T7 bakteriyofaj Biopanning üzerinden kantitatif PCR

Bu yöntem, karmaşık örneklerden ve bakteriyofaj esaslı tanı ve tedavilerden bakteriyofajların numaralandırması ile ilgili viroloji ve mikrobiyoloji alanlarındaki temel sorunların yanıtına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, geleneksel tahlillerle mümkün olmayan çok sayıda faj görüntü biyopanning deneylerinden elde edilen çok sayıda numunenin zaman verimli ve doğru bir şekilde ölçülmesini sağlamasıdır. Prosedürü gösteren Rashmi Mohanty ve Jasmim Leal, benim laboratuvar dan lisansüstü öğrenciler olacaktır.

Astarları tasarladıktan ve stok konsantrasyonu oluşturduktan sonra, mikrolitre başına 0,1 mikrogram konsantrasyonla referans T7 faj DNA'sı elde edin. Ultra saf su kullanarak, 0.2 mililitre PCR tüplerde mikrolitre başına bir milyon femtogramdan mikrolitre başına bir femtograma kadar bu DNA'yı on kat daha fazla seyreltin. Her konsantrasyon20 mikrolitre hazırlayın, pipet ipuçlarını değiştirmek ve seyreltme her aşaması arasında tüpler girdap emin olun.