Name: Kynurenine ve Kynurenic asit yüksek performanslı sıvı kromatografi ölçüsü: Biyokimya biliş ve uyku sıçanlarda ilişkin (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda akut kinürenin müdahalesinin etkilerini yüksek performanslı sıvı kromatografi ile ölçme yöntemini. Bu teknik, beyin ve plazmadaki metabolitleri güvenilir şekilde analiz eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu da çalışmanın kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01 NS102209) ve bir bağış Clare E. Forbes Trust tarafından finanse edildi.

<ol><li>Leklem, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+aspects+of+tryptophan+metabolism+in+humans+and+other+species%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Clinical+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Quantitative aspects of tryptophan metabolism in humans and other species: a review.</a> The American Journal of Clinical Nutrition. 24 (6), 659-672 (1971).</li>
<li>Pocivavsek, A., Notarangelo, F. M., Wu, H. Q., Bruno, J. P., Schwarcz, R. Astrocytes as Pharmacological Targets in the Treatment of Schizophrenia: Focus on Kynurenic Acid. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128009819000250">Modeling the Psychophathological Dimensions of Schizophrenia - From Molecules to Behavior</a>. Pletnikov, M. V., Waddington, J. L. , Elsevier, Academic Press. London, San Diego, Waltham, Oxford. 423-443 (2016).</li>
<li>Hilmas, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+metabolite+kynurenic+acid+inhibits+alpha7+nicotinic+receptor+activity+and+increases+non-alpha7+nicotinic+receptor+expression%3A+physiopathological+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The brain metabolite kynurenic acid inhibits alpha7 nicotinic receptor activity and increases non-alpha7 nicotinic receptor expression: physiopathological implications.</a> Journal of Neuroscience. 21 (19), 7463-7473 (2001).</li>
<li>Perkins, M. N., Stone, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+iontophoretic+investigation+of+the+actions+of+convulsant+kynurenines+and+their+interaction+with+the+endogenous+excitant+quinolinic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">An iontophoretic investigation of the actions of convulsant kynurenines and their interaction with the endogenous excitant quinolinic acid.</a> Brain Research. 247 (1), 184-187 (1982).</li>
<li>DiNatale, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kynurenic+acid+is+a+potent+endogenous+aryl+hydrocarbon+receptor+ligand+that+synergistically+induces+interleukin-6+in+the+presence+of+inflammatory+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Kynurenic acid is a potent endogenous aryl hydrocarbon receptor ligand that synergistically induces interleukin-6 in the presence of inflammatory signaling.</a> Toxicological Sciences. 115 (1), 89-97 (2010).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kynurenic+acid+as+a+ligand+for+orphan+G+protein-coupled+receptor+GPR35%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Kynurenic acid as a ligand for orphan G protein-coupled receptor GPR35.</a> The Journal of Biological Chemistry. 281 (31), 22021-22028 (2006).</li>
<li>Alexander, K. S., Wu, H. Q., Schwarcz, R., Bruno, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+elevations+of+brain+kynurenic+acid+impair+cognitive+flexibility%3A+normalization+by+the+alpha7+positive+modulator+galantamine%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berlin%29%22%5BJournal%5D)">Acute elevations of brain kynurenic acid impair cognitive flexibility: normalization by the alpha7 positive modulator galantamine.</a> Psychopharmacology (Berlin). 220 (3), 627-637 (2012).</li>
<li>Chess, A. C., Landers, A. M., Bucci, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-kynurenine+treatment+alters+contextual+fear+conditioning+and+context+discrimination+but+not+cue-specific+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">L-kynurenine treatment alters contextual fear conditioning and context discrimination but not cue-specific fear conditioning.</a> Behavioural Brain Research. 201 (2), 325-331 (2009).</li>
<li>Chess, A. C., Simoni, M. K., Alling, T. E., Bucci, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevations+of+endogenous+kynurenic+acid+produce+spatial+working+memory+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophrenia+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Elevations of endogenous kynurenic acid produce spatial working memory deficits.</a> Schizophrenia Bulletin. 33 (3), 797-804 (2007).</li>
<li>Pocivavsek, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+endogenous+kynurenic+acid+control+hippocampal+glutamate+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in endogenous kynurenic acid control hippocampal glutamate and memory.</a> Neuropsychopharmacology. 36 (11), 2357-2367 (2011).</li>
<li>Pocivavsek, A., Baratta, A. M., Mong, J. A., Viechweg, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Kynurenine+Challenge+Disrupts+Sleep-Wake+Architecture+and+Impairs+Contextual+Memory+in+Adult+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Acute Kynurenine Challenge Disrupts Sleep-Wake Architecture and Impairs Contextual Memory in Adult Rats.</a> Sleep. 40 (11), (2017).</li>
<li>Halassa, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytic+modulation+of+sleep+homeostasis+and+cognitive+consequences+of+sleep+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Astrocytic modulation of sleep homeostasis and cognitive consequences of sleep loss.</a> Neuron. 61 (2), 213-219 (2009).</li>
<li>Erhardt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kynurenic+acid+levels+are+elevated+in+the+cerebrospinal+fluid+of+patients+with+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Kynurenic acid levels are elevated in the cerebrospinal fluid of patients with schizophrenia.</a> Neuroscience Letters. 313 (1-2), 96-98 (2001).</li>
<li>Linderholm, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+levels+of+kynurenine+and+kynurenic+acid+in+the+CSF+of+patients+with+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophrenia+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Increased levels of kynurenine and kynurenic acid in the CSF of patients with schizophrenia.</a> Schizophrenia Bulletin. 38 (3), 426-432 (2012).</li>
<li>Sathyasaikumar, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+kynurenine+pathway+metabolism+in+the+prefrontal+cortex+of+individuals+with+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophrenia+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Impaired kynurenine pathway metabolism in the prefrontal cortex of individuals with schizophrenia.</a> Schizophrenia Bulletin. 37 (6), 1147-1156 (2011).</li>
<li>Schwarcz, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+cortical+kynurenate+content+in+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Increased cortical kynurenate content in schizophrenia.</a> Biological Psychiatry. 50 (7), 521-530 (2001).</li>
<li>Pocivavsek, A., Rowland, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+Neuroscience+Illuminates+Causal+Relationship+Between+Sleep+and+Memory%3A+Translating+to+Schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophrenia+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Basic Neuroscience Illuminates Causal Relationship Between Sleep and Memory: Translating to Schizophrenia.</a> Schizophrenia Bulletin. 44 (1), 7-14 (2018).</li>
<li>Shibata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorimetric+micro-determination+of+kynurenic+acid%2C+an+endogenous+blocker+of+neurotoxicity%2C+by+high-performance+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography%22%5BJournal%5D)">Fluorimetric micro-determination of kynurenic acid, an endogenous blocker of neurotoxicity, by high-performance liquid chromatography.</a> Journal of Chromatography. 430 (2), 376-380 (1988).</li>
<li>Buzsaki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+consolidation+during+sleep%3A+a+neurophysiological+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Sleep+Research%22%5BJournal%5D)">Memory consolidation during sleep: a neurophysiological perspective.</a> Journal of Sleep Research. 7, 17-23 (1998).</li>
<li>Graves, L. A., Heller, E. A., Pack, A. I., Abel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+deprivation+selectively+impairs+memory+consolidation+for+contextual+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Sleep deprivation selectively impairs memory consolidation for contextual fear conditioning.</a> Learning & Memory. 10 (3), 168-176 (2003).</li>
<li>Yamashita, M., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tryptophan+circuit+in+fatigue%3A+From+blood+to+brain+and+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Tryptophan circuit in fatigue: From blood to brain and cognition.</a> Brain Research. 1675, 116-126 (2017).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bir güvenilir değerlendirilmesi KYNA beyin için bir periferik kynurenine yönetim sonra birleştirmek ve biyokimyasal ve fonksiyonel deneyler yorumlamak çok önemlidir. Burada, yeni kullanıcıların, plazma kynurenine ve beyin KYNA sıçan ölçmek için etkili yöntemler kurmak için izin verir ayrıntılı bir iletişim kuralı mevcut. Kynurenine plazma ölçüm doğru enjeksiyon doğruladı ve beyin de novo sentezinde metaboliti KYNA ölçümü onaylar. Shibata18, huzurunda tam olarak beyin nanomolar aralığındak...

KP esansiyel amino asit triptofan1yaklaşık % 95'i aşağılayıcı için sorumludur. Memeli beyninde astrocytes alınan kynurenine neuroactive küçük molekül KYNA öncelikle enzim kynurenine aminotransferaz (KAT) II2tarafından metabolize. KYNA bir antagonisti NMDA ve α7nACh reseptörleri beyin2,3,4, görür ve ayrıca aril hidrokarbon reseptör (AHR) ve G-protein de dahil olmak üzere reseptörlerinin sinyal hedefleri reseptör 35 (GPR35) birleştiğinde5 ,6. Deneysel hayvan yükselmeler KYNA beyinde bilişsel performansları bir dizi davranışsal deneyleri2,7,8,9,10 zarar gösterilmiştir . Böylece daha fazla rol astrocyte kaynaklı moleküllerin uyku Nörobiyoloji oransal destekleme KYNA bilişsel işlevler tarafından etkileyen uyku-uyanıklık davranış11, oransal olarak önemli bir rol oynar gelişmekte olan bir hipotez öneriyor ve biliş12.
Klinik olarak, yükselmeler KYNA içinde beyin omurilik sıvısı ve otopsi beyin dokusu içinde şizofreni13,14,15,16, zayıflatıcı bir psikiyatrik bozukluk ile hastalardan bulunmuştur tarafından bilişsel bozuklukları ile karakterizedir. Şizofreni hastalarında da sık sık hastalık17şiddetlendirmek uyku bozukluğu tarafından boğulmuş. Uyku ve biliş, öğrenme ve hafıza, özellikle arasında bir ilişkisi oransal KP metabolizması ve KYNA rolünün anlaşılması şizofreni ve diğer fakir bu sonuçların tedavisi için yeni tedavilerin gelişmesine neden olabilir psikiyatrik hastalıklar.
KP metabolitleri ölçümü için güvenilir ve tutarlı bir yöntem çeşitli kuruluşlardan ortaya çıkan araştırma KP biyoloji bilimsel anlayış içine entegre edilebilir sağlamak önemlidir. Halen, kynurenine fare plazma ve KYNA sıçan beyin tarafından yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) ölçmek için yöntemler açıklanmaktadır. Yapar bir fluorimetric tespitinde huzurunda Zn2 +kullanın, Shibata18 ve daha yakın zamanda adapte ve bırakmak için sonrası sütun reaktifi olarak 500 mM çinko asetat ile derivatize için en iyi duruma getirilmiş tarafından geliştirilen ilk mevcut iletişim kuralı endojen, nanomolar miktarda KYNA beyin11algılama.
Mevcut protokolünde açıklandığı gibi de novo endojen KYNA üretimi teşvik için doğrudan bioprecursor kynurenine intraperitoneally enjekte edilir (IP) içinde rats. KYNA üretim derecesini belirlemek için biyokimyasal değerlendirmeler ile birlikte, bir kynurenine etkileri bağımlı hipokampal bellek (pasif kaçınma paradigma) meydan ve uyku-uyanıklık mimarisi (EEG ve EMG sinyalleri) de incelenen11. Bu teknikleri bir arada sıçanlarda kynurenine meydan vivo biyokimyasal ve fonksiyonel etkisini incelenmesi için izin verir.

<table><tbody><tr><td>Wistar sıçanları</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td>yetişkin erkek, 250-350 g</td></tr><tr><td>L-kinürenin sülfat</td><td>Sai Advantium</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ReproSil-Pur C18 sütunu (4 mm x 150 mm)</td><td>Dr. Maisch GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EZ Clips</td><td>Stoelting Co.</td><td>59022</td><td></td></tr><tr><td>Montaj malzemeleri vidalar</td><td>PlasticsOne</td><td>00-96 X 1/16</td><td></td></tr><tr><td>Emilmeyen</td><td>Sütürler MedRep Express</td><td>699B</td><td>CP Tıbbi Monomid Siyah Naylon Sütürler, 4-0, P-3, 18", 12</td></tr><tr><td>Emilebilir Sütür</td><td>KUTUSU Ethicon</td><td>J310H</td><td>4-0 Kaplamalı Vicryl Violet 1X27 '' SH-1</td></tr><tr><td>Diş Çimentosu</td><td>Çalma A.Ş.</td><td>51458</td><td></td></tr><tr><td>Matkap Ucu</td><td>Çalma A.Ş.</td><td>514551</td><td>0,45 mm</td></tr> <tr><td>< güçlü > İsim< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Şirket< > <</td> <td>güçlü > Katalog Numarası< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Yorumlar< / güçlü ></td></tr> <tr><td>< güçlü >İttifak HPLC sistemi< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>E2695 ayırma modülü</td><td>Sular</td><td>176269503</td><td></td></tr><tr><td>2475 floresan dedektörü</td><td>Sular</td><td></td><td></td>186247500</tr><tr><td>Sütun sonrası reaktif yöneticisi</td><td>Waters</td><td>725000556</td><td></td></tr><tr><td>Lenovo bilgisayar</td><td>Waters</td><td>668000249</td><td></td></tr><tr><td>Empower yazılımı</td><td>Waters</td><td>176706100</td><td></td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Company</td><td>strong><Katalog Numarası</td><td>Yorumlar</güçlü></td></tr><tr><td><güçlü> sıçan< / güçlü için pasif kaçınma kutusu ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Ekstra uzun MDF ses azaltma</td><td>kabini MedAssociates</td><td>ENV-018MD</td><td>İç: 22" (G) x 22" (Y) x 16" (D)</td></tr> <tr><td>Merkez kanal modülatör mekik kutusu odası</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010MC</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan için paslanmaz çelik ızgara zemin</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010MB-GF</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik giyotin kapı</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010B-S</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan için hızlı bağlantı kesme mekiği ızgarası zemin demeti</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010MB-QD</td><td></td></tr><tr><td>Uyaran ışığı, 1" beyaz lens, modüler panel üzerine monte edilmiş</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-221M</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan odası için ses kontrollü Sonalert modülü</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-223AM</td><td></td></tr><tr><td>SmartCtrl 8 giriş/16 çıkış paketi</td><td>MedAssociates</td><td>DIG-716P2</td><td></td></tr><tr><td>Mekik kutuları için 8 Kanallı IR kontrolü</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-253C</td><td></td></tr><tr><td>Kızılötesi kaynak ve dedektör dizi şeritleri</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-256</td><td></td></tr><tr><td>Masaüstü arayüz kabini, 120 V 60 Hz</td><td>MedAssociates</td><td>SG-6080C</td><td></td></tr><tr><td>Çift aralıklı sabit akım caydırıcı stimülasyon modülü</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-410B</td><td></td></tr><tr><td>Katı hal ızgara zemin karıştırıcı modülü</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-412</td><td></td></tr><tr><td>Çift A/B şok kontrol modülü</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-415</td><td></td></tr><tr><td>2' 3-Pin mini-molex uzatma</td><td>MedAssociates</td><td>SG-216A-2</td><td></td></tr><tr><td>10' Şok çıkış kablosu, DB-9 M/F</td><td>MedAssociates</td><td>SG-219G-10</td><td></td></tr><tr><td>Mekik şok kontrol kablosu 15', 6</td><td>MedAssociates</td><td>SG-219SA</td><td></td></tr><tr><td>Küçük masa üstü dolap ve güç kaynağı, 120 V 60 Hz</td><td>MedAssociates</td><td>SG-6080D</td><td></td></tr><tr><td>PCI arayüz paketi</td><td>MedAssociates</td><td>DIG-700P2-R2</td><td></td></tr><tr><td>Mekik kutusundan kaçınma yardımcı programı paketi</td><td>MedAssociates</td><td>SOF-700RA-7</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>< güçlü > Şirket< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Katalog Numarası< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Yorumlar< / güçlü ></td></tr> <tr><td>< güçlü > Uyku Uyanık İzleme Ekipmanları < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Ponehmah yazılımı</td><td>Veri Bilimleri Uluslararası (DSI)</td> <td>PNP-P3P-610</td><td></td></tr><tr><td>MX2 8 Kaynak Edinme arayüzü</td><td>Veri Bilimleri Uluslararası (DSI)</td> <td>PNM-P3P-MX204</td><td></td></tr><tr><td>Dell bilgisayar, Optiplex 7020, Windows 7, 64 bit</td><td>Veri Bilimleri Uluslararası (DSI)</td><td>271-0112-013</td><td></td></tr><tr><td>Dell 19" bilgisayar monitörü</td><td>Veri Bilimleri Uluslararası (DSI)</td><td>271-0113-001</td><td></td></tr><tr><td>Plastik kafesler için alıcılar, 8x</td><td>Veri Bilimleri Uluslararası (DSI)</td><td>272-6001-001</td><td></td></tr><tr><td>Cisco RV130 VPN yönlendirici</td><td>Veri Bilimleri Uluslararası (DSI)</td><td>RV130</td><td></td></tr><tr><td>Matrix 2.0</td><td>Veri Bilimleri Uluslararası (DSI)</td><td>271-0119-001</td><td></td></tr><tr><td>Ağ anahtarı</td><td>Veri Bilimleri Uluslararası (DSI)</td><td>SG200-08P</td><td></td></tr><tr><td>Neuroscore yazılımı</td><td>Veri Bilimleri Uluslararası (DSI)</td><td>271-0171-CFG</td><td></td></tr><tr><td>İki biyopotansiyel kanallı verici, model TL11M2-F40-EET</td><td>Veri Bilimleri Uluslararası (DSI)</td><td>270-0134-001</td><td></td></tr></tbody></table>

kynurenine ve kynurenic asit yüksek performanslı sıvı kromatografi ölçüsü: biyokimya biliş ve uyku sıçanlarda ilişkin

A High-performance Liquid Chromatography Measurement of Kynurenine and Kynurenic Acid: Relating Biochemistry to Cognition and Sleep in Rats

Triptofan bozulma kynurenine yolu (KP) psikiyatrik bozukluklar karıştığı olmuştur. Özellikle, astrocyte elde edilen metaboliti kynurenic asit (KYNA), bir antagonisti her iki N-metil-d-aspartat (NMDA) ve α7 (α7nACh) nikotinik asetilkolin reseptörü, sağlık ve hastalığında bilişsel süreçlerde karıştığı olmuştur. Şizofreni hastalarının beynindeki KYNA düzeyleri yüksek olarak, bir arıza glutamatergic ve kolinerjik reseptörler nedensel bilişsel işlev bozukluğu için hastalığın psikopatoloji bir çekirdek etki alanı ile ilgili olabilir inanılıyor. KYNA şizofreni ile bireylerde pathophysiologically önemli bir rol oynayabilir. Kemirgen beyinde endojen KYNA doğrudan bioprecursor kynurenine hayvanlarla davranarak yükseltmek mümkündür ve preklinik çalışmalar sıçanlarda akut yükselmeler KYNA öğrenme ve bellek süreçlerinin etkisi olabilir göstermiştir. Geçerli protokol bu deneysel yaklaşım ayrıntılı olarak açıklar ve kan kynurenine düzeyleri ve beyin KYNA oluşumu, (yüksek performanslı sıvı kromatografi kullanarak) bir) bir biyokimyasal analiz birleştirir b) davranışsal soruşturma için test hipokampal bağımlı bağlamsal bellek (pasif kaçınma paradigma) ve c) bir değerlendirme uyku-uyanıklık davranış [telemetric kayıtları birleştirerek electroencephalogram (EEG) ve electromyogram (EMG) sinyalleri] sıçanlarda. Birlikte ele alındığında, yüksek KYNA, uyku ve biliş arasında bir ilişki okudu ve bu protokol ayrıntılı olarak kynurenine yükselme ve KYNA oluşumu içinde vivo sıçanlarda işlevi sonuçlarını anlamak için deneysel bir yaklaşım açıklar. Bu iletişim kuralı değişimleri gözden geçirmek elde edilen sonuçlar KP ve KYNA uyku ve biliş sağlık ve hastalık Birleşik Devletleri oransal önemli roller hizmet hipotez test edecek.

Bir mayi kynurenine enjeksiyon beyin KYNA yükseltmek için bir yöntem olarak kullanımını doğrulamak için doku HPLC analiz gerçekleştirildi. Standart eğrileri (Şekil 1) ilişkili yazılım kullanarak ve doku örnekleri miktar için izin inşa edildi. Temsilcisi chromatograms kynurenine ve KYNA için Şekil 2' de sunulmuştur. Kynurenine 6 dk saklama teker gözlendi ve KYNA 11 dk bir tutma zaman vardı. KP dynamics gözlemlemek için 100 mg/kg k...

Kynurenine yolu (KP) neuroactive metabolitleri değişiklikler psikiyatrik hastalıklarda karıştığı. Bir değişmiş kynurenine yolu metabolizma vivo içinde Rodents fonksiyonel sonuçları araştıran yeni tedavi yaklaşımları aydınlatmak yardımcı olabilir. Geçerli protokol fareler bir akut kynurenine mücadelesine etkisini araştırmak için biyokimyasal ve davranışsal yaklaşımlar birleştirir.

Kynurenine ve Kynurenic asit yüksek performanslı sıvı kromatografi ölçüsü: Biyokimya biliş ve uyku sıçanlarda ilişkin

The kynurenine pathway (KP) of tryptophan degradation has been implicated in psychiatric disorders. Specifically, the astrocyte-derived metabolite ...

Bu yöntem, sıçanlarda akut kinürenin tehdidinin etkisi hakkında sinirbilim alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olmak için biyokimyasal ve davranışsal yaklaşımları birleştirir. Tekniğin ana avantajı, sıçan beyni ve plazmasındaki kinürenin yolağı metabolitlerinin ölçümü için güvenilir ve tutarlı bir yöntem sağlamasıdır. Prosedürü göstermek, laboratuvarımdan bir öğrenci araştırma asistanı olan Carly Fabian olacak.İntraperitoneal kinürenin uygulamasından sonra uygun deneysel son noktada, donmuş hasat edilmiş plazmayı ıslak buz üzerinde çözdürün ve çözülmüş numuneleri ultra saf su ile seyreltin. 100 mikrolitre seyreltilmiş numuneyi 25 mikrolitre% 6 perklorik asit içeren ayrı kaplara aktarın ve numuneleri santrifüjleyin. Daha sonra, kinürenin ve kinürenik asit tayini için her tüpten 100 mikrolitre süpernatanı ayrı ayrı 250 mikrolitrelik mikrosantrifüj tüplerine aktarın.Beyin örneklerinden kinürenik asit ölçümü için, donmuş hasat edilmiş beyin örneklerini kuru buz üzerinde çözdürün ve her örneği hassas bir analitik terazide ayrı ayrı tartın. Tüm numuneler tartıldığında, tüpleri ıslak buz üzerine taşıyın ve her doku numunesini ultra saf su ile hacimce bir ila 10 ağırlık oranında

a-high-performance-liquid-chromatography-measurement-kynurenine

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Bir prosedür elektroansefalogram, elektromiyogram ve serebral laktat konsantrasyon takip edilir iken optogenetically kortikal piramidal nöronların etkinlik işlenmesi için tarif edilmektedir. Onlar kendiliğinden uyku / uyanıklık döngüsü geçmesi ise Deneysel kayıtları kablo-tethered fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir. Optogenetic cihaz laboratuar monte edilmiştir; kayıt ekipman ticari olarak temin edilebilmektedir.

Eşzamanlı Elektroensefalografi, Kemirgen Serebral Korteks Laktat Konsantrasyonu ve Nöronal Faaliyet Optogenetic Manipülasyon Gerçek zamanlı ölçüm

Bu videoda, anestezi uygulanmış bir fareye elektroensefalogram (EEG) ve elektromiyogram (EMG) elektrot düzeneğinin implante edilmesi için bir protokol gösterilmektedir. İşlem, fareyi stereotaksik bir çerçeve üzerine sabitlemeyi, kafatasında orta hat kesisi yapmayı, elektrotlar için delikler açmayı ve sinyal kaydı için elektrot ünitesini sabitlemeyi içerir. Kurtarma işleminden sonra, farenin uyku-uyanıklık davranışı kaydedilen sinyaller kullanılarak analiz edilir.

Elektroensefalogram ve Elektromiyogram Kayıtları ile Farelerde Uyku Davranışının Analiz Edilmesi

Serbest davranan farelerde elektroensefalogram (EEG) ve elektromiyogram (EMG) kaydı, davranış ve fizyolojiyi uyku ve uyanıklık ile ilişkilendirmek için kritik bir adımdır. Burada açıklanan deneysel protokol, farelerde EEG ve EMG kayıtlarını elde etmek için kablo tabanlı bir sistem sağlar.

Farelerde Uyku Ölçüm Basım Kayıt Prosedürü

Synaptosomal dopamin alımı ve yüksek performanslı sıvı Kromatografi analiz temsil deneysel araçları tarafından değerlendirilmesi dopamin taşıyıcı işlevi ve striatal dokusunda dopamin düzeyleri dopamin homeostazı farelerde araştırmak için anılan sıraya göre. Burada protokolleri dopamin doku içeriği ölçmek ve dopamin taşıyıcı işlevselliğini değerlendirmek için mevcut.

Dopaminerjik Homeostasis farelerde yüksek performanslı sıvı Kromatografi analizi ve Synaptosomal dopamin alımı kullanımı tarafından değerlendirilmesi

Biz aynı anda üç monoamin nörotransmitter belirlenmesi ve iki onların metabolitleri bebekler idrar için yüksek basınçlı sıvı Kromatografi (HPLC) elektrokimyasal algılama (ECD) ile birleştiğinde uygun bir katı fazlı çıkarma mevcut. Biz Ayrıca metaboliti MHPG beyin hasarı erken tanısı için potansiyel bir biyomarker olarak bebekler için tanımlar.

Ayıklama ve çözümleme katekoiamin nörotransmitter ve onların metabolitleri yüksek basınçlı sıvı Kromatografi ile uygun bir yöntem

Etkinlik tabanlı ev-kafes izleme aracılığıyla uyku ölçme bir yüksek-den geçerek yöntemi açıklamak. Bu yöntem geleneksel EEG tabanlı yöntemleri avantaj sunar. Toplam uyku süresi belirlenmesi için de doğrulanır ve uyku insan hastalık kemirgen modellerinde izlemek için güçlü bir araç olabilir.

Uyku süresi Rodents noninvaziv, yüksek üretilen iş belirlenmesi

Burada, in vivo microdialysis EEG kayıtları ile birlikte epileptik ve sigara-epileptik sıçan ventral hipokampus glutamat ve aspartat sürümde analiz etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Ekstraselüler glutamat ve aspartat konsantrasyonu hastalık farklı aşamalarında ile ilişkili.

Microdialysis fareler serbestçe hareket EEG kayıtları sırasında eksitatör Amino asit

Uyku kaybı ve sirkadiyen hizalama çok sayıda operasyonel kazalara ve olaylara katkıda bulunur. Tedbirlerin ve çalışma çizelgeleme tasarımlarının etkinliğini azaltmaya yönelik etkinliği, operasyonel ortamlarda değerlendirmek zor olabilir. Bu yazıda karmaşık operasyonel ortamlarda uyku, sirkadiyen, yorgunluk ve performans verilerinin toplanması için bir yaklaşım özetlenmiştir.

Karmaşık operasyonel ortamlarda uyku, Circadian, yorgunluk ve performans verilerini toplama

Burada, katılımcıların Münih ChronoType Anketi, altın standart sirkadiyen faz biyobelirteçleri ve aktigrafik ölçüleri temel alınarak sirkadiyen fenotip gruplarına doğru kategorize etmesini takiben performanstaki diurnal ritimleri araştırmak için bir yöntem saklıyız.

Gerçek Dünyada İnsan Sirkadiyen Fenotilik ve Diurnal Performans Testi

Burada, tek bir dörtlüktolü kütle spektrometresi ile birlikte sıvı kromatografisi ile analiz edilen kanser hücre kültürlerinden toplanan ortamda kynurenine pathway'de (kynurenine, 3-hydroxykynurenine, ksantürenik asit, 3-hidroksiranilik asit) üretilen dört farklı triptofan metabolitinin belirlenmesi için bir protokol açıklanmıştır.

Kanser Hücre Kültürlerinden Toplanan Ortamda Sıvı Kromatografi-Kütle Spektrometresi ile Analiz Edilen Seçilmiş Kynureninlerin Eşzamanlı Nicelemesi

Öğrenin, sıçanlarda akut kinürenin müdahalesinin etkilerini yüksek performanslı sıvı kromatografi ile ölçme yöntemini. Bu teknik, beyin ve plazmadaki metabolitleri güvenilir şekilde analiz eder.

Kynurenine ve Kynurenic asit yüksek performanslı sıvı kromatografi ölçüsü: Biyokimya biliş ve uyku sıçanlarda ilişkin

Daha fazla video keşfet