Name: Ölçeklenebilir gerilebilir, Çift kanal, mikrosıvısal Organ cips imalatı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 44 s
Description: Öğrenin, 3D baskılı kalıplar ve yumuşak silikon kauçuk kullanarak ölçeklenebilir, gerilebilir organ çipi üretimini. Bu yöntem, mekanik uyaranlar ve perfüzyon sistemleri ile organ düzeyinde fonksiyonları in vitro ortamda taklit eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

M. Rousseau ve S. Kroll ilk fabrikasyon Protokolü gelişimine katkıları için fotoğraf ve videografisi ve M. Ingram, J. Nguyen, ö. Shea ve N. Wen ile yardım için teşekkür. Bu araştırma için biyolojik ilham mühendislik Harvard Üniversitesi ve Savunma İleri Araştırma Projeleri Ajansı işbirliği anlaşmaları #W911NF-12-2-0036 ve #W911NF-16-C-0050 altında Wyss Enstitüsü tarafından sponsor oldu ve FDA verin # HHSF223201310079C, hibe NIH #R01-EB020004 ve #UG3-HL141797-01 ve Bill ve Melinda Gates Vakfı DEI için verir #OPP1163237 ve #OPP1173198. Sayısı ve sonuçlar bu belgede yer alan yazarlar ve resmi ilkelerine, ifade veya ima, Savunma İleri Araştırma Projeleri Ajansı, gıda ve İlaç İdaresi, temsil olarak yorumlanmalıdır değil Ulusal Sağlık Enstitüleri, veya ABD hükümeti.

1. genel hazırlık
<ol><li>Enkaz önlemek için çalışma alanı ambalaj bant kullanarak temiz ve temiz oda silin ve izopropil alkol alan aşağı silin.</li>
	<li>PDMS gerektiren tüm adımları için PDMS 10:1 oranında (10 Ajan, elastomer temel 100 g bağlama çapraz g) karıştırın. El ile veya piyasada bulunan bir mikser ile karıştırın. Burada bir gezegen santrifüj karıştırıcısını kullanır: 2000 rpm az 2 dakika boyunca karıştırma, sonra PDMS 2200 devirde 2 dakika gaz giderme.</li>
	<li>Darbe enkaz kullanmak için önceden dışarı için hava tabancası ile temiz tüm kalıpları. Uyarı: Metal forseps kalıpları yüzeyine zarar verir gibi enkaz kaldırmak için kullanın.</li>
</ol>2. üst kanal hazırlık
<ol><li>Temizlik bezleri ve etanol ile poliüretan her parçanın parlak yüz aşağı silin. Tüm kalan etanol poliüretan yüzeyden kurutulur emin olun.</li>
	<li>Poliüretan parlak yüz sadece bir şey gibi açılış kalıp boşaltma PDMS için üstündeki bırakarak kalıp, açık tarafındaki bir mühür oluşturmak için MIP kalıp açık tarafına yerleştirin. Not: Kontrol her kalıp poliüretan parça veya PDMS tarafından güvenli bir şekilde kaplıdır kalıpları dökme sırasında sızıntı olacaktır.</li>
	<li>Kalıp ve poliüretan derlemeler karşı MIP jig sonu dokulu tarafı ile MIP jig içine yerleştirin. Kadar tüm kalıpları içinde jig yerleştirilir bu yapmaya devam edin.</li>
	<li>MIP jig jig aralığı 25 mm genişliğinde olana bir anahtarı kullanarak kolu çevirerek sıkıştırın.</li>
	<li>Alüminyum folyo yüzeyleri sızıntı aşırı PDMS önlemek için MIP jig çevreleyen bir tekne yapmak.</li>
	<li>PDMS her kalıpları içine de tam kadar dökün. Not: Her küçük parça üst bileşen PDMS yaklaşık 3 mL gerektirir.</li>
	<li>Bir kez tüm jig dolu, jig vakum desiccator içine yerleştirin. Vakum PDMS degas 1 h için-80 kPa, çek.</li>
	<li>1 h sonra desiccator MIP jig çıkarın ve PDMS tedavi etmek en az 4 h 60 ° C fırında yerleştirin.</li>
	<li>Bir anahtarı kullanarak MIP jig sökmeye, jig kolu çevirerek gevşetin yönünün. Kalıplar sıkıştırma özgür olduğunda, kalıpları jig kaldırın.</li>
	<li>Poliüretan şeritler her kalıptan çıkartın ve atmak.</li>
	<li>Dikkatle de-kendi kalıpları PDMS parçaları kalıp ve onları özelliği-tarafı yukarı yatıyordu.</li>
	<li>Kiremit kazıyıcı, son sekme çentik bıçağına hizalamak ve her iki ucu için singulate en iyi bileşenler kes gitsin.</li>
	<li>Parçalar herhangi aşağıdaki hata modları için kontrol ve tatmin edici herhangi bir parça atmak: ana kanal, kanal alanı, büyük kabarcıklar, üzerindeki büyük enkaz çizikler deforme vakum kanalları.</li>
	<li>Parçalar kare Petri yemekler içinde basınç olumlu dolapları, oda sıcaklığında saklayın.</li>
</ol>3. alt kanal hazırlık
<ol><li>Kavite üst PDMS ulaşana kadar yaklaşık 10.5 g PDMS kalıpları içine dökün.<ol>
<li>Alt kanal kalıp kalıp altına tedavi PDMS için kontrol edin.</li>
		<li>Kalıp alt pürüzlü bir yüzeyde son parçaların düzensiz kalınlığı neden olabilir beri kirli, kalıp derinliklerinden gelen eski PDMS kazı. Not: küçük için < ele geçen, 2 cm2 alanları hava tabancası çok yavaşça PDMS alan üzerinde taşımak için kullanılabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kalıpları 1 h için vakum desiccator içine koyun.</li>
	<li>1 saat sonra bir seviye 60 ° C fırında kalıpları taşınmak > 4 h.</li>
	<li>Laminar akış başlıklı masada kalıp yerleştirin. Kalıp bir kenarından PDMS gevşetin.</li>
	<li>Bir köşe kavrama ve yavaşça geri kalıp yüzeyinden PDMS soyma.</li>
	<li>Tamamen kaldırılır, kanal özellikleri yüz doldu çalışma yüzeyinde düzenleyin.</li>
	<li>Fayans Kesiciler, adım 2.12 olduğu gibi çentikli PDMS kiremit kesici bıçak yerleştirme ile dış kenarları boyunca parçalar kesip.</li>
	<li>Parçalar herhangi bir enkaz kaldırmak için kasette özelliği yan yatıyordu.</li>
	<li>Bant ambalaj bölümünü kaldırın. Bölümü gevşek sonunda slayt sürükleyin. Mutsuz son ile cam laminat. Not: Bu bölümü. döşeme sırasında germe önlemek için önemlidir Eğer kabarcık bölümü ile cam arasında tuzak, yavaşça bölümü forseps ile kaldırın ve yeniden yatıyordu.</li>
	<li>Parçaların kalite kontrol kontrol edin. Parçalar herhangi bir arıza modları için kontrol ve çizikler ana kanal, büyük enkaz, büyük kabarcıklar veya deforme vakum kanalları içeren kapsayan herhangi bir tatmin edici olmayan parçaları atın.</li>
	<li>Bant ile özellikleri kapsar.</li>
	<li>Parça pozitif basınç kabine oda sıcaklığında saklayın.</li>
</ol>4. PDMS membran hazırlık
<ol><li>Gofret arkasında PDMS ücretsiz olduğundan emin olun.</li>
	<li>Her zar gofret AMF kasetlerine atanmış yuva yerleştirin.</li>
	<li>1 mL şırınga PDMS 0.09 mL her membran gofret yazı dizi merkezi yerleştirmek için kullanın. En az 5 dk PDMS membran gofret mesaj yaymak izin vermek için oturup PDMS izin. Not: yazı dizi en az % 75'i PDMS içinde kaplı kadar bir sonraki adıma geçin değil. Artık PDMS uzun bekleme süreleri bu adımda tercih edilir böylece sonrası bölgeye fitil yetkisi olan membranlar kalitesini artırır.</li>
	<li>Plazma 20 W 45 için Polikarbonat şerit tedavi s, O2 gaz plazma makine içinde 0.80 mbar.</li>
	<li>Polikarbonat levha plazma makineden çıkarın ve Polikarbonat levhalar 45 x 45 mm kareler halinde kesmek için makas kullanın. Not: plazma ile teması en aza indirmek tedavi yüzey toz için Polikarbonat yapışmasını önlemek için.</li>
	<li>Yavaşça Polikarbonat kareler üzerine sıvı PDMS membran gofret merkezli tedavi plazma yan yattı. Polikarbonat ve PDMS temas halinde olduğundan emin olun. Not: hava cepleri polikarbonat ve PDMS arasında kaçının.</li>
	<li>Önceden kesilmiş PDMS spacer Polikarbonat meydanın ortasına yerleştirin.</li>
	<li>Önceden kesilmiş dokulu Polikarbonat levha yapıştırma montaj sıkıştırma plaka tutmak için PDMS blok üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Tepsi tepsi 3 arkada, tepsi 2 orta ve Kaset 1 ön ekleyin. Kaset 1 bir çentik hizalama için vardır.</li>
	<li>Çıkış basınç valfi açın ve giriş basıncı Vana yavaşça açın. Ancak o zaman çıkış basıncı Vanayı kapat. Not: böylece çıkış gücünün 4 kg yavaş yavaş anında, hangi ekmeğine kırabilir aksine her membran gofret uygulanır bu.</li>
	<li>AMF düğmeyi açık kür döngüsü başlar. Gofret altında 4 kg (16 kPa) sıkıştırma ve Tablo 1' de listelenen bayiliği bir sıcaklık döngüsü tedavi.</li>
</ol><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:323px;" width="322"><colgroup>
<col>
<col>
<col>
</colgroup>
<tbody>
<tr height="39">
<td height="39" style="height:39px;width:91px;">Adım</td>
			<td style="width:131px;">Sıcaklık (° C)</td>
			<td style="width:101px;">Süresi (dk)</td>
		</tr>
<tr height="20">
<td align="right" height="20" style="height:20px;">1</td>
			<td align="right">20</td>
			<td align="right">20</td>
		</tr>
<tr height="20">
<td align="right" height="20" style="height:20px;">2</td>
			<td align="right">35</td>
			<td align="right">10</td>
		</tr>
<tr height="20">
<td align="right" height="20" style="height:20px;">3</td>
			<td align="right">45</td>
			<td align="right">10</td>
		</tr>
<tr height="20">
<td align="right" height="20" style="height:20px;">4</td>
			<td align="right">50</td>
			<td align="right">60</td>
		</tr>
<tr height="20">
<td align="right" height="20" style="height:20px;">5</td>
			<td align="right">60</td>
			<td align="right">120</td>
		</tr>
<tr height="18">
<td align="right" height="18" style="height:19px;">6</td>
			<td align="right">20</td>
			<td>Basılı tutun</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1 - membran koşullar kür
<ol start="12"><li>Giriş basıncı Vanayı kapat ve hava silindir basınç serbest bırakmak için çıkış basınç valfi açın.</li>
	<li>Kasetlerdeki kaldırmak ve laminar akış hood getir.</li>
	<li>Dikkatle dokulu Polikarbonat soyma ve PDMS spacer dikkatli bir şekilde çıkarın. Not: Bu farklı bir köşeden peeling başlangıç olursa da Polikarbonat taşıyıcı soyma değil emin olmak için PDMS spacer dikkat et.<ol>
<li>Polikarbonat taşıyıcı için delikler aracılığıyla ile alanları aracılığıyla PDMS membran incelemek ve bir işaretleyici delik aracılığıyla alan anahat izlemek ve herhangi bir delik veya kusurları membranlarda işaretlemek için kullanın.</li>
		<li>Gofret forseps işleme kullanarak, gofret tepsisinden gevşetin.</li>
		<li>Her membran gofret çıkarın ve kabında yerleştirin. Not: PDMS membran membran gofret--dan de-kalıp ve yedekleme Polikarbonat yapıştırılır. PDMS Polikarbonat gemisinden ayırma başlarsa, farklı bir bölgesinden kabuğu.</li>
		<li>Membranlar ve gofret Petri yemekler pozitif basınç kabine oda sıcaklığında saklayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. top derleme ve hazırlık
<ol><li>Mat bant kullanarak, PDMS membranlar yanı sıra enkaz kaldırmak için Petri kabına içi temiz.</li>
	<li>İyice enkaz kaldırmak için en iyi her bileşenin Özellik yan bant.</li>
	<li>En iyi kanal bölümü ("top") özelliğini tarafı yukarı PDMS membran ile Petri kabına yerleştirin. Not: bazı membranlar bir ya da iki üst kısımları kullanım alanı için boyutuna bağlı olarak kullanılabileceğini unutmayın. Her üst bölümü ana kanallar membran işaretli alana içinde uygun olmalıdır.</li>
	<li>Petri yemekler plazma makineye yükleyin.</li>
	<li>Plazma tedavi membran ve üst 20 W için 45 s, O2 gaz 0.80 mbar.</li>
	<li>Bağ devir bitti sonra bulaşıkları kaldırmak ve aktif parça özelliği yan membran üstüne uzandı ve bölümü tamamen hava kabarcığı yok ile membran ile lamine sağlamak.</li>
	<li>60 ° C fırında tavlama en az 2 h için parçalar yerleştirin.</li>
	<li>Bir neşter, Polikarbonat taşıyıcı üst-membran derlemesinden ayırmak için gümrüklü üst çevresinde izleme kullanarak. Not: taşıyıcı kesme.</li>
	<li>Bir kez bölümü takip, Polikarbonat derlemesinden kabuğu. Dön gümrüklü PDMS membran taşıyıcı soymak.</li>
	<li>Keskin uçlu forseps kullanarak, alt kanal erişim bağlantı noktalarından membran kaldırın ve bir stereoscope altında forseps ile herhangi bir enkaz veya toz kaldırma. Not: erişim bağlantı noktası kapsayan membran herhangi bir bölümünü bırakmayın.</li>
</ol>6. küçük parça derleme
<ol><li>5.5. adımda koşul kullanma alt bileşenleri ile tarafı yukarı, plazma tedavi derlemeleri bulunmaktadır.</li>
	<li>Ters bir mikroskop altında yarı en iyi derleme ile mikroskop slayt altına hizalayın.</li>
	<li>En az 2 h için 60 ° C fırında yerleştirin.</li>
	<li>Çip kalite kontrol muayene Not: Ana bağlantı noktalarına yakın ilgi ve kanal çip ödeme. Hatası modları için göz bebekleri ve de mikroskop altında kontrol edin.<ol>
<li>Çip tam gümrüklü denetlemek için hafifçe delaminating parçalar için kontrol etmek için belgili tanımlık küçük parça her köşesinde tug.</li>
		<li>Dalgalı bir desen veya hafif bir sapma kanal olarak görünür bir buruşuk veya sarkma membran denetlemek için çip kanal bakın.</li>
		<li>Enkaz ana kanaldaki incelemek için mikroskop kontrol edin. Not: Enkaz vakum kanalları gibi kritik olmayan alanlarda kabul edilir.</li>
		<li>Çipte ile hala ters mikroskop, ana kanal ve delaminasyon için vakum kanalları inceleyin. Not: Delaminasyon kritik olmayan alanlarda (örn., çip kenarına) kabul edilir.</li>
		<li>Ana kanal içinde 50-60 µm (1-2 membran gözenekleri) hizalanmış onay. Not: Bu kanallar vakum kanalları ile üst üste değil önemlidir.</li>
		<li>Ana kanal ve giriş ve çıkış kanal arasındaki zar belirgin herhangi bir delik sağlam olup olmadığını kontrol edin. Not: Bir bulky çip ya da hücre büyümesini kanallar dışında zarda herhangi bir delik açabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Mağaza oda sıcaklığında kabine pozitif basınç Petri yemeklerinde fişleri.</li>
</ol>

<ol><li>Bhatia, S. N., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+organs-on-chips%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Microfluidic organs-on-chips.</a> Nature Biotechnology. 32 (8), 760-772 (2014).</li>
<li>Benam, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+In+vitro+Disease+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology+Mechanisms+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Engineered In vitro Disease Models.</a> Annual Review of Pathology Mechanisms of Disease. 10 (1), 195-262 (2015).</li>
<li>Huh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Human+Disease+Model+of+Drug+Toxicity-Induced+Pulmonary+Edema+in+a+Lung-on-a-Chip+Microdevice%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">A Human Disease Model of Drug Toxicity-Induced Pulmonary Edema in a Lung-on-a-Chip Microdevice.</a> Science Translational Medicine. 4 (159), 159ra147(2012).</li>
<li>Huh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstituting+Organ-Level+Lung+Functions+on+a+Chip%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Reconstituting Organ-Level Lung Functions on a Chip.</a> Science. 328 (5986), 1662-1668 (2010).</li>
<li>Kim, H. J., Huh, D., Hamilton, G., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+gut-on-a-chip+inhabited+by+microbial+flora+that+experiences+intestinal+peristalsis-like+motions+and+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Human gut-on-a-chip inhabited by microbial flora that experiences intestinal peristalsis-like motions and flow.</a> Lab on a Chip. 12 (12), 2165-2174 (2012).</li>
<li>Kim, H. J., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut-on-a-Chip+microenvironment+induces+human+intestinal+cells+to+undergo+villus+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Gut-on-a-Chip microenvironment induces human intestinal cells to undergo villus differentiation.</a> Integrative Biology. 5 (9), 1130-1140 (2013).</li>
<li>Kim, H. J., Li, H., Collins, J. J., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+microbiome+and+mechanical+deformation+to+intestinal+bacterial+overgrowth+and+inflammation+in+a+human+gut-on-a-chip%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Contributions of microbiome and mechanical deformation to intestinal bacterial overgrowth and inflammation in a human gut-on-a-chip.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (1), E7-E15 (2016).</li>
<li>Musah, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+induced-pluripotent-stem-cell-derived+human+podocytes+reconstitute+kidney+glomerular-capillary-wall+function+on+a+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Mature induced-pluripotent-stem-cell-derived human podocytes reconstitute kidney glomerular-capillary-wall function on a chip.</a> Nature Biomedical Engineering. 1 (5), s41551-017-0069–017(2017).</li>
<li>Somayaji, M. R., Das, D., Przekwas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+approaches+for+modeling+and+analysis+of+human-on-chip+systems+for+drug+testing+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discovery+Today%22%5BJournal%5D)">Computational approaches for modeling and analysis of human-on-chip systems for drug testing and characterization.</a> Drug Discovery Today. 21 (12), 1859-1862 (2016).</li>
<li>Prantil-Baun, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiologically+Based+Pharmacokinetic+and+Pharmacodynamic+Analysis+Enabled+by+Microfluidically+Linked+Organs-on-Chips%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pharmacology+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Physiologically Based Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis Enabled by Microfluidically Linked Organs-on-Chips.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 58 (1), 37-64 (2018).</li>
<li>Mahler, G. J., Esch, M. B., Stokol, T., Hickman, J. J., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body-on-a-chip+systems+for+animal-free+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Alternatives+to+laboratory+animals%3A+ATLA%22%5BJournal%5D)">Body-on-a-chip systems for animal-free toxicity testing.</a> Alternatives to laboratory animals: ATLA. 44 (5), 469-478 (2016).</li>
<li>Miller, P. G., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+demonstration+of+a+pumpless+14+compartment+microphysiological+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Design and demonstration of a pumpless 14 compartment microphysiological system.</a> Biotechnology and Bioengineering. 113 (10), 2213-2227 (2016).</li>
<li>Coppeta, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+portable+and+reconfigurable+multi-organ+platform+for+drug+development+with+onboard+microfluidic+flow+control%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">A portable and reconfigurable multi-organ platform for drug development with onboard microfluidic flow control.</a> Lab Chip. 17 (1), 134-144 (2016).</li>
<li>Wikswo, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaling+and+systems+biology+for+integrating+multiple+organs-on-a-chip%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Scaling and systems biology for integrating multiple organs-on-a-chip.</a> Lab on a Chip. 13 (18), 3496-3511 (2013).</li>
<li>Sung, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+PBPK+guided+%26%2334%3BBody-on-a-Chip%26%2334%3B+Systems+to+Predict+Mammalian+Response+to+Drug+and+Chemical+Exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+biology+and+medicine+%28Maywood%2C+N.J.%29%22%5BJournal%5D)">Using PBPK guided &#34;Body-on-a-Chip&#34; Systems to Predict Mammalian Response to Drug and Chemical Exposure.</a> Experimental biology and medicine (Maywood, N.J.). 239 (9), 1225-1239 (2014).</li>
<li>Stokes, C., Cirit, M., Lauffenburger, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiome-on-a-Chip%3A+The+Challenge+of+%26%2334%3BScaling%26%2334+in+Design%2C+Operation%2C+and+Translation+of+Microphysiological+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22CPT%3A+Pharmacometrics+%26+Systems+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Physiome-on-a-Chip: The Challenge of &#34;Scaling&#34 in Design, Operation, and Translation of Microphysiological Systems.</a> CPT: Pharmacometrics & Systems Pharmacology. 4 (10), 559-562 (2015).</li>
<li>Shirure, V. S., George, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+considerations+to+minimize+the+impact+of+drug+absorption+in+polymer-based+organ-on-a-chip+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Design considerations to minimize the impact of drug absorption in polymer-based organ-on-a-chip platforms.</a> Lab Chip. , (2017).</li>
<li>Huh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfabrication+of+human+organs-on-chips%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Microfabrication of human organs-on-chips.</a> Nature Protocols. 8 (11), 2135-2157 (2013).</li>
<li>Tran, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exact+kinetic+analysis+of+passive+transport+across+a+polarized+confluent+MDCK+cell+monolayer+modeled+as+a+single+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Exact kinetic analysis of passive transport across a polarized confluent MDCK cell monolayer modeled as a single barrier.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 93 (8), 2108-2123 (2004).</li>
<li>Henry, O. Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organs-on-chips+with+integrated+electrodes+for+trans-epithelial+electrical+resistance+%28TEER%29+measurements+of+human+epithelial+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Organs-on-chips with integrated electrodes for trans-epithelial electrical resistance (TEER) measurements of human epithelial barrier function.</a> Lab on a Chip. 17 (13), 2264-2271 (2017).</li>
<li>Maoz, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organs-on-Chips+with+combined+multi-electrode+array+and+transepithelial+electrical+resistance+measurement+capabilities%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Organs-on-Chips with combined multi-electrode array and transepithelial electrical resistance measurement capabilities.</a> Lab on a Chip. 17 (13), 2294-2302 (2017).</li>
<li>Benam, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matched-Comparative+Modeling+of+Normal+and+Diseased+Human+Airway+Responses+Using+a+Microengineered+Breathing+Lung+Chip%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Systems%22%5BJournal%5D)">Matched-Comparative Modeling of Normal and Diseased Human Airway Responses Using a Microengineered Breathing Lung Chip.</a> Cell Systems. 3 (5), 456-466 (2016).</li>
</ol>

D.E.I. bir kurucusu ve eşitlik taklit, Inc, tutar ve onun bilimsel Danışma Kurulu Başkanı. J.P. olduğunu şu anda taklit, Inc. adında, Y.C., J.P., çalışanı ve D.E.I. mucitler lisanslı taklit, Inc için fikri mülkiyet üzerinde

İmalat işleminin yüksek çözünürlükte 3D yazdırılan kalıpları için PDMS üst ve alt Organ çip karoserisi micromolded gözenekli PDMS Membranlar ile birleştiğinde desen kullanır. Bu kritik yaklaşım kurmak ölçeklendirilen imalat ve takım değiştirme içine hızlı geçiş ile birlikte prototipleme kolaylığı nedeniyle seçildi. Üst bileşen kalıp döküm adımı sırasında tanımlanmış dikey profilleri ile hassas yerlerde desen noktalarına tasarlanmıştır. Bu sadece emek erişim bağlantı noktalarının el ile delme dahil önler ancak da enkaz sa...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58151/scalable-fabrication-stretchable-dual-channel-microfluidic-organ">Scalable Fabrication of Stretchable, Dual Channel, Microfluidic Organ Chips</a>.  The Representative Results, Discussion, and References sections have been updated.
In the Representative Results section, the legend for Figure 5 has been updated from:
Figure 5: Permeability of inert tracer Cascade Blue through the microporous PDMS membrane. Cascade Blue hydrazide dye in medium was loaded into the top channel of the Organ Chip and perfused at 60 µL/h to measure the flux of the dye across the membrane into the bottom channel containing medium. Empty chips were compared to Gut Chips with Caco2-BBe1 cells in the apical channel and human vascular endothelial cells (HUVEC) in the basal channel cultured for 6 days. Error bars indicate standard error of the mean.
to:
Figure 5: Permeability of inert tracer Cascade Blue through the microporous PDMS membrane. Cascade Blue hydrazide dye in medium was loaded into the top channel of the Organ Chip and perfused at 60 µl/h to measure the flux of the dye across the membrane into the bottom channel containing medium. Empty chips were compared to Gut Chips with Caco2-BBe1 cells in the apical channel and human vascular endothelial cells (HUVEC) in the basal channel cultured for 6 days. The apparent permeability (Papp, cm/s) of the microporous PDMS membrane was determined using the dye concentration in the outlet channels. The gut chip cell layers provide a significantly increased barrier to permeability. Error bars indicate standard error of the mean.
In the Discussion section, the fourth paragraph has been updated from:
Troubleshooting the resulting Organ Chips takes place at two levels: during the fabrication process and during Organ Chip culture. We have developed a visual method for quality assurance (QA) of through-hole formation in the cast membranes that greatly accelerates the production process while improving the quality and reliability of assembled Organ Chips. This QA method allows for process troubleshooting, and we recommend keeping a record of process conditions to enable tracking fabrication problems that may occur during cell culture. During Organ Chip culture, inert tracer dyes are the simplest method of measuring barrier function to troubleshoot the fabrication process and cell culture steps. Lucifer Yellow has been used historically due to its small molecular mass and innate fluorescence, but Cascade Blue offers similar properties with a narrower emission spectrum that is less likely to interfere with downstream assays. Larger molecules, such as poly-ethyleneglycol (PEG)- or dextran-conjugated fluorophores are larger and consequently result in lower permeability overall and lower sensitivity. The apparent permeability (Papp, cm/s) of tracer dyes can be used to determine barrier function properties of organs or tissues (Figure 4). The following equation can be used to calculate Papp between the dosing channel and receiving channel and is derived from equations used primarily for Transwell studies19,20 and corrects for tracer dye loss caused by absorption into PDMS by comparing the two output flows and not relying on mass balance assumptions at the outflow.
<img alt="Papp formula for permeation rate analysis in a scientific study, featuring equation variables." src="/files/ftp_upload/58151/58151eq1.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Equation 1">
to:
Troubleshooting the resulting Organ Chips takes place at two levels: during the fabrication process and during Organ Chip culture. We have developed a visual method for quality assurance (QA) of through-hole formation in the cast membranes that greatly accelerates the production process while improving the quality and reliability of assembled Organ Chips. This QA method allows for process troubleshooting, and we recommend keeping a record of process conditions to enable tracking fabrication problems that may occur during cell culture. During Organ Chip culture, inert tracer dyes are the simplest method of measuring barrier function to troubleshoot the fabrication process and cell culture steps. Lucifer Yellow has been used historically due to its small molecular mass and innate fluorescence, but Cascade Blue offers similar properties with a narrower emission spectrum that is less likely to interfere with downstream assays. Larger molecules, such as poly-ethyleneglycol (PEG)- or dextran-conjugated fluorophores are larger and consequently result in lower permeability overall and lower sensitivity. The apparent permeability (Papp, cm/s) of tracer dyes can be used to determine barrier function properties of organs or tissues (Figure 5). The following equation derived by Tran, et al.19 can be used to calculate Papp between the dosing channel and receiving channel, which partially corrects for tracer dye loss caused by absorption into PDMS by averaging the two output flows and not relying on mass balance assumptions at the outflow.
<img alt="Permeability coefficient equation, Papp, showing variables for diffusion analysis." src="/files/ftp_upload/58151/58151eq1v2.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Equation 1">
The References section has been updated from:
<ol start="19">
	<li>Blaser, D.W. Determination of drug absorption parameters in Caco-2 cell monolayers with a mathematical model encompassing passive diffusion, carrier-mediated efflux, non-specific binding and phase II metabolism. at &lt;http://edoc.unibas.ch/655/1/DissB_7998.pdf&gt; (2007).</li>
	<li>Hubatsch, I., Ragnarsson, E.G.E., Artursson, P. Determination of drug permeability and prediction of drug absorption in Caco-2 monolayers. Nature Protocols. 2 (9), 2111-2119 (2007).</li>
	<li>Henry, O.Y.F. et al. Organs-on-chips with integrated electrodes for trans-epithelial electrical resistance (TEER) measurements of human epithelial barrier function. Lab on a Chip. 17 (13), 2264-2271 (2017).</li>
	<li>Maoz, B.M. et al. Organs-on-Chips with combined multi-electrode array and transepithelial electrical resistance measurement capabilities. Lab on a Chip. 17 (13), 2294-2302 (2017).</li>
	<li>Benam, K.H. et al. Matched-Comparative Modeling of Normal and Diseased Human Airway Responses Using a Microengineered Breathing Lung Chip. Cell Systems. 3 (5), 456-466.e4 (2016).</li>
</ol>
to:
<ol start="19">
	<li>Tran, T.T. et al. Exact kinetic analysis of passive transport across a polarized confluent MDCK cell monolayer modeled as a single barrier. Journal of Pharmaceutical Sciences. 93 (8), 2108–2123 (2004).</li>
	<li>Henry, O.Y.F. et al. Organs-on-chips with integrated electrodes for trans-epithelial electrical resistance (TEER) measurements of human epithelial barrier function. Lab on a Chip. 17 (13), 2264-2271 (2017).</li>
	<li>Maoz, B.M. et al. Organs-on-Chips with combined multi-electrode array and transepithelial electrical resistance measurement capabilities. Lab on a Chip. 17 (13), 2294-2302 (2017).</li>
	<li>Benam, K.H. et al. Matched-Comparative Modeling of Normal and Diseased Human Airway Responses Using a Microengineered Breathing Lung Chip. Cell Systems. 3 (5), 456-466.e4 (2016).</li>
</ol>

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58151/scalable-fabrication-stretchable-dual-channel-microfluidic-organ">Scalable Fabrication of Stretchable, Dual Channel, Microfluidic Organ Chips</a>.&#160; The Representative Results, Discussion, and References sections have been updated.

Erratum: Scalable Fabrication of Stretchable, Dual Channel, Microfluidic Organ Chips

Burada, Çift kanallı, imalatı bozukluklarına Organ-on-a-Chip (Organ Chip) mikrosıvısal kültür aygıtları kullanarak bir ölçeklenebilir protokol mükellef üniteleri ve geleneksel yumuşak litografi araçlarına erişim eksik araştırma grupları tarafından kullanılacak açıklayın. Bu cihazlar insan organ-düzey işlevleri anlayış normal ve hastalık Fizyoloji yanı sıra uyuşturucu yanıt vitro1,2için özetlemek için geliştirilmiştir. Kritik Mühendislik için bu işlevselliği yarı geçirgen bir zar (Şekil 1) tarafından ayrılmış iki periosteum mikrosıvısal kanallar vardır. Bu tasarım rekreasyon dokular, genellikle geçirgen membran bir tarafındaki organ parenkima hücreleri ve diğer vasküler endotel yanı sıra sıvı akış maruz kaldıkları en az iki tür arasındaki doku doku arayüzlerin sağlar. Ayrıca, çünkü elastomerik polimer, poli (dimetil siloxane) (PDMS) imal Organ çip vücut için kullanılır ve membran bileşenleri, döngüsel mekanik zorlanma mühendislik tüm uygulanabilir doku doku arabirim üzerinden elastik membran organlarının hareketleri akciğer ve bağırsak bağırsakların nefes gibi yaşam, doğal fiziksel microenvironment taklit etmek için.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58151/58151fig1.jpg"> Şekil 1: Organ çip kesiti. Organ cips iki kanal her iki tarafta hücrelerle seribaşı gözenekli, elastik zar ayrılmış oluşur. En iyi kanal kesitleri vardır 1 mm x 1 mm yüksek, alt geniş kanal çapraz bölüm 1 mm x 0.2 mm yüksek ve vakum kanalları hem de ve alt bölümleri geniş 0.3 mm genişliğinde, 0,5 mm yüksek vardır ve sıvı kanallardan 0.3 mm aralıklı vardır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58151/58151fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Bu gerilebilir, Çift kanal, Organ cips nanopartikül emme akciğer ve akciğer ödemi ilaçla3,4hareket nefes etkisini gösteren için kullanılmıştır; farklılaşma5 ve bağırsak5,6,7bakteriyel büyüme üzerindeki etkileri peristaltik hareket; ve döngüsel deformasyonlar nedeniyle nabız kalp farklılaşması üzerine etkisi ve olgunlaşma böbrek8glomerular podocytes. Ayrıca, bir endotel kaplı vasküler kanal bir hücre dışı matriks (ECM) tarafından ayrılmış içeren bu iki lümen cihazlar-ayrı olarak erişilebilir bir kanal içinde parenkima hücrelerden kaplı membran uyuşturucu PK karakterizasyonu için uygundur parametreleri ve sınırlı tek perfüzyon yeni hedef bulma sistemleri kanal. Ayrıca, birden fazla Organ cips birlikte yolu ile bağlantılı olabilir etkili bir insan vücut-Tarih-hangi tedavi geliştirme9için bir çekici insan vitro platform teklif verebilir, cips, oluşturmak için onların vasküler kanallar 10. En mikro-fizyolojik sistemleri (MPS)11,12,13farklı olarak, Organ cips parenkima vasküler etkileşimlerine kolaylaştırır gözenekli bir zar ayrılmış iki mikrosıvısal kanal içerir. vivo organ fonksiyon özetlemek. Bu sadece vasküler kanallar aracılığıyla ortak bir orta ventriküler tarafından farklı organların birlikte bağlama kolaylaştırır, ancak doku ve sıvıları compartmentalization vivo içinde işlevlerini taklit eder ve farmakokinetik deneme destekler ve vitro-vivo içinde ekstrapolasyon9,zor veya imkansız tek kanal MPS14,15,1610 yanı sıra modelleme. PDMS popülaritesi mikrosıvısal aygıtları araçları geliştirme için malzemenin doğal yetenek küçük moleküller10,17emmek için üstesinden gelmek için açmıştır. Ancak, cips nerede PDMS emici bileşikleri ve mikrobiyal ajanlar kullanımı olun Organ fiş zor yeniden biyolojik çalışmaları desteklemek için gereken çok sayıda küçük araştırma grupları için bile bir ölçeklenebilir üretim süreci gerektirir. Burada açıklanan protokolü erişim üniteleri ve yumuşak litografi eksik dahil olmak üzere akademik laboratuarlarında kullanılmaya uygun cihaz imalat için bir yöntem sunar. Bu iletişim kuralı çok çeşitli temel biyolojik süreçlerin yanı sıra translasyonel terapötik geliştirme keşfetmek için gerilebilir, Çift Kanal aygıtları kullanmak isteyen araştırmacılar tarafından Organ yongaları için erişim genişletmek amaçlamaktadır.
Micromanufacturing alanları birleştirmek ile üretim için tasarım en iyi yöntemleri yararlanarak, sağlam bir yaklaşım yüksek tekrarlanabilirlik ve verim ile Organ çip cihazlar büyük miktarlarda imalatı için geliştirilmiştir. Burada açıklanan imalat Protokolü Organ çip üretimi için ölçeklenebilir bir yöntem sağlar. Biz kadar ölçeklendirme PDMS bileşenleri döküm etkinleştirmek için poliüretan conta şeritler ile birleştiğinde bir isteğe bağlı kalıp yerinde Jig (MIP; Ekmalzeme sökülüp takılması) nasıl kullanılacağını açıklar. Demolding dokulu yan kolaylaştırır süre poliüretan şeritler parlak yüz optik pürüzsüz PDMS parçalar üretmek. Ayrıca, bir isteğe bağlı otomatik membran fabrikatör (toplu iş başına 24 membranlar kadar imalatı için kür sırasında membran gofret kalıp Tekdüzen sıkıştırması sağlayan AMF) nasıl kullanılacağını açıklar. Tasarım geniş deneyim mekanik zorlanma ve perfüzyon dokuların oluşan organ çalışmaları için geçerlidir ve bu fişleri ile küçük ve büyük ihtiyaçlarını karşılamak için gereken miktarlar düşük çip çip değişkenlik üretilebilir araştırma grupları aynı. Bir toplu iş veya seri üretim bandından biçimine mükellef ve kolayca üretim süreçleri, personel eğitimi ve duyarlı sorun giderme kontrol için kalite değerlendirmesi protokolleri ile uyumlu akışıdır. Umarız bu protokolü erişim çift kanallı, gerilebilir, Organ yongaları için temel ve translasyonel araştırma yeteneklerini için genişleyecektir.

<table><tbody><tr><td>Kişisel Koruyucu Donanım</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hairnet</td><td>VWR</td><td>89107-770</td><td></td></tr><tr><td>Tyvek laboratuvar önlüğü</td><td>VWR</td><td>13450-506</td><td></td></tr><tr><td>Uzatılmış manşet eldivenler</td><td>VWR</td><td>89521-898</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kesme matı</td><td>VWR</td><td>102096-430</td><td></td></tr><tr><td>Fayans kesici</td><td>McMaster-Carr</td><td>26765A31</td><td></td></tr><tr><td>Yerinde kalıp (MIP) üst kalıplar</td><td>Protolabs, Inc.</td><td></td><td>Prototherm 12120</td></tr><tr><td>Yerinde Kalıp (MIP) alt kalıplarında özel olarak basılmıştır</td><td>Protolabs, Inc.</td><td></td><td>Prototherm 12121'de özel olarak basılmış</td></tr><tr><td>Ördek gagası kavisli forseps</td><td>VWR</td><td>63041-864</td><td></td></tr><tr><td>Keskin uçlu forseps</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>72700-D</td><td></td></tr><tr><td>Metal spatula</td><td>VWR</td> <td>ve nbsp; 82027-528</td><td></td></tr><tr><td>Derin reaktif iyon aşındırma (DRIE)&nbsp; sütun dizisi gofretleri</td><td>Sensera, Inc.</td><td>görenek</td><td>Gofret başına dört adet 50 x 50 mm sütun dizisi; sütunlar 7 um genişliğinde, 50 um yüksekliğinde, altıgen aralıklarla 40 um aralıklı</td></tr><tr><td>Dokulu polikarbonat .01" kalınlığında</td><td>McMaster-Carr</td><td>85585K33</td>, <td>45 mm kare</td></tr><tr><td>PDMS bloklarına (40 x 40 x 5 mm)</td> <td>kesilmiş n/a</td><td>özel</td><td></td></tr><tr><td>Laminer akış başlığı</td><td>Germfree</td><td>BVBI</td><td>döküm şirket içi</td></tr><tr><td>Hava tabancası</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>60 derece; C seviyesi fırın</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vakumlu kurutucu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0,1 g'a kadar</td><td>kütle dengesi</td><td></td><td></td> doğruluğu</tr><tr><td>Plazma makinesi</td><td>Diener</td><td>Nano</td><td>oksijen plazma kapasitesi kritiktir</td></tr><tr><td>Sarf malzemeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 poli (dimetilsiloksan) (PDMS) baz/kürleme maddesi kiti</td><td>Ellsworth Yapıştırıcılar ve nbsp;</td><td></td><td></td>4019862</tr><tr><td>Karıştırma kabı</td><td></td><td></td><td>Düşük etilbenzen seviyeleri nedeniyle prepolimeri tutarken yeterli havalandırma sağlayın</td></tr><tr><td>1 mL şırınga</td><td>VWR</td><td>10099-395</td><td></td></tr><tr><td>Temiz oda mendilleri</td><td>VWR</td><td>TWTX1080</td><td></td></tr><tr><td>25 x 75 mm cam mikroskop slaytları</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td></td></tr><tr><td>Koli bandı</td><td>VWR</td><td>500043-724</td><td></td></tr><tr><td>Bant</td><td>VWR</td><td>500026-873</td><td></td></tr><tr><td>Kalıp kesim Poliüretan (PU) şeritler</td><td>Atlantic Gasket, Inc.</td><td>Özel: AGWI2X3</td><td>&nbsp; 1/8 inç kalın; 60 Durometre Siyah Poliüretan; 2 inç x 3 inç</td></tr><tr><td>Polikarbonat film .005 "kalınlığında</td><td>McMaster-Carr</td><td>85585K102</td><td></td></tr><tr><td>100 x 100 x 15 mm kare ızgaralı petri kapları</td><td>VWR</td><td>60872-480</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Alüminyum folyo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Opsiyonel Donanım</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Thinky PDMS Mikser</td><td>Thinky</td><td>ARE-310</td><td></td></tr><tr><td>Kalıp yerinde (MIP) aparatı</td><td>şirket</td><td></td> içi <td>vidalı kelepçe sıkıştırma aparatı</td></tr><tr><td>Otomatik membran imalatçısı (AMF)</td> programlanabilir ısıtıcılı <td>şirket</td><td></td> içi <td>pnömatik sıkıştırma piston dizisi</td></tr></tbody></table>

Ölçeklenebilir gerilebilir, Çift kanal, mikrosıvısal organ cips imalatı

Scalable Fabrication of Stretchable, Dual Channel, Microfluidic Organ Chips

Hayvan çalışmaları insan hastalarda klinik yanıt tahmin etmek sık sık başarısız olmaları nedeniyle çok sayıda kurşun bileşikleri ilaç boru hattı başarısız. Etkinlik, toksisite ve farmakokinetik (PK) profilleri insanlarda değerlendirmek için bir deneysel vitro platformu sağlayan insan Organ-on-a-Chip (Organ Chip) mikrosıvısal hücre kültür aygıtları,-ebilmek var olmak daha iyi tedavi edici etkinliği belirleyicileri ve Emanet için hayvan çalışmaları karşılaştırıldığında Kliniği. Bu cihazların hemen hemen herhangi bir organ türü işlevini model oluşturmak için kullanılan ve fluidically gerek kalmadan organ ve tüm vücut düzeyi insan fizyolojisi üzerinde vitro çalışmalar gerçekleştirmek için ortak endotel kaplı mikro aracılığıyla bağlanabilir insanlar üzerinde deneyler. Bu Organ fişleri geçirgen bir elastomerik membran organ özgü parenkima hücreleri bir tarafta ve hangi cyclically sağlamak için gergin olabilir diğer mikrovasküler endotel ile ayrılmış iki periosteum mikrosıvısal kanal oluşur organ özgü mekanik yardımlar (hareketleri akciğer nefesmesela ). Bu iletişim kuralı esnek, Çift Kanal imalatı detayları, Organ cips 3D kullanarak bölümlerinin döküm yoluyla kalıpları, birden fazla döküm kombinasyonu etkinleştirme ve adımları post-processing basılmış. Gözenekli poli (dimetil siloxane) (PDMS) membranlar boyutlu mikrometre ile döküm delik aracılığıyla silikon ayağı dizileri altında sıkıştırma kullanarak. İmalat ve montaj Organ fiş ekipman ve geleneksel bir temiz oda dışında uygulanabilir adımları içerir. Bu iletişim kuralı araştırmacılar vitro organ ve vücut düzey çalışmalar ilaç bulma, güvenlik ve etkinliğini test yanı sıra temel biyolojik süreçlerin mekanik çalışmaları için Organ çip teknolojisine erişim sağlar.

Burada sunulan Protokolü PDMS Organ cips ölçeklenebilir imalatı açıklar. Bu cihazlar bir elastik geçirgen membran (Şekil 1) üzerinde iki ayrı derin doku türlerinin kültür sağlar. PDMS kanalları kullanarak 3D yazdırılan kalıpları, hangi yeni tasarımları (Şekil 2A ve 2B) prototip hızlandırır artığını. En iyi Kanal sıkıştırma alt kanal bileşenleri tepsilerde döküm ve (Şekil 2B) yedeklem...

Burada, açıklar gerilebilir, Çift Kanal imalatı, organ çip mikrosıvısal hücre kültür cihazlar organ düzeyi işlevlerine içinde in vitrorecapitulating için bir iletişim kuralı mevcut.

Ölçeklenebilir gerilebilir, Çift kanal, mikrosıvısal Organ cips imalatı

A significant number of lead compounds fail in the pharmaceutical pipeline because animal studies often fail to predict clinical responses in human ...

Bu protokolün genel amacı, organ düzeyinde işlevselliğin in vitro olarak özetlenmesi için organ yontulmuş mikroakışkan cihazların imalatını tanımlamaktır. Bu protokol, organ seviyesi işlevini in vitro olarak yeniden özetleyen organ yontulmuş cihazları imal etmenin bir yolunu tanımlar. Func, bu gibi cihazlar, aslında yumuşak bir silikon kauçuk 3D baskılı kalıplar kullanılarak imal edilmektedir.Bu kauçuk, bu cihazları mekanik işaretlerle aşılamamızı sağlıyor. Ayrıca kan akışını ve organ sistemleri içindeki diğer vücut sıvılarının akışını taklit eden profüzyon u ekliyoruz. Şimdi bir araya getirildiğimizde, bu cihazlar in vivo'da olan karmaşık fizyolojiyi yeniden yaratmamızı ve anlamaya çalışmamızı sağlıyor.Ama bunu tüp bebek olarak yap. Yani aslında insanlar üzerinde deney yapıyoruz, ama insanlar üzerinde değil. Ve bu, hayvan çalışmaları arasındaki uçurumu köprülemenin çok etkili bir yoludur, bu her zaman terapötiklerin klinik öncesi gelişiminde yapılır, ve daha sonra insan çalışmalarından önce, klinik çalışmalar olarak adlandırılır, insan için çok daha büyük bir risk in, insan güvenliği için.Ve bu cihazlar bölünmeyi köprülemeye yardımcı oluyor ve aslında yeni terapötikler geliştirmemize ve insan gibi karmaşık sistemlerde olan temel biyolojiyi anlamamıza olanak sağlıyor. En iyi kanal hazırlığı. Her poliüretan parçanın parlak tarafını etanol ve temiz oda mendilleriyle silin.Yerine kalıp kalıp açık tarafında poliüretan parlak tarafı yerleştirin. Jig sonuna karşı dokulu tarafı içine kalıp ve poliüretan meclisleri yerleştirin. Tüm kalıplar jig içinde yerleştirilen kadar bunu yapmaya devam edin.Jig aralığı genişliği 25 milimetre olana kadar, bir anahtar kullanarak sapını çevirerek jig sıkın. Yerine jig kalıp çevreleyen alüminyum folyo bir tekne olun. Tam olana kadar her kalıbın kuyusuna PDMS dökün.Bir kez tüm jig doldurulur, vakum desiccator içine jig yerleştirin. Bir saat sonra, kurutucu kaldırın. Ve en az dört saat boyunca 60 derece santigrat fırın içine yerleştirin.Bir anahtar kullanarak jig sökmek. Her kalıp poliüretan şeritler çıkarın. Ve atın.PDMS parçalarını kalıplarından dikkatlice demold olarak ayırın ve yan larını yukarı yaslayın. Son sekme çentikteki döşeme kazıyıcının bıçağını hizala. Ve üst bileşenleri sinüle her ucunu kesip.Kare Petri yemekleri bitmiş parçaları saklayın. Parçaları oda sıcaklığında pozitif basınç dolaplarında saklayın. Alt kanal hazırlığı.Kalıba 10,5 gram PDMS dökün. Hava tabancası çok nazikçe boşluk üzerinde PDMS taşımak için kullanılabilir. Kalıpları vakum lu kurutucuya yerleştirin.Bir saat sonra, bir seviye 60 derece santigrat fırınkalıpları taşıyın. Bir laminar akış kaputunda masaya kalıp yerleştirin. PDMS'yi kalıbın kenarından gevşetin.Bir köşeyi tutun ve pLÜT'leri kalıbın yüzeyinden yavaşça soyun. Tamamen çıkarıldığında, kanal özelliklerinin karşı karşıya kalması için çalışma yüzeyini ters çevirin ve uzanın. Kiremit kesici ile dış kenarları boyunca kesin.Düz raket forceps ile, herhangi bir enkaz kaldırmak için bant yan özelliği yatıyordu. Ambalaj bandından bir parça çıkarın. Parçanın gevşek ucunu slayt boyunca sürükleyin.Gevşek uç camla laminat olacaktır. Scotch bant ile kapak özellikleri. Parçaları oda sıcaklığında pozitif basınç dolaplarında saklayın.PDMS membran hazırlığı. Gofretlerin arkadaki PDMS'siz olup olmadığını kontrol edin. Belirlenen yuvalara her membran gofret yerleştirin.Her membran gofret sonrası dizinin merkezine 09 mL PDMS yerleştirmek için tek mL şırınga kullanın. PDMS en az beş dakika oturalım. PDMS membran gofret sonrası boyunca yayılmasına izin verin.Posta dizisinin en az %75'i PDMS kapsamında olana kadar bir sonraki adıma geçin. Plazma, protokolde açıklanan koşulları kullanarak polikarbonat şeridi tedavi edin. Plazma makinesinden polikarbonat levha çıkarın ve 45 milimetre kareler tarafından 45 milimetre içine polikarbonat levhalar kesmek için makas kullanın.Polikarbonat karelerin plazma tedavi tarafını membran gofret merkezli PDMS üzerine yatırın. PDMS boşluklayıcısını polikarbonat karesinin ortasına yerleştirin. Sonra önceden kesilmiş dokulu polikarbonat yerleştirin.Tepsileri, üç tepsinin arkada, tepsinin ikisini ortada, birinci tepsinin önte olması için yerleştirin. Tepsi bir hizalama için bir çentik vardır. Çıkış basınç valfini açın ve giriş basınç valfini çok yavaş bir şekilde açın.Bu kuvvet dört kilogram yavaş yavaş her membran gofret uygulanır, anında gofret kırabilir aksine. Kür leme döngüsüne başlamak için AMF anahtarını açıp açın. Daha sonra giriş basınç valfini kapatın ve hava silindirlerinden basıncı serbest bırakmak için çıkış basınç vanalarını açın.Tepsileri çıkarın ve laminar akış kaputuna getirin. Dikkatle dokulu polikarbonat soyma. PDMS boşluklayıcısını dikkatlice çıkarın.PDMS membranını deliklerden geçen alanlar için inceleyin. Delik alanının anahatlarını izlemek için bir işaretçi kullanın. Ayrıca membranlar üzerinde herhangi bir delik veya kusurları işaretleyin.Bu işaretlenmemiş ve işaretli bir membran örneğidir. Gofret taşıma cımbız kullanarak, tepsiden gofret gevşetin. Gofret her membran çıkarın ve Petri çanak üzerine yerleştirin.PDMS membran gofret ten kalıp olacak ve polikarbonat destek bağlı olacaktır. Parçaları oda sıcaklığında pozitif basınç dolaplarında saklayın. Üst montaj ve hazırlık.Mat bitmiş Scotch bant kullanarak, enkaz kaldırmak için PDMS membranlar yanı sıra Petri çanak içinde temizleyin. Enkaz kaldırmak için iyice her uzun kanal üst özelliği yan bant. PDMS membran lı Petri kabına üstleri yerleştirin.Bazı membranlar bir veya iki üst parçalar alabilir unutmayın. Her üst kısmın ana kanalları membran içinde işaretli alana sığmalıdır. Petri tabaklarını plazmaya yükleyin.Plazma tedavi membran ve üst yazılı protokole göre. Yapıştırma döngüsü bittikten sonra, bulaşıkları çıkarın ve aktive edilen üst kısımları membranın üzerine tökezle. En az iki saat 60 derece santigrat fırında yerleştirin.Neşter kullanarak, bağlı üst çevresi etrafında iz polikarbonat taşıyıcı ayırmak için. Parça izlendikten sonra polikarbonattan üst kısmı soyun. Üst bağdaklı PDMS membran da taşıyıcı dan soyma gerekir.Cımbız kullanarak alt kanala erişen bağlantı noktalarından membranı çıkarın. Membranın erişim bağlantı noktasını kaplayan herhangi bir parçasını bırakmayın. Ayrıca cımbız ile herhangi bir enkaz veya toz kaldırın.Çip montajı. Özellik yan yukarı, plazma tedavi altları ile üst montajları. Ters bir mikroskop altında, alt yarısı ile üst montaj hizalayın.En az iki saat 60 derece santigrat fırında yerleştirin. Sonuç -ları. Burada sunulan protokol, PDMS organ yongalarının ölçeklenebilir imalatını açıklamaktadır. Bu cihazlar elastik gözenekli membran üzerinde iki farklı bol doku tipleri kültür sağlar.PDMS kanalları, yeni tasarımların prototipini hızlandıran 3D baskılı kalıplar kullanılarak döküme alınır. Üst kanallar kalıplı portları ile bileşenleri üretmek için uyumlu bir poliüretan conta karşı sıkıştırma altında kalıplar döküm. Alt kanal bileşenleri tepsilere atılır ve mikroskop slayt desteğinde işlenir.Bu üretim yaklaşımı, parçaların çok ölçekli desenlerini tek bir adımda birleştirir, bu da zamandan tasarruf sağlar, tekrarlanabilirliği ve izlenebilirliği artırır ve bağlantı noktası delme ve birden çok kesme adımı tarafından oluşturulan enkazı azaltır. Gözenekli membranlar organ yongasının işlevi için çok önemlidir ve desenli silikon gofretlere karşı döküme dayalı üretim yaklaşımı tutarlı kalınlıkta ve yüzey kaplamalı membranlarla sonuçlanır. Polikarbonat taşıyıcılar aracılığıyla elleçleme, daha büyük toplu üretim ve depolama sağlar.Monte edilen organ çipi optik saydam bir paketiçinde iki profüzyon kanalından oluşur. Örtüşen bölgede, gözenekli bir PDMS membran, siklik vakum aktüasyonu kullanarak mekanik zorlanma sağlamak için her iki tarafta iki paralel kanal kullanılırken, metabolitler, proteinler, terapötikler, patojenler ve hücrelerin doku-doku etkileşimini sağlar. PDMS membran gözenekliliği biyo-tıbbi metabolitlerin akı destekler, büyüme faktörleri, ve vaskülatür ve organ parankim arasındaki hatta hücreleri.Membranın görünür geçirgenliği, Caco-2 bağırsak hücreleri olan ve olmayan çıkış kanallarındaki di-konsantrasyon kullanılarak belirlendi. Bağırsak çip hücre katmanları geçirgenlik için önemli ölçüde artmış bir bariyer sağlar. Organ çipi, paralel vakum kanalları kullanılarak, membrana ve dolayısıyla kültürlü dokulara döngüsel yük yüklemesi nicel ve tekrarlayıcı bir şekilde uygulamak için harekete geçilebilir.Bu döngüsel suşu, media profüzyonu ile birlikte, bağırsak çipinde villi oluşumu gibi in vivo organ fizyolojisini daha iyi taklit etmek için hücresel farklılaşmayı destekler. Burada açıklanan protokolü kullanarak, artık gerilebilir bir PDMS organ çipi üretebilmelisiniz.

scalable-fabrication-stretchable-dual-channel-microfluidic-organ

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz elastomerik polidimetilsiloksan (PDMS)-tabanlı photolithographically tanımlanan hassas birimleri kapatın ve özellik için ekstra enerji ihtiyacını Mikrovalf dizileri imalat ve otomatikleştirmek için protokolleri göstermektedir. Bir paralel subnanoliter ses mikseri ve entegre bir mikroakışkan perfüzyon sistemi sunulmaktadır.

Elastomerik Mikrovalf Diziler Kontrollü mikroakışkan Chips

Biz, üç-boyutlu hücre kültürü için gözenekli polimer cips mikroimalat için iki süreç sunuyoruz. Bunlardan birincisi, solvent buhar kaynak işlemi ile birlikte sıcak kabartma. Ikincisi ise, kısa bir süre önce geliştirilen iyon izleme teknolojisi ile üretim önemli bir basitleştirme giden kombine microthermoforming süreci kullanır.

Üç boyutlu Hücre ekimi için Chip-ölçekli Yapı iskeleleri mikroimalat

Biz temiz oda ya da yumuşak litografi gerek kalmadan, birden çok farklı suşları için benzer dinamik koşullar uygulanarak yeteneğine microfluidic cihazlar üretmek için basit bir yöntem sunulmaktadır.

Birden Farklı Suşlarının incelenmesi için bir mikroakışkan Cihazı

Bu yazıda tek bir hücre analizi için bir mikroakışkan çip sunuyoruz. Bu sağlar: hücre içi proteinler, enzimler, kofaktörler, ve floresan deneyleri veya bağışıklık aracılığıyla ikinci haberciler miktar.

Tek Hücrelerinin yönlü Kimyasal Analiz için mikroakışkan Chip

Bir mikro-on-a-chip platformu fotolitografik reflowable ışığa tekniği, yumuşak litografi ve Mikroakiskan kombinasyonu tarafından geliştirilmiştir. Endothelialized mikro platformu, in vivo mikrodamar içinde üç boyutlu (3D) geometrisi ile taklit eden sürekli perfüzyon kontrollü akış altında çalışan, yüksek kaliteli ve gerçek zamanlı görüntü sağlar ve mikrovasküler araştırma için uygulanabilir.

Çok derinlemesine Dairesel kesit Endothelialized mikro kanallar-on-a-chip Geliştirme Prosedürü

Burada, birincil hücreleri, doku modellerini ve punch biyopsilerini 28 güne kadar mikroakışkan çok organlı bir çipte kokültür yapmak için bir protokol sunuyoruz. İnsan dermal mikrovasküler endotel hücreleri, karaciğer agregatları ve deri biyopsileri ortak bir besiyeri dolaşımında başarılı bir şekilde birleştirildi.

Çok organ Chip - Uzun vadeli Çok doku kokültürü için mikroakışkan Platformu

Bu yayın entegre elektrotlar transendothelial elektrik direniş (AYLARININ) doğrudan miktar için bir organ-on-chip cihazı imalatı açıklar. Doğrulama, kan - beyin bariyerini bu mikrosıvısal cihazın içinde taklit ve bariyer fonksiyonu izlenir. Elektrot entegrasyon ve doğrudan AYLARININ miktar için sunulan yöntemleri genel olarak geçerlidir.

İmalat ve Organ-on-chip sistemin doğrudan Transendothelial elektrik direncini ölçmek için entegre elektrotlar ile doğrulama

Kan-beyin bariyeri (BBB) sıkı beyin homeostazı düzenleyen bir çok hücreli nörovasküler birimdir. İnsan iPSC'leri ve çip üzerine organ teknolojilerini birleştirerek, hastalık modellemesi ve CNS ilaç penetrite tahminleri için uygun kişiselleştirilmiş bir BBB çipi ürettik. BBB çipinin üretimi ve işletimi için ayrıntılı bir protokol açıklanmıştır.

İnsan iPSC Tabanlı Kan-Beyin Bariyer Chip Üretimi

1500 kültür ünitesi, bir dizi gelişmiş peristaltik pompa ve yerinde karıştırma modülünden oluşan karmaşık yaşam makineleri üzerinde yüksek verimli çalışmalar için mikroakışkan bir sistem sunuyoruz. Mikroakışkan çip, vivodaki son derece karmaşık ve dinamik mikro çevresel koşulların analizini sağlar.

Yüksek Verimli Mikroakışkan Cihaz Kullanarak Dinamik ÇevreSel Koşulların Üretilmesi

Bu protokol, Primer dokuların (deri, alveolus, hava yolu ve bağırsak) tam kalınlıkta çip üstü organ kültürlerinin başarılı bir şekilde kurulması ve olgunlaşması için Open-Top Organ-Chip'in yeteneklerini ve temel kültür modalitelerini açıklamakta ve insan epitelyal/mezenkimal ve vasküler niş arayüzünün farklı fonksiyonel yönlerini in vitro olarak araştırma fırsatı sunmaktadır.

İnsan Epitel Dokularının Üstü Açık Bir Organ Çipi Üzerindeki Sitomimarisinin ve İşlevinin Yeniden Yapılandırılması

Öğrenin, 3D baskılı kalıplar ve yumuşak silikon kauçuk kullanarak ölçeklenebilir, gerilebilir organ çipi üretimini. Bu yöntem, mekanik uyaranlar ve perfüzyon sistemleri ile organ düzeyinde fonksiyonları in vitro ortamda taklit eder.

Ölçeklenebilir gerilebilir, Çift kanal, mikrosıvısal Organ cips imalatı

Daha fazla video keşfet