle, genellikle iki ila üç kişinin doku topladığı ve birinin verileri kaydettiği bir montaj hattı sürecimiz var. West Virginia Üniversitesi'nden doktora öğrencileri Heather Walsh ve Cheyenne Smith ve yeni bir doktora mezunu olan Ryan Braham, süreçteki çeşitli adımları gösterecekler.

Balıkları kurumsal yönergelere göre toplayıp ötenazi yaptıktan sonra, balığı tartın ve ölçün ve bir kan örneği alın. Daha sonra, burnun ucundan kuyruğun sonuna kadar balığın toplam uzunluğunu ölçün. Yanal çizginin altındaki kaudal alanın önüne, daha önce heparin ile kaplanmış 22 veya 23 gauge iğne ile üç CC'lik bir şırınga yerleştirin.

İhtiyacı omurgaya çarpana kadar yukarı doğru eğin ve bir kan örneği almak için hafifçe geri çekin. Kan örneğini bir toplama tüpüne aktarmadan önce iğneyi çıkarın ve keskin bir çöp kutusuna koyun. Günübirlik geziler için, kan laboratuvara dönene kadar ıslak buz üzerinde tutulabilir.

Daha sonra, analiz edilene kadar eksi 80 santigrat derecede saklanan plazmayı çıkarmak için santrifüjlenir. Her gün laboratuvara dönülmüyorsa, bir santrifüj ve kuru buz deposu gereklidir. Ardından, balığın vücudundaki, yüzgeçlerindeki, gözlerindeki ve solungaçlarındaki herhangi bir dış anormalliği veya lezyonu belgeleyin.

Balıkları sülükler, kurtçuklar, trematod, metaçerkarial kistler ve solungaç parazitleri gibi dış parazitler açısından inceleyin. Daha sonra karın boşluğunu anal bölgeden operkuluma açmak için makas kullanın. İç organları ortaya çıkarmak için kas flebini çıkarın.

İç organları inceleyin ve genel ve fokal renk bozulmalarını, kabarık alanların varlığını, kistleri, parazitleri ve boyut anormalliklerini belgeleyin. Daha sonra, karaciğeri çıkarmak için, hepatik arteri ve ön ucun bağ dokusunu kesin. Karaciğeri karkastan nazikçe kaldırın ve safra kesesini delmemeye dikkat ederek bağırsaklara ve yağ yağına olan tüm yapışmaları ve bağlantıları kesin.

Karaciğeri tartın. Daha sonra metin protokolünde belirtildiği gibi hepatosomatik indeksi elde edin. Sonra gonadları çıkarın ve tartın.

Dikkatlice, çekmeden küçük doku örneklerini kesin. Bir balıktan alınan doku örneklerini aynı kaba koyun. Daha sonra, karaciğerin çeşitli bölgelerinden en az beş, üç ila dört milimetre kalınlığında parçalar kesin ve bunları sabitleyici kaba yerleştirin.

Boyutuna bağlı olarak, sabitleyici kabın içine bütün bir gonad veya bir gonad parçası yerleştirin. Daha sonra daha küçük bütün organları ve diğer büyük organların parçalarını fiksatif kaba yerleştirin. Herhangi bir anormal doku gözlenirse, normal dokunun ek bir bitişik parçasını koruyun.

Balıkları yaşlandırmak için pullar, yüzgeç ışınları ve otolitler gibi çok sayıda yapı kullanılabilir. Burada en doğru oldukları için otolitleri kullanıyoruz. İlk önce solungaç kıstağını kesin ve başını geriye doğru bükün.

Daha sonra prootik bülleri bulmak için, nörokraniyumun alt kısımlarının etrafındaki bağ ve kas dokularını soyun. Prootik bülleri kırmak ve otolitleri ortaya çıkarmak için bir kemik kesici kullanın. Otolitler çıplak gözle görülebilmelidir.

Otolitleri etiketli, kapaksız bir şişeye yerleştirin ve yaş analizi yapılana kadar oda sıcaklığında saklayın. Çok sayıda kimyasala ve diğer çevresel stres faktörlerine maruz kalmak immünosupresyona neden olabilir. Lenfositler, makrofajlar ve granülositler bu dokudan izole edilebilmekte ve laboratuvarda patojenleri öldürme, antikor üretme, tümör hücrelerine yanıt verme ve diğer fonksiyonları ölçülebilmektedir.

Steril makas, neşter ve forseps kullanarak ön böbrek dokusunu çıkarın. Hücreleri canlı tutmak için ön böbrek örneğini uygun ortama yerleştirin. Numuneyi tek hücreli süspansiyonlar halinde homojenize etmek için steril bir el tipi doku öğütücü kullanın.

Ve numuneleri ıslak buz üzerinde tutun. RNA'nın korunması için, iki ila üç küçük karaciğer parçasını, dokuya 10'a bir oranında koruyucu maddeye uygun koruyucuya yerleştirin. Bu çalışmada, beyaz emiciler, üç Büyük Göl endişe alanından veya AOC'lerden ve Kewanee Nehri referans bölgesinden toplandı.

Dış tümörlü balıkların yüzdesi St.Louis AOC'de %15,5 ile Milwaukee AOC'de %58 arasında değişmektedir. Gizli beyaz lekeler, hafif kabarık mukoid lezyonlar ve büyük papillomatöz lezyonlar dahil olmak üzere çeşitli dış lezyon türleri gözlendi. Bu çalışmada, özellikle Kewanee referans bölgesinde gözlenen ayrık beyaz lekeler ve mukoid lezyonların çoğu, neoplazinin aksine hiperplastik lezyonlardı.

Histopatolojik analiz ayrıca görsel gözlemle tanımlanamayan karaciğer tümörlerini de tanımladı. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa balık başına 15 ila 20 dakika içinde yapılabilir. Bu prosedürü denerken, belirli türünüz için neyin normal olduğunu bilmek ve anormallikleri tanımlarken mümkün olduğunca tutarlı ve doğru olmak önemlidir.

Boyut, renk, doku ve konumu ekleyin. Fotoğraf dokümantasyonu yararlıdır. Bu teknik, herhangi bir balık türü için kullanılabilir ve çevresel stres faktörlerinin olumsuz etkilerini daha iyi anlamak ve istilacı hastalıkları belirlemek için balık sağlığını hem mekansal hem de zamansal olarak belgelemek için yararlıdır.