Yaprak sprey kütle spektrometresi: Doğrudan metabolitleri bitki doku üzerinden değerlendirmek için bir hızlı ortam iyonlaşma tekniği

Yaprak spreyi MS, çok çeşitli uygulamalara sahip, bozulmamış bitki dokularının kalitatif ve yarı kantitatif analizi için hızlı bir yöntemdir. Bu tekniğin temel avantajı, bitki dokusunun esasen hiçbir numune hazırlığı olmadan doğrudan analiz edilebilmesidir. Bu yöntem, Sceletium'dan elde edilen mesembrin alkaloidleri hakkında iyi bilgiler sağlasa da, diğer çeşitli bitki türlerinin ve pestisitler gibi dışsal kimyasalların analizi için de kullanılabilir.

Bu yönteme yeni olan kişiler, her bitki türü, doku tipi ve ilgilenilen bileşik için protokolü optimize etmek gerektiğinden bunu zor bulabilir. Yaprak spreyi için modifiye edilmiş bir nano sprey kaynağı kullanın MS.As yaprak spreyi MS için akışkan bileşen gerekmez, sıvı kromatografi probunu kaynaktan çıkararak kaynağı değiştirin. Bitki dokusuna voltaj uygulayacak olan yaprak sprey kütle spektrometresi telinin bir ucunda tele lehimlenmiş bir pim, diğer ucunda ise lehimlenmiş bir kelepçe bulunur.

Sistem yakın zamanda kullanılıyorsa, süpürme konisindeki herhangi bir alternatif kaynağı çıkarmadan önce dokunulamayacak kadar soğumasını bekleyin. Ardından nano sprey yaprak spreyi MS kaynağını takın. Son olarak, metin protokolünde açıklandığı gibi bir ayar dosyası ve bir yöntem dosyası oluşturun.

Daima eldiven giyin ve çıplak elle dokunulmuş bitki dokusunu kullanmayın. Aksi takdirde, polietilen glikol gibi kirletici iyonlar spektrumlara hakim olacaktır. Hızlı bir numune alımına izin vermek için analiz için bitki dokularını kütle spektrometresi sistemi ile aynı odaya getirin.

Doğal olarak sivri uçlu olmayan bitki dokusu için, konik bir nokta kesmek için cam slayt üzerinde bir tıraş bıçağı kullanın. Sceletium tortuosum yapraklarını çimlenmeden 10 hafta sonra, her biri bir nokta oluşturmak için konik bir uca sahip ince şeritler halinde kesin. Sonunda kenetlenecek bitki dokusunu nazikçe seçmek için forseps kullanın.

Dokuyu forseps ile tutarak, dikkatlice kelepçeye aktarın. Dokuyu MS girişi ile aynı hizada konumlandırmak için esnek kolu ve teli kelepçe ile ayarlayın. Her bir spesifik kütle spektrometresi için iyon girişinden en uygun mesafe için metne bakın.

İlk denemeler düşük bir sinyal yoğunluğu üretirse, bitki dokusu iyon girişine daha yakın hareket ettirilebilir. Yöntem dosyasını yükleyin. Veri dosyasını adlandırın ve dosya depolama konumunu ayarlayın.

Ardından oynat'a tıklayarak MS sistemini açın ve veri almaya başlamak için başlat'a tıklayın. Koruma için yüksek voltaj ile kullanıcının elleri arasındaki mesafeyi en üst düzeye çıkarmak için jel yükleme uçlu bir pipet kullanarak bir çözücü uygulayın. Sinyal devam ettiği sürece veya yeterli spektrum toplanana kadar, tipik olarak 30 ila 60 saniye arasında veri toplayın.

Veri alımını durdurun ve MS sistemini duraklatın. Aldıktan sonra, mendili çıkarın ve kelepçeyi tüy bırakmayan bir mendille %100 metanol ile yıkayın. Veri dosyasını açın ve temel tepe kütle kronogramını görsel olarak inceleyin.

Sinyal yoğunluğunun yaklaşık 10 milyon ila 500 milyon arasında olduğunu kontrol edin. Dört ondalık basamağa kadar M üzeri Z içeren bir ekleme listesiyle yeni bir yöntem dosyası oluşturun. Global listelere ve dahil etmeye tıklayın.

PRM'nin özellikleri altında, parçalanma enerjisini ve diğer tandem MS parametrelerini seçin. Mesembrin alkaloidleri için tandem MS verilerini elde etmek için, iyonları Z üzerinde 276.1583 M, Z üzerinde 290.1742 M ve Z üzerinde 292.1897 M'de 35'lik normalleştirilmiş bir çarpışma enerjisinde parçalayın. Ardından, tandem MS yöntem dosyasını ve adlandırılmış bir veri dosyasını yükleyin.

MS sistemini açın ve gerekirse bir çözücü ekleyerek veri toplamaya başlayın. Yeterli spektrum toplandığında, tipik olarak 30 ila 60 saniye sonra, edinimi durdurun. Metin protokolünde açıklandığı gibi veri analizi gerçekleştirin.

Yaprak spreyi MS ve pozitif iyonizasyon ile Sceletium tortuosum'un metabolik profilinin temsili sonuçları, bu çalışmada 260 ila 295 M Z.In iç kısım gösterilerek gösterilmiştir, yaprak spreyi MS ile toplam dokuz mesembrin alkaloidi tespit edildi ve puditive tanımlamalar yapıldı. Yaprak spreyi MS toplam iyon sayısı kütle kronogramı, edinimin tüm süresi boyunca kararlı bir sinyalin korunduğu başarılı bir yaprak spreyi MS deneyini temsil eder. Her tepe için, en üstteki sayı dakika cinsinden zamandır ve alttaki M üzeri Z'dir.Tandem kütle spektrumları, yaprak spreyi MS ile bir Sceletium tortuosum kesilmiş yapraktan yapılan pozitif iyonizasyonda toplanmıştır. Alkaloidlerin puditive tanımlamaları, mesembrin M ve mesembrenone M izomerleri, mesembrin ve mesembrin M dihidro için doğru kütle ve kütle parçalanmasından yapılmıştır.

Bu videoyu izledikten sonra, bitki metabolitlerini tespit etmek için yaprak spreyi MS'in nasıl kullanılacağını iyi anlamış olmalısınız. Yaprak spreyi MS, endojen bileşiklerin yanı sıra pestisitler gibi eksojen bileşikleri tespit etmek için kullanılmıştır.