Name: Pluripotent kök hücre kaynaklı Teratomas Dış Beam radyasyon bir küçük-hayvan modelinde kullanarak hedeflenen ve seçici tedavisinde (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 8 s
Description: Öğrenin, farelerde pluripotent kök hücre kaynaklı teratomları hedefli dış ışın radyasyon tedavisi ile nasıl etkili ve güvenli bir şekilde tedavi edebilirsiniz. Bu yöntem, çevre dokulara zarar vermeden tümörleri küçültmeyi amaçlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar ulusal kurumları, sağlık R01 HL134830 (PKN), K08 HL135343 (KS) ve 5F32HL134221 teşekkür etmek istiyorum (JWR); Howard Hughes Tıp Enstitüsü (ASL); ve desteklerinden dolayı Stanford kardiyovasküler Enstitüsü (ASL).

Bu hayvan deney onaylanmış ve Kurumsal değerlendirme Komitesi ve laboratuvar hayvan bakım Stanford Üniversitesi'nde tarih yönetim paneli altında gerçekleştirilen.
1. hücre kültürü iPSCs
<ol><li>İnsan iPSCs lentiviral 6-şey plakaları kaplı membran matris (örneğin, matrigel, bu andan matris anılacaktır) ile yeniden programlama tarafından türetilmiş büyümek.</li>
	<li>Her gün iPSCs zenginleştirilmiş kültür orta ile medya değiştirmek (bakınız Tablo reçetesi) 37 ° C ve % 5 CO2kuluçka.</li>
	<li>Hücrelerin % 80 – 90 izdiham (yaklaşık her 4 günde) ulaştığınızda, rekombinant hücre-ayrılma enzim 1 mL ekleyin ( Tablo malzemelerigörmek) başına iyi ve 5 min için 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
	<li>5 dk sonra pipetting tarafından iyi hücrelerden ayırmak, onları bir 15 mL tüp aktarmak ve de 300 x gsantrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Santrifüjü sonra süpernatant Aspire edin ve hücre Pelet zenginleştirilmiş kültür orta resuspend ( Tablo malzemelerigörmek) adlı bir 1:1,000 seyreltme Y27632 inhibitörü ile zenginleştirilmiş.</li>
	<li>Disosiye hücre hücre sayım gerçekleştirmek ve matris kaplı 6-şey plakaları bir yoğunluk 2 x 105 4 x 105için hücreleri replate.</li>
</ol>2. iPSCs iletim bir çift-füzyon muhabir gen ile
<ol><li>Geçiş iPSCs yılında 6-şey plakaları yordamına göre ve zenginleştirilmiş kültür orta ekleyebilirsiniz (bkz: Malzemeler tablo) içeren 6 µg/mL hexadimethrine bromür. Not: 200-400 hücreler/koloni en yüksek iletim verimliliği verim için ideal koloni boyutudur.</li>
	<li>Kendi kendine ihracı lentivirus insan Ubikuitin promotor-C tarafından 50.000 x g 4 ° C'de 2 h için bir SW-29 rotor tortu Santrifüjü tarafından tahrik ateş böceği luciferase ve yeşil flüoresan protein (FLuc-eGFP) taşıma konsantre</li>
	<li>Viral konsantre iPSCs enfeksiyonu (MOI) 10 çokluğu, bir 6-şey plaka ekleyin ve gecede %5 CO237 ° C'de kuluçkaya. Not: Enfeksiyon çokluğu ifade monomeric floresan protein (FACS) tarama sıralama floresans aktif bir hücre tarafından analiz tarafından tespit edilmiştir.</li>
	<li>Ertesi gün, çıkarmak belgili tanımlık virüs vasıl 300 x g 6 dakika oda sıcaklığında IPSC 6-şey plakaların Santrifüjü tarafından.</li>
	<li>Medya günlük ile zenginleştirilmiş kültür orta değiştirmek ( Tablo malzemelerigörmek) ve geçit Protokolü göre. Floresan mikroskop eGFP yaklaşık iletim verimliliği belirlemek için kullanmaktadır.</li>
	<li>% 30-40 bir verimlilik FACS sıralamak için yeterli olur. Hücreleri en az % 30-40 eGFP ifade edersek eGFP ifade hiPSCs FACS için devam edin.</li>
	<li>Ex vivo FLuc faaliyet onaylamak için GFP FACS tarafından adlı bir şey başına 5000 hücre yoğunluğuna göre ifade hücreleri plaka.</li>
	<li>Transduced hücreleri kuluçkaya ve (negatif kontrol görev yapacak) Sigara transduced hücreleri bioluminescence reporter ile yoklama D-biyoluminesans (100 μmol/L) için 6 h. bioluminescence Mikroplaka spectrofluorometer ile ölçmek.</li>
</ol>3. Dorsal kanadını immünyetmezligi farelerde Teratoma oluşumu için PSC'ler nakli
<ol><li>Rekombinant hücre-ayrılma enzim karışımı insan iPSCs bir çift-füzyon muhabir gen (FLuc-GFP) ile kültür (bakınız Bölüm 2) transduced içeren 6-şey plaka başına 1 mL ekleyin ve 5 min için kuluçkaya.</li>
	<li>Kuluçka dönemi sonra hücreler pipet aspirasyon ve ifade tarafından dağıtmak. Kültür ortamının eşit bir birim eklemek ve vasıl 250 x g 4 dk santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Santrifüjü tamamlandıktan sonra süpernatant çözüm Aspire edin, hücre Pelet matris 30 µL içinde resuspend ve canlılığı enjeksiyon önce korumak için buz yerleştirin. 1 x 106 hücre bir hemasitometre kullanarak bir hasat onaylayın.</li>
	<li>Çift-füzyon hücreleri muhabir gen transfected kullanan çift-pozitif FACS hücrelerden (Bölüm 2) 30 µL matris içinde askıya.</li>
	<li>Anestezi farelerde % 2 isoflurance 1 L/dak oksijen ile kullanarak 8-10 hafta korele çıplak teşvik ve bakım % 2 isoflurane 1 L/dak oksijen ile kullanın.</li>
	<li>28,5 G kullanarak, cep/matris karışımı enjekte (bakınız Tablo reçetesi) süspansiyon, toplam 5 x 103 5 x 106 hücrelere (enjeksiyon başına yaklaşık 100 ul) bir enjeksiyon için hedef kanat, subkutan uzaya.</li>
	<li>Uzun süre ve büyük tümör büyüme tahmin için fareler korumak planlama bir daha kaudal enjeksiyon yeri düşünün.</li>
	<li>İmzalat hayvanlar üzerinde ısıtmalı bir yastık ayaktan kadar kurtarmak için izin verilen (genellikle < 1s) Solunum oranı izleme ile ten rengi ayak parmakları, ayaktan kadar.</li>
</ol>4. bioluminescence transplante hücrelerinin hücre hayatta kalma ve Teratoma büyüme değerlendirmek için (BLI) görüntüleme
<ol><li>Aşı sonra istenen timepoints mayi (IP) enjeksiyonu 375 mg/kg fareler içine muhabir inceleyebilirsek D-biyoluminesans gerçekleştirin.</li>
	<li>10 dakika sonra bir IP enjeksiyon, görüntü bioluminescence sinyal (açıklandığı adım 3.5 olarak yapılır) imzalat hayvanlar için 30 dk 1 dk edinme windows 5 dk aralıklarla kullanarak. Not: Haftalık resim satın almalar tavsiye edilir. Anestezi korunur görüntüleme sırasında sunarak inhale isoflurane üzerinden bir burun konisi.</li>
	<li>Veri analizi için bir bölge (ROI) ilgi BLI sinyal üzerinde çizin ve sonra steradian (fotonlar/s/cm2/sr) başına santimetre kare başına saniyede maksimum fotonlar birimlerindeki emisyonları ölçmek edinme kez normalleştirmek.</li>
</ol>5. teratoma ışınlama bir preklinik görüntü güdümlü Irradiator (Şekil 1) kullanarak
<ol><li>Bir fare devirme kutusuna % 100 oksijen 1 L/dk akış hızında % 2 isoflurane kullanarak anestezi. Fare tam anestezi sonra bir görüntü güdümlü önceden klinik irradiator yatağa aktarın ( Tablo malzemelerigörmek). Anestezi % 2 isoflurane tarafından korumak sürekli üzerinden bir burun konisi.</li>
	<li>Mikro-CT görüntüleri 400 projeksiyon görüntüleri üzerinde 360 ° 40 kVp, 2 mA röntgen ışını kullanarak bir küme olarak alacak ve o bir izotropik piksel boyutu 0.2 mm olan hacimsel görüntüler içine yeniden.</li>
	<li>RT_Image yazılım paketi (http://rtimage.sourceforge.net/) kullanarak mikro-CT görüntüleri kullanarak bir radyasyon tedavi planı ve tedavi gerçekleştirmek. Not: İki 225 kVp röntgen ışını, fare geri kalanı yüzeyine süpürgelik ve temel iç organlar tutumlu yüzeysel hedef teratoma geçmek yönelik kullanılan tedavi planı oluşur. Doz hedef tümörün ortasındaki 6 Gy olduğu kadar pozlama süreleri kirişler için üç aylık sistemi kalibrasyon verileri temel alınarak ayarlanır.</li>
	<li>Tedavi süreci 18 Gy toplam hedef tümör sunmak için üç gün üst üste yinelemek.</li>
	<li>Standart tedavi sonrası bakım hayvanlar korumak.</li>
</ol>

<ol><li>Sallam, K., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+biology%3A+insights+from+molecular+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell biology: insights from molecular imaging.</a> Methods in Molecular Biology. 660, 185-199 (2010).</li>
<li>Lee, A. S., Tang, C., Rao, M. S., Weissman, I. L., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenicity+as+a+clinical+hurdle+for+pluripotent+stem+cell+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tumorigenicity as a clinical hurdle for pluripotent stem cell therapies.</a> Nature Medicine. 19 (8), 998-1004 (2013).</li>
<li>Amariglio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor-derived+brain+tumor+following+neural+stem+cell+transplantation+in+an+ataxia+telangiectasia+patient%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient.</a> PLOS Medicine. 6 (2), e1000029(2009).</li>
<li>Kuriyan, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vision+Loss+after+Intravitreal+Injection+of+Autologous+%26%2334%3BStem+Cells%26%2334%3B+for+AMD%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Vision Loss after Intravitreal Injection of Autologous &#34;Stem Cells&#34; for AMD.</a> The New England Journal of Medicine. 376 (11), 1047-1053 (2017).</li>
<li>Berkowitz, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioproliferative+Lesion+of+the+Spinal+Cord+as+a+Complication+of+%26%2334%3BStem-Cell+Tourism%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Glioproliferative Lesion of the Spinal Cord as a Complication of &#34;Stem-Cell Tourism&#34.</a> The New England Journal of Medicine. 375, 196-198 (2016).</li>
<li>Zhang, W. Y., de Almeida, P. E., Wu, J. C. Teratoma formation: A tool for monitoring pluripotency in stem cell research. <a target="_blank" href="https://www.stembook.org/node/723">StemBook</a>. , The Stem Cell Research Community. (2012).</li>
<li>Scott, C. T., Magnus, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wrongful+termination%3A+lessons+from+the+Geron+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22STEM+CELLS+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Wrongful termination: lessons from the Geron clinical trial.</a> STEM CELLS Translational Medicine. 3 (12), 1398-1401 (2014).</li>
<li>Strauss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geron+trial+resumes%2C+but+standards+for+stem+cell+trials+remain+elusive%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Geron trial resumes, but standards for stem cell trials remain elusive.</a> Nature Biotechnology. 28 (10), 989-990 (2010).</li>
<li>Coghlan, A. <a target="_blank" href="http://connection.ebscohost.com/c/articles/108773320/unexpected-mutations-put-stem-cell-trial-hold">Unexpected mutations put stem cell trial on hold.</a> New Scientist. 227 (3033), 9(2015).</li>
<li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+antibody+against+SSEA-5+glycan+on+human+pluripotent+stem+cells+enables+removal+of+teratoma-forming+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">An antibody against SSEA-5 glycan on human pluripotent stem cells enables removal of teratoma-forming cells.</a> Nature Biotechnology. 29 (9), 829-834 (2011).</li>
<li>Lee, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cell+number+on+teratoma+formation+by+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Effects of cell number on teratoma formation by human embryonic stem cells.</a> Cell Cycle. 8 (16), 2608-2612 (2009).</li>
<li>Tano, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+in+vitro+method+for+detecting+undifferentiated+human+pluripotent+stem+cells+as+impurities+in+cell+therapy+products+using+a+highly+efficient+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A novel in vitro method for detecting undifferentiated human pluripotent stem cells as impurities in cell therapy products using a highly efficient culture system.</a> PLoS One. 9 (10), e110496(2014).</li>
<li>Kuroda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+sensitive+in+vitro+methods+for+detection+of+residual+undifferentiated+cells+in+retinal+pigment+epithelial+cells+derived+from+human+iPS+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Highly sensitive in vitro methods for detection of residual undifferentiated cells in retinal pigment epithelial cells derived from human iPS cells.</a> PLoS One. 7 (5), e37342(2012).</li>
<li>Cao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+visualization+of+embryonic+stem+cell+survival%2C+proliferation%2C+and+migration+after+cardiac+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">In vivo visualization of embryonic stem cell survival, proliferation, and migration after cardiac delivery.</a> Circulation. 113 (7), 1005-1014 (2006).</li>
<li>Cao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+of+embryonic+stem+cell+misbehavior+and+suicide+gene+ablation%5BTitle%5D)+AND+%22Cloning+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging of embryonic stem cell misbehavior and suicide gene ablation.</a> Cloning Stem Cells. 9 (1), 107-117 (2007).</li>
<li>Kotini, A. G., de Stanchina, E., Themeli, M., Sadelain, M., Papapetrou, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escape+Mutations%2C+Ganciclovir+Resistance%2C+and+Teratoma+Formation+in+Human+iPSCs+Expressing+an+HSVtk+Suicide+Gene%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy+-+Nucleic+Acids%22%5BJournal%5D)">Escape Mutations, Ganciclovir Resistance, and Teratoma Formation in Human iPSCs Expressing an HSVtk Suicide Gene.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 5, e284(2016).</li>
<li>Smith, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptotic+susceptibility+to+DNA+damage+of+pluripotent+stem+cells+facilitates+pharmacologic+purging+of+teratoma+risk%5BTitle%5D)+AND+%22STEM+CELLS+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Apoptotic susceptibility to DNA damage of pluripotent stem cells facilitates pharmacologic purging of teratoma risk.</a> STEM CELLS Translational Medicine. 1 (10), 709-718 (2012).</li>
<li>Choo, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+against+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells+by+a+cytotoxic+antibody+recognizing+podocalyxin-like+protein-1%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Selection against undifferentiated human embryonic stem cells by a cytotoxic antibody recognizing podocalyxin-like protein-1.</a> Stem Cells. 26 (6), 1454-1463 (2008).</li>
<li>Yorke, E., Gelblum, D., Ford, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient+safety+in+external+beam+radiation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Roentgenology%22%5BJournal%5D)">Patient safety in external beam radiation therapy.</a> American Journal of Roentgenology. 196 (4), 768-772 (2011).</li>
<li>Zhou, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+micro-computed+tomography-based+image-guided+conformal+radiotherapy+system+for+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology+%E2%80%A2+Biology+%E2%80%A2+Physics%22%5BJournal%5D)">Development of a micro-computed tomography-based image-guided conformal radiotherapy system for small animals.</a> International Journal of Radiation Oncology • Biology • Physics. 78 (1), 297-305 (2010).</li>
<li>Slatkin, D. N., Spanne, P., Dilmanian, F. A., Gebbers, J. O., Laissue, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subacute+neuropathological+effects+of+microplanar+beams+of+x-rays+from+a+synchrotron+wiggler%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Subacute neuropathological effects of microplanar beams of x-rays from a synchrotron wiggler.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (19), 8783-8787 (1995).</li>
<li>Lee, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+Report%3A+External+Beam+Radiation+Therapy+for+the+Treatment+of+Human+Pluripotent+Stem+Cell-Derived+Teratomas%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Brief Report: External Beam Radiation Therapy for the Treatment of Human Pluripotent Stem Cell-Derived Teratomas.</a> Stem Cells. 35 (8), 1994-2000 (2017).</li>
<li>Berkowitz, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioproliferative+Lesion+of+the+Spinal+Cord+as+a+Complication+of+%26%2334%3BStem-Cell+Tourism%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Glioproliferative Lesion of the Spinal Cord as a Complication of &#34;Stem-Cell Tourism&#34.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (2), 196-198 (2016).</li>
<li>Swijnenburg, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+embryonic+stem+cells+reveals+patterns+of+survival+and+immune+rejection+following+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of embryonic stem cells reveals patterns of survival and immune rejection following transplantation.</a> Stem Cells and Development. 17 (6), 1023-1029 (2008).</li>
<li>Cao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+de+novo+imaging+of+human+embryonic+stem+cell-derived+teratoma+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Noninvasive de novo imaging of human embryonic stem cell-derived teratoma formation.</a> Cancer Research. 69 (7), 2709-2713 (2009).</li>
<li>Priddle, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+of+human+embryonic+stem+cells+transplanted+in+vivo+in+murine+and+chick+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cloning+and+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging of human embryonic stem cells transplanted in vivo in murine and chick models.</a> Cloning and Stem Cells. 11 (2), 259-267 (2009).</li>
<li>Dale, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dose-rate+effects+in+targeted+radiotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Physics+in+Medicine+%26+Biology%22%5BJournal%5D)">Dose-rate effects in targeted radiotherapy.</a> Physics in Medicine & Biology. 41 (10), 1871-1884 (1996).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Preklinik veri ve "kök hücre Turizm" kurbandan anekdot durumlarda teratomas gelişme riski PSC tedaviler23ile ilişkili ciddi bir sıkıntıları olduğunu onaylayın. Önlemek ve kök hücre tedavileri ile ilişkili neoplastik risk tedavi dikkatli yaklaşımlar geliştirilmesi, bu nedenle, Klinik rejeneratif kök hücre tedavileri tercümesi kolaylaştıran önemli bir adımdır. Bu makalede, PSC ilişkili teratomas EBRT bir fare modeli kullanılarak tedavi hedefleme yöntemi açıklanan ve ışınlanmış tümörlerin BLI Imaging...

Kök hücre tedavileri doku rejenerasyonu için geliştirme çabaları etkili klinik dağıtımı için engelleyici son birkaç on yıl içinde engelleri bir dizi karşılaştı. Bu engellerin zavallı hücre saklama, kök hücre immünojenisite ve form teratomas1neoplastik potansiyeline sitelerdeki içerir. Tumorigenicity özellikle klinik endişe olduğu bu kök hücre nakli alıcılar2zarar verme olasılığı vardır. Tümör oluşumu nedeniyle düzensiz kök hücre enjeksiyonları hesapları zaten birden fazla klinik ayarları3,4,5' te bildirdin. En sık klinik endişe içinde pluripotent kök hücre (PSC) gelişme gösterdi ve gecikmeler ve birden çok yüksek profilli embriyonik kök hücre (ESC) iptaller sonuçlandı ve pluripotent kök hücre (IPSC) indüklenen teratoma oluşumu için potansiyel olduğunu denemeler6,7,8,9. Böylece, uygun tedavi sağlayarak doğru iyatrojenik Bu tümörler ortaya gereken adanmış bir translasyonel araştırma için acil ihtiyaç vardır.
Bugüne kadar kök hücre hatalı davranmasından kaynaklanacak denetlemek için çoğu stratejileri PSC'ler numarasıyla tumorigenic potansiyel2,10azaltılması üzerinde odaklanmıştır. Ne yazık ki, az sayıda kalan hücreleri (örneğin., 1 x 104 1 x 105 hücreleri11' e) kadar algılama sınırın altına şu anda kullanılabilir deneyleri12', alıntı teratoma oluşumu için gereklidir 13. preseparation bu yöntemler kullanarak başka sınırlamalar arasında düşük verim ve yüksek gider, daha yeni doku mühendisliği yaklaşımlar ve hücre potansiyel bozulma için uygun olmayabilir tek hücreli süspansiyonlar güven hayatta kalma ve engraftment.
Kaç çalışmalar teratoma oluşumu takip tedavi seçenekleri ele sahip. Belki de en iyi okudu strateji "intihar" genlerin birleşme içine kök hücre14,15olduğunu. Bu yöntem, genetik olarak eğer teratomas enjekte hücreleri üretmek böylece bir kurtarma yaklaşım sağlayan farmakolojik stimülasyon postinjection tarafından etkinleştirilebilen bir indüklenebilir apoptosis aktive gen dahil etmek için kök hücre işleme içerir. Bu yaklaşım, ancak, PSC'ler ve ilaç direnci16kademeli bir gelişim potansiyeli genetik değişiklikler hedef kapalı etkileri de dahil olmak üzere önemli sakıncaları muzdarip. Benzer bir yaklaşım küçük moleküller PSC'ler Seçici hücre ölümü anti-apoptotik yolları17inhibisyonu yoluyla ikna etmek için kullanır. Diğer gruplar PSC'ler pluripotency yüzey işaretleyicileri, podocalyxin benzeri protein-1 (PODXL)18gibi karşı antikor kullanarak hücre ölümü hedef almış. Küçük molekül veya antikor teslim zamanlaması çok erken teslim ve terapötik etkinlik Eğer çok geç teslim olmayabilir PSC'ler tedavi potansiyeli üzerinde önemli bir etkiye sahip anlamına gelir. Buna ek olarak, küçük moleküller ve bu şekilde kullanılan antikorları sistemik etkileri incelenmiştir değil.
Bu tümörler tedavi için alternatif bir yaklaşım dış beam radyasyon tedavisi (EBRT) kullanarak dayanır. EBRT Şu anda solid tümör19tedavisinde istihdam birincil yöntemleri biridir. EBRT, proton ışın ve stereotaktik radyocerrahi, geliştirilmesi dahil olmak üzere yenilikleri Açıkorur EBRT teratoma adresleme için ideal hale normal doku hasarı kaçınırken hedefleme gelişmiş patolojik yapıları etkinleştirdiniz anatomik olarak hassas yapıları20oluşumu. Ayrıca, bu yöntem genetik manipülasyon veya kök hücrelerin klinik güvenlik ile dolu her ikisi de viral iletim önler ve etkinlik15ilgilendiriyor. Son olarak, mikro-irradiators gelişmeler EBRT uygulamada kemirgenler21etkinleştirdiniz.
Bu makalede, farelerde insan iPSCs enjekte edilerek teratoma oluşumu küçük hayvan modeli oluşturmak nasıl gösterir. Biz o zaman EBRT seçerek bu tümör doku çevresindeki en az hasarla vivo ortadan kaldırmak için uygulamak gösterilmiştir. Bu yaklaşım bir hedefe yönelik tedavi biyolojik moleküller üzerine çalışmaları ve peptidler sistemik teslimini ve PSC'ler genetik manipülasyon hedef kapalı etkileri kaçınırken PSC kaynaklı teratomas için sağlar. Araştırma amaçlı kök hücreleri tümör yanıtı için radyasyon tedavisi (BLI) görüntüleme bioluminescence izlemek için reporter genler ile transduce için isteğe bağlı bir adım de veriyoruz.

<table><tbody><tr><td>İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücre Kontrol Hattı</td><td>Stanford Üniversitesi</td><td>Nguyen Laboratuvarı</td><td>iPSC</td></tr><tr><td>Corning matrigel bazal membran matrisinin</td> hücre kültürü 354234 <td>Fisher Scientific</td><td>CB-40234</td><td>iPSC</td></tr><tr><td>Essential 8 kültür ortamının</td> hücre kültürü <td>ATCC-Küresel biyokaynak merkezi</td><td>30-2203</td><td>iPSC</td></tr><tr><td>Tryple E</td><td>Gibco</td><td>12605-036'nın</td> <td>hücre kültürüiPSC</td></tr><tr><td>Y27632 inhibitörü 2 HCL'nin hücre kültürü (ROCK İnhibitörü)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S104950MG</td><td>iPSC</td></tr><tr><td>Lentivirus</td><td>Cyagen</td><td>P170721-1001cjn'nin</td> hücre kültürü <td>iPSC'nin çift füzyon raportör geni ile transdüksiyonu</td></tr><tr><td>Polyrbrene Enfeksiyonu/Transfeksiyon Reaktifi</td><td>Millipore Sigma</td><td>TR-1003-G</td><td>iPSC'nin çift füzyon raportör geni</td></tr> <tr><td>ile transdüksiyonuUbikitin promotörü Stanford</td><td>Üniversitesi Sam</td><td>Gambhir laboratuvarı</td> tarafından yönlendirilen fluc-eGFP raportör geni <td>iPSC'nin çift füzyon raportör geni</td></tr><tr><td>D-luciferin</td><td>Perkin Elmer</td> ile <td>transdüksiyonu 122799 Çift füzyon raportör geni ve BLI Akış sitometresi ile iPSC transdüksiyonu</td><td></td></tr><tr><td>(BD FACSARIA III)</td> <td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>Çift füzyon raportör gen</td>mikroplaka spektroflorometresi (Glomax Navigator Sistemi) ile <td>iPSC'nin FACSAria</td></tr><tr><td></td> Transdüksiyonu <td>Promega Bio Systems, Sunnyvale, CA</td><td>GM2000</td><td>Çift füzyon raportör geni Xenogen IVIS 200 ile iPSC'nin transdüksiyonu</td></tr><tr><td>;</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td>BLI</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CDS019936</td><td>ışınlama</td></tr><tr><td>X-Rad SmART görüntü kılavuzlu ışınlayıcı&nbsp;</td><td>Precision X-ray Inc., North Branford, CT</td><td>X-Rad SmART</td><td>ışınlama</td></tr><tr><td>RT_Image yazılım paketi</td><td>Stanford Üniversitesi (http://rtimage.sourceforge.net/)</td><td>RT_Image v0.2 ve beta;</td><td>ışınlama</td></tr></tbody></table>

pluripotent kök hücre kaynaklı teratomas dış beam radyasyon bir küçük-hayvan modelinde kullanarak hedeflenen ve seçici tedavisinde

Targeted and Selective Treatment of Pluripotent Stem Cell-derived Teratomas Using External Beam Radiation in a Small-animal Model

Kurbanlar "kök hücre Turizm," Dünya çapında, kök hücrelerin düzensiz ekimi giderek artan sayıda kök hücre transplantasyonu güvenlik kaygıları gündeme getirdi. Farklılaşmamış hücreleri oldukça daha yaygın bir uygulama nakli Ayrıştırılan rağmen teratomas hala kalan farklılaşmamış kök hücre varlığı nakli anda ortaya çıkabilir veya spontan mutasyonlar gelen farklılaşmış hücreleri. Kök hücre tedavileri kez anatomik olarak duyarlı sitelerin teslim edildiğinden, hatta küçük tümörler klinik olarak yıkıcı, körlük, felç, bilişsel anormallikler ve kardiyovasküler disfonksiyon sonucu olabilir. Bu sitelere cerrahi erişim Ayrıca hastalar birkaç tedavi olanakları ile bırakarak sınırlı olabilir. Kök hücre aksaklığı kontrol, bu nedenle, kök hücre tedavisi klinik çeviri için çok önemlidir.
Dış beam radyasyon organları çevreleyen için yaralanma en aza indirerek teratoma yükünü azaltmak için hedeflenmiş tedavi teslim, etkili bir yol sunar. Ayrıca, bu yöntem genetik manipülasyon önler veya kök hücre ki viral iletim ek klinik güvenlik ve etkinlik endişeleri ile ilişkili. Burada, bir protokol pluripotent kök hücre kaynaklı teratomas farelerde oluşturmak için ve seçmeli olarak bu tümörler içinde vivo ablate için dış beam radyasyon tedavisi uygulamak açıklar.

Enjekte fareler genellikle teratoma büyüme oluşumu (Şekil 2) görüntüleme BLI tarafından onaylandı olarak 4-8 hafta sonra ortaya koyacak. Tümör önemli ölçüde zaman 18 Gy bir ay sonra hücre teslim, verilen luciferase sinyal (Şekil 2) önemli bir azalma sonuçlanan toplu bir doz ile ışınlanmış küçülür. Önemlisi, normal dokuların 5 mm radyasyonlu sitesinden alınan herhangi bir önemli bozukluğu (Şekil 3) iç...

Pluripotent kök hücre kaynaklı teratomas tedavi stratejileri araştırma kök hücre tedavisi klinik çeviri için önemlidir. Burada, ilk olarak, fare ve daha sonra seçmeli olarak hedef için kök hücre kaynaklı teratomas oluşturmak ve bu tümörler içinde bir küçük-hayvan irradiator kullanarak vivo görmek için bir protokol açıklayın.

Pluripotent kök hücre kaynaklı Teratomas Dış Beam radyasyon bir küçük-hayvan modelinde kullanarak hedeflenen ve seçici tedavisinde

The growing number of victims of &#34;stem cell tourism,&#34; the unregulated transplantation of stem cells worldwide, has raised concerns about the ...

Bu işlemin genel amacı, küçük hayvan dış ışın radyasyon tedavisinin in vivo etkinliğinin değerlendirilmesi için farelerde kök hücre kaynaklı teratomları seçici olarak hedeflemektir. Harici radyasyon ışını tedavisinin en büyük avantajı, sistemsel olarak yapılan tedavilerin hedef dışı yan etkilerinden kaçınan kök hücre ilişkili teramtomalar için hedeflenen bir tedavi olmasıdır. Dış ışın radyasyon terapisindeki gelişmeler, normal dokulara zarar vermemek için küçük teratomların özel hedeflemesini sağlayarak radyasyona duyarlı teratomların tedavisinde ideal hale getirilmiştir.Bu yöntem sadece hücre tedavileri için optimize stratejileri içgörü sağlamak değil, aynı zamanda klinik insan tedavileri uygulanabilir olma potansiyeline sahiptir. IPSC'ler içeren altı kuyulu bir plaka alarak başlayın. İmmün yetmezlikli hayvanlarda tetratoma oluşumunu indüklemek için oda sıcaklığında beş dakikalık kuluçka için bir çift füzyon muhabiri gen ile transduced insan kaynaklı pluripotent kök hücreleri içeren 6-iyi plaka iyi başına rekombinant hücre dissosiasyon enzim karışımı bir mililitre ekleyin.Kuluçka sonunda borulama hücreleri dağıtmak ve her kuyuya hücre kültürü orta eşit hacimli ekleyerek enzimatik

targeted-selective-treatment-pluripotent-stem-cell-derived-teratomas

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

İnsan pluripotent kök hücreler (hPSCs) farklı hastalıkların sayısız tedavi potansiyeline sahiptir. Bu hücrelerin yardımcı vücutta herhangi bir hücre tipinde farklılaşabilmektedir olduğu yatmaktadır. Burada hPSCs arasında pluripotence göstermek için kullanılan deney teratomlar, açıklanmaktadır.

Testis Kapsül içinde teratom Üretimi

Bu makalenin amacı, kemoradyoterapi çalışmaları için ortotopik glioblastoma modelinin kullanımı tanımlamaktır. Bu makale implante, hücre işleme rağmen gitmek ve bir intrakraniyal modeli kullanarak farenin radyoterapi olacaktır.

Bir Ortotopik Fare Beyin Tümörü Modelinde Kombinasyon Radyoterapi

Bu video, tümörleri tedavi etmek için immünokonjugatların ve ardından radyoligandların uygulandığı önceden hedeflenmiş radyoimmünoterapi veya PRIT tekniğini açıklar. Bu radyoimmünoterapi, sağlıklı dokulara radyasyon dozlarını azaltır ve antikor bazlı vektörlerle uyumlu olmayan çok düşük yarı ömre sahip radyonüklidleri kullanır.

Önceden Hedeflenmiş Radyoimmünoterapi: Terapötik Radyonüklidlerin Tümörlere Hedefe Yönelik Verilmesi İçin Bir Yöntem

Biz böylece etkili fototermal tedavi ajanları işleyen, yapı-bağımlı floresan kendini söndürme ve benzersiz fototermal özelliklere sahip porphysomes denilen yeni içsel fonksiyonlu nanovesicles geliştirdi. Bu yüksek basınçlı ekstrüzyon porphysomes kullanılarak formüle edilebilir ve bir ksenograft tümör modelinde bunların fototermal tedavi etkinliğini araştırmıştır.

One Minute, Porphysomes Sub-Bir-Watt Fototermal Tümör Ablasyon, İçsel fonksiyonlu Nanovesicles

Birincil invaziv kadavradan mesane kanseri zenograftlarını aşılamak için kurulan teknik laparotomi ve mesane seferberlik gerektirir. Bu prosedür, fareler üzerinde önemli morbidite uğratan teknik açıdan zor ve zaman alıcıdır. Bu nedenle perkütan yaklaşım ultrason rehberlik kullanarak, yüksek hassasiyet geliştirdi.

Kemirgen Ortotopik Mesane ksenogratflarının Minimal İnvaziv kurulması

Kök hücreler tümör tropizminden ötürü beyin tümörlerini tedavi etmek için terapötik taşıyıcıları umut vericidir. Non-invaziv intranazal kök hücre iletimi kan beyin bariyerini atlar ve klinik çeviri için güçlü bir potansiyel gösterir. Bu makale, glioma fare modelinde intranazal kök hücre sunumunun temel ilkelerini özetlemektedir.

Bir Fare Modelinde Tedavi Edici Kök Hücrelerin Glioblastomaya İntranazal Dağıtımı

Geçmişte, küçük hayvan ışınlama genellikle iyi arasındadır tümör cilt hedef yeteneği olmadan gerçekleştirildi. Sıçanlarda insan glioblastoma tedavisinde taklit etmek için hedefi oldu. Küçük hayvan ışınlama platformu kullanarak, evde beslenen hayvan tabanlı alt birim preklinik bir ortamda artırılması ile MRI destekli 3D açıkorur ışınlama gerçekleştirilen.

Bir mikro-irradiator kullanarak Glioblastoma fare modeli ışınlama güdümlü evde beslenen hayvan ve MRI

Burada, biyolojik ilgili sitelerdeki kanser için güvenilir preklinik modelleri oluşturmak için bir protokol ultrason destekli enjeksiyon Nöroblastom (NB) ve Ewing sarkomu (ES) hücre yararlanmak için (hücre satırları ve hasta kaynaklı tümör hücreleri kurulu) mevcut araştırma.

Ultrason kullanımı doku Yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör Xenografts kurulması için güdümlü

Burada, doğruluk ve verimliliği optimize etmek için şirket içinde geliştirilen algoritmaları kullanarak bir sıçan glioblastoma modelinde preklinik pozitron emisyon tomografisi tabanlı radyoterapi yapmak için bir protokol sunuyoruz.

Küçük Hayvan Radyasyonu Araştırma Platformu kullanılarak Glioblastoma Rat Modelinde Pozitron Emisyon Tomografi tabanlı Doz Boyama Radyasyon Tedavisi

Glioblastom, primer beyin kanserinin yıkıcı bir şeklidir ve lazer interstisyel termal terapi, ameliyat edilemeyen glioblastom için geleneksel cerrahi rezeksiyona umut verici bir alternatif olarak ortaya çıkmaktadır. Bu protokol, tedavi etkilerini veya adjuvan ve kombinatoryal tedavileri incelemek için kullanılabilecek optimize edilmiş bir klinik öncesi fare modelini tanımlar.

Glioblastomun Lazer İnterstisyel Termal Tedavisi için İmmünkompetan Bir Murin Modeli

Öğrenin, farelerde pluripotent kök hücre kaynaklı teratomları hedefli dış ışın radyasyon tedavisi ile nasıl etkili ve güvenli bir şekilde tedavi edebilirsiniz. Bu yöntem, çevre dokulara zarar vermeden tümörleri küçültmeyi amaçlar.

Pluripotent kök hücre kaynaklı Teratomas Dış Beam radyasyon bir küçük-hayvan modelinde kullanarak hedeflenen ve seçici tedavisinde (Video) | JoVE Journal

Pluripotent kök hücre kaynaklı Teratomas Dış Beam radyasyon bir küçük-hayvan modelinde kullanarak hedeflenen ve seçici tedavisinde

Daha fazla video keşfet