Name: Drosophila larva termal tercihlerini belirlemek için bir sıcaklık gradyanı tahlil (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: Öğrenin, Drosophila melanogaster larvalarının tercih ettiği çevre sıcaklığını belirlemek için sürekli termal gradyan analizi yöntemini. Bu teknik, somatosensasyon mekanizmalarını ve gelişimsel davranışları incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

C.M. (DC007864, DC016278) NIDCD (EY008117, EY010852), NEI fon tarafından desteklenmektedir ve NIAID (1DP1AI124453).

<ol><li>Fowler, M. A., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+TRP+channels+and+animal+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila TRP channels and animal behavior.</a> Life Sci. 92, 394-403 (2013).</li>
<li>Palkar, R., Lippoldt, E. K., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+basis+of+thermosensation+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular basis of thermosensation in mammals.</a> Curr Opin Neurobiol. 34, 14-19 (2015).</li>
<li>Vriens, J., Nilius, B., Voets, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+thermosensation+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Peripheral thermosensation in mammals.</a> Nat Rev Neurosci. 15 (9), 573-589 (2014).</li>
<li>Rosenzweig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+ortholog+of+vertebrate+TRPA1+regulates+thermotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">The Drosophila ortholog of vertebrate TRPA1 regulates thermotaxis.</a> Genes Dev. 19, 419-424 (2005).</li>
<li>Kwon, Y., Shim, H. S., Wang, X., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+thermotactic+behavior+via+coupling+of+a+TRP+channel+to+a+phospholipase+C+signaling+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Control of thermotactic behavior via coupling of a TRP channel to a phospholipase C signaling cascade.</a> Nat Neurosci. 11, 871-873 (2008).</li>
<li>Kwon, Y., Shen, W. L., Shim, H. S., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+thermotactic+discrimination+between+the+optimal+and+slightly+cooler+temperatures+via+a+TRPV+channel+in+chordotonal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fine thermotactic discrimination between the optimal and slightly cooler temperatures via a TRPV channel in chordotonal neurons.</a> J Neurosci. 30 (31), 10465-10471 (2010).</li>
<li>Shen, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+rhodopsin+in+temperature+discrimination+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Function of rhodopsin in temperature discrimination in Drosophila.</a> Science. 331 (6022), 1333-1336 (2011).</li>
<li>Sokabe, T., Chen, H. S., Luo, J., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+switch+in+thermal+preference+in+Drosophila+larvae+depends+on+multiple+rhodopsins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A switch in thermal preference in Drosophila larvae depends on multiple rhodopsins.</a> Cell Rep. 17, 336-344 (2016).</li>
<li>Ni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ionotropic+Receptors+IR21a+and+IR25a+mediate+cool+sensing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">The Ionotropic Receptors IR21a and IR25a mediate cool sensing in Drosophila.</a> Elife. 5, 13254(2016).</li>
<li>Luo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Navigational+decision+making+in+Drosophila+thermotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Navigational decision making in Drosophila thermotaxis.</a> J Neurosci. 30 (12), 4261-4272 (2010).</li>
<li>Ashburner, M., Golic, K. G., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila%3A+a+laboratory+handbook%22">Drosophila: a laboratory handbook</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2005).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu protokolü başarılı olmasını sağlamak için larva deneyler yapmak için yeterli sayıda elde etmek için ilgili adımları uygulamak önemlidir. Bu Maya tüpler için 2-3 yumurta atarken geliştirmek d Yapıştır içeren sinekli ön besleme içerir. Şişeleri su şişeleri içeren bir tepsiye yerleştirilir ve gıda nem korur ve etkili tarafından larvaları besleme iken normal koyu döngüleri maruz izin teşvik şeffaf plastik bir torbaya alınmış gerekir. Ancak, Maya Yapıştır sinekler tuzak haline çok yumuşak olmamalıdır. Kadın başına şişe üze...

Thermotaxis hareket eden hayvanlar tarafından en uygun koşulları1,2,3bir ortam seçmek için istihdam edilmektedir. Eğer iklim aşırı sıcak veya soğuk, bu davranış yaşam için hayati önem taşımaktadır. Buna ek olarak, birçok hayvan çok küçük rahat aralığında sıcaklık farklılıkları duyarlıdır ve çevresi ile ideal bir sıcaklık ararlar. Bu onların vücut ısısı çevre ile equilibrate meyve sinekleri gibi poikilothermic organizmalar için belirli önem taşıyor. Larva thermotaxis izlemek için deneyleri ve moleküler sensörler Drosophila geçici potansiyel reseptör (TRP) kanalları4,5,6gibi rolleri açıklığa kavuşturulması enstrümantal oldunuz. rhodopsins7,8ve ionotropic reseptör reseptörleri (IRS)9, hangi sıcaklık hassasiyeti ile bu hayvanların farklı sıcaklık aralıklarında bağışlamak.
Bir iki yönlü seçim test termal larvaları6,7tercihlerinde çalışmaya bir yaklaşım sağlar. Tahlil iki farklı sıcaklık bölgeleri kurulması üzerine kuruludur ve hayvanlar üzerinde başka bir tarafı seçmek izin verir. Çift yönlü seçenek test sonuçlarından sağlam, özellikle sıcaklık iki seçenek arasında büyük farklar olabilir. Her tahlil sadece iki grup tabulating gerektirdiğinden, buna ek olarak, verileri bir basit tercih dizin olarak ifade edilebilir. Rahatlık ve kolaylık-in iki yönlü seçim deneyleri de genetik ekranlara mükellef bulunmaktadır. Ancak, büyük bir sınırlama birçok deney vahşi-türü veya mutant hayvanlar tercih edilen sıcaklığını kurmak için gerekli olmasıdır.
Degrade bir tahlil tercih edilen sıcaklık tek tahlil8' kurmak için bir fırsat sunuyor. Ayrıca, iki yönlü seçim test farklı olarak, bu hayvan, bir grup dağılımı değerlendirilmesi sıcaklıklar sürekli bir dizi ile karşı karşıya izin verir. Bir degrade tahlil bir petri ve tek hayvan kullanır ve bireysel hayvanlar10ayrıntılı davranışını karakterize için uygundur. Ancak, Petri yemekler yuvarlak olduğundan, sıcaklık bölgeleri boyutları değişir ve Merkezi'nden mesafeye göre aşamalı olarak daha küçüktür. Bu nedenle, bu kurulum nüfus hayvanların sıcaklığı seçimleri izlemek için ideal değildir.
Larva grupları sıcaklık tercihlerini değerlendirmek için uygundur sürekli bir termal degrade aparatı ve dikdörtgen bir arena istihdam burada açıklanmıştır. Aparatı oluşturmak ve montajı kolaydır. Buna ek olarak, gradyandaki doğrusal ve 42 ° C. 10 ° C arasında büyük sıcaklık aralıkları üzerinden thermotaxis değerlendirmek için kullanılabilir gibi esnektir Tahlil hızlı ve doğru sözlü gerçekleştirmek ve tekrarlanabilir veri verir. Larva tercih sıcaklığını raporlama yanı sıra, hayvan nüfusu tercihleri tek bir deneyde bir tüm doğrusal aralığında ortaya çıkarır. Bu avantajlar nedeniyle thermotaxis için gerekli genler tanımlamak için mükemmel bir seçimdir.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Gradyan tahlil aparatı</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PolyScience 9106, Soğutmalı/Isıtmalı 6L Sirkülasyon Banyosu</td><td>Thomas Scientific</td><td>9106</td><td>Bu modelin üretimi durdurulmuştur. Güncellenen yedek modeller şunları içerir: 120 V, 60 Hz veya 1184L08 için 1186R00 ve 1197U04 ve 240 V, 50 Hz için 1197U04.</td></tr><tr><td>Alüminyum tahlil plakası (tek yönlü gradyan için)</td><td></td><td></td> <td>Dış boyut: 14 x 10.1 x 0.9 cm, iç boyut: 12.9 x 8.7 x 0.8 cm, siyah eloksallı.</td></tr><tr><td>Alüminyum levha (çift yönlü gradyan için)</td><td></td><td></td><td>25 x 22 x 0,2 cm, siyah eloksallı.</td></tr><tr><td>Alüminyum blok</td><td></td><td></td><td>Dış boyut: 25,5 x 5 x 1,4 cm, iç kanalların parametreleri Şekil 1D'de gösterilmiştir.</td></tr><tr><td>Alüminyum bloklar ve borular için konektör</td><td>McMaster-Carr</td><td>91355K82</td><td></td></tr><tr><td>Tygon Sıhhi Silikon Boru</td><td>Tygon</td><td>57296</td><td>1/4 "ID x 3/8" OD x 1/16 " duvar</td></tr> <tr><td>< güçlü > Adı< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Şirket< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Katalog Numarası< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Yorumlar<</td></tr> <tr><td>>< güçlü > Öğeler ve tahlil için reaktifler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pestle</td><td>USA Scientific</td><td>17361</td><td>1,5 mL mikrosantrifüj tüpleri için havaneli</td></tr><tr><td>Termometre</td><td>Fluke</td><td>51II</td><td></td></tr><tr><td>Termokupl</td><td>Fluke</td><td>K tipi</td><td></td></tr><tr><td>Üniversal mikroplaka kapağı</td><td>Corning</td><td>6980A77</td><td></td></tr><tr><td>35 mm çanak</td><td>Corning</td><td>9380D40</td><td></td></tr><tr><td>Etiketleme bandı (çift yönlü gradyan için)</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-951</td><td>Fisherbrand etiketleme bandı 2 inç x 14 yds</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16500500</td><td>%1 çözelti hazırlayın</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma</td><td>S0389-5KG</td><td>Teste başlamadan hemen önce %18'lik çözelti hazırlayın</td></tr><tr><td>Boya fırçası</td><td>Fisher Scientific</td><td>11860</td><td></td></tr><tr><td>50 mL santrifüj tüpleri</td><td>Denville</td><td>C1062-P</td><td></td></tr><tr><td>Scoopula</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-357Q</td><td></td></tr><tr><td>500 mL yuvarlak geniş ağızlı şişe</td><td>Pyrex</td><td>1395-500</td><td></td></tr><tr><td>Hücre süzgeci (300 mm gözenek)</td><td>PluriSelect</td><td>43-50300</td><td>Larva yıkama için isteğe bağlı ürün</td></tr><tr><td>Karton kutu (flakon tepsisi)</td><td>Genesee Scientific</td><td>FS32-124</td><td></td></tr><tr><td>Adı</strong</td><td>>Company<</td><td>strong>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Drosophila food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Damıtılmış su</td><td></td><td></td><td>22.400 mL</td></tr><tr><td>Mısır unu, sarı (ekstra ince ağ, floklu) 20 kg</td><td>LabScientific Inc.</td><td>NC0535320</td><td>1.609 g</td></tr><tr><td>Bira mayası 100 lbs</td><td>MP Biomedicals</td><td>ICN90331280</td><td>379 g</td></tr><tr><td>NutriSoy&reg; Soya Unu (10 kg/adet)</td><td>Genesee Scientific</td><td>62-115</td><td>221 g</td></tr><tr><td>Drosophila Agar, Tip II (5 kg)</td><td>Genesee Scientific</td><td>66-103</td><td>190 g</td></tr><tr><td>Karo hafif mısır şurubu</td><td>Karo</td><td></td><td>1.700 mL</td></tr><tr><td>Metil 4-hidroksibenzoat (200 geçirmez etanol içinde süspansiyon)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H5501-5KG</td><td>72 g/240 mL</td></tr><tr><td>Propiyonik asit saflığı. pa,>%99,5 (GC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>81910-1 L</td><td>108 mL</td></tr><tr><td>Fosforik asit&nbsp; ACS reaktifi, > H2O</td><td>Sigma Aldrich</td><td>438081-500 mL'de</td> ağırlıkça %<td>8.5</td></tr></tbody></table>

drosophila larva termal tercihlerini belirlemek için bir sıcaklık gradyanı tahlil

A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae

Meyve sineği Drosophila melanogaster, dahil olmak üzere birçok hayvan onların tercih edilen termal manzara aramaya sağlayan çevre sıcaklığı, ayrımcılık dakika farklılıklar yeteneğine sahiptirler. Larva sıcaklık tercihleri üzerinde tanımlanmış bir doğrusal Aralık tanımlamak için biz bir sıcaklık gradyanı kullanarak bir tahlil geliştirilmiştir. Bir tek yönlü eğim kurmak için iki Alüminyum blok her biri bireysel blok sıcaklığını denetler bağımsız su hamama bağlanır. İki blok geçişin alt ve üst sınırlarını ayarlayın. Sıcaklık gradyanı plaka aralarındaki uzaklığı kapsaması su kontrollü iki blok ötede bir özel kaplamalı alüminyum levha koyarak kurulur. Su blok üst kısmında ayarlanır alüminyum plaka uçları minimum ve maksimum sıcaklık tanımlar ve bölgeler arasında doğrusal bir sıcaklık gradyanı iki blok oluştururlar. Degrade tahlil farklı yaş larva için uygulanabilir ve mutasyonlar TRP kanalları ve sıcaklık ayrımcılık için gerekli olan opsins, kodlama genler etkileyen olanlar gibi fenotipleri sergi mutantlar tanımlamak için kullanılan.

Bir 18 ° C - 28 ° C tek yönlü kurmak için degrade, biz iki su banyo sıcaklıklarında 16.8 ° C ile 31 ° c için ayarla Biz 13 puan sıcaklıklarda tüm 6 bölgeler, bölgeler arasında kenarlık çizgisi üst ve alt bölümleri içinde 26 pozisyonlarda ve özel jel yüzeyi (Şekil 2C, 2E) aşırı ucundaki sıcaklık ölçülerek elde. Sıcaklık dağılımı degrade boyunca yaklaşık doğrusal (Y 0.9672 * X + 16.19, R2 = 0.9961 =) (Şekil 2E</s...

Burada, Drosophila larva sürekli termal degrade kullanarak tercih edilen ortam sıcaklığında belirlemek için bir iletişim kuralı mevcut.

Drosophila larva termal tercihlerini belirlemek için bir sıcaklık gradyanı tahlil

Many animals, including the fruit fly, Drosophila melanogaster, are capable of discriminating minute differences in&#160;environmental temperature, which ...

Bu yöntem, drosophila melanogaster gibi bir hayvanın tercih ettiği çevre sıcaklığını seçme mekanizması olan somatosensasyon alanındaki önemli bir soruyu ele almak için kullanılabilir. Bu tekniğin temel avantajı, sürekli bir sıcaklık aralığı ile karşı karşıya kaldığında larva grubunun tercih edilen sıcaklığını tek bir tahlilde belirleyebilmesidir. Drosophila larvalarının sıcaklık tercihleri hakkında bilgi sağlamanın yanı sıra, impress plakası solucan, C elegans gibi diğer model organizmalarla kullanım için de uyarlanabilir.İlk olarak, bir haç için şişeler hazırlamak için maya macunu yapın. Maya granüllerini damıtılmış suda karıştırın ve bir havaneli ile bir macun haline getirin. Ardından, gıda yüzeyinin hemen üzerindeki standart drosophila şişelerinin iç duvarlarına yakın bir miktar maya ezmesi ekleyin.Larvaları üretmek için 12 ila 35 dişi ve yarısına kadar erkek toplayın, ancak 10'dan fazla erkek toplayın. Bu grupları maya macunu içeren şişede birleştirin. Hazırlanan şişeleri 100 şişelik bir tepsiye yükleyin.Nem sağlamak için tepsiye su dolu 20 açık şişe ekleyin. Ardından tepsiyi şeffaf bir plastik torbaya koyun ve 25 santigrat derecede 48 saat inkübe edin. 48 saatlik beslenme ve çiftleşmeden sonra, yumurtaları toplamak için sinekleri yeni yiyecek şişelerine aktarın.Üzerlerine dokunun. Karbondioksit kullanmayın. Ardından, sineklerin 25 santigrat derecede üç saat boyunca yumurta bırakmasına izin verin.Daha sonra yetişkinleri çıkarın ve yumurtaları içeren şişeleri tekrar su şişelerinin bulunduğu tepsiye yerleştirin ve torbayı kapatın. Ardından, yumurtaları 25 santigrat derecede istenen larva aşamasına kadar geliştirin. Tek yönlü bir gradyan hazırlamak için, önce tahlil için bir insan ortam ortamı oluşturun.Ayrı su banyolarına bağlı iki alüminyum bloğu 10 santimetre aralıklarla ıslak kağıt havluların üzerine yerleştirin. Su banyolarının önceden ısıtılması gerekir. Daha sonra, 100 mililitre% 1 agaroz yapın ve düz bir yüzeyde her bir tahlil plakasına 25 mililitre ekleyin.Agaroz katılaştıktan sonra, yüzeyi biraz kaba hale getirmek için yüzeyi bir melamin süngerle hafifçe ovalayın. Ardından, verimli sıcaklık transferini teşvik etmek için, tahlil plakalarındaki alüminyum bloklar arasındaki boşlukları bir sprey şişesinden verilen suyla doldurun. Şimdi, tahlil plakalarını alüminyum blokların üzerine yerleştirin ve alüminyum blokların kenarlarıyla tam olarak eşleşmesi için sınırların her iki kenardan iki santimetre uzakta olduğundan emin olun.Ardından, jellerin kurumaması için plakaların yüzeyine bir film su püskürtün. Ardından, buharlaşmayı azaltmak ve jel yüzeyinin sıcaklığını stabilize etmeye yardımcı olmak için sistemi bir karton kutu ile örtün. Sıcaklığın dengelenmesi için beş ila 10 dakika bekleyin.Ardından, baştan sona eşit bir sıcaklık olduğundan emin olmak için plaka üzerindeki yüzey sıcaklığını en az 12 yerde kontrol edin, iki santigrat derece verin veya alın. Ardından, tahlil yapılana kadar kutu kapağını değiştirin. Temiz larvaları izole etmek için önce 50 mililitrelik bir test tüpüne yaklaşık 40 mililitre% 18 sükroz çözeltisi ekleyin.Daha sonra larvaları yiyecek yığınlarından bir kepçe kullanarak çözeltiye aktarın. Daha sonra, larvaları kepçe kullanarak çözeltinin etrafında iyice karıştırın. Şimdi, larvaların tüpün üst tabakasına yüzmesi için 30 ila 60 saniye bekleyin.Daha sonra larvalarla birlikte çözeltiyi 50 mililitrelik başka bir tüpe dökün ve taze% 18 sükroz ile doldurun. Yine larvaların yüzmesini bekleyin. Yiyeceklerin varlığı sonuçları etkileyebilir.Bu nedenle, tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için, gıda ile kontaminasyonu en aza indirmek için larvaları iyice temizlemek önemlidir. Larvalara zarar vermemek için nazikçe yapın. Daha sonra, 50 mililitrelik bir tüpün üzerine 300 mikronluk bir hücre süzgeci yerleştirin, ardından sakaroz çözeltisinin yüzeyindeki ölü yetişkin cesetlerini ve yüzen kalıntıları temizleyin.Şimdi, larvaları süzgeçten geçirerek süzgeçten geçirin ve onları örgü elek üzerinde toplayın. Ardından, larvaları daha fazla temizlemek için süzgeçten iki kez yaklaşık 50 mililitre su akıtın. Daha sonra, 35 milimetrelik boş bir tabağa, larvaların çoğunu süzgeçten su kullanarak durulayın.Kalan larvaları ağ üzerinde aktarmak için bir boya fırçası kullanın. Ardından, bir mikro pipet kullanarak tabaktaki suyun çoğunu sifonlayın. Daha sonra kapağı tabağın üzerine baş aşağı yerleştirin, böylece larvalar kaçamaz.Şimdi, testi başlatmadan önce larvaların 10 ila 20 dakika iyileşmesine izin verin. İlk olarak, jelin üzerindeki karton kutuyu çıkarın ve jel yüzey sıcaklığını hızlı bir şekilde kontrol edin. Yüzey kuruysa, yüzeye az miktarda su püskürtün.Jel iyiyse, küçük bir boya fırçası kullanarak her plakanın ortasına 100 ila 200 larva yükleyin. Ardından, larvaları yakalamak için her bir tahlil plakasının üzerine bir kapak yerleştirin ve ışığa maruz kalmayı önlemek için kurulumu bir karton kutu ile örtün. Tahlil şu anda devam ediyor.10 ila 30 dakika sonra karton kutuyu ve mikroplaka kapağını çıkarın. Ardından, larvaların konumunu kaydetmek için plakaları yukarıdan fotoğraflayın. Jelin yüzeyinde yansımayı önlemek için kutuyu kameranın üzerine yerleştirin.Plakayı temizlemek için, dağılmış olabilecekleri her yerde tüm larvaları aspire edin. Şimdi, görüntü analiz yazılımı kullanarak her bölgedeki larvaların yüzde dağılımını hesaplayın. Tahlil plakasındaki sınırlara göre her iki santimetrede bir çizgiler yapın ve her bölgedeki larva sayısını sayın.Sayarken, her kenardan 0,5 santimetre uzaklıktaki sırtlara dağılmış larvaları göz ardı edin, çünkü jel kalınlığı ve sıcaklık koşulları kenara yakın yerlerde eşit değildir. 18 santigrat derece ila 28 santigrat derece arasında, 16.8 santigrat derece ve 31 santigrat dereceye ayarlanmış su banyoları kullanılarak tek yönlü gradyan yapıldı. Gradyan boyunca sıcaklık dağılımının neredeyse doğrusal olduğu bulundu.Kontrol larvaları çeşitli yaşlarda test edildi. Birinci, ikinci ve erken-üçüncü instar larvaları 24 santigrat derece bölgesi için en yüksek tercihleri gösterdi. Üçüncü yılın ortalarında, larvaların çoğu 18 santigrat derece bölgesinde birikmiştir.Dolaşmayan geç üçüncü instar larvaları, 18 santigrat derece bölgesinde sıkı bir şekilde kümelenmiştir. Beyaz 1118 olan kontrol suşunda 18 santigrat derece bölgesinde birikme eğilimi, bir kenar etkisinden kaynaklanmadı, çünkü geç üçüncü instar larvaları hala çift yönlü bir gradyan kullanarak 18 derece Santigrat bölgesinde birikti. Sıcaklığı ayırt etmek için gerekli olan üçüncü instar larvalarının barındırdığı mutasyonları analiz ettiğimizde, sonuçlar değişti.trpA1'de boş mutasyona sahip larvalar, 18 santigrat derece ila 28 santigrat derece gradyasının tamamına eşit olarak dağıtılır. Sadece A ve B izoformlarını veya trpA1'in C ve D izoformlarını eksik olan larvalar da ciddi bozulmalar göstermiştir. Fosfolipaz c beta, norpA'yı kodlayan iki genden birinde mutasyona sahip larvalar da bozulmuştur.Bununla birlikte, diğer fosfolipaz c beta, plc21c'yi kodlayan bir gende mutasyona sahip larvalar normal davrandı. Bu videoyu izledikten sonra, yabani tip ve mutant drosophila larvalarının sıcaklık tercihlerini karşılaştırmanıza olanak tanıyan sürekli bir termal gradyan kullanarak tekrarlanabilir sonuçların nasıl elde edileceği konusunda net bir anlayışa sahip olmalısınız. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik tek bir tahlil için 30 dakika içinde yapılabilir.Bu prosedürü denerken, sinek şişelerinin durumuna dikkat etmek ve larvaları kurumuşsa kullanmamak önemlidir. Bu teknik, drosophila larvalarının rahat aralıkta en sevdikleri sıcaklığı seçmek için ihtiyaç duyduğu yeni genlerin keşfini basitleştirir.

a-temperature-gradient-assay-to-determine-thermal-preferences

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu yazıda, tayinlerde termal nosisepsiyon çalışma...

Termal nosisepsiyon değerlendirilmesi Yerel ve Küresel Yöntemleri<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

Bu video, tercih edilen maddenin yutulmasından sonra sineğin karın rengini değerlendirerek farklı tada sahip renkli solüsyonlara karşı çekiciliği veya kaçınmayı ölçmek için kullanılan davranışsal bir yöntem olan tat tercihi testini açıklar. Öne çıkan protokol, sineklerin değişen sakaroz konsantrasyonlarına sahip çözeltilere yönelik tercihini ölçmek için kullanılan prosedürü göstermektedir.

Tat tercihi testi: Drosophila'da beslenme davranışını ölçmek için bir yöntem

&gt;Drosophila larvaları, potansiyel olarak zararlı termal uyaranlara tepkileri hayvanda caydırıcı veya "nosifensif" olarak adlandırılan davranışları tetikleyen özel duyusal nöronlara (nosiseptörler) sahiptir. Bu video, bir ısı probunun kütikül üzerine lokal olarak uygulanmasına yanıt olarak larva davranışını kaydederek termal nosisepsiyonunu değerlendirmek için bir yöntemi açıklar. Bu nedenle bu yönteme yerel ısı probu tahlili denir.

Lokal Isı Probu Deneyi: Drosophila Larvalarında Yüksek Sıcaklıkların Nosisepsiyonunu Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

&gt;Drosophila meyve sinekleri, sıcaklıktaki küçük değişiklikleri ayırt edebilir ve bu nedenle uygun termal koşullara sahip ortamları seçebilir. Bu video, Drosophila larvalarının sıcaklık tercihini doğrusal bir termal gradyan üzerinde test eden davranışsal bir testi açıklamaktadır.

Sıcaklık Gradyanı Deneyi: Drosophila Larvalarında Sıcaklık Tercihini Test Etmek İçin Bir Yöntem

Son zamanlarda, sineklerde tercih edilen sıcaklığın gündüz arttığı ve gece boyunca düştüğü drosophila sirkadiyen çıktısı, sıcaklık tercih ritmi (TPR) adlı bir roman belirledik. TPR, başka bir sirkadiyen çıkış olan lokomotor aktiviteden bağımsız olarak düzenlenir. Burada TPR'nin tasarımını ve analizini drosophila.

Drosophila'da Sıcaklık Tercih Davranışının ve Sirkadiyen Ritminin Tasarımı ve Analizi

Bu rapor, TriKinetics Drosophila Activity Monitor kullanılarak Drosophila larva aktivitesini ölçmek için bir yöntemi açıklar. Cihaz, 16 adede kadar bireysel hayvanın hareketlerini algılamak için kızılötesi ışınlar kullanır. Veriler, oranlar ve hayvanların tahlil odaları içindeki konumları dahil olmak üzere hareket parametrelerini temsil etmek için analiz edilebilir.

Larvaların Faaliyet Ölçümü<em&gt; Drosophila</em&gt; Activity Monitor

Burada Drosophila larvalarının soğuk nosisepsiyon incelemek için yeni bir test göstermektedir. Bu deney, bir fokal zararlı soğuk uyan uygulamak edebilen özel bir dahili Peltier prob kullanır ve ölçülebilir soğuk belirli bir davranış ile sonuçlanır. Bu teknik, soğuk nosisepsiyon başka hücresel ve moleküler diseksiyon sağlayacaktır.

Soğuk nosisepsiyon için Roman Tahlili<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

Burada zaman ve mekan içinde hızlı ve hassas sıcaklık değişiklikleri üretir programlanabilir bir ısı kontrollü arena kullanarak sıcaklık değiştirme Drosophila lokomotor performansını otomatik olarak belirlemek için bir iletişim kuralı mevcut.

Drosophila sıcaklık değişiklikler uzay ve zaman içinde performansını belirlemek için otomatik yöntemi

Termal sınırlar organizmaların tolere ettiği ortamları tahmin edebilir, ki bu da hızlı iklim değişikliği karşısında değerli bilgilerdir. Burada açıklanan böceklerde kritik termal minima ve ısı nakavt süresini değerlendirmek için yüksek iş gücü protokolleri vardır. Her iki protokol de iş hacmini en üst düzeye çıkarır ve tahlillerin maliyetini en aza indirir.

Böceklerde Kritik Termal Limitlerin Yüksek İş Gücü Tahlilleri

Böcekler, içinde kalmaya çalıştıkları optimal bir çevresel sıcaklık aralığına sahiptir ve birçok dış ve iç faktör bu tercihi değiştirebilir. Burada, böceklerin doğal davranışlarını özgürce sergilemelerini sağlayan sıcaklık seçimini incelemek için uygun maliyetli ve basit bir yöntem açıklıyoruz.

Sivrisineklerin ve diğer ektotermlerin sıcaklık tercihinin belirlenmesi

Bu rapor, bir inkübatör odası içindeki bir hava iletimi ısı stresörüne yanıt olarak bir Drosophila Aktivite Monitörü (DAM2) kullanarak yetişkin Drosophila melanogaster'in devrilme süresini ölçmek için bir yöntemi açıklar. DAM2, bir kızılötesi ışını geçerken bireysel sinek hareketlerini kaydederek aktiviteyi ölçer. Veri analizi, yazarlar tarafından oluşturulan yeni bir yürütülebilir dosya ile kolaylaştırılır.

Drosophila Activity Monitor Sistemini Kullanarak Isı Toleransı Testleri: Veri Analizi için Yürütülebilir Bir Uygulama Kılavuzu

Öğrenin, Drosophila melanogaster larvalarının tercih ettiği çevre sıcaklığını belirlemek için sürekli termal gradyan analizi yöntemini. Bu teknik, somatosensasyon mekanizmalarını ve gelişimsel davranışları incelemek için kullanılır.

Drosophila larva termal tercihlerini belirlemek için bir sıcaklık gradyanı tahlil

Daha fazla video keşfet