Name: Sıçan Vivo içinde kısmi karaciğer Dairesinde için bir temel olarak yeni bir cerrahi teknik (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 27 s
Description: Keşfedin sıçanlarda in vivo tek karaciğer lobu perfüzyonu için yeni bir cerrahi teknik. Bu yöntem, kısmi karaciğer mühendisliği çalışmaları için temel oluşturur ve uzun süreli sağkalım sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Jens Geiling Anatomi Enstitüsü üzerinden teşekkür etmek istiyorum ben, Jena Üniversitesi Hastanesi sıçan karaciğer anatomi şematik çizimler üretmek için.

Konut ve tüm yordamları yürütülen Alman hayvan refah teşri uygun olarak... Tüm gazlı bez, kaplama giysileri ve cerrahi aletler autoclaved ve operasyon öncesi hazırlanmış. Tüm yordamları Steril koşullar altında yapılmaktadır.
1. cerrahi işlem için fareyi hazırlanması
<ol><li>Fareyi bir indüksiyon odasında yerleştirin ve fare tamamen anestezi kadar %4 buharlaşmış isoflurane ve % 100 oksijen 0,5 L/dk 3 dk, fareyle anestezi.</li>
	<li>Fareyi indüksiyon odadan alın ve vücut ağırlığını ölçmek.</li>
	<li>Karın üzerinde cerrahi bölgesinin kürk tıraş.</li>
	<li>Hayvan arka anestezi derinleştirmek için ek bir 2 dakika için isoflurane odasına koyun.</li>
	<li>Fare Operasyon masası sırtüstü pozisyonda yerleştirin.</li>
	<li>Anestezi Maskesi farenin ağız bölgesine düzeltmek ve %2 buharlaşmış isoflurane ve % 100 oksijen 0,5 L/dk akış hızında sürekli gaz akışı ile anestezi hayvan tutmak.</li>
	<li>Bacaklarda bant parçaları ile düzeltmek.</li>
	<li>Veteriner merhem kuruluğu önlemek için her iki gözde uygulanır.</li>
	<li>Buprenorfin yönetmek 0,05 mg/kg subkutan, operasyon süresi sırasında ağrı gidermek için.</li>
	<li>% 70 alkol 2 tur tarafından takip iyot tentür 3 mermi karın alan cerrahi dezenfekte.</li>
	<li>Yer nereye belgili tanımlık kesme yalnızca işlem alanı maruz karın bırakın yapılacak alanı çevresinde gazlı bez sterilize.</li>
	<li>Toe-çimdik çekilme refleks sıçan yok olduğunda işlemi gerçekleştirmek için devam edin.</li>
</ol>2. laparotomi farenin
<ol><li>Makas ve bir elektrik coagulator kullanarak bir enine karın kas ve cilt kesi yapmak.</li>
	<li>Tamir ve xiphoid işlemi 4-0 polipropilen dikiş kullanarak kafa doğru çekin. Not: karaciğer xiphoid işleminin daha iyi maruz için dikey olarak yukarı kaldırın, ancak şiddetli solunum kısıtlama ve boğulma önlemek için dikkatli olun dikkat edin.</li>
	<li>Periton boşluğuna karın duvarları başından karaciğer ortaya çıkarmak için iki subcostal Kancalı doğru her iki tarafında çekerek açın.</li>
	<li>Oniki parmak bağırsağı ve ince bağırsak karın boşluğunda kurutma önlemek için nemli bir gazlı bez ile kapağı.</li>
	<li>Sol ve sağ medyan loblar ıslatılmış gazlı bez kullanarak kaldırın ve karaciğer Hilus toraks daha iyi maruz için karşı tutunuz.</li>
	<li>Fareyi bir stereomicroscope (8 X büyütme) altında yerleştirin.</li>
	<li>Sıcak biraz saline tüm prosedürü sırasında kurutma önlemek için her birkaç dakikada karın içine ve karaciğer ve bağırsak yüzeyinin bırak.</li>
</ol>3. sol yan lob içinde bir Bypass geçit kurulması
<ol><li>Sol portal ven teşrih ve Bankası (Şekil 2A), 6-0 ipek sütür ile ligate.</li>
	<li>Sol hepatik arter, sol safra kanalını sol medyan portal ven, sol medyan hepatik arter ve sol medyan safra kanalı ile birlikte sol medyan lob (Şekil 2B) için perfusate akışını önlemek için mikro kelepçeler ile engelleyin.</li>
	<li>Sol yan lob mikro makasla keserek lob çevreleyen bağ ayırın.</li>
	<li>Sol yanal hepatik ven sol yan lob tabanında mikro kelepçeler (Şekil 2C) ile sıkma tarafından engelleyin. Not: sol portal ven de yanlışlıkla kelepçe değil emin olun.</li>
	<li>Sol portal ven bağ tutun ve daha sonra cannulation için uygun gerilim ile ven tutmak için kullanım sivrisinek kıskaç.</li>
	<li>Dikkatle bir kesik bir 24-G iğne-konut sonda ( Şekil 3A) ile delme tarafından sol portal ven ön duvarında olun. Not: vasküler erişim noktaları sol portal ven ve sol hepatik ven bir yan yol oluşturmak için ihtiyaç vardır. Bu adımda, vasküler erişim yerine damarlara iğneyle delme makas kullanarak daha büyük bir kesi yaparak tarafından oluşturmak için tercih edilir. Bu kanama ve daha sonra stenoz riskini azaltır.</li>
	<li>Kateter geri çekilin ve iğne iğne ücretsiz 24-G kateter elde etmek için kateter dışarı al.</li>
	<li>Kateter bir perfüzyon tüp bağlamak, diğer bitiş noktası 40 15 mL 20 mL şırınga bağlandığı U/mL serum fizyolojik bir perfüzyon pompa üzerinde heparinized.</li>
	<li>Pompa tüp ve iğne-Alerjik kateter havadan dışarı çıkarmak için tüp ventriküler için açın.</li>
	<li>Perfüzyon pompa kapatmak açmak.</li>
	<li>Yeniden, iğne-Alerjik kateter sol portal ven yoluyla ven (Şekil 3B) üzerinde delinmiş kesi içine ekleyin. Not: sayesinde hiçbir şey kateter sabitleme için çok sınırlı alanlarda, bu noktada sabit değil. Bu nedenle, cerrah dikkatli olmalısınız cannulated kateter çıkarılması önlemek için.</li>
	<li>Dikkatli bir şekilde sol yanal hepatik ven kenar boşluğuna maruz bölgesinin başka bir kesi 22 ya da 24 G iğne-konut sonda (Şekil 3 c) ile delme tarafından olun. Not: Kateter gemi biraz daha küçük olması önerilir.</li>
	<li>Kateter geri çekilin ve iğne iğne-Alerjik 22-G kateter elde etmek için kateter dışarı al.</li>
	<li>Heparinized serum sol lateral lob ile sıvı perfüzyon pompa 24-G cannulated iğne-Alerjik kateter sol portal ven 0.5 mL/dk akış hızında, açın.</li>
	<li>Sol yanal hepatik ven kesi çevresinde dışarı akan atık sıvı emmek için kuru gazlı bez kullanın.</li>
	<li>Sol lateral hepatik ven ile delinmiş kesi ile intra abdominal kirlenme (şekil 3D) en aza indirmek için sıvı bir çıkış üretmek için 22-G iğne-Alerjik kateter, damarın cannulate. Not: Teknik olarak karaciğer lob için cannulated kateter düzeltmek zordur. Bu nedenle, cerrah deplasman kateterin önlemek için dikkat etmelidir. Alternatif olarak, bir kateter ile sol yanal hepatik ven cannulation, atık sıvı da, kesi bölgesinde damarın sadece kuru bir gazlı bez ile absorbe edilebilir.</li>
	<li>Yaklaşık 20 dk (Grup 1) için heparinized serum fizyolojik ile sol yan lob ventriküler tutmak ve o zaman sadece serum fizyolojik ile 2 h 3 h ya da 4 h (Grup 2, Grup 3 ve Grup 4, sırasıyla).</li>
	<li>Perfüzyon durdurmak için pompa çevirmek.</li>
</ol>4. fizyolojik reperfüzyon sol yan lob
<ol><li>Her iki kateter sol portal ven ve sol yanal hepatik ven çıkar.</li>
	<li>11-0 poliamid dikiş ile sol portal ven kesi kapatın.</li>
	<li>Bir 11-0 poliamid dikiş ile sol yanal hepatik ven kesi kapatın.</li>
	<li>Sol yanal hepatik ven unclamp.</li>
	<li>Sol medyan portal ven, sol safra kanalını ve sol hepatik arter unclamp.</li>
	<li>Damar yeniden açmak için sol portal ven üzerinde bağ kesti.</li>
</ol>5. karın duvarı kapatılması
<ol><li>Karın duvarı kas tabakası tarafından kesintiye uğramış ile 4-0 absorbe polyglactin 910 dikiş dikiş kapatın.</li>
	<li>Karın duvarının deri tabakası tarafından kesintiye uğramış ile 4-0 absorbe polydioxanone dikiş dikiş kapatın.</li>
	<li>Karın kapattıktan sonra cilt kesi % 70 alkol ile dezenfekte edin.</li>
</ol>6. ameliyat sonrası tedavi farenin
<ol><li>Canlandırma için yaklaşık 10 dakika için ısınma bir yastık üzerinde hayvan yerleştirin ve daha sonra yeni bir kafesin içine koydu.</li>
	<li>Buprenorfin yönetmek 0,05 mg/kg subkutan 2 x bir gün bir ardışık 3 d postoperatively ağrı serbest bırakmak için.</li>
</ol>

<ol><li>Kim, W. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OPTN+%2F+SRTR+2016+Annula+Data+Report%3A+Liver%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation.+Suppl%22%5BJournal%5D)">OPTN / SRTR 2016 Annula Data Report: Liver.</a> American Journal of Transplantation. Suppl. 1, 172-253 (2018).</li>
<li>Palakkan, A. A., Hay, D. C., Anil Kumar, P. R., Kumary, T. V., Ross, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+tissue+engineering+and+cell+sources%3A+issues+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Liver tissue engineering and cell sources: issues and challenges.</a> Liver International. 33, 666-676 (2013).</li>
<li>Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+matrix%3A+not+just+pretty+fibrils%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The extracellular matrix: not just pretty fibrils.</a> Science. 326, 1216-1219 (2009).</li>
<li>Flaim, C. J., Chien, S., Bhatia, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+extracellular+matrix+microarray+for+probing+cellular+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">An extracellular matrix microarray for probing cellular differentiation.</a> Nature Methods. 2, 119-125 (2005).</li>
<li>Wells, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+matrix+stiffness+in+regulating+cell+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">The role of matrix stiffness in regulating cell behavior.</a> Hepatology. 47, 1394-1400 (2008).</li>
<li>Ren, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+two+decellularization+methods+in+the+development+of+a+whole-organ+decellularized+rat+liver+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Evaluation of two decellularization methods in the development of a whole-organ decellularized rat liver scaffold.</a> Liver International. 33, 448-458 (2013).</li>
<li>Yagi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human-scale+whole-organ+bioengineering+for+liver+transplantation%3A+a+regenerative+medicine+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Human-scale whole-organ bioengineering for liver transplantation: a regenerative medicine approach.</a> Cell Transplantation. 22, 231-242 (2013).</li>
<li>Jiang, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-chemical+decellularization+of+the+whole+liver+for+mesenchymal+stem+cells-based+functional+hepatic+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Cryo-chemical decellularization of the whole liver for mesenchymal stem cells-based functional hepatic tissue engineering.</a> Biomaterials. 35, 3607-3617 (2014).</li>
<li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nature Medicine. 16, 814-820 (2010).</li>
<li>Baptista, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+whole+organ+decellularization+for+the+generation+of+a+vascularized+liver+organoid%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">The use of whole organ decellularization for the generation of a vascularized liver organoid.</a> Hepatology. 53, 604-617 (2011).</li>
<li>Bruinsma, B. G., Kim, Y., Berendsen, T. A., Yarmush, M. L., Uygun, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Layer-by-layer+heparinization+of+decellularized+liver+matrices+to+reduce+thrombogenicity+of+tissue+engineered+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+and+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Layer-by-layer heparinization of decellularized liver matrices to reduce thrombogenicity of tissue engineered grafts.</a> Journal of Clinical and Translational Research. 1 (1), (2015).</li>
<li>Park, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+Liver+Extracellular+Matrix+as+Promising+Tools+for+Transplantable+Bioengineered+Liver+Promotes+Hepatic+Lineage+Commitments+of+Induced+Pluripotent+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Decellularized Liver Extracellular Matrix as Promising Tools for Transplantable Bioengineered Liver Promotes Hepatic Lineage Commitments of Induced Pluripotent Stem Cells.</a> Tissue Engineering Part A. 22, 449-460 (2014).</li>
<li>Ko, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineered+transplantable+porcine+livers+with+re-endothelialized+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Bioengineered transplantable porcine livers with re-endothelialized vasculature.</a> Biomaterials. 40, 72-79 (2015).</li>
<li>Bao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+a+portal+implantable+functional+tissue-engineered+liver+using+perfusion-decellularized+matrix+and+hepatocytes+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Construction of a portal implantable functional tissue-engineered liver using perfusion-decellularized matrix and hepatocytes in rats.</a> Cell Transplantation. 20, 753-766 (2011).</li>
<li>Pan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vivo+organ+engineering%3A+Perfusion+of+hepatocytes+in+a+single+liver+lobe+scaffold+of+living+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Biochemistry+%26+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">In-vivo organ engineering: Perfusion of hepatocytes in a single liver lobe scaffold of living rats.</a> The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 80, 124-131 (2016).</li>
<li>Madrahimov, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marginal+hepatectomy+in+the+rat%3A+from+anatomy+to+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Marginal hepatectomy in the rat: from anatomy to surgery.</a> Annals of Surgery. 244, 89-98 (2006).</li>
<li>Mussbach, F., Settmacher, U., Dirsch, O., Dahmen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineered+Livers%3A+A+New+Tool+for+Drug+Testing+and+a+Promising+Solution+to+Meet+the+Growing+Demand+for+Donor+Organs%5BTitle%5D)+AND+%22European+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Bioengineered Livers: A New Tool for Drug Testing and a Promising Solution to Meet the Growing Demand for Donor Organs.</a> European Surgical Research. 57, 224-239 (2016).</li>
<li>Mussbach, F., Settmacher, U., Dirsch, O., Dahmen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+engineering+as+a+new+source+of+donor+organs%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Der+Chirurg%22%5BJournal%5D)">Liver engineering as a new source of donor organs: A systematic review.</a> Der Chirurg. 87, 504-513 (2016).</li>
<li>Xie, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+systemic+and+hepatic+hemodynamic+parameters+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Monitoring of systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e51955(2014).</li>
<li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+and+Recellularization+of+Rat+Livers+With+Hepatocytes+and+Endothelial+Progenitor+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Decellularization and Recellularization of Rat Livers With Hepatocytes and Endothelial Progenitor Cells.</a> Artificial Organs. 40, E25-E38 (2016).</li>
<li>Yagi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human-scale+whole-organ+bioengineering+for+liver+transplantation%3A+a+regenerative+medicine+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Human-scale whole-organ bioengineering for liver transplantation: a regenerative medicine approach.</a> Cell Transplantation. 22, 231-242 (2013).</li>
<li>Otsuka, H., Sasaki, K., Okimura, S., Nagamura, M., Nakasone, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterned+co-culture+of+hepatocyte+spheroids+layered+on+non-parenchymal+cells+to+understand+heterotypic+cellular+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Science+and+Technology+of+Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Micropatterned co-culture of hepatocyte spheroids layered on non-parenchymal cells to understand heterotypic cellular interactions.</a> Science and Technology of Advanced Materials. 14, 065003(2013).</li>
<li>Bale, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+coculture+strategies+for+primary+hepatocytes+and+liver+sinusoidal+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+C%3A+Methods%22%5BJournal%5D)">Long-term coculture strategies for primary hepatocytes and liver sinusoidal endothelial cells.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 21, 413-422 (2015).</li>
<li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+perfusion-decellularization+methods+of+porcine+livers+for+clinical-scale+whole-organ+bioengineering%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Optimizing perfusion-decellularization methods of porcine livers for clinical-scale whole-organ bioengineering.</a> BioMed Research International. , 785474(2015).</li>
<li>Barakat, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+decellularized+porcine+liver+for+engineering+humanized+liver+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Use of decellularized porcine liver for engineering humanized liver organ.</a> Journal of Surgical Research. 173 (1), e11-e25 (2012).</li>
<li>Navarro-Tableros, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recellularization+of+rat+liver+scaffolds+by+human+liver+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Recellularization of rat liver scaffolds by human liver stem cells.</a> Tissue Engineering Part A. 21 (11-12), 1929-1939 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Engelleme ve sıvı bir giriş olarak bir kateter ile sol portal ven ve sıvı bir çıkış olarak başka bir kateter ile sol yanal hepatik ven cannulating, biz başarılı bir şekilde sol yan lob içinde bir vivo içinde sıvı yan yol gösteren oluşturulan Teknik cannulation kapları küçük boyutu ve kanama neden yüksek bir risk nedeniyle son derece zor olsa da, mümkün olabilir. 4 saatlik bir uzun perfüzyon süre geçiren fareler bile en az 1 hafta fareler bu cerrahi işlem tahammül olabilir gösterilen, hayatta kaldı.
<p class=...

Organ nakli için göstergeler sürekli genişletiyoruz. Buna ek olarak, organ bağışı oranları ve organları genel kalitesini, greft için artan bir talep lider kabul etmediğinizi. Karaciğer nakli bekleyen listesine aday sayısı devam artırmak (Örneğin, Amerika Birleşik Devletleri, 11,340 hastaların 2016 yılında eklenen karşılaştırıldığında 10,636 ile 2015 yılında)1. Önemli çabalara rağmen mevcut organ sayısı klinik ihtiyaçlarını karşılamıyor. Karaciğer hastalığı olaylarının artması nedeniyle, birçok hasta ile son aşama karaciğer hastalıkları die önce bir donör organ nakli bekleme listesinde kullanılabilir duruma gelir. Donör karaciğer nakli için büyük talebi karşılamak için2alternatif yaklaşımlar karaciğer dokusu mühendislik prensipleri etkin olarak davranıyorsunuz kullanarak takip etti. Günümüzde karaciğer mühendislik yeni geliştirilen biyolojik tekniği bu sıkıntısı üstesinden gelebilir.
Karaciğer mühendislik iki adımdan oluşur: bir acellular iskele iskele repopulation tarafından takip, nesil. Bir biyolojik acellular karaciğer iskele elde etmek için explanted karaciğer periosteum ile damar sistemi hücresel malzeme karaciğer kaldırabilirsiniz iyonik veya Nonyonik deterjanlar ile gerçekleştirilir. Çoğu önceki çalışmalarda, bir biyolojik acellular karaciğer iskele perfüzyon karaciğer Sodyum Lauryl Sülfat ve TritonX100 bir kombinasyonu ile sağlanır. Tüm hücreleri hücre dışı matriks yapısını devam edildi, ancak sonuç olarak çıkarıldı. Organ iskele olgun hücreler, hepatosellüler, yanı sıra endotel hücre satırları ve birincil tetkikine veya endotel hücreleri veya mezenkimal kök hücre (MSC) eşzamanlı uygulama olmadan reseeded. Çoğu araştırmacılar odak ex vivo karaciğer mühendislik3,4,5,6,7,8,9,10 11,12,13,14. Ancak, çoğu önceki çalışmalarda sadece küçük parçalar halinde yeniden iskele küpleri farklı heterotopik implantasyon siteleri nakledilen. Bazı çalışmalarda, kısmi yeniden iskele yardımcı bir greft nakledilen. Ancak, maksimum bildirilen yaşam süresi sadece 72 h8,14oldu. Bildiğimiz gibi bir repopulated tam karaciğer nakli orthotopic nakli hakkı henüz gerçekleştirilen veya hakkında yayınlandı. Uzun vadeli işlevi ve mühendislik organ nakli hala onların bebeklik vardır. Bu nedenle, ex vivo karaciğer Mühendislik için alternatif bir yaklaşım gereklidir.
Vivo karaciğer mühendislik hepatik repopulation fizyolojik koşullar altında çalışmaya alternatif temsil edebilir. Vivo karaciğer mühendislik ex vivo karaciğer Dairesi'ne göre avantajları manifold. Vivo yeniden kısmi karaciğer iskele fizyolojik kan perfüzyon uygun sıcaklık, yeterli oksijen, besin ve büyüme faktörleri ex vivo perfüzyon yapay kültür orta ile aksine tabi tutulur. Ayrıca, kalan kısmi normal karaciğer başta olmak üzere uzun süreli sağkalım izin hepatik fonksiyon tutar. Bir implant ex vivo mühendislik karaciğer grefti deneysel hayvan uzun vadeli yaşama, karaciğer fonksiyon8tarafından sürdürülmesi hala yetersiz olduğu için biz sonuçta olmak o vivo içinde kısmi karaciğer engineeringwould öngörülüyor bir ex vivodaha uzun hayatta kalma gözlemleri ile mühendislik karaciğerleri evrimi daha fazla çalışmaya gelecek vaat eden model.
Son zamanlarda, bir araştırma grubu (Pan ve iş arkadaşları), ilk kez bir teknik15mühendislik vivo içinde karaciğer sundu. Onlar sağ inferior karaciğer lob anatomik ve teknik sorunlara rağmen yaşayan sıçanlarda izole perfüzyon elde etti. Vivo repopulation bir sıçan birincil hepatosit hücre satırı kullanarak ilk intraoperatif sonuçlarını rapor ettiler. Ancak, Pan ve ark. vivo içinde cerrahi perfüzyon modeli dezavantajları vardır. Onlar tek karaciğer lob perfüzyon içinde rats tamamen engelleme portal ven ve hayvan için ciddi zarar verebilir inferior vena kava pahasına elde etti. Deneysel fareler intraoperatif gözlem zaman sadece 6 saat sonra kurban edildi. Bu nedenle, in vivo karaciğer lob perfüzyon tekniği daha da ameliyat sonrası hayatta kalma ulaşmak için iyileştirilmesi gerektiğini.
Vivo karaciğer lob perfüzyon, hepatik anatomi sıçan16, hemodinamik fareler17ve karaciğer Biyomühendislik izleme için portal ven cannulation teknik önceki çalışmalarda temel için bir roman hayatta kalma model geliştirdik 18 , 19. yordamı için önemli adımlar Şekil 1A - 1Egösterilmiştir.
Bu tekniği bu deneysel vivo içinde perfüzyon modeli temel araştırma kısmi organ tedavi için uyuşturucu ile infüzyon, in vivo decellularization tarafından organ hastalıkları için kimyasal bir rezeksiyon olarak kullanmak isteyenler için uygundur (Örneğin , karaciğer kanseri), in vivo hücre kültüründe ex vivo iki boyutlu ve üç boyutlu karşılaştırma decellularized matris hücre kültür sistemleri20,21,22,23 , 24 , 25 , 26ve in vivo mühendislik decellularization ve repopulation tarafından karaciğer.

<table><tbody><tr><td>Perfüzyon Pompası Perfüzörü</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>VI</td><td>B. Braun, Melsungen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kateter</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Versatus-W&nbsp; Kateter</td><td>Terumo</td><td>SR + DU2419PX</td><td>24G, 0.74 kez; 19 mm</td></tr><tr><td>Versatus-W&nbsp; Kateter</td><td>Terumo</td><td>SR + DU2225PX</td><td>22G, 0.9 ve kez; 25mm</td></tr><tr><td>mikro cerrahi alet</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>mikro makas</td><td>F & middot; S&middot; L</td><td>No. 14058-09</td><td></td></tr><tr><td>mikro serrefine</td><td>F & middot; S&middot; L</td><td>No.18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Mikro kelepçeler aplikatör</td><td>F & middot; S&middot; L</td><td>No. 18057-14</td><td></td></tr><tr><td>Düz mikro forseps</td><td>F & orta nokta; S&middot; L</td><td>No. 00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli mikro forseps</td><td>F & orta nokta; S&middot; L</td><td>No. 00649-11</td><td></td></tr><tr><td>mikro iğne tutucu</td><td>F & middot; S&middot; L</td><td>No. 12061-01</td><td></td></tr><tr><td>genel cerrahi aletler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>standart sissors</td><td>F & middot; S&middot; L</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sivrisinek kelepçesi</td><td>F & middot; S&middot; L</td><td></td><td></td></tr><tr><td>tırtıklı forsep</td><td>F & orta nokta; S&middot; L</td><td></td><td></td></tr><tr><td>dişli forsep</td><td>F & orta nokta; S&middot; L</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iğne tutucu</td><td>F & orta nokta; S&middot; L</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sütür</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4-0 prolen</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4-0 ETHICON*II</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-0 ipek</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>11-0 polyamid</td><td>ethicon</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sıçan vivo içinde kısmi karaciğer dairesi'nde için bir temel olarak yeni bir cerrahi teknik

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

Organ mühendislik kullanılabilir karaciğer organ yerine ekimi oluşturmak için yeni bir stratejidir. Son zamanlarda, vivo içinde karaciğer mühendislik, repopulation tarafından takip vivo içinde organ decellularization de dahil olmak üzere, umut verici bir yaklaşım ex vivo karaciğer mühendislik üzerinde ortaya çıkmıştır. Ancak, ameliyat sonrası hayatta kalma elde değil. Bu çalışmada vivo içinde karaciğer Mühendislik için bir önkoşul olarak vivo içinde seçime bağlı karaciğer lob perfüzyon sıçanlarda bir roman cerrahi teknik geliştirmektir. Biz sadece sol yan lob aracılığıyla devre yan yol oluşturun. Sonra sol lateral lob heparinized serum periosteum. Deneme 4 grup ile gerçekleştirilir (n = 3 fareler grup başına) farklı perfüzyon 20 dk, 2 h, 3 h ve 4 h hayatta kalma, hem de renk macroscopically görünür bir değişiklik ve kan hücreleri histolojik olarak kararlı yokluğu göre Portal triad ve sinusoids başarılı modeli kurulması için bir göstergesi olarak alınır. Sonra seçici perfüzyon sol yan lob sol yan lob, gerçekten de, soluk sarı kırmızı döndü gözlemlemek. Histolojik değerlendirme, hiçbir kan hücreleri portal ven, merkezi ven ve sinusoids dalında görülebilir. Sol yan lob bloke damarları yeniden açılması sonra kırmızıya döner. 12/12 fareler yordamı bir haftadan fazla hayatta kaldı. Vivo içinde tek karaciğer lob perfüzyon bir haftadan daha uzun yaşam süresi ile cerrahi bir modeli rapor için ilk sırada. Daha önce yayımlanmış rapora aksine, burada sunulan tekniğinin en önemli avantajı bu perfüzyon karaciğer % 70 tüm prosedürü korunur. Bu teknik kurulması vivo içinde kısmi karaciğer mühendislik decellularization ve recellularization de dahil olmak üzere sıçanlarda için bir temel sağlar.

On iki erkek (Yaş 12 - 13 hafta) Lewis fareler seçici karaciğer lob perfüzyon etkisini değerlendirmek için kullanıldı. Deneme dört gruplar halinde gerçekleştirildi (n = 3 fareler grup başına). 20 dakika dönemlerinde farklı perfüzyon kullanılarak, 2 saat, 3 saat ve 4 saat yukarıda açıklanan adımları izleyerek, biz başarıyla vivo içinde tek lob perfüzyon elde.
Vivo Sol yan lob pe...

Biz daha fazla vivo içinde kısmi karaciğer gelecekte mühendislik eğitimi için bir önkoşul olarak köstebeğiyle vivo içinde tek karaciğer lob perfüzyon modeli için yeni bir cerrahi teknik kurmak.

Sıçan Vivo içinde kısmi karaciğer Dairesi'nde için bir temel olarak yeni bir cerrahi teknik

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver ...

Son birkaç yıl içinde, karaciğer mühendisliği nakli mümkün karaciğer greftleri üreten potansiyeli nedeniyle dünya çapında sıcak bir konu haline gelmiştir. Ancak uzun süreli fonksiyon ve mühendislik organlarının nakli hala geleceğin vizyonudur. Son zamanlarda in-vivo karaciğer lob profüzyon karaciğer mühendisliği başlatmak için umut verici bir strateji haline gelmiştir.Bu tekniğin önemli bir avantajı in-vivo kısmi karaciğer iskelesi skatolojik kan profüzyonuna maruz koyulmuş olmasıdır. Bu yapay kültür ortamı ile ex-vivo profüzyon aksine uygun sıcaklık, yeterli oksijen, besin ve büyüme faktörleri ile iskele sağlar. Başka bir avantajı kalan karaciğer hepatik fonksiyonu korur ve böylece esas olarak uzun vadeli sağkalım sağlar.Ancak in-vivo tek lob profüzyon modeli teknik olarak zorlu ve post operatif sağkalım henüz elde edilmiştir. Burada daha fazla in-vivo tek karaciğer lob mühendisliği için bir temel olarak uzun vadeli sağkalım ile başka bir cerrahi model sunmak için gidiyoruz. Cerrahi modeli göstermeden önce fare karaciğer anatomisi hakkında kısa bir bilgi vermek istiyoruz.Tek karaciğer lob profüzyon modelimizi oluşturmak için sol lateral lobseçtik. Bu bir bypass oluşturmak için izin veren ayrı bir vasküler kaynağı ve drenaj ile tek karaciğer lobudur. Bu fareportal venöz sistemin 3 boyutlu rekonstrüksiyonudur.Burada odak daha sonra sıvı girişi olarak hizmet verecek sol portal ven üzerindedir. Bu sıçandaki hepatik venöz sistemin 3 boyutlu rekonstrüksiyonudur. Burada bizim odak daha sonra bir sıvı çıkış olarak hizmet verecek sol lateral hepatik ven üzerindedir.Karaciğer vasküler anatomisinin bu illüstrasyonu, kısmi perfüzyon modeli için kullanılan vasküler erişim noktalarını vurgulamaktadır. Bu animasyon in-vivo sol lateral karaciğer lob perfüzyon modeli üreten düzeni göstermektedir. Cerrahi modeli oluşturmak için sol lateral lob içinde bir devre baypas oluşturacağız.Bu amaçla aşağıdaki damarları n için sol portal ven, sol hepatik arter, sol safra kanalı, sol median protal ven, hepatik arter ve safra kanalı ve sol lateral hepatik ven bloke etmek gerekir. O zaman sol portal damarı 24 gage kateterle kanüle etmeliyiz. Daha sonra sol lateral hepatik ven 22 gage kateter kullanılarak canüle edilir.Daha sonra sol portal ven kateter bir perfüzyon pompası bağlanır. Kuru gazlı bez atık sıvı emmek için sol lateral hepatik ven kateter çıkışında yerleştirilir. Bu şekilde bir baypas oluşturulur.Sonra sol lateral lob dakikada 0.5 mililitre akış hızında heparinize tuzlu ile perfüzyon. Tıkanmış damarlarıyeniden açtıktan sonra sol lateral loba fizyolojik perfüzyon geri yüklenir. Şimdi cerrahi perfüzyon modeli kurulmuştur.Bu videoda gösterilen tüm prosedürler yerel makamlar tarafından değerlendirildi ve onaylandı. Karın operasyon alanı üç tur iyot tentürü ile dezenfekte edilir ve ardından %70 alkol iki tur. Steril gazlı bez karın üzerine yerleştirilir ve sadece ameliyat alanı açıkta kalır.Sıçanın karın duvarında enine kesi yapılır. 4-0 prolene sütür ksifoid sürecini düzeltmek ve baş doğru çekmek için kullanılır. Üst karın duvarlarının her iki tarafı organın tam maruz ilerlemeye ulaşmak için iki alt kıyı kancası kullanılarak geri çekilir.Sonra karaciğer loblarını görebiliriz. İşte selektif perfüzyon için kullanılan sol lateral lob. Biz duodenum ve karın boşluğunda ince bağırsak oval kuruluk için nemlendirilmiş gazlı bez ile kapsamaktadır.Ortanca lobları nemli gazlı bezle kaldırarak karaciğerin hilum'unu ortaya çıkarıyoruz. Sıçan steril bir mikroskop altına yerleştirilir. Sol portal damarını inceliyoruz.Daha sonra sol protal ven 6-0 ipek sütür ile ligate. Sol hepatik arter, sol safra kanalı, yanı sıra sol median portal ven, sol median hepatik arter, ve sol median safra kanalı mikro-kelepçeler kullanılarak bloke edilir. Sol lateral hepatik veni sol lateral lobun tabanında mikro-kıskaçlarla tıkıyoruz.Sıvı girişi oluşturmak için, portal venin sapı 24 gage iğneli bir kateter ile delinmiş. Ama kateter takılmamış. Daha sonra kateterden iğneyi çıkarıp kateteri perfüzyon pompasına bağlıyoruz.Tüpten ve kateterden hava yıkmak için bir dakika boyunca heparinize tuzlu su yla perfüzyon yapıyoruz. Daha sonra pompayı kapatıyoruz. Daha sonra şu anda perfüzyon pompasına bağlı olan iğnesiz kateter sol portal damarına yerleştirilir.Bu şekilde, kantinli kabın manipülasyonlarını en aza indiririz. İşte sol lateral hepatik venin maruz kalan bölgesi benzer bir şekilde kanüle sokulacağız. Önce sol lateral hepatik vende 22 gage veya 24 gage iğneli mesken kateter ile delerek bir drenaj deliği oluşturuyoruz.Kateterin damardan biraz daha küçük olduğunu tavsiye ediyoruz. Daha sonra dakikada 0,5 mililitre lik bir akış hızında heparinize tuzlu ile sol lateral lob perfuse başlar. Dışarı akan atık sıvı sıyrık ile emilir.Atık sıvı ile intraabdominal kontaminasyonu en aza indirmek için sol lateral hepatik vene iğnesiz kateteri yeniden yerleştiriyoruz. Böylece kanüle sol lateral hepatik ven bir sıvı çıkış olarak hizmet vermektedir. Sol lateral loba heparinize tuzlu luk terlemeye devam ediyoruz.Çıkıştan kanlı sıvı nın damlatılması görülebilir. Ok, heparinize tuzlu ile perfüzyon sırasında sol lateral lob sarı döndü gösterir. Perfüzyon sonunda kateterler damarlardan çıkarılır.Sol lateral hepatik ven drenaj açıklığı tek bir 11-0 pollumite sütür ile kapatılır. Sol portal ven giriş girişi de 11-0 pollumite sütür ile kapatılır. Re perfüzyon sol lateral hepatik ven kelepçe çıkardıktan sonra suprahepatik vena kava geri akışı ile başlar.Fizyolojik perfüzyon daha sol hepatik arter ve safra kanalı ndan kelepçe çıkardıktan sonra geri, yanı sıra sol median vasküler yapılar. Tam re perfüzyon koyu kırmızı bir renk değişikliği ile belirtildiği gibi sol portal ven yeniden açıldıktan sonra elde edilir. Sol lobperfüzyonu.Bu resimdeki beyaz ok, hedef karaciğer lobunun gerçekten seçici olarak perfüzyona sahip olduğunu gösteriyor. Burada beyaz oklar, karaciğerin yaklaşık%70'ini temsil eden kalan lobların tüm prosedür boyunca fizyolojik perfüzyonu koruduğunu göstermektedir. Sol lateral lobun reperfüzyonu.Burada kırmızı ok, bloke damarları yeniden açtıktan sonra sol yan lob fizyolojik olarak re perfüzyon olduğunu gösterir. Mavi ok sol ortanca lobun sürekli iskemi olduğunu gösteriyor. Seçici olarak perfüzyon sol lateral lob histolojik H E boyama kullanılarak incelendi.Şekil A, perfüzyonlu sol lateral lobda portal ven ve sinüzoidlerin dalında kan hücresi tespit edilemediğini göstermektedir. Beklendiği gibi kırmızı hücreler hepatik arter dalında görülebilir. Şekil B'de inferior kaudate lob kontrol görevi görededir.Kan hücreleri açıkça görülebilir ve protal ven ve hepatik arter dalları yanı sıra sinüzoidler. Şekil C, perfüzyon sol lateral lobda merkezi venda kan hücresi bulunmadığını göstermektedir. Buna karşılık, şekil D kontrol inferior kauat lob kan hücrelerinin merkezi ven görünür olduğunu göstermektedir.Ardışık 12 işlemde bir haftalık sağkalım oranı %100'e ulaştık. İn-vivo karaciğer lob perfüzyon modelimizi Pan ve meslektaşlarının modeliyle karşılaştırdık. Pan ve grubumuz arasındaki metodoloji ve sonuçlardaki temel farklar şunlardır: biz sol lateral lob'u hedef karaciğer lobu olarak seçerken sağ inferior lob'u seçtiler;portal hipertansiyona yol açan vena kava ve ana portal damarı engellediler.Buna karşılık karaciğerin %70'inin portal perfüzyonuna sahip çıktık;bir haftalık sağkalım oranımız %100 iken fareleri ameliyatla kurban ettiler Yeni cerrahi modelimizin avantajları:teknik olarak zor ama uygulanabilir;ve %100 sağkalım oranının gösterdiği gibi iyi tolere edilir. Ancak bir sınırlama sol median lob portal ven tıkanıklığı nedeniyle iskemi sürekli olmasıdır. Tekniğimizin potansiyel uygulamaları şunlardır: ilaçlarla perfüzyon ile in-vivo kısmi organ tedavisi için kullanılabilir;kimyasal rezeksiyon olarak in-vivo kısmi organ desellülerizasyonu;ex-vivo ile karşılaştırıldığında in-vivo hücre kültür sistemi;ve in-vivo karaciğer mühendisliği.

a-novel-surgical-technique-as-foundation-for-vivo-partial-liver

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz sıçan kadavradan karaciğer nakli için klasik iki manşet tekniğinin kolay bir tesis revizyonu sunuyoruz.

Sıçanlarda Ortotopik Karaciğer Nakli

Sıçanlarda transplantasyon'a biyomedikal araştırmalar için vazgeçilmez bir deneysel model. Burada% 50 parsiyel greft kullanılarak hepatik arter rekonstrüksiyonu ile ortotopik sıçan karaciğer nakli için cerrahi işlemler sunuyoruz.

Hepatik Arter İmar Kısmi Ortotopik Karaciğer Nakli Bir Rat Modeli Cerrahi İşlemleri

Biz kolay ortotopik sıçan karaciğer nakli için "hızlı-bağlayıcı" cihazın tasarımı açıklar.

Kolay Sıçan Karaciğer Nakli için üretim cihazlar ve Araçlar

Benzersiz bir sıçan karaciğer hilar kelepçe modeli iskemi-reperfüzyon zedelenmesinin iyileşmesi farmakolojik moleküllerin etkisini incelemek için geliştirilmiştir. Bu model, doğrudan karaciğer taşınmasına izin veren, portal damar dalı ile iskemik karaciğer segment portal kaynağının doğrudan kanül içerir.

Bir Sıçan Karaciğer Hilar Kelepçe Modeli Kullanılarak Doğrudan Segmental İçi hepatik Dağıtım Yöntemi

Kısmi hepatectomy (PHx) ve hücre transplantasyonu dalak ile NOD gerçekleştirmek için bir protokol anlatmıştık. SCID (BAŞINI SALLAMAK. CB17-Prkdcscid/J) fareler. Bu protokol için ortaya çıkarmak ve hücre intrasplenic nakli için başka bir kesi ardından karaciğer sol lob çıkarabileceğim için bir kesi yapılır.

Hepatositlerin intrasplenic nakli düğümde kısmi Hepatectomy sonra. SCID fareler

Burada, yeniden arterialized sıçan kısmi karaciğer nakli ile ilgili bir protokol sunulmuştur. Özellikle, % 70 karaciğer rezeke vivo içinde gemi odaklı hepatectomy Güncellenme Zamanı bir tekniğin kullanmaktı. Hepatik arter bir uç-yan şekilde yeniden. Manşet tekniği infrahepatic vena cava anastomoz süresini kısaltmak için güncellenmiştir.

Yeniden Arterialized sıçan kısmi karaciğer nakli bir vivo içinde gemi odaklı % 70 ile Hepatectomy

Suprahepatic vena kava (SHVC) yeniden inşası sıçan orthotopic karaciğer nakli zor bir adım kalır. Bu makalede, bir roman manyetik anastomoz tekniği kullanarak Sıçanlarda SHVC yeniden inşası için adım adım bir protokol gösteriyoruz.

Orthotopic fare modeli bir roman manyetik anastomoz teknik Suprahepatic Vena kava imar için kullanılarak karaciğer nakli

Burada, yenidoğan (0 gün) farelerde karaciğer sol lob kısmi rezeksiyon için yeni bir yöntem mevcut. Bu yeni iletişim kuralı akut karaciğer hasarı ve yaralanma yanıt yenidoğan ortamda çalışmak için uygundur.

Kısmi Lobular Hepatectomy: Morfolojik karaciğer rejenerasyonu için cerrahi bir Model

Burada, fare gözünün ön kamarasına aşılanmış karaciğer sferoidlerinin noninvaziv in vivo görüntülemesine izin veren bir platformu tarif ediyoruz. İş akışı, birincil karaciğer hücrelerinden sferoidlerin üretilmesinden fare gözüne transplantasyona ve konfokal mikroskopi ile hücresel çözünürlükte in vivo görüntülemeye kadar uzanır.

Fare gözünün ön kamarasına aşılanmış karaciğer sferoidlerinin in vivo görüntülenmesi

Burada tarif edilen sıçan heterotopik yardımcı karaciğer nakli protokolü, hepatik allogreft rejeksiyon mekanizmalarını araştırmak için pratik bir araştırma aracı sunmaktadır. Bu model, sıçanlarda ortotopik karaciğer naklinin cerrahi engellerini ve hayvan stresini hafifletmeye yardımcı olur.

Allogreft Rejeksiyon Çalışmaları için Hepaticoureerostomi Kullanan Heterotopik Yardımcı Tüm Karaciğer Sıçan Nakli Modeli

Keşfedin sıçanlarda in vivo tek karaciğer lobu perfüzyonu için yeni bir cerrahi teknik. Bu yöntem, kısmi karaciğer mühendisliği çalışmaları için temel oluşturur ve uzun süreli sağkalım sağlar.

Sıçan Vivo içinde kısmi karaciğer Dairesi'nde için bir temel olarak yeni bir cerrahi teknik

Daha fazla video keşfet